药分盐酸普鲁卡因胺、对氨基水杨酸

药分盐酸普鲁卡因胺、对氨基水杨酸盐酸普鲁卡因，对乙酰氨基酚，盐酸丁卡因的鉴别、杂质检查、含量测定0924 第三组徐一三冷涛2012092412 2012092409 芳胺类药物主要分为两类：一类为芳伯氨基未被取代，而在芳环对位有取代的对氨基苯甲酸酯类。

另一类则为芳伯氨基被酰化，并在芳环对位有取代的酰胺类药物。

盐酸普鲁卡因，盐酸丁卡因对氨基苯甲酸酯类药物①芳伯氨基特性显重氮化－偶合反应；与芳醛缩合反应；易氧化变色等。

②水解特性含酯键（或酰胺键）易水解。

其水解的快慢受光线、热或碱性条件的影响。

水解产物主要为对氨基苯甲酸（PABA）。

③弱碱性除苯佐卡因外，因其脂烃胺侧链为叔胺氮原子，故具有弱碱性。

因此能与生物碱沉淀剂发生沉淀反应；但在水溶液中不能用标准酸直接滴定，在非水溶剂中能滴定。

对乙酰氨基酚酰胺类药物①芳酰氨基在酸性溶液中易水解为芳伯氨基，并显芳伯氨基特性反应。

②酚羟基特性对乙酰氨基酚(FeCl3)。

此外，本类药物的紫外吸收和红外吸收光谱特征均可供分析用。

一．盐酸普鲁卡因（一）盐酸普鲁卡因的鉴别《中国药典》规定鉴别盐酸普鲁卡因的方法：水解反应、 IR 法、氯化物的反应、芳香第一胺反应。

1.水解反应：原理：盐酸普鲁卡因遇氢氧化钠试液即析出白色沉淀，加热变为油状物，继续加热，产生的蒸汽能使湿润的红色石蕊试纸变为蓝色，加热至油状物消失后，放冷，加盐酸酸化，即析出白色沉淀。

沉淀可溶于过量的盐酸。

方法：取供试品约0.1g，加水2ml溶解后，加10%氢氧化钠溶液1ml，即生成白色沉淀；加热，变成油状物，继续加热，发生的蒸气使润湿的红色石蕊试纸变为蓝色；加热至油状物消失后，放冷，加盐酸酸化，即析出白色沉淀；沉淀可溶于过量的盐酸。

2．氯化物的反应：按《中国药典》附录“一般鉴别试验”中“氯化物”项下的沉淀反应和氧化还原反应进行鉴别。

(1)沉淀反应取供试品溶液，加稀硝酸使成酸性后，滴加硝酸银试液，即生成白色凝乳状沉淀；分离，沉淀加氨试液即溶解，再加稀硝酸酸化后，沉淀复生成。

(2)氧化还原反应取供试品少量，置试管中，加等量的二氧化锰，混匀，加硫酸润湿，缓缓加热，即发生氯气，能使润湿的碘化钾淀粉试纸显蓝色。

沉淀反应：硝酸银试液、硝酸酸性，agcl白色凝乳状沉淀。

3. 芳香第一胺反应又称为重氮化一偶合反应，用于鉴别芳香第一胺。

收载于《中国药典》附录“一般鉴别试验”项下。

盐酸普鲁卡因具有芳伯氨基，在盐酸介质中与亚硝酸钠作用，生成重氮盐，重氮化盐进一步与β-萘酚偶合，生成红色偶氮合物。

所用试剂：稀盐酸、亚硝酸钠溶液、β—萘酚试液。

现象：生成橙色或猩红色的沉淀。

方法：取本品约50mg,加稀盐酸1ml，必要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加0.1mol/L，亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性β-萘酚试液数滴，生成橙黄到猩红色沉淀。

（二）盐酸普鲁卡因的杂质检查盐酸普鲁卡因的杂质检查项目有：酸度、溶液的澄清度、干燥失重、炽灼残渣、铁盐及重金属和对氨基苯甲酸。

在盐酸普鲁卡因的生产和贮藏中都有可能引入对氨基苯甲酸。

《中国药典》2010年版加强对药物中杂质的控制，与2005年版相比，对氨基苯甲酸是盐酸普鲁卡因原料药质量控制中新增加的检查项目。

采用反相液相色谱检查。

方法如下：色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以含0.1%庚烷磺酸钠的0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH 值至3.0）-甲醇（68:32）为流动相；检测波长279nm。

理论板数按对氨基苯甲酸峰计算不低于2000，盐酸普鲁卡因峰和对氨基苯甲酸峰的分离度应大于2.0。

系统适用性试验溶液：取供试品溶液1ml与对照品溶液9ml混合均匀，既得。

测定法：取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中含0.2mg的溶液，作为供试品溶液；另取对氨基苯甲酸对照品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中含1μg的溶液，作为对照品溶液。

取对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高约为满量程的20%。

精密量取供试品溶液与对照品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。

供试品溶液包谱图中如有与对氨基苯甲酸峰保留时间一致的色谱峰，按外标法以峰面积计算，不得过0.5%。

（三）盐酸普鲁卡因原料药的含量测定——《中国药典》采用亚硝酸钠滴定法，用永停法指示终点。

方法：取本品约0.6g，精密称定，照永停滴定法，在15～25℃，用亚硝酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定。

每1ml亚硝酸钠滴定液(0.1mol/L)相当于27.28mg的盐酸普鲁卡因。

滴定原理同芳香第一胺的鉴别项下。

由重氮化反应可知，1mol的亚硝酸钠相当于1mol 的盐酸普鲁卡因，盐酸普鲁卡因的分子量为272.77，所以滴定度T=0.1×272.77=27.28(mg)。

二．对乙酰氨基酚（一）鉴别1．与三氯化铁试液的反应：显蓝紫色2.水解后重氮化一偶合反应：对乙酰氨基酚在稀盐酸酸性溶液中，加热水解后产生具有芳伯氨基的对氨基酚，与亚硝酸钠试液发生重氮化反应，其重氮盐与碱性β-萘酚试液偶合显红色。

（二）对乙酰氨基酚的杂质检查：需检查的特殊杂质：有关物质和对氨基酚。

1.有关物质：以对氯乙酰苯胺为对照，用薄层色谱法对照品比较法控制有关物质对氨基酚、对氯乙酰苯胺、偶氮苯、苯醌等中间体、副产物及分解产物。

2. 对氨基酚的检查：为中间体、水解产物原理：对氨基酚为芳香第一胺，能与碱性亚硝基铁氰化钠试液生成蓝色配位化合物。

注意：对氨基酚毒性较大，易被氧化变为醌式有色化合物方法：与对氨基酚对照品同法制成的对照液比色法。

【检查】对氨基酚及其他杂质取本品适量，精密称定，加溶剂[甲醇－水(4：6)]制成每1ml 中约含对乙酰氨基酚20mg的溶液，作为供试品溶液(临用新制)；另取对氨基酚和对乙酰氨基酚对照品适量，精密称定，加上述溶剂制成每1ml中约含对氨基酚1µg和对乙酰氨基酚20µg的溶液，作为对照品溶液。

照高效液相色谱法（附录VD）测定。

用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；磷酸盐缓冲液（取磷酸氢二钠8.95g，磷酸二氢钠3.9g，加水溶解至1000ml，加入10%四丁基氢氧化铵溶液12ml）-甲醇（90：10）为流动相；检测波长为245nm；柱温为40℃；理论板数按对乙酰氨基酚峰计算应不低于2000，对氨基酚与对乙酰氨基酚峰之间的分离度应符合要求。

取对照品溶液20µl，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使对氨基酚色谱峰的峰高约为满量程的10%，再精密量取供试品溶液与对照品溶液各20µl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的4倍；按外标法以峰面积计算，含对氨基酚不得过0.005%，其他杂质相对于对照品溶液色谱图中对乙酰氨基酚峰面积计算，单个未知杂质不得过0.1%，杂质总量不得过0.5%。

（三）含量测定对乙酰氨基酚在0.4% 氢氧化钠溶液中，max =257 nm ，《中国药典》采用紫外分光光度法（吸收系数法）测定对乙酰氨基酚含量。

取本品约40mg，精密称定，置250ml量瓶中，加0.4％氢氧化钠溶液50ml溶解后，加水至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml 量瓶中，加0.4％氢氧化钠溶液10ml，加水至刻度，摇匀，照分光光度法，在257nm的波长处测定吸收度，按C8H9N02的吸收系数（E1％1cm）为715计算含量。

若样品称量为m（g），测得的吸收度为A，则含量百分率的计算式为计算公式：A／715 × 250／5 × 1／m×100％三．盐酸丁卡因鉴别: （1）取本品约0.1g，加5%醋酸钠溶液10ml溶解后，加25%硫氰酸按溶液1ml，即析出白色结晶；滤过，结晶用水洗涤，在80℃干燥，依法测定（附录ⅥC），熔点约为131℃。

（2）取本品约40mg，加水2ml溶解后，加硝酸3ml，即显黄色。

（3）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集314图）一致。

（4）本品的水溶液显氯化物的鉴别反应（附录Ⅲ）。

检查: 酸度取本品0.50g，加水5ml溶解后，加溴酚蓝指示液1滴，如显淡黄色，加氢氧化钠滴定液(0.1mol/L）1滴，应变为淡蓝色。

溶液的澄清度取本品1.0g，加水10ml溶解后，溶液应澄清；如显浑浊，与1号浊度标准液（附录ⅨB）比较，不得更浓。

易炭化物取本品0.50g，依法检查（附录ⅧO），与橙黄色3号标准比色液（附录ⅨA 第一法）比较，不得更深。

有关物质取本品，加水制成每1ml中含0.10g的溶液，作为供试品溶液。

另取对氨基苯甲酸对照品适量，精密称定，加水制成每1ml中含0.20mg的溶液作为对照品溶液。

照薄层色谱法（附录ⅤB）试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以乙醚-正己烷-冰醋酸（80:16 :4）为展开剂，展开，晾干，于105℃干燥10-15分钟后，置紫外光灯（254nm）下检视。

供试品溶液如显杂质斑点，其颜色与对照品溶液的主斑点比较，不得更深。

干燥失重取本品，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过1.0%（附录ⅧL）。

炽灼残渣不得过0.1%（附录ⅧN）。

含量测定: 取本品约0.2g，精密称定，加冰醋酸25ml与醋酐5ml 溶解后，加热回流2分钟，放冷，加醋酸汞试液5ml与结晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝色，并将滴定的结果用空白试验校正。

每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于30.08mg的C15H24N2O2·HCl。