产果胶酶黑曲霉的筛选及诱变育种
高产果胶酶的黑曲霉化学诱变选育
高产果胶酶的黑曲霉化学诱变选育杜国军;程红;彭凯;刘晓兰;田英华【期刊名称】《江苏农业科学》【年(卷),期】2012(040)004【摘要】以黑曲霉(Aspergillus niger) HY - D3为出发菌株,采用化学试剂甲基磺酸乙酯(EMS)进行诱变处理,以获取果胶酶高产突变菌株.首先使用透明圈法进行初筛,选育出透明圈与菌落直径比值有大幅提高的突变株,然后采用固体发酵法进行复筛,最终筛选出1株高产果胶酶的突变株HY - M27.HY - M27经过连续5代的斜面培养,产果胶酶遗传特性稳定,其酶活力达到了2290 U/g以上,比出发菌株提高了2.91倍.【总页数】3页(P348-350)【作者】杜国军;程红;彭凯;刘晓兰;田英华【作者单位】齐齐哈尔大学食品与生物工程学院,黑龙江齐齐哈尔 161006;齐齐哈尔大学农产品加工黑龙江省普通高校重点实验室,黑龙江齐齐哈尔 161006;齐齐哈尔大学食品与生物工程学院,黑龙江齐齐哈尔 161006;齐齐哈尔大学食品与生物工程学院,黑龙江齐齐哈尔 161006;齐齐哈尔大学食品与生物工程学院,黑龙江齐齐哈尔 161006;齐齐哈尔大学农产品加工黑龙江省普通高校重点实验室,黑龙江齐齐哈尔 161006;齐齐哈尔大学食品与生物工程学院,黑龙江齐齐哈尔 161006;齐齐哈尔大学农产品加工黑龙江省普通高校重点实验室,黑龙江齐齐哈尔 161006【正文语种】中文【中图分类】Q933【相关文献】1.果胶酶高产菌株的微波-硫酸二乙酯复合诱变选育 [J], 杜国军;田英华;刘晓兰2.果胶酶高产菌株的激光诱变选育研究 [J], 王爱峰;张智维;曹忙选3.高产纤维素酶黑曲霉菌株的化学诱变选育 [J], 冯培勇;宿红艳;张丽;王艳华4.黑曲霉原生质体诱变选育果胶酶高产菌株 [J], 陈林;王明兹;柯崇榕;高媛媛;庄秀红;杨章萍;牛俊巍;黄建忠5.果胶酶高产菌种的紫外诱变选育及其培养条件的响应面法优化 [J], 林伟铃;田宝玉;秦勇;吕睿瑞;王春香;强慧妮;黄建忠因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
果胶酶生产菌株的筛选过程
果胶酶生产菌株的筛选过程
果胶酶是一种水解果胶的酶，广泛应用于饮料、果汁、果酱等果蔬加工行业，因此具
有广阔的市场前景。
果胶酶的生产需要先筛选出高效的产酶菌株，这是整个生产链中的重
要环节之一。
本文将介绍果胶酶生产菌株的筛选过程。
一、菌株筛选的目的
菌株筛选的目的是选择能够高效稳定产生果胶酶的菌株，并进行进一步的优化。
其中，首先对原料的化学成分进行分析，确定产酶菌株种类；然后利用生物学方法进行初步筛选，筛选出具有较高产酶活力的菌株；最后通过构建适合产酶环境的基因工程菌株，提高果胶
酶产量及质量。
二、原料分析
果胶酶生产的原材料主要是果胶。
在根据应用对象的要求确定产酶菌株种类前，需要
对果胶的化学成分进行分析。
化学成分分析涉及果胶的多种指标，如果胶的含量、分子量、分枝度等。
三、生物学初筛
四、构建基因工程菌株
生物学初筛之后，还需要进一步构建基因工程菌株，进一步提高产酶能力。
通常采用
两种策略：一是通过原位突变构建高酶力突变菌株；二是将产酶基因转化到优良的生产菌
株中，形成高产酶菌株。
这两种策略的原理是一样的，都是通过改变产酶基因的表达水平，实现在原生菌株中快速构建高效产酶菌株的目的。
以上就是果胶酶生产菌株的筛选过程的详细介绍。
通过该过程的步骤，可以产生高效、稳定、可持续产酶的菌株，促进果胶酶的产业化发展。
果胶酶预设方案
产果胶酶黑曲霉的筛选及诱变育种1.实验材料1.1菌种由中科院提供1.2.1斜面培养基察氏培养基：硝酸钠3g，磷酸氢二钾1g，七水合硫酸锰0.5g，氯化钾0.5g，硫酸亚铁0.01g，蔗糖30g，琼脂20g，水1000mL。
（121度灭菌20min）1.2.2平板分离培养基（察氏培养基）1.2.3果胶平板培养基（％）磷酸氢二钾0.1，硝酸钠0.3，硫酸镁0.05，硫酸铁0.001，琼脂2.0，果胶0.2，pH5.51.2.4固体发酵复筛培养基1.麸皮10g，豆粕0.25g，硝酸钠0.35g，硫酸铵0.1g，装入250mL三角瓶，按料水比（w/v）1：1.5加入pH5.0~5.5的水。
（0.1Mpa/cm2灭菌30min）2试验方法2.1出发菌种的筛选2.1.1菌种的活化取斜面培养基的黑曲霉菌种一支，接种于察氏斜面培养基，36℃恒温培养5~7天。
2.1.2制备孢子悬液取活化的斜面一支，加入无菌水洗下孢子，制成均匀的孢子悬液，调整孢子浓度为1.0×106个/mL。
（参考一定浓度菌悬液的制备，比较几种方法的准确度）2.1.3平板分离将菌悬液进行系列稀释，使之成为十万、一万、一千、一百个孢子每毫升，并分别涂布与果胶平板培养基，36℃恒温培养5~7天。
2.1.4菌种的筛选1向平皿中加入5mL碘液，静止2min，即可见清晰的透明圈，将碘液倒出加入5mL生理盐水10min，将剩余碘液冲洗干净，选取透明圈与菌落直径比大的接种与斜面培养基，并分别进行固体发酵，选取酶活力高的作为出发菌株。
2黑曲霉的直径之比最大，说明它的产酶能力较高，所以采用黑曲霉作为出发菌株。
实验采用刚果红平板培养基作为筛选培养基，培养基中果胶作为唯一碳源，又作为底物诱导物，诱导果胶酶的产生。
刚果红作为透明圈指示剂，可能与果胶形成红色络合物，果胶酶分解果胶络合物消失，在平板上形成透明水解圈。
透明圈与菌落直径之比越大，酶活力越高。
2.2紫外线照射剂量的选择2.2.1取36℃恒温培养5天的出发菌种斜面，用生理盐水洗下孢子，将孢子悬浮液置于无菌的盛有玻璃珠的三角瓶中，震荡使孢子分散，再以双层无菌擦镜纸过滤，使形成分散程度达到90~95％的单孢子悬液。
产果胶酶黑曲霉的UV诱变及基于葡萄皮渣的固态发酵
ｒ ｅ ｓ ｉ ｄ ｕ ｅ ｗａ ｓ ｕ ｓ ｅ ｄ ｔ ｏ ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｅ ｐ ｅ ｅ ｔ ｉ ｎ ａ ｓ ｅ ｂ ｙ Ａ ｓ ｐ ｅ ｒ ｇ ｉ ｌ ｌ ｕ ｓ ｎ ｉ ｇ ｅ ｒ ． Ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｓ ｈ ｏ ｗ ｅ ｄ ｔ ｈ ａ ｔ ， ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ｅ ｉ ｇ ｈ ｔ Ａ ｓ ｐ ｅ ｒ ｇ ｉ ｌ ｌ ｕ ｓ ｎ ｉ ｇ ｅ ｒ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ ｓ
２ ． 陕西省 葡 萄与 葡萄 酒工程技 术研 究 中心 ， 陕 西杨 凌 ７ １ ２ １ ０ ０ ）
摘 要： 对产果胶酶的黑曲霉进行 紫外诱 变， 使 用透明圈法并结合液 态发 酵法进行 筛选， 获得果胶 酶产量提 高的黑曲
霉菌株 ， 并利 用葡萄皮 渣进行 固态发 酵 生产果胶 酶。结 果表 明， Ｈ ４ ０ ７ ４ １ 、 Ｈ ４ ０ ４ ９ ３ 、 Ｈ ４ ０ ９ ８ ２ 、 Ｈ ４ １ １ ３ ３ 、 Ｈ ４ １ １ ３ ４ 、 Ｈ ４ １ ０ ３ ４ 、
生 物 王 程
Ｖ ｏ １ ３８ ， Ｎｏ ． １ ２０１７
．
产 果胶 酶 黑 曲霉 的 Ｕ Ｖ诱 变 及 基 于 葡萄 皮 渣 的 固态 发 酵
黄丹 梅’ ， 宋 育阳 ， 刘 延琳 ， 秦 义 ’
（ １ ． 西北农 林科 技 大 学葡萄 酒 学院 ， 陕西杨 凌 ７ １ ２ １ ０ ０ ；
Ｕｌ ｔ ｒ ａ ｖ ｉ ｏ ｌ ｅ ｔ ｌ ｉ ｇ ｈｔ ｏ ｎ Ｈ４０ ７ ４１ ｓ ｐ ｏ ｒ ｅ ｓ ０￣３ ６０ ｓ ， ａ ｎ ｄ ｗｅ ｏ ｂｔ ａ ｉ ｎ ｅ ｄ ａ ｈ ｉ ｇ ｈ ｙ ｉ ｅ ｌ ｄ ｐｅ ｃ ｔ ｉ ｎａ ｓ ｅ ｍｕ ｔ ａ ｎｔ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ Ｈ４ ０７ ４１－２０ ． Ｔｈ ｅ ｐｅ ｃ ｔ ｉ ｎ ａ ｓ ｅ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ ｗａ ｓ ４ ６ ２． ８ ４ Ｕ／ｍＬ ｉ ｎ ｐｅ ｃ ｔ ｉ ｎ ｌ ｉ ｑｕ ｉ ｄ ｆ ｅ ｒ ｍｅ ｎｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｍｅ ｄ ｉ ｕ ｍ， ｗｈｉ ｃ ｈ ｗａ ｓ ３ ｔ ｉ ｍｅ ｓ ｏ ｆ ｔ ｈｅ ｏ ｒ ｉ ｇ ｉ ｎ ａ ｌ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ ． Ｂｙ ｏ ｐ ｔ ｉ ｍｉ ｚ ｉ ｎ ｇ ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｎ ｔ ｅ ｎ ｔ ｓ ｏ ｆ ｇ ｒ ａ ｐ ｅ ｓ ｋ ｉ ｎ ｒ ｅ ｓ ｉ ｄｕ ｅ， ｗｈ ｅ ａ ｔ ｂ ｒ ａ ｎ ａ ｎ ｄ ｗａ ｔ ｅ ｒ， ｗｅ ｏ ｂｔ ａ ｉ ｎｅ ｄ ａ ｂ ｅ ｔ ｔ ｅ ｒ ｍｅ ｄ ｉ ｕ ｍ ｆ ｏ ｒ ｍｕｌ ａ ｗａ ｓ ｇ ｒ ａ ｐｅ ｓ ｋ ｉ ｎ ｒ ｅ ｓ ｉ ｄｕ ｅ ５ ０ ｇ， ｗｈ ｅ ａ ｔ
黑曲霉原生质体诱变育种技术研究进展
自Ｂｕｃｈｍａｎ和Ｂｏｎｎｅｒ在１９５９年首次报道利用酶解破壁方法从粗糙脉孢霉（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｚｒａｃｒａｓａ）菌丝体释放原生质体以后，在其他各种真菌的原生质体制备和再生的研究陆续开展，极大丰富了人们对真菌细胞外表和其生理功能的知识，尤其对于２０世纪７０年代中期兴起的原生质体融合遗传育种手段在丝状真菌的应用起到了启动作用［４］。
对于黑曲霉的原生质体制备、再生以及原生质体诱变育种技术的研究也日益增多。
但是自然筛选的黑曲霉产酶水平一般较低，无商业开发价值，而诱变育种是一种简便易行而且快速的选育方法。
由于各种诱变剂对微生物的作用位点和方式不尽相同，因此，反复使用同一诱变因子会出现钝化现象，可能引起微生物的回复突变，这就要求在黑曲霉进行诱变育种时要尽量选用新的诱变因子，才会有较大可能性取得成功。
原生质体由于去除外壁障碍，对各种诱变剂敏感性较强，往往正突变率高，因而利用原生质体直接诱变经过多种诱变剂处理过的钝化株，是较有意义的诱变方法。
１黑曲霉原生质体Ｗｅｉｂｕｌｌ等于１９５３年首先提出原生质体概念。
用水解酶将细胞壁水解剥离，剩下由原生质体膜包围着的原生质体部分称为原生质体（ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔ）。
其形状随不同菌类而异。
原生体基本保持原细胞结构、活性和功能，只是因为去掉了细胞壁，对渗透压和外界环境特别敏感。
为制备原生质体，必须有效地除去细胞外的细胞壁。
去壁的方法有机械法、非酶分离法和酶法。
实际工作中绝大多数采用酶法，时间短，效果好。
１．１原生质体的生物学特性原生质体与完整细胞相比，细胞结构和功能是相类似的；来自不同菌丝部位的原生质体，生理生化特性不同，对诱变剂的敏感也不同，从菌丝顶端分离出的原生质体代谢活动要强；去壁后的原生质体对外界条件敏感，并且外界大分子如外源ＤＮＡ等容易进入细胞内；原生质体在一定条件下容易再生成细胞壁而复原为完整细胞形态；原生质体由于剥去了细胞壁，等于失去了屏障，外界的因素本身对它就有影响，再加上用诱变剂黑曲霉原生质体诱变育种技术研究进展李秀珍，杨平平，王燕＊（山东轻工业学院食品与生物工程学院，山东济南２５０３５３）摘要：综述了黑曲霉原生质体的生物学特性、释放过程、再生过程以及酶浓度、酶解温度、酶解时间、菌体的预处理和渗透压稳定剂等对黑曲霉原生质体制备的影响。
果胶酶高产菌种的筛选
果胶酶高产菌种的筛选
钦传光;丹·娃伦亭娜;丁诺·狄安娜
【期刊名称】《中国酿造》
【年(卷),期】2000(000)004
【摘要】采用简化的筛选流程,先定性后定量地对112种由加拉兹工业微生物菌种实验室提供的黑曲霉纯种进行了筛选.将菌种所产生的酶活力与市售的实用酶制剂的酶活力相比较,结果选出三株果胶酶高产菌,其中内聚半乳糖醛酸酶和外聚半乳糖醛酸酶的活性较高,更适合于食品工业的需要.
【总页数】3页(P14-15,18)
【作者】钦传光;丹·娃伦亭娜;丁诺·狄安娜
【作者单位】湖北工学院生物工程系,武汉,430068;罗马尼亚加拉兹大学食品工程系;罗马尼亚布加勒斯特大学生物系
【正文语种】中文
【中图分类】TS2
【相关文献】
1.高效产果胶酶的黑曲霉菌种的诱变及筛选 [J], 屈二军;李文建;刘云肖;陈兰英;赵桢
2.紫外诱变黑曲霉筛选高产果胶酶菌种 [J], 佘秋生;杨海波;杨冠军;薛银磊;祝小龙;单林娜
3.饲用果胶酶高产菌种的选育及其固态发酵生产技术 [J],
4.果胶酶高产菌种的紫外诱变选育及其培养条件的响应面法优化 [J], 林伟铃;田宝
玉;秦勇;吕睿瑞;王春香;强慧妮;黄建忠
5.嗜碱细菌碱性果胶酶的研究——Ⅰ.菌种筛选、产酶条件和酶作用条件的研究 [J], 黄诗笺;卢振祖;陈漱涢
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产果胶酶菌株的筛选
产果胶酶菌株的筛选果胶酶是一种广泛存在于细菌、真菌和植物中的酶，对果胶的降解有着重要的作用。
本文采用筛选法对果胶酶菌株进行了研究，通过对果胶酶活性的测定和分析，最终筛选出了一株高效产果胶酶的细菌菌株。
该研究为果胶酶的应用和产业化开发提供了一定的理论和实践基础。
关键词：果胶酶；筛选法；菌株；活性；产业化一、引言果胶是一种存在于植物细胞壁中的多糖物质，对于维持植物细胞的结构和功能具有重要作用。
而果胶酶则是一种能够降解果胶的酶，广泛存在于细菌、真菌和植物中，对于果胶的降解和利用有着重要的作用。
因此，研究和开发高效产果胶酶的菌株，对于果胶的应用和产业化开发具有重要意义。
目前，产果胶酶的菌株主要通过筛选法进行研究和开发。
筛选法是指通过对大量的微生物菌株进行筛选和鉴定，最终选出具有高效果胶酶产生能力的菌株。
该方法具有简单、快速、经济等优点，已经成为了产酶菌株研究的主要手段之一。
二、筛选方法本研究采用筛选法对果胶酶菌株进行了研究。
具体方法如下：1.样品采集从不同的环境中采集微生物样品，包括土壤、水体、植物等。
将样品分别接种到含有果胶的培养基中，筛选出产果胶酶的微生物菌株。
2.酶活性测定采用橙色果胶法对菌株的果胶酶活性进行测定。
将菌株培养于含有果胶的液体培养基中，采用紫外分光光度计对液体中的果胶酶活性进行测定。
3.菌株鉴定对产酶菌株进行鉴定，包括形态学、生理生化特征、16S rRNA序列分析等，最终确定产酶菌株的种属和命名。
4.酶活性分析对不同菌株的果胶酶活性进行比较分析，筛选出产酶效果最好的菌株。
5.产酶菌株保存将筛选出的高效产果胶酶菌株进行保存，为后续的应用和产业化开发提供保障。
三、结果与分析通过上述筛选方法，本研究筛选出了一株高效产果胶酶的菌株，命名为Pseudomonas sp. CJ-1。
该菌株的果胶酶活性为0.152 U/mL，比其他菌株要高出很多。
同时，通过对菌株的形态学、生理生化特征和16S rRNA序列分析，确定该菌株属于假单胞菌属(Pseudomonas)。
实验三 产果胶酶菌株的筛选
总的来说，我认为我们小组本次的实验较为成功。首先，我们的分离平板上长的菌种较好，并且纯化平板上长出了不止一个小菌落；其次，我们组的标准曲线测定的数据可信度较高，为后面酶活的准确计算提供了好的前提；最后，是我们小组的成员在实验时，操作规范，一丝不苟，本着严肃认真的态度进行实验，为整个实验的成功提供了基本的保障。
③在绘制标准曲线时，每一浓度OD值要测两次，最终取平均值，以减小误差；
④ 加入0.2ml待测酶液时，应小心不要滴在试管壁上，否则煮沸过后可能溶液由于未有酶液还未开始反应；
⑤酶活测定时：
试管上编号：贴上用圆珠笔写上编号的胶布，以防止保温或沸水加热时脱落；
移液枪的使用：向试管内加入待测酶液或DNS时，枪头不要触碰管壁，也不要伸入液面下，连续吸取同一种溶液时可以不用更换枪头！
精确记时：每一管加入酶液的时间要记录，每管之间间隔的时间要合理；
避免试管进水：煮沸和用流水冲洗时；
⑥ 分光光度计使用时：
•提前半小时接通电源，打开机器开关使仪器通电，自检；
•将对照液及测定液分别装入比色杯3/4体积并用镜头纸擦干外壁，放入样品室；
•调节测定所用波长540nm；
•以对照为参比；
•测定的是吸光值；
加入3mLDNS试剂终止反应
加入3mLDNS试剂终止反应
步骤6
混合均匀
混合均匀
混合均匀
步骤7
加入0.2毫升待测酶液，沸水浴煮沸5min
沸水浴煮沸5min
沸水浴煮沸5min
步骤8
流水冷却
流水冷却
流水冷却
步骤9
加蒸馏水10mL，混匀
加蒸馏水10mL，混匀
加蒸馏水10mL，混匀
步骤10
OD540nm比色
黑曲霉原生质体诱变及其产纤维素酶条件研究
纤维素类物质是自然界中最丰富的一种可再生资源 和能源，如果能利用纤维素酶将天然纤维素降解为可利 用的低聚糖，再进一步转化为生物乙醇等物质，对解决当 前世界所面临的能源危机和环境污染问题具有深远的意 义【”。据报道，产生纤维素酶的微生物大多是木霉属菌株， 而利用黑曲霉生产纤维素酶的报道较少【２】。本文选择黑 曲霉作为出发菌株，通过紫外线、硫酸二乙酯对其原生质 体进行复合诱变育种，并对其产酶条件进行了优化，以期 进一步提高其纤维素酶活力，弥补木霉属菌株的不足。
原生质体再生培养基，３０℃培养３ ｄ，计算再生率。 原生质体再生率＝（再生菌落数／原生质体数）ｘ１００％
１．２－３原生质体诱变处理
项目１广可广嚆≯≮孑１而 表１紫外照射时间对原生质体致死率的影响
．；。
照射时间（ｓ）
１．２．３．１紫外线诱变（ＬｒＶ） 将适量原生质体悬液置于无菌培养皿中，置于１５ Ｗ
紫外灯下，距离１０ ｃｍ照射不同时间，红灯保护下吸取原 生质体悬液１ ｎ也，涂布于再生培养基平板上。取未经紫 外线处理的原生质体悬液１ ｍＬ，同样涂布于平板做对 照，置于培养箱中３０℃恒温培养３ ｄ计数，计算致死率。 １．２．３．２硫酸二乙酯（ＤＥＳ）诱变
ｌ材料与方法
１．１材料 黑曲霉３０７８６，购自中国农业微生物菌种保藏中
心；生物传感器（ＳＢＡ一４０型），购自山东省科学院；渗透 压稳定剂：０．８ ｍｏｌ／Ｌ氯化钾溶液；硫酸二乙酯（ＤＥＳ）溶 液：２ ｍＬ ＤＥＳ溶于８ ｍＬ ９５％ｖｏｌ乙醇，备用。
无菌复合酶液：将一定量的纤维素酶、蜗牛酶及溶菌 酶溶于渗透压稳定剂，充分振荡溶解后，８０００ ｒ／ｍｉｎ离心 １５ ｍｉｎ，用０．２２ Ｉｘｍ滤膜过滤除菌；配制成０．５％纤维素 酶＋０．５％蜗牛酶＋１．０％溶菌酶的混合酶液。
产果胶酶菌株的筛选
产果胶酶菌株的筛选果胶酶是一种广泛存在于微生物中的酶类，对于果汁、果蔬加工、酿酒等行业具有重要的应用价值。
本文通过对果胶酶的作用机理和筛选方法的介绍，以及对果胶酶产生菌株的筛选过程的详细描述，为果胶酶的生产提供了一定的参考。
关键词：果胶酶，产生菌株，筛选方法，应用价值引言果胶酶是一种可以分解果胶的酶类，它广泛存在于微生物中，如细菌、真菌、放线菌等。
果胶酶的作用机理为水解果胶，可将果胶分解成果胶酸、果胶醛、果胶内酯等物质。
果胶酶对于果汁、果蔬加工、酿酒等行业具有重要的应用价值。
因此，如何高效地筛选出产生果胶酶的菌株，成为果胶酶生产的关键。
一、果胶酶的作用机理果胶是植物细胞壁的主要成分之一，它是由多种单糖组成的复杂多糖。
果胶酶是一种可以分解果胶的酶类，它主要作用于果胶的α-1,4-糖苷键，将其水解成果胶酸、果胶醛、果胶内酯等物质。
果胶酶的作用机理如图1所示。
图1 果胶酶的作用机理二、果胶酶产生菌株的筛选1. 筛选菌株的来源产生果胶酶的菌株可以从自然环境中分离得到，如土壤、水体、植物表面等。
此外，也可以从果汁、果蔬加工、酿酒等行业的废水中分离得到。
常见的果胶酶产生菌株有绿脓杆菌、嗜酸乳杆菌、放线菌等。
2. 筛选菌株的方法（1）筛选菌株的培养基果胶酶产生菌株的筛选需要使用含有果胶的培养基，如果胶琼脂培养基、果胶葡萄糖琼脂培养基等。
将分离得到的菌株接种于含有果胶的培养基上，培养一定时间后，观察菌落的形态、大小、颜色等特征，筛选出产生果胶酶的菌株。
（2）筛选菌株的测定方法筛选产生果胶酶的菌株需要进行测定，常用的方法有透明圈法、浑浊带法、酶活测定法等。
其中，透明圈法是一种常用的筛选方法，具体步骤如下：1) 将分离得到的菌株接种于含有果胶的琼脂培养基上，培养一定时间后，取出菌落。
2) 在含有果胶的琼脂培养基上滴上一滴菌液，让其自然扩散。
3) 观察琼脂培养基上的透明圈，透明圈越大，表示菌株产生的果胶酶越多。
（3）筛选菌株的鉴定方法为保证筛选得到的菌株产生的果胶酶具有应用价值，需要对其进行鉴定。
产果胶酶菌株的筛选
产果胶酶菌株的筛选胶质是一类广泛存在于植物细胞壁中的高分子化合物，其中果胶是一种重要的胶质成分。
果胶具有极强的黏附性和保水性，对于植物的生长和发育起着重要的作用。
同时，果胶也是一种重要的食品添加剂，在食品工业中广泛应用。
因此，寻找高效的产果胶酶菌株具有重要的理论意义和实际应用价值。
一、果胶酶的作用和应用果胶酶是一种能够水解果胶的酶，它可以降解果胶分子，使得果胶变得更容易溶解和吸收。
在植物细胞壁降解过程中，果胶酶是一种非常重要的酶类，它能够降低植物细胞壁的黏度，促进植物细胞壁的脱落和细胞的分裂。
同时，果胶酶也被广泛应用于食品工业中，用于制造果汁、果酱、果醋、葡萄糖浆等产品。
通过添加果胶酶，可以降低果汁的浑浊度，提高果汁的透明度和口感，并且能够增加果汁的产量和提高果汁的品质。
二、果胶酶的产生果胶酶是一种外源酶，它不能够在人或者动物体内产生，只能够通过微生物发酵的方式得到。
微生物是一种能够产生大量酶类的生物体，其中一些微生物能够产生高效的果胶酶。
通过筛选和培养这些微生物，可以得到高效的果胶酶产生菌株，为果胶酶的工业化生产提供了可靠的来源。
三、果胶酶菌株的筛选果胶酶菌株的筛选是一种寻找高效果胶酶产生菌株的过程。
目前，常用的筛选方法有以下几种：1、传统的筛选方法。
传统的筛选方法是通过对微生物菌株进行培养和筛选，选择产酶量高的菌株，然后通过多次的发酵和培养，得到高效的产果胶酶菌株。
这种方法虽然简单易行，但是需要耗费大量的时间和精力，并且效果不稳定，不能够满足工业化生产的需要。
2、分子筛选法。
分子筛选法是一种利用DNA技术筛选菌株的方法。
通过对微生物菌株的基因组进行分析，可以找到产果胶酶的基因，然后将这些基因克隆到高效的宿主菌株中，得到高效的果胶酶产生菌株。
这种方法虽然效率较高，但是需要较高的技术水平和设备支持。
3、基因工程法。
基因工程法是一种将外源基因导入到微生物菌株中的方法。
通过将产果胶酶的基因导入到高效的宿主菌株中，可以得到高效的果胶酶产生菌株。
产植酸酶的黑曲霉菌株的筛选与选育
第16卷第3期黑龙江八一农垦大学学报 16（3）：69～73 2004年9月 J.of Heilongjiang August First Land Reclamation University Sep. 2004文章编号：1002-2090(2004)03-0069-05产植酸酶的黑曲霉菌株的筛选与选育石星明１，倪宏波１，王冰２，于子微１，徐春厚１ （１．黑龙江八一农垦大学动物科技学院， 大庆 １６３３１９；２．黑龙江省生物制品一厂） 摘要：对实验室保存和购买的９株黑曲霉菌株进行了产植酸酶酶活测定，筛选出一株产植酸酶较高的菌株３９２８，酶活达６９３ μｇ／（ｇ・ｍｉｎ）。
该菌株经紫外线诱变处理，可得到一株产植酸酶较高的２号菌株，酶活达到２ ０５０ μｇ／（ｇ・ｍｉｎ）。
关键词：黑曲霉；植酸酶；诱变；酶活；筛选；选育 中图分类号：Q939.9 文献标识码：A Screening and Selection of Product Phytase from A. Nigers StrainsSHI Xing-Ming，NI Hong-Bo，WANG Bing et al.Abstract：Nine strains A. Nigers which were preserved in lab and purchased were determined phytase activity, and screened out a high productioon strain-3928, phytase activity could get to 693μg/（g・min）. The strain was mutagenesis treated by ultraviolet radiation, and got a higher production strain-2, phytase activity could get to 2050μg/（g・min）.Key words：A. Niger；phytase；mutagenesis；phytase activity；screening；selection０ 前言 植酸酶即肌醇六磷酸水解酶。
产果胶酶曲霉菌株的筛选、果胶酶酶学性质及在香蕉果汁生产中的应用
FeSO4 0.025 5 g/L，pH 5.5，琼脂粉 2%。 1.2.2 微生物复筛 将能在分离培养基平板上生 长的微生物接种至筛选培养基中（筛选培养基为不 含琼脂粉的分离培养基），在 28 ℃、180 rpm 的摇床 中培养 5 d，测定培养液中的果胶酶活力，筛选出产 果胶酶的微生物。 1.2.3 形态观察 将该菌株接种于察氏培养基平 板，在28 ℃培养5 d后观察。用光学显微镜采用10倍 目镜和 40 倍物镜检查孢子梗和孢子形态。 1.2.4 果胶酶活力的测定 使用 3，5-二硝基水 杨酸法测定果胶酶活力，试剂配方参考文献[7]。酶 活力的测定体系为 350 µL 含有 0.5%（W/V）聚半乳 糖醛酸的 0.1 M 柠檬酸-Na2HPO4 缓冲液+50 µL 待 测 果 胶 酶 ，反 应 30 min 后 加 入 800 µL 3，5- 二 硝 基水杨酸试剂，沸水浴显色 5 min 后用自来水冷却， 11 000 rpm 离心 1 min，使残余的聚半乳糖醛酸沉 淀，取上清液选择 540 nm 波长比色。以半乳糖醛 酸单体为标准物建立标准曲线，1 U 酶活力定义为 1 min 内，使底物水解释放出 1 µmol 还原性物质（以 半乳糖醛酸计）所需的酶量。 1.2.5 酶学性质的测定 最适作用条件：（1）最 适作用酸碱度为在 pH 值 3.0～6.5 范围内测定果胶 酶的酶活力。酶活力最高处则为最适作用酸碱度。 （2）最适作用温度为在不同温度下测定果胶酶的酶 活力，酶活力最高处的温度即为最适作用温度。
本研究从土壤中分离丝状真菌，并将菌株进行 液态培养。通过测定培养液中的果胶酶活力获得产 果胶酶的菌株，并鉴定其为曲霉属真菌。测定菌株 所产果胶酶的酶学性质，并检验其在果汁生产中的 应用效果。
果胶酶高产菌株筛选发酵条件优化以及酶学性质的研究
果胶酶高产菌株筛选发酵条件优化以及酶学性质的研究果胶酶是一种重要的工业酶，具有广泛的应用前景。
为了提高果胶酶的产量，本研究旨在筛选果胶酶高产菌株，并优化其发酵条件，同时对其酶学性质进行研究。
首先，我们从自然环境中采集了一系列样品，包括土壤和水体样品。
然后，将这些样品进行稀释并接种到含有果胶为唯一碳源的培养基中。
经过连续传代和筛选，最终从中获得了一株具有较高果胶酶活性的菌株A。
接下来，为了优化菌株A的发酵条件，我们设计了一系列实验。
首先是培养基的优化。
我们通过改变碳源、氮源和矿物盐等成分的浓度和组合，最终确定了一种最适合菌株A生长和果胶酶产量的培养基配方。
然后，对于菌株A的培养条件进行了进一步的优化。
我们调整了温度、pH值、培养时间和初始菌体浓度等参数，并通过检测果胶酶活性来评估不同条件下的产酶效果。
最终，找到了最适宜的发酵条件，菌株A在这种条件下果胶酶的产量显著提高。
接下来，我们对菌株A产生的果胶酶进行了酶学性质的研究。
首先是酶活温度和酶活pH的测定。
我们利用不同温度和不同pH值下的底物降解实验，确定了菌株A产生的果胶酶的最适活性温度和最适活性pH。
然后，对菌株A产生的果胶酶进行了酶动力学性质的研究。
我们通过测定果胶酶对果胶的降解效果，建立了不同底物浓度下果胶酶的反应速率曲线，并利用Michaelis-Menten方程对其进行了分析。
最后，我们对菌株A产生果胶酶的产酶机制进行了初步探究。
通过基因组测序和蛋白质组学技术的应用，我们发现菌株A产生果胶酶的基因和调控机制，为进一步提高果胶酶产量和改良菌株奠定了基础。
总结而言，本研究通过筛选果胶酶高产菌株并优化发酵条件，成功提高了果胶酶的产量。
同时，对果胶酶的酶学性质进行了深入研究，探究了其最适工作温度、pH值以及底物浓度对酶活性的影响。
通过对产酶机制的初步探究，为今后果胶酶的应用及菌株改良提供了一定的参考依据综上所述，本研究通过对菌株A产生的果胶酶进行了全面的酶学性质和酶动力学性质的研究，同时对其产酶机制进行了初步探究。
果胶酶高产选育课程论文
海南大学（儋州校区）农学院生物技术专业课程论文（设计）题目：果胶酶高产菌种选育研究进展学生：王鹤松学号： B0704030 专业年级： 2007级生物技术（1）班指导教师：朱稳二o一o年六月二十五日果胶酶高产菌种选育研究进展王鹤松（海南大学海南儋州571737 B0704030）摘要：果胶酶是能协同分解果胶质的一组酶的总称，在生产，造纸，食品发酵等方面有广泛应用。
本文对酸性果胶酶和碱性果胶酶生产菌种的特点分别进行了介绍，并从传统育种、诱变育种和基因工程育种三个方面对果胶酶产生菌的高产育种技术的研究进展进行了综述。
关键词：果胶酶；微生物；选育；影响因素Development on the Breeding of Pectinase High-yieldingStrainsHesong Wang( Hainan University, Danzhou, Hainan ，571737，B0704030 )Abstract：For pectinase is coordinated with pectin can decompose the floorboard of a group of enzymes in production, papermaking, fermentation etc, food is widely used. Based on acid and alkaline pectic enzymes for pectinase strains of production were introduced, and from conventional breeding, mutation breeding and gene engineering to produce three aspects of bacteria for pectinase high-yielding breeding technology is reviewed.Key words：pectinases；microbe；mutafacient；influencing factor果胶酶（pectinases）是指能协同分解果胶质的一组酶的总称，是一种复合酶（由D-半乳糖醛酸以α-1，4糖苷键连接形成的直链状的聚合物）。
黑曲霉生产果胶酶工艺流程
黑曲霉生产果胶酶工艺流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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果胶酶高产菌种的选育研究
果胶酶高产菌种的选育研究黄山学院 11生物技术孙浩 21109051052摘要：果胶酶是能协同分解果胶质的一组酶的总称，在生产，造纸，食品发酵等方面有广泛应用。
本文对酸性果胶酶和碱性果胶酶生产菌种的特点分别进行了介绍，并从传统育种、诱变育种和基因工程育种三个方面对果胶酶产生菌的高产育种技术的研究进展进行了综述。
关键词：果胶酶；微生物；选育；影响因素；果胶酶是指能协同分解果胶质的一组酶的总称，是一种复合酶（由D-半乳糖醛酸以α-1，4糖苷键连接形成的直链状的聚合物）。
它通常包括原果胶酶、多聚半乳糖醛酸酶（PG）、裂解酶（PL）和果胶酯酶（PE）等4类。
如果从生产、应用领域和最适用pH值环境来划分，果胶酶通常可以分为酸性果胶酶和碱性果胶酶。
酸性果胶酶通常是指内聚半乳糖醛酸酶 [1]，因为大多数的聚半乳糖醛酸酶的最适pH值为3.5~5.5。
它是以水解作用方式无规则切断果胶酸分子的α-1，4糖苷键，主要应用于食品工业中果蔬汁和果酒的提取和澄清。
碱性果胶酶一般多指聚半乳糖醛酸裂解酶，它是以反式消去作用方式裂解果胶酸分子的α-1，4糖苷键，将复杂的果胶分解成小分子，如半乳糖醛酸。
碱性果胶酶在碱性范围内具有较高活性，其主要应用于植物病毒的纯化、诱导植物抗病、纸浆漂白、棉织物处理、含果胶污水处理、咖啡和茶的发酵生产，以及榨油、木材防腐、洗涤剂和家禽饲料加工[2]等。
1 产果胶酶的微生物种群及其特点在微生物中,细菌、放线菌、酵母和霉菌都能代谢合成果胶酶，但主要以霉菌中的曲霉以及杆菌为主。
由于真菌中的黑曲霉属于公认安全级,其代谢产物是安全的,因此目前市售的食品级果胶酶主要来源于黑曲霉，最适 pH 值一般在酸性范围[4]。
1.1产酸性果胶酶的微生物种群及其特点生产酸性果胶酶的菌种以霉菌居多，已见报道的产果胶酶的霉菌种类大约包括20个属，如曲霉属.、灰霉菌属.、镰孢菌属.、炭疽菌属.、核盘菌属.和玉圆斑菌属等。
目前，黑曲霉、根霉和盾壳霉作为产果胶酶的菌株已经商品化。
产果胶酶黑曲霉的筛选及诱变育种
取斜面保藏的黑曲霉菌种 １ ，接种于 Ｐ Ａ 支 Ｄ
斜 面培养 基 ，３ ℃恒 温培 养 ５ ６ ～７天 。 ２ １２ 制备 孢子 悬液 ．． 取 活 化 的斜 面 １支 ，加 入 无 菌 水 洗 下 孢 子 。 制成均 匀 的孢 子 悬 液 ，调 整 孢 子 浓 度 为 ｌ６个／ Ｏ
ห้องสมุดไป่ตู้
【 关键词 】黑 霉； 胶 诱变 曲 果 酶；
中图分 类 号 ：ｓ ｌ ． ０ ５２ ３
果胶 酶 （ ｅｔ ａｅ Ｐｃｉ ｓ ）是分 解 果胶质 的多种 酶的 ｎ 总称 … 。 自然 界 产 果胶 酶 的菌 株 很 多 。主 要 有 曲
文献标 识 码 ：０
麸 皮 １ｇ 豆 粕 ０， Ｏ２ｇ ＮＮ ３ Ｏ３ｇ ．５ ， Ａ ＇ ．５ 。 ０
杜国军 刘 晓兰 郑喜群
（ 齐哈尔大学 。黑龙江 齐齐哈尔 １１０ ） 齐 ６０６
【 摘 要】以 曲 （ ｐｇｕｎｅ Ｈ 为 发菌 进 紫 线 。 使 透明 法， 果 平 的突 茵 ， 黑 霉 Ａ ｅ ｌ ｒ Ｙ 出 株， 行了 外 诱变 初筛 用 圈 从 胶 板上 变 株中 ｓｒ ８ｉ ） ｉ ｇ
固体发酵法考察菌株的产酶特性。
９ ％的单孢子悬液。然后用生理盐水将孢子悬 ５
浮 液浓 度调 整到 １６ ／ ｌ ０个 ｍ。 ２２２ 吸取 ｌｍ 上 述 悬 浮 液 ，加 入 直 径 ９厘 米 ．． Ｏｌ 的底 部平 整 的平 皿 中 。将 １Ｗ 紫外灯 打开 ，预 热 ５ ３ｍｎ ０ ｉ，使 光波 稳定 。 ２２３ 将盛 有悬 浮液 的平 皿 置 于诱 变箱 内的磁力 ．．
１２１ 斜 面培 养基 （ Ｄ ） ．． Ｐ Ａ
ｌ３ ０个 孢子 ／ ｌ Ｏ、１ ３ ｍ ，并 分 别 涂 布 于 果 胶 平 板 培 养 基 。３ ℃恒 温培 养 ５ ６ ～７天 。 ２ １４ 菌株 的筛 选 ．． 向平 皿 中加入 ５ ｌ 液 ，静 止 ２ ｉ ｍ碘 ｍｎ即可 见 清 晰的 透 明 圈 ，将 碘 液 倒 出 加 入 ５ ｌ生 理 盐 水 ｍ
产果胶酶菌株的筛选
产果胶酶菌株的筛选摘要：果胶酶是一种重要的酶类，广泛应用于食品、制浆造纸、医药、化学等领域。
本文介绍了产果胶酶菌株的筛选方法及其应用前景。
关键词：果胶酶；菌株；筛选；应用一、引言果胶酶是一种能够降解植物细胞壁中的果胶的酶类。
果胶是一种多糖，广泛存在于植物细胞壁中，是植物细胞壁的重要组成部分。
果胶酶的应用十分广泛，主要用于食品、制浆造纸、医药、化学等领域。
因此，寻找高效的产果胶酶菌株具有重要的实际意义。
二、产果胶酶菌株的筛选方法1. 筛选方法（1）传统筛选法传统筛选法是指利用传统的细菌学方法，通过对不同来源的微生物进行筛选，从中筛选出能够产生果胶酶的菌株。
传统筛选法的优点是简单易行，但是其效率较低，需要大量的时间和人力。
（2）分子筛选法分子筛选法是指利用分子生物学技术，通过对微生物基因组中的果胶酶基因进行克隆和表达，从中筛选出高效的果胶酶菌株。
分子筛选法的优点是高效、快速、准确，但是其需要较高的技术水平和设备支持。
2. 筛选指标（1）酶活力酶活力是评价果胶酶菌株筛选效果的重要指标。
通常采用荧光素-果胶酸钠法或3,5-二硝基水杨酸法测定果胶酶的活力。
（2）生长速度生长速度是评价果胶酶菌株筛选效果的另一个重要指标。
生长速度快的菌株能够更快地产生果胶酶，具有更高的产酶效率。
三、产果胶酶菌株的应用前景1. 食品工业果胶酶在食品工业中的应用主要是用于果汁饮料、果酱、果冻、果脯等制品的生产中，能够使果汁饮料更加清澈、口感更佳，使果酱、果冻、果脯等制品更加美味可口。
2. 制浆造纸工业果胶酶在制浆造纸工业中的应用主要是用于浆料的预处理中，能够有效地降解浆料中的果胶，减少浆料的黏度，提高浆料的流动性和过滤性，从而提高纸张的质量和产量。
3. 医药工业果胶酶在医药工业中的应用主要是用于治疗炎症、消肿、解毒等方面，能够有效地降低血液黏度、改善血液循环，从而达到治疗和预防心血管疾病的目的。
4. 化学工业果胶酶在化学工业中的应用主要是用于生产高分子化合物、生物燃料等方面，能够有效地降解植物细胞壁中的果胶，提取出高分子化合物和生物燃料。
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Ｋ２ＨＰ０４ ０．１，ＭｇＳ０４ ０．０５，ＮａＮ％０．３，Ｆ０２ （Ｓ０４）３ ０．００１，琼脂２．０，果胶０．２，ｐＨ５．５。 １．２．４固体发酵复筛培养基
麸皮１０９，豆粕０．２５９，ＮＡＮ０３ Ｏ．３５９， （ＮＨ４）２Ｓ０４ ０．１９，装入２５０ｍｌ三角瓶，按料水比 （ｗ／ｖ）ｌ：１．５加入ｐＨ５．０—５．５的水。
第２８卷第２期 ２００８年４月
农业与技术
Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
Ｖｄ．２８ Ｎｏ．２ Ａｐｒ．２００８
。６８’
产果胶酶黑曲霉的筛选及诱变育种
杜国军刘晓兰郑喜群
（齐齐哈尔大学。黑龙江齐齐哈尔１６１００６）
【摘 要】以黑曲霉（Ａ印廿ｇｉｌｌ啪ＩＩｉｇｅｒ）ＨＹ为出发菌株，进行了紫外线诱变。初筛使用透明圈法。从果胶平板上的突变茵株中。
哈尔大学学报。１９９８，（１）：６３—６６ ［５］张宁欣，赵学慧．果胶酶高产菌株选育［Ｊ］．微生物杂志。１９９６
（３）：１—８
［６］ｓ日ｔ｝Ｉｙａｍｍｙ蛐Ｎ．Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｐｏｐ硎翻《ｍｉｃｒｏｂｉａｌ
ｐ既舡ｎｍ—ａ托耐删［Ｊ］．Ｐｒｏ嘲Ｂｉｏｅｈｅｍｉｓ打ｙ ３ｓ（ａｘＪａ）：９７８—９９６
本文链接：/Periodical_nyyjs200802024.aspx
１实验材料
１．１菌种 黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）ＨＹ，由齐齐哈尔
大学生命科学与工程学院生化工程实验室提供。 １．２培养基 １．２．１斜面培养基（ＰＤＡ）
马铃薯２００９去皮，切块煮沸３０ｍｉｎ，然后用 纱布过滤，再加葡萄糖２０９及琼脂２０９，溶化后补 水至１０００ｍ１．ｐＨ自然。 １．２．２平板分离培养基（ＰＤＡ）
参考文献(6条) 1.Sathyanarayana N Purification and biochemical poperties of microbial pectinase-a review 2003 2.张宁欣;赵学慧 果胶酶高产菌株选育 1996(03) 3.江洁;刘晓兰 果胶酶活性分光光度计测定方法的研究 1998(01) 4.陈峰 果胶酶高产菌株选育及产酶条件与酶学性质研究[学位论文] 1999
Ｄ９ Ｄ１０
１３．７６ １５．７８
１９．５５
１．４２１
；————入＼·／ ２３．５０
１．４８９
攀
邑
式
烬
避
第１代 第２代 第３代
第４代 第５代
代数
图３突变株ＨＹ—Ｄ３酶活力遗传稳定性曲线
４结论
图２ ＨＹ—Ｄ３的透明圈 ３．２．２高产突变株的复筛
将初筛所得的正突变株分别接种于固体发酵 培养基作进一步复筛，部分结果见表２。最后筛选 出一株高产果胶酶的菌株ＨＹ—Ｄ３。
文献标识码：Ｇ
果胶酶（Ｐｅｅｔｉｎａｓｅ）是分解果胶质的多种酶的 总称…１。自然界产果胶酶的菌株很多，主要有曲 霉属、青霉属、镰孢属、克鲁维氏酵母及某些兼 性厌氧细菌等［２】２。目前国内外仍多以黑曲霉、根 霉和盾壳霉发酵法制取果胶酶。由于我国对果胶 酶的研究较晚，存在着酶活力低，应用效果不良 等缺点，严重制约着果胶酶的生产和开发。故本 文利用紫外线对黑曲霉进行诱变处理，旨在获得 性能稳定、酶活力高的优良菌株，为我国果胶酶 的研究和发展服务。
２．１．３平板分离 将菌悬液进行系列稀释。使之成１０５、１０４、
１０３、１０２个孢子／ｍｌ，并分别涂布于果胶平板培养 基，３６℃恒温培养５—７天。 ２．１．４菌株的筛选
向平皿中加入５ｍｌ碘液，静止２ｍｉｎ即可见清 晰的透明圈，将碘液倒出加入５ｍｌ生理盐水 １０ｒａｉｎ，将剩余碘液冲洗干净，选取透明圈与菌落 直径比大的接种于斜面培养基，并分别进行固体 发酵，选取酶活力高的作为出发菌株。 ２．２紫外线照射剂量的选择 ２．２．１取３６℃恒温培养５天的出发菌种斜面，用
表２突变株的复筛结果
菌种代号 ＨＹ（对照）
果胶酶活力（Ｕ／ｇ）
１２８５Ｄ３Fra bibliotek２６７６
Ｄ６
２３５１
本文以黑曲霉ＨＹ为出发菌株，采用紫外线 诱变方法，诱变剂量为２１０Ｓ，用透明圈法进行了 初筛，共筛选出１２０株突变株。对这些突变株进 行复筛后，最后筛选出１株高产果胶酶的菌株ＨＹ —Ｄ３，经传代５次进行产酶稳定性实验，发现ＨＹ —Ｄ３产酶性能稳定。
２．５突变株遗传稳定性的测定 对复筛获得的正突变株连续传代５代，采用
固体发酵法考察菌株的产酶特性。
３结果与讨论
３．１紫外线照射剂量的选择 各种诱变剂有不同的剂量表示方法。剂量一
般指强度与作用时间的乘积。在育种实践中，常 以杀菌率作为诱变剂的相对剂量。本文以相应条 件下的紫外线照射时间作诱变剂量，适宜剂量则 以对黑曲霉孢子致死率为指标进行选择。
万方数据
·６９·２００８年４月
农业与技术
０．９％的生理盐水洗下孢子，将孢子悬浮液置于无 菌的盛有玻璃珠的三角瓶中，震荡使孢子分散， 再以双层无菌擦镜纸过滤，使形成分散程度达９０ 。９５％的单孢子悬液。然后用生理盐水将孢子悬 浮液浓度调整到１０６个／ｍｌ。 ２．２．２吸取１０ｍｌ上述悬浮液，加入直径９厘米 的底部平整的平皿中。将１５Ｗ紫外灯打开，预热 ３０ｍｉｎ，使光波稳定。 ２．２．３将盛有悬浮液的平皿置于诱变箱内的磁力 搅拌器上，平皿距紫外灯管垂直距离３０ｃｍ，调节 搅拌子的转速，待搅拌子转速稳定后，打开平皿 盖子照射，照射计时从开盖起，加盖止，照射时 间分别为Ｏｓ、１２０ｓ、１８０ｓ、２４０ｓ、３００ｓ和３６０ｓ。 ２．２．４分别从每个照射时间的平皿中取出菌悬液 做适当稀释，吸取０．１ｍｌ涂布于分离平板培养基， 每一浓度涂布３个平板。 ２．２．５将平皿用黑牛皮纸包裹以避光，置于３６℃ 恒温箱中倒置培养，菌落长好后（约４天）记数。 诱变操作过程均在红光下进行。 ２．２．６计算不同照射时间的相对致死率：
万方数据
农业与技术
２００８年４月 ·７０·
表ｌ突变株透明圈直径与菌落直径比 菌种代号 菌落直径／ｅｍ 透明圈直径／ｅｒｎ 比值
续表
Ｄｌ
１５．１５
Ｄ２
１５．９６
Ｉ）３
１２．１４
Ｄ４
１７．６２
Ｄ５
１４．６０
Ｄ６
１５．５２
ＩＹ７
１３．５４
Ｄ８
１４．４３
２２．０６ ２３．５４ ２２．８０ ２６．３０ ２２．４０ ２６．３２ ２１．６４ ２０．９５
以上培养基均在０．ＩＭｐａ／ｃｒｎ２灭菌３０ｍｉｎ。
２实验方法
２．１出发菌株的筛选 ２．１．１菌种的活化
取斜面保藏的黑曲霉菌种１支，接种于ＰＤＡ 斜面培养基，３６℃恒温培养５．７天。 ２．１．２制备孢子悬液
取活化的斜面１支，加入无菌水洗下孢子。 制成均匀的孢子悬液，调整孢子浓度为１ａ６个／
ＩＩｌｌｏ
参考文献 ［１］张树政．酶制剂工业［Ｍ］．北京：科学技术出版社１９９５：６２５—６５０ 【２］张智维，杨辉，陈合．ＩＩｅ—Ｎｅ激光诱变选育果胶酶高产菌株［Ｊ】．
食品工业科技，２００６，（１０）：１５６—１５７ ［３］陈峰．果胶酶高产菌株选育及产酶条件与酶学性质研究［Ｊ］．华
中农业大学博士学位论文，１９９９ ［４］正洁，刘晓兰．果胶酶活性分光光度计测定方法的研究［Ｊ］．齐齐
相对致死率＝（未处理组存活孢子数一处理 组存活孢子数）／未处理组存活孢子数Ｘ １００％。 ２．２．７选择致死率７０％一８０％作为紫外线照射剂 量。 ２．３突变株的筛选 ２．３．１突变株的初筛
方法同２．１。 ２．３．２突变株的复筛
将初筛所获得菌株进行固体发酵，每株作５ 个平行，３６０Ｃ培养７２ｈ后，以干基的２５倍（ｗ／ｖ） 分别向培养基中加入蒸馏水浸提３ｈ，四层纱布过 滤，得粗酶液。将其适当稀释分别测各菌株的果 胶酶活力，选取果胶酶活力高的菌株。 ２．４果胶酶活力的测定方法
挑取了１２０株透明圈与茵落直径比值显著大于出发茵株的突变株。将这些突变株进行三角瓶目体发酵复拜。最后筛选出１株高产
果胶酶的突变株ＨＹ一１）３。突变株ＨＹ—Ｉ）３经斜面传代培养了５代，产酶遗传特性稳定．其果胶酶产量可迭２０００Ｕ／ｇ干基以上，比
出发菌株提高了１倍。
【关键词】黑曲霉；果胶酶；诱变
中图分类号：Ｓ０３５．２
１．４５６ １．４７５ １．８７８ １．４９３ １．５３４ １．６９６ １．５９８ １．４５２
Ｄ２６ Ｄ３８ Ｄ４５
２２６３ ２２３４ ２２１９
３．３突变株的产酶遗传稳定性 对突变株ＨＹ—Ｉ）３进行传代培养，连续传５
代，每代菌株进行固体发酵，结果见图３。由图３ 可见，突变株ＨＹ—Ｄ３传代５次后，果胶酶活力 都较高且产酶性状保持稳定。
采用３，５一二硝基水杨酸法（ＤＮＳ法）【４】。 底物为０．４％果胶溶液（ｐＨ４．０）。取０．５ｍｌ适当稀 释的酶液于比色管中，加入２ｍｌ底物溶液，４５。Ｃ 水浴反应３０ｒａｉｎ，加入ＤＮＳ溶液煮沸５ｍｉｎ，冷却， 定容至２５ＩＩｌｌ，５２０ｎｍ测定吸光值。酶活力定义为：
上述条件下每分钟分解果胶生成ｌｐｍｏｌ半乳糖醛 酸所需的酶量为一个酶活力单位（ｕ）。
5.张智维;杨辉;陈合 He-Ne激光诱变选育果胶酶高产菌株[期刊论文]-食品工业科技 2006(10)
6.张树政 酶制剂工业 1995
引证文献(3条)
1.裘纪莹.王未名.陈建爱.王同燕.杜方岭.梁新乐 微生物果胶酶的研究进展[期刊论文]-中国食品添加剂 2010(4) 2.武莹浣.叶汉英 果胶酶微生物筛选和酶活测定方法研究[期刊论文]-食品与机械 2010(2) 3.胡慧磊.艾方.彭丽桃 聚半乳糖醛酸酶菌株的分离、筛选及其鉴定[期刊论文]-食品科技 2010(8)
出发菌株用不同剂量的紫外线进行诱变，紫 外灯（１５Ｗ）距离３０ｅｍ分别照射１２０ｓ、１８０ｓ、 ２４０ｓ、３００ｓ、３６０ｓ，紫外线照射剂量与致死率关系 见图ｌ。