293细胞复苏传代冻存

复苏293细胞

1.紫外消毒超净台，完全培养基（10％FBS）复温，准备一个15ml离心管；

2.从液氮（-198℃）中取出293细胞，在37℃水浴锅解冻；

3.取10ml完全培养基于15ml离心管，加1.5ml冻存293细胞，轻轻混匀；

4.离心1500rpm，3min；

5.吸走上清，混匀后加5ml完全培养基；

6.吹打混匀后转入培养瓶培养。

293细胞传代

1.293细胞长到70％即可传代，将培养皿边缘用酒精棉球擦一遍；

2.负压吸走培养基，加PBS 洗一遍；

3.负压吸走PBS，加胰酶（没过皿底即可）消化；

4.负压吸走胰酶，加两吸管培养基，将细胞从皿底吹落；

5.对准皿底用力吹打10下，将细胞吹散；

6.将吹散细胞加入培养基内，摇匀；

7.种细胞，6孔板每孔加2ml（用于转染的板需先用Polylysine扩板），放回孵

箱培养。

冻存293细胞

1.当293细胞长到70％时，准备冻存；

2.冻存液：90％完全培养基，10％DMSO （根据说明书要求配制，不同种类

293冻存液不同）；

3.吸干培养基，用PBS洗一遍；

4.加入胰酶消化后，吸去胰酶，加入少许培养基吹打；

5.转入15ml离心管，加培养基至10ml并混匀；

6.离心1500rpm，3min；

7.吸去上清，沉淀加冻存液吹打混匀（根据要冻存的细胞的多少加适当量的冻

存液，冻存细胞浓度不宜过稀，一个25cm2培养瓶冻2-3管）；

8.分装至冻存管，每管约1.5ml；

9.将冻存管放入异丙醇盒并置于-80℃过夜;

10.然后将冻存管放入液氮储存。