结核感染t细胞检测方法

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T-SPOT_TB操作说明电子版

结核感染T细胞检测试剂盒（免疫斑点法）说明书【产品名称】通用名称：结核感染T细胞检测试剂盒（免疫斑点法）英文名称：T-SPOT.TB【包装规格】24人份/盒。

【预期用途】该产品用于检测人外周抗凝全血中的结核特异抗原刺激活化的效应T细胞，仅适用于临床疑似结核病的辅助诊断。

结核感染的免疫应答反应以细胞免疫为主，作为免疫应答的一部分，T细胞受结核抗原刺激致敏，形成活化的效应T细胞，包括CD4和CD8，从全血中单独被分离出来，在体外受特异抗原刺激并被记数。

从结核分枝杆菌复合群（人型、牛型、非洲型）中选择有用的抗原降低与BCG（卡介苗）和环境分枝杆菌的交叉反应提高特异性。

两个单独的抗原模仿ESAT-6和CFP 10，联合应用提高检测灵敏度。

T-SPOT.TB是一种更简单的酶联免疫斑点（ELISPOT）检测方法。

ELISPOT检测是高灵敏度的，在细胞分泌的细胞因子扩散稀释前，其能够立即捕获细胞周围所分泌的细胞因子。

这使得ELISPOT检测更加的灵敏，超过传统的ELISA实验。

T-SPOT.TB 被设计出来用于检测结核特异抗原刺激活化的效应T细胞。

T-SPOT.TB记数每个活化的结核特异效应T细胞。

【检验原理】外周血单个核细胞（PBMCs）从全血样本中被分离，通过洗涤排除本底干扰因素。

记数PBMCs，保证有标准的细胞数量用于检测。

这可以保证因为免疫系统削弱（免疫力低下和免疫抑制）而导致T细胞浓度低的样本也有足够的细胞数加入反应孔检测。

与ELISPOT技术一样的洗涤和记数过程，提高了检测结核病和结核感染的性能。

抗原和PBMCs一起孵育，刺激所有的致敏T细胞。

分泌的细胞因子被预包被在反应孔膜上的特异抗体捕获，然后细胞和其它不必要的物质通过洗涤被去除。

标记二抗，碱性磷酸酶配对的与细胞因子上不同的抗原决定簇结合，在反应孔膜上捕获细胞因子。

通过洗涤去除任何未标记的抗体。

可溶的底物溶液加入到每个检测孔中，在反应部位被酶分解形成不溶性色素沉淀斑点。

(仅供参考)结核感染T细胞检测

结核感染T细胞检测（T-SPOT.TB）一、背景结核病是由结核分枝杆菌（MTB）引起的传染性疾病。

全世界每年大约有8，000，000新增的结核病例。

据此估计，三分之一的世界人口已被结核杆菌感染并成为潜在的或活动性结核患者。

亚洲结核发病率约占世界结核病发病率的７０％，我国结核发病率则位居世界第二位。

２０００年第四次全国结核病流行病学抽样调查结果估计，我国活动性结核患者约有４５０万人，占全球结核患者总数的１／４，其中痰菌阳性的结核患者约有２００万人，痰涂片阳性的结核患者约１５０万人。

每年约有１３万人死于结核病。

由于卡介苗的使用，现在结核病的发病率比过去有所下降，但是由于艾滋病、吸毒、免疫抑制剂的使用，酗酒与贫困，难民迁移等诸多因素的影响，结核及其它分枝杆菌所致的感染发病率又呈上升趋势。

如何能够快速、准确的诊断结核病，有效的控制结核病的继续蔓延，已经成为我们首要重视的问题。

然而，目前结核诊断的标准仍局限于临床检查结核细菌培养和涂片直接镜检再辅以X线检查和结核菌素皮肤测试观察。

这些方法均依赖于病人的临床症状，不能达到早期检测潜在结核感染的目的。

结核感染T细胞检测试剂用于肺结核和肺外结核诊断与鉴别诊断具有独特优势：（1）具有非常高的灵敏度和特异性（2）不受环境分枝杆菌感染和卡介苗（BCG）接种影响（3）基本不受机体免疫抑制影响，适用于HIV感染和免疫抑制剂治疗人群（4）简单的实验室血液检查，24小时快速报告结果二、产品的检测原理和方法结核感染T细胞检测试剂盒（T-SPOT.TB）为英国Oxford Immunotec公司生产，应用的方法学为酶联免疫斑点技术（ELISPOT），产品的检测原理和检测方法如下。

这类反应统称为γ干扰素释放试验（γ Interferon Release Assay, IGRA），目前已经列入美国、欧洲等地结核病诊疗指南，用于结核病辅助诊断。

2．2 产品的检测方法2．2．2 检测过程略：见操作说明三、国内、外已批准上市及应用现状目前结核感染T细胞检测试剂（T-SPOT.TB）已获得欧盟CE认证、美国FDA认证。

结核感染T细胞检测ppt课件

种类特异性
内容摘要
用T-SPOT.TB检测14例鸟分枝杆菌感染者，13例阴性，1例为临界值，复查也为阴性。
受试者数量
文献发表
14
Adams et al Sc. J Inf.
Dis..
2008;40(3):196-203.
经过结核筛查的无症状的受试者，T-SPOT.TB检测结果全部为
47
Clark et al. Clin. Exp.
阴性，特异性100%。
Imm.
2007; 150(2):238-44
在德国用T-SPOT.TB对健康的卫生保健工作者进行筛查。仅1 例阳性（1/95），为影像学工作者，接触病人超过35年。 TST检测假阳性结果34% （32/95）。
95
Barsegian et al.
J of Hospital Inf
结核特异性T细胞，这些淋巴细胞在受到结核特异
抗原刺激后分泌γ 干扰素而设计的T细胞免疫斑点试验。检测外周血中受结核特异抗原刺激释放γ 干扰素的T淋巴细
胞，经酶联免疫显色后，通过ELISPOT分析系统对斑点进行计数，1个斑点代表一个分泌细胞，计算出抗原特异性细胞的频率。
空白对照孔内斑点数小于10且阳性对照孔内斑点数大于20时视为试验有效
在经培养确诊的活动性结核患者中，T-SPOT.TB的灵敏度为94%。
87
Lee et al.
ERJ 2006; 28:24–30
30
Clark et al. Clin. Exp.
Imm.
2007; 150(2):238-44
140
Kang et al Chest.
2007 Sep;132(3):959-65

T-SPOT.TB操作指南[1]

• (抗原 A 或抗原 B 斑点数) – (阴性对照孔斑点数) ≥ 6.
– 当阴性对照孔斑点数 ≥ 6 spots, 阳性样本应为:
• (抗原 A 或抗原 B 斑点数) ≥ 2x (阴性对照孔斑点数).
• 如果阳性对照孔结果良好，但抗原A或抗原B均达不到阳性样本判断标准，则结果为阴性。 • 阳性结果说明患者体内存在针对结核杆菌的效应T淋巴细胞。 • 阴性结果提示患者可能不含针对结核杆菌的效应T淋巴细胞。
结核感染T细胞斑点实验操作指南
Page 1
PP-TB-UK-V8 020306
样品采集与制备
• 推荐采用BD Vacutainer® CPTTM柠檬酸钠抗凝细胞制备真空采血管. • 或肝素锂抗凝采血管，同时准备无菌Ficoll淋巴细胞分离液。
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PP-TB-UK-V8 020306
样品采集与制准备ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
Neubauer Haemocytometer Fast-Read Disposable Counting Slide
Page 11
PP-TB-UK-V8 020306
细胞计数与稀释
• 简化方程:
需要的细胞悬液量(ml) = 每个培养孔需要加入细胞数量 /(100,000s) x 需要使用的细胞稀释液量 (ml) 计数的每ml细胞数量 (106 / ml)
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PP-TB-UK-V8 020306
Page 9 PP-TB-UK-V8 020306
细胞计数及稀释
• 在1.5ml 离心管中加入10µl 已制备样品细胞悬液和40µl 的 0.4% 台酚兰（trypan blue），制备1：5细胞稀释液。 • 取10µl 台酚兰/细胞混合悬液加入血细胞计数板并进行活细胞计数（可使用自动血细胞计数仪自动计数）。

结核感染T细胞(TB-IGRA)检测及意义

结核分枝杆菌（MTB）
注：感染后发病与否和机体易感性有关！
复燃
暴露感染
1% 9%
疾病进展
Latency 潜伏
活动性结核病
2-5% 5-10% HIV>10%
治愈
未根治
一直存在活菌
90%
LTBI 自愈
需预防性服药
细菌全部被清除
不发展为结核病
不需要预防性服药
结核病的免疫主要是细胞免疫
Dheda K, et al.The immunology of tuberculoisis:From bench to beside.Respirogy,2010,15:433-450
目录
contents
1. 结核病的诊断现状
2. TB-IGRA介绍 3. TB-IGRA的临床应用
4. TB-IGRA检测方法及结果解释
临床应用案例
肺结核辅助诊断：
某院呼吸科病人，男临床症状：发热1周，咳嗽检测结果：TB-IgG(-)，TB-IGRA（+）T-N的值是21.5pg/ml 结果分析：TB-IgG灵敏度低，易漏检。临床诊断：肺结核备注：2011年，WHO建议不再使用结核抗体检测结核感染
•原理: 感染者体内被结核菌（TB）抗原致敏的效应T细胞，
在体外受到相同抗原的刺激（在APC辅助下）后，会分泌大量IFN- γ(细胞因子)。通过IFN- γ的检测，判断结核感染情况。
12
目录
contents
1. 结核病的诊断现状
2. TB-IGRA介绍 3. TB-IGRA的临床应用
4. TB-IGRA检测方法及结果解释
潜伏性感染监控
一起小规模结核暴发流行的调查与控制
某中学高三年级小规模结核爆发

结核感染T细胞检测(T-SPOT.TB)

1520文档结核感染T细胞检测(T-SPOT.TB)
一.临床意义：
结核病临床表现复杂多样，可累及全身各个系统，给临床诊断带来很大困难。

本项目检测通过将分离标本中的单个核细胞加入结核分枝杆菌特异性抗原A、B分别进行细胞培养后，分别检测分泌γ干扰素的特异性淋巴细胞的数量诊断结核感染。

本检测诊断结核感染的敏感性为90%-95%，特异性为93%-100%。

对临床诊断或排除结核病具有重要的参考价值。

二.标本类型、采集及运送要求：
1.采集要求：标本采集后4小时内必须送到实验室，标本采集后如果超过4小时未送检将严重影响检测结果。

2.静脉血：肝素钠（绿头管）抗凝管采集静脉血4ml，立即颠倒数次，充分混匀，以免血液凝固。

采血后向试管中注入血液时请缓慢进行，避免用力过猛造成细胞破坏影响检测结果。

三．标本采集时间、结果发放时间及检测频率
1.标本采集时间：每周一上午12点之前采血；并于4小时之内送到临床微生物实验室。

（必要时可与临床微生物实验室联系）
2.结果发放时间：周二下午4点半检验报告发出。

3.检测频率：暂定每周检测一次。

. 1。

结核感染T细胞干扰素释放试验要点

的鉴别诊断；
4、TB-IGRA阳性，表明机体曾经患过结核病，不能区分目前是否为活动性结核病；
5、TB-IGRA所用抗原为MTB特异性抗原，阴性检测结果代表目前机体没有MTB特异抗原致敏的T淋巴细胞，即受检者目前未感染MTB。
说明：近期有其它细菌感染、慢性病等可能会造成体内γ-干扰素升高，或者近期接受γ-干扰素治疗也会导致体内γ-干扰素水平过高。
免疫缺陷患者，应用免疫抑制剂、肾上腺皮质激素治疗患者，病危病人和免疫能力极其低下，在接受结核杆菌相关抗原刺激时，γ干扰素的分泌比较低，可能会产生阴性结果。
建议对该类患者检测前参考CD4含量水平或者T淋巴细胞水平。
结核感染T细胞(TB-IGRA)/γ-干扰素释放试验
项目名称
标本类型
临床意义
“结核感染T细胞(TB-IGRA)”(又称“γ-干扰素释放试验”）
肝素锂抗凝血（长绿管），采集静脉血不低于4mL
1、可用于结核病辅助诊断，特别是对于菌阴肺结核和肺外结核的辅助诊断有更大的临床意义；
2、潜伏性结核筛查(不受卡介苗接种和环境分枝杆菌的影响)，主要用于生物制剂/免疫抑制剂使用前后的结核感染筛查；

结核感染T细胞检测

T-SPOT.TB试验结果用每106 PBMCs中斑点形成细胞（SFCs）的数目来描述，即SFCs/106 PBMCs
T-SPOT.TB高灵敏度
种类
活动性结核/ 灵敏度
内容摘要
将T-SPOT.TB的检测结果与最后通过涂片和培养确诊的结果进行比较。包括牛型结核杆菌和非洲型结核杆菌感染的患者。T-SPOT.TB的灵敏度为97.2%。（CI 90.3-99.7%）
在经培养确诊的活动性结核患者中，T-SPOT.TB的灵敏度为94%。
87
Lee et al.
ERJ 2006; 28:24–30
30
Clark et al. Clin. Exp.
Imm.
2007; 150(2):238-44
140
Kang et al Chest.
2007 Sep;132(3):959-65
抗原刺激后分泌γ 干扰素而设计的T细胞免疫斑点试验。检测外周血中受结核特异抗原刺激释放γ 干扰素的T淋巴
细胞，经酶联免疫显色后，通过ELISPOT分析系统对斑点进行计数，1个斑点代表一个分泌细胞，计算出抗原特异性细胞的频率。
空白对照孔内斑点数小于10且阳性对照孔内斑点数大于20时视为试验有效
Immunol 2008; 15;168-
71
T-SPOT.TB高特异性检测所用的ESAT-6＆CFP 10抗原均来自结核
分枝杆菌基因组RD1区域，RD1区基因仅存在于结核分枝杆菌复合群（人型、牛型、非洲型）。卡介苗和大多数环境分枝杆菌缺失RD1区基因因此 T-SPOT.TB不会受卡介苗或者非结核分枝杆菌影响。
32
Kim et al. Arch Intern
Med.

结核感染T细胞(TB-IGRA)检测及意义

88.6%(39/44)
国外mparison of Tuberculin Skin Testing, QuantiFERON-TB Gold and TSPOT.TB in Children
Latent TB检出高
Positive Tuberculin Skin Test or Interferon-Gamma Release Radiographic Lesions Suggesting Old Healed Tuberculosis
临床应用案例
肺外结核辅助诊断：
➢某院感染科，女，75岁 ➢临床症状：发热数日，胸痛，干咳 ➢检测结果：X射线胸腔积液影像，积液涂片（-）、积液培养
（-）、TB-IGRA T-N 350pg/ml，积液单核细胞增多，血沉快 ➢结果分析：对于肺外结核的诊断，涂片与培养的阳性率极低， TB-IGRA（+），结合其他非特异辅助指标可明确诊断肺外结核。
A
25
NTM（非结核分枝杆菌）比例增高
2000 年全国流调分离的抗酸杆菌菌株中，NTM 菌株占11. 1% ，其中90% 为非结核分枝杆菌肺病。
NTM 肺病的临床表现与结核病相似，既可有全身中毒症状，亦有局部损害表现。但症状和体征缺乏特异性，20%-50% 的病人无明显症状，除非做菌型鉴定，凭临床表现难与肺结核病相鉴别。
A
16
TB-IGRA 产品特性
➢高灵敏度，检出率85%以上
➢高特异性
RD1区编码的ESAT-6和CFP-10两个特异性抗原
该抗原具有较强的Thl细胞免疫原性，且在所有制备卡介苗的菌株及环境中绝大多数非结核分枝杆菌中均不存在该抗原，不受卡介苗和非分
支杆菌影响
IFNg

结核感染T细胞检测(T-SPOT.TB)简介与临床应用

结核菌的特性和临床检测的现状又是如何？
1、结核病疫情严重
全球 • 20亿人口感染结核 • 现有活动性结核病患者2000万 • 新增活动性结核病人约900万/年 • 每年200-300万患者死亡
我国
结核病高负担国家之一，患者人数仅次于印度，居全球第二位
• 约5.5亿人口感染过结核菌 • 现有活动性肺结核患者450万 • 新发患者145万/年 • 死亡人数13万/年
- 胸部的 X-光或 CT 扫描显示异常
- 肺外结核难以诊断 (特别是儿童)
活动性结核
• 新发TB病例来自潜伏性结核感染人群
• 潜伏性结核感染（latent TB Infection, LTBI）人群数量巨大——“定时炸弹”
全面性
目前检测方法是否满足临床需求？
• 细菌学 • 免疫学
灵敏度性能不稳定
结核感染T细胞检测（T-SPOT.TB）简介与临床应用
什么是结核病
• 结核病是由结核杆菌感染引起的慢性传染病。结核菌能侵入全身各个器官，但80% 发生在肺部，常称肺结核。
• 结核病又称为“痨病”和“白色瘟疫”，是一种古老的传染病。
• 人与人之间呼吸道传播是本病传染的主要方式。传染源是接触排菌的肺结核患者，而肺外结核病则不具有传染性。
暴露程度不足，结核杆菌被机体免疫力清除
- 没有症状,结核杆菌仍旧存在而不能被侦测
- X-光/ CT 扫描显示正常
- 没有抗体应答
- 诊断困难
- 传统的结核感染检测只有 TST（PPD）
机体被感染
受机体免疫力抑制没有临床症状
终身处于感染状态
潜伏感染
5%
5%
再次激活
有临床症状具有传染性

结核感染t细胞检测课件

自动化和智能化
开发自动化和智能化的T细胞检测系统，提高检测的效率和可重复性。
T细胞检测与其他检测方法的联合应用
与细菌学检测联合
将T细胞检测与传统的细菌学检测方法相结合，以提高结核病的诊断准确性。
与免疫学检测联合
将T细胞检测与其他免疫学指标（如抗体水平）相结合，以提供更全面的免疫反应信息。
与分子生物学检测联合
04
结核感染T细胞检
测的临床应用
诊断结核病
诊断准确性
结核感染T细胞检测通过检测体内是否存在结核特异性抗原，能够准确诊断结核病，尤其对于肺外结核和痰菌阴性肺结核的诊断具有重要意义。
早期诊断
由于结核感染T细胞检测具有较高的灵敏度，能够在结核病早期阶段就检测出阳性结果，有助于早期诊断和治疗，减少疾病传播。
临床验证
进行大规模的临床验证研究，以评估新型T细胞检测方法的性能和实用性。
THANKS
感谢您的观看
T细胞检测通常采用酶联免疫法（ELISA）或酶标仪进行定量检测。
通过检测IFN-γ水平，判断是否存在结核特异性T细胞反应。
T细胞检测的优势与局限性
优势
T细胞检测具有较高的灵敏度和特异性，能够早期发现结核感染，尤其适用于潜伏性结核感染的诊断。
局限性
T细胞检测无法区分活动性结核与潜伏性结核感染，且受免疫系统功能状态、年龄、疫苗接种等因素影响，可能出现假阳性或假阴性结果。
结核感染T细胞检测课件
目录
CONTENTS
• 结核感染概述 • 结核感染的检测方法 • 结核感染T细胞检测原理 • 结核感染T细胞检测的临床应用 • 结核感染T细胞检测的未来发展
01
结核感染概述

结核感染T细胞检测方案

32
Kim et al. Arch Intern
Med.
2007; 167;20:2255-2259
186
Kim et al. Am J Med
2009；122, 189-195
58
Janssens et al ERJ
2007；30(4):722-8
32
Dominguez et al Clin
Vacc
结核特异性T细胞，这些淋巴细胞在受到结核特异
抗原刺激后分泌γ 干扰素而设计的T细胞免疫斑点试验。检测外周血中受结核特异抗原刺激释放γ 干扰素的T淋巴细
胞，经酶联免疫显色后，通过ELISPOT分析系统对斑点进行计数，1个斑点代表一个分泌细胞，计算出抗原特异性细胞的频率。
空白对照孔内斑点数小于10且阳性对照孔内斑点数大于20时视为试验有效
Diseases
2009,9:60
6.结论
T-SPOT.TB在诊断结核感染方面具有良好的敏感性和特异性，在现有结核诊断方法存在缺陷的今天， T-SPOT.TB 可以给临床诊断提供参考。
基于结核抗原特异性T细胞向病变部位集中的特点， T-SPOT.TB的检测物已不局限于静脉血，支气管肺泡灌洗液、痰液、胸腹水、脑脊液等也可用于对肺内及肺外结核的诊断。
受试者数量
72
文献发表
Meier et al Eur J Microbiol Infect Dis (2005)；24: 529-536
在经培养确诊的活动性结核受试者中，T-SPOT.TB的灵敏度为96.6%。其中29例免疫力低下患者，T-SPOT.TB的灵敏度为100%
在确诊病例（涂片或培养阳性）和临床诊断病例（有临床症状和抗痨治疗有效）中，T-SPOT.TB的灵敏度为90.3% ，并且不受CD4细胞数量影响。

检验科新项目-结核感染T细胞

检验科新项目-----结核感染T细胞γ干扰素释放实验（TB-IGRA）为更好满足肿瘤性、结核性包块及肿瘤性、结核性胸腹水鉴别诊断的临床需求，检验科拟开展“结核感染T细胞γ干扰素释放实验”的新项目。

该项目采用经美国CDC及欧盟CDC
推荐的更敏感的结核检测技术。

此技术不受卡介苗和其他常见非结核分枝杆菌的干扰，主要用于癌性胸腹水与结核性胸腹水等的鉴别诊断。

该技术检测标本类型除血液外还可检测体液（如胸腹水、灌洗液、浆膜腔积液等）。

该项目可以医保支付。

一检测原理
结核分枝杆菌感染机体后，T淋巴细胞会形成免疫“记忆”；通过在体外分离到T淋巴细胞后，培养增殖T细胞的同时加入相应结核分枝杆菌特异抗原进行刺激，激活该细胞的记忆；有记忆的细胞会分泌γ干扰素；通过检测γ干扰素的量，来反映机体是否有结核感染。

二临床意义
该检测可用于肿瘤性、结核性包块及肿瘤性、结核性胸腹水等的鉴别诊断。

三 TB-IGRA检测结果的临床意义解读
1 TB-IGRA阴性结果：阴性检测结果代表目前机体没有 MTB 特异抗原致敏的 T 淋巴细胞，即受检者目前未感染 MTB。

临床诊断上首选排除结核病的诊断，尤其是在结核病高发地区、免疫功能正常人群及无可靠依据诊断结核病时。

2 TB-IGRA阳性结果：应结合影像学，临床症状，既往病史，结核中毒症状，有无病灶等综合考虑进行临床诊断和干预措施。

由于该实验涉及活细胞培养，为了保证测定结果的准确性，请严格按照下表要求采样和。

QB—SPOT结核实验

QB—SPOT结核实验
结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）是一种运用IGRA技术，检测被结核分枝杆菌特异的早期分泌靶抗原6（ESAT-6）和培养滤液蛋白10（CFP 10）分别刺激后释放γ-干扰素的效应T淋巴细胞，以辅助诊断结核感染的实验室检测技术。

TBspot试验通常指T-SPOT试验，即结核杆菌感染T细胞斑点试验，又称为结核菌感染干扰素释放试验，是利用结核特异性抗原，通过酶联免疫斑点技术，检测受试者体内是否存在结核效应的T淋巴细胞，从而判断被检查者是否感染结核杆菌。

该检查的原理是结核杆菌感染之后，T淋巴细胞会形成免疫记忆。

通常在体外分离到T淋巴细胞之后，培养增殖T细胞的同时，用相应的特异性抗原，进行刺激，激活T细胞记忆，有记忆的细胞则会分泌大量的干扰素。

结核T-SPOT检查即为结核菌T细胞斑点检测，是临床用于诊断结核病的新型检查方法。

通过检测干扰素的量，判断该细胞是否存在结核感染形成的记忆，进而通过进一步的反应判断是否存在结核菌感染。

但它的结果不能作为单独或决定性诊断活动性结核的证据，阳性结果仅提示患者体内存在结核杆菌特异性的效应T细胞。

但是否为活动性结核，则需要结合患者的临床症状及其他检测指标，进行综合判断。

现在已经有多项研究的结果显示，T-SPOT试验只能判断是否感染过结核，但无法鉴别活动性结核与潜伏性结核，因此对于活动性结核的诊断价值有限。

结核感染T细胞检测

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在德国用T-SPOT.TB对健康的卫生保健工作者进行筛查。仅1 例阳性（1/95），为影像学工作者，接触病人超过35年。 TST检测假阳性结果34% （32/95）。
95
在接触结核的健康医务工作者和健康对照受试者中用TST和TSPOT.TB检测。155健康医务工作者中，TST阳性的27例，而 T-SPOT.TB仅3例阳性。健康对照组T-SPOT.TB全部阴性而 TST有3例阳性。
186
Kim et al. Am J Med 2009；122, 189-195
58 32
Janssens et al ERJ 2007；30(4):722-8 Dominguez et al Clin Vacc Immunol 2008; 15;16871
T-SPOT.TB高特异性检测所用的ESAT-6＆CFP 10抗原均来自结核
218
Storla et al. BMC Infectious Diseases 2009,9:60
6.结论
T-SPOT.TB在诊断结核感染方面具有良好的敏感性和特异性，在现有结核诊断方法存在缺陷的今天， T-SPOT.TB 可以给临床诊断提供参考。基于结核抗原特异性T细胞向病变部位集中的特点， T-SPOT.TB的检测物已不局限于静脉血，支气管肺泡灌洗液、痰液、胸腹水、脑脊液等也可用于对肺内及肺外结核的诊断。
分枝杆菌基因组RD1区域，RD1区基因仅存在于结
核分枝杆菌复合群（人型、牛型、非洲型）。
卡介苗和大多数环境分枝杆菌缺失RD1区基因因此 T-SPOT.TB不会受卡介苗或者非结核分枝杆菌影响。
种类
内容摘要
受试者数量 14
文献发表
特异性

t 细胞斑点法

t 细胞斑点法T细胞斑点法是一种用于检测T细胞免疫反应的方法。

它通过检测T 细胞对特定抗原的反应来确定免疫系统是否对某种病原体产生了免疫反应。

这种方法被广泛用于检测病毒感染、肿瘤、自身免疫性疾病等多种情况。

本文将详细介绍T细胞斑点法的原理、步骤及其在临床中的应用。

一、原理T细胞斑点法基于以下原理：当机体受到感染或其他刺激时，特定的抗原会被处理成小片段，并呈现在抗原提呈细胞表面上，这些表面抗原片段能够诱导T细胞免疫反应。

在这个过程中，活化的T细胞会分泌干扰素γ（IFN-γ），而IFN-γ则会刺激靶细胞释放出介导免疫反应所需的化学物质。

因此，通过检测IFN-γ释放量就可以确定是否存在特定的T细胞免疫反应。

二、步骤1.血样采集：使用标准的静脉采血方法采集患者的外周血。

2.细胞分离：将血样中的白细胞分离出来。

这可以通过密度梯度离心法或磁珠分离法实现。

3.抗原刺激：将抗原加入到白细胞中并进行培养。

这个过程需要一定的时间，通常需要24-48小时。

4.检测IFN-γ：将培养液收集起来，并使用特定的酶联免疫吸附试验（ELISPOT）或流式细胞术检测其中IFN-γ的含量。

5.数据分析：根据IFN-γ含量确定是否存在特定的T细胞免疫反应。

三、应用T细胞斑点法在临床中有着广泛的应用。

以下是其中几个方面：1. 检测病毒感染：例如，T细胞斑点法可以用于检测结核病、乙型肝炎和人类免疫缺陷病毒（HIV）等感染。

2. 肿瘤诊断和治疗监测：T细胞斑点法可以用于检测肿瘤特异性T细胞的存在和活性，以评估肿瘤的免疫治疗效果。

3. 自身免疫性疾病诊断：例如，T细胞斑点法可以用于检测类风湿关节炎、系统性红斑狼疮和硬皮病等自身免疫性疾病。

4. 药物过敏反应：T细胞斑点法可以用于检测药物过敏反应中特定的T 细胞免疫反应。

总之，T细胞斑点法是一种可靠、灵敏和特异的检测方法，可以用于评估机体对感染、肿瘤和自身免疫性等方面的免疫反应。

在临床中有着广泛的应用前景。

结核感染T细胞斑点试验

T-SPOT-TB—应用
在活动性结核病中的诊断意义 1.敏感性86-94%，特异性89-99% 2.在肝移植术后、艾滋病、血液肿瘤等免疫抑制患
者中， T-SPOT-TB阳性率略低于免疫正常组，但仍具有较高的敏感性，且优于结核菌素试验。
3.在肺外结核患者诊断中的，敏感性优于结核菌素试验。
4.对小于4岁儿童，与结核菌素实验比较敏感性无优势，美国CDC更推荐结核菌素实验。
结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT-IGRAs）
在2001年前，美国仅批准结核菌素皮肤试验（TST）用于结核分支杆菌的检测。在认识到IFN-γ在调节对结核分支杆菌的细胞介导的免疫反应中起重要作用，从而使得（interferon gamma release assays） IGRAs用于检测结核感染。IGRAs通过检测代表结核分支杆菌的抗原刺激T淋巴细胞反应后释放IFN-γ的量来判断是否存在结核杆菌感染。
T-SPOT-TB—示意
T-SPOT-TB—解释
非黄金标准定性检测而不是定量检测敏感性95.3%-98.8% 特异性94.1%-100% 萨斯分枝杆菌( My cobacter ium kans asii ) 、海
分枝杆菌(My cobacter ium mar inum ) 、斯氏分枝杆菌( My cobacter ium sz ul gai ) 等少数分枝杆菌中也存在完整RD1区，编码ESAT�� 6 和CFP�� 10, 可造成检测结果成假阳性。
T-SPOT-TB—应用
在结核性脑膜炎、结核性胸膜炎中的诊断意义 1.敏感性优于ADA、TB-DNA，约在62-75%，特异性无
统计学差异。 • 在结核病治疗中的评价意义

结核感染T细胞斑点实验临床检测研究

结核感染T细胞斑点实验临床检测研究
邹盛华;张丽水;黄明翔;毛文捷
【期刊名称】《中国防痨杂志》
【年(卷),期】2009(031)009
【摘要】目的探讨结核感染T细胞斑点实验(T-SPOT.TB)在临床快速诊断结核病中的应用价值.方法利用T-SPOT.TB方法检测外周血中结核感染特异的效应T淋巴细胞的频率.同时与涂片抗酸染色、BACTEC960培养及实时定量PCR方法做比对.结果 164例结核病患者中,155例T-SPOT.TB阳性,提示方法敏感度为
94.5%(155/164),显著高于其他方法.60例非结核呼吸道疾病对照组中有5例阳性,20例健康对照均为阴性,方法的特异度为93.8%(75/80).结论 T-SPOT.TB方法敏感度和特异度均非常高,可用于结核病的快速诊断,尤其是对于结核病和非结核分枝杆菌病的早期鉴别.
【总页数】4页(P539-542)
【作者】邹盛华;张丽水;黄明翔;毛文捷
【作者单位】福建省福州肺科医院,福州,350008;福建省福州肺科医院,福
州,350008;福建省福州肺科医院,福州,350008;福建省福州肺科医院,福州,350008【正文语种】中文
【相关文献】
1.结核感染T细胞斑点实验在结缔组织病患者中辅助诊断结核感染的应用 [J], 王霖
2.结核感染T细胞斑点实验在结核病快速诊断中的临床应用价值 [J], 高万芹
3.肺结核合并糖尿病患者的临床特征及结核感染T细胞斑点实验的应用价值 [J], 郑志炫
4.肺结核合并糖尿病患者的临床特征及结核感染T细胞斑点实验的应用价值 [J], 郑志炫
5.结核感染T细胞斑点实验在临床早期诊断菌阴肺结核中的应用价值 [J], 朱峰;姜秀峰;李柏春;葛良卫
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