真菌评分在侵袭性念珠菌感染诊断中的应用价值
侵袭性真菌感染诊断与评价
22
曲霉菌病诊断面临的挑战
目前曲霉菌病诊断主要基于患者高危因素(免疫状态)、 临床表现、影像学表现和微生物学证据综合考虑。 X线表现无特异性且滞后,不适合早期诊断;胸部 CT典 型早期表现如“晕轮征”,非粒缺患者较粒缺患者少见。 曲霉病患者往往有血小板减少倾向,组织活检受限,即使 做组织病检,区分曲霉菌和其他丝状真菌也很困难。 BAL 、痰等分泌物培养敏感性不高,且曲霉菌属生长缓慢 ,需要几天甚至几周才能得到阳性培养结果,阳性培养结 果要注意与定植区分。
24
念珠菌血症的诊断 临床中被延误23-52小时
首发症状到血培养的获得
___________________________________________________________________________
(无可获取数据;估计时间: 0-2 小时)
血培养的配送及实验室
操作过程
______________________________________________________________________
死亡率
Crit Care Med. 2008;36(7):1993-8.
12
ICU侵袭性念珠菌感染 患者死亡率高
40
35
(%) 30 率 25 亡 20 死
15
10
5
0
36.2
侵袭性念珠菌感染
8.9 同期入住ICU 患者
13
我国肺真菌病现状 十年多中心回顾性研究
研究组织者:中华医学会呼吸病学分会组织
70
60
50
例 (%) 40 比 占 30 所
20
10
Eno、Fba定量检测对侵袭性念珠菌病的诊断价值评估的开题报告
Eno、Fba定量检测对侵袭性念珠菌病的诊断价值评估的开题报告侵袭性念珠菌病是一种由念珠菌(Candida)引起的严重感染性疾病。
在重症患者和免疫系统受损的患者中发病率较高,死亡率也较高。
快速、准确地诊断侵袭性念珠菌病对于治疗和预后具有重要意义。
目前可用于快速诊断侵袭性念珠菌病的方法主要包括血液培养和分子检测技术。
血液培养虽然是迄今为止检测侵袭性念珠菌病的“金标准”,但它存在着患者血容量小、细胞外真菌存在和培养时间长等问题,且检测灵敏度和特异性都有限。
近年来,分子检测技术(例如PCR)被广泛用于快速检测侵袭性念珠菌病,其准确性和灵敏度得到了明显提高。
然而,单独的PCR技术尚存在一些问题,如缺乏标准化检测方法和不能区分病原菌是否处于活跃状态等。
Eno(菌落培养点涂片法,enolase activity assay)是一项新的快速检测侵袭性念珠菌病的技术。
Eno技术基于侵袭性念珠菌能够在培养基表面通过产生ENOLase 酶表型而被检测出来的原理,可在24小时内得到结果,且灵敏度高、特异性好、易于执行等优点。
Fba(Fructose-bisphosphate aldolase,果糖-1,6-二磷酸酸解酶)定量检测则是利用念珠菌中存在的果糖-1,6-二磷酸酸解酶,以同样的原理快速检测侵袭性念珠菌病。
尽管Eno和Fba技术已经被证明在快速检测侵袭性念珠菌病方面具有潜在的优势,但是它们和传统的血液培养方法以及PCR技术相比仍需进一步的评估和优化。
该研究旨在评估Eno和Fba技术在诊断侵袭性念珠菌病方面的准确性和临床应用的价值。
具体研究计划如下:1.研究设计:采用前瞻性队列研究设计,收集经临床和血液培养法检测为侵袭性念珠菌病的患者的血液标本,并使用Eno和Fba技术和PCR技术进行检测。
2.研究对象:选择入住重症监护室和免疫功能低下患者,临床症状和血液标本符合侵袭性念珠菌病标准的患者。
3.数据分析:利用SPSS软件分析各项指标的敏感度、特异性、阴性预测值、阳性预测值以及检测时间等,并对各项指标进行比较和分析,以评估Eno和Fba技术在诊断侵袭性念珠菌病方面的准确性和临床应用的价值。
G试验在侵袭性念珠菌病中的临床价值
G试验在侵袭性念珠菌病中的临床价值申旺;杨文丽;叶丽燕;谭晓宇;黄晨娟;张鑫【摘要】目的探讨G试验在侵袭性念珠菌病(invasive candidiasis,IC)中的诊断价值及其与患者粒细胞、病原菌、体温之间的关系.方法选取暨南大学附属五邑中医院2015年9月至2018年6月期间55例IC患者、42例侵袭性曲霉菌病(invasive aspergillosis,IA)患者、30名念珠菌黏膜定植者、50名健康人群,采用免疫比浊法检测各组G试验浓度;采用ROC曲线分析G试验在IC患者中的诊断价值;同时比较G试验阳性率与IC患者粒细胞、病原菌、体温之间的关系;结果采用SPSS 19.0进行统计分析.结果 IC患者G试验水平显著高于健康人群、念珠菌黏膜定植患者和IA患者(P<0.05).55例IC患者中,非白念珠菌例数(32例)超过白念珠菌(23例).分别以非侵袭性真菌组(invasive fungal disease,IFD)和非IC组作为对照组,G试验诊断IC患者的ROC曲线下面积(AUC)为0.899和0.782.粒细胞正常组IC患者G试验阳性率与粒细胞增高组、粒细胞减少组之间无统计学差异(P>0.05),但显著高于粒细胞缺乏组(P<0.05);白念珠菌IC组G试验阳性率与热带和光滑念珠菌组差异无统计学意义(P>0.05),但显著高于其他念珠菌感染组(P<0.05);G试验阳性率在不同体温组IC患者均无统计学差异(P>0.05).结论 G试验在IC患者中具有较高的诊断价值,不仅可区分致病菌和定植菌,还对IC和IA的鉴别具有一定的价值;G试验阳性率与IC患者的粒细胞缺乏和感染的病原菌类型相关,与体温无关.%Objective To explore the diagnostic value of G test in invasive candidiasis(IC)and its relationship with neutrophils, pathogen,and body temperature in patients.Methods Fifty-five patients with IC,42patients with invasive aspergillosis(IA),30cases of Candida mucosa colonizer,50healthy people were collected from September 2015to June 2018in WuyiTraditional Chinese Medicine Hospital Affiliated of Jinan University,the level of G test were detected by immuneturbidimetry. Diagnostic value of G test in IC patients was assessed by ROC analysis.The relationships between positive rate of G test and neutrophils,pathogen,body temperature in patients with IC were also compared.SPSS19.0was used for statistical analysis.Results The level of G test in IC patients was significantly higher than these of healthy people,Candidacolonizers and IApatients(P<0.05).Among 55patients with IC,the number of non-Candida albicans(32cases)was higher than that of Candida albicans (23cases).Non-IFD group and non-IC group were used as the control group,the area under the ROC curve(AUC)of the G test diagnostic IC patients was0.899and 0.782.The positive rate of G test in IC patients with neutrophil normal group was not significant different from those of neutrophil increase group and neutrophil reduction group (P>0.05),but it was significantly higher than that of neutrophil deficiency group(P<0.05).The positive rate of G test in Candida albicans group was not significantly different from that in the Candida tropicalis and Candida glabratagroup(P>0.05),but significantly higher than that in other Candidainfection group(P<0.05).There were no significant differences in the positive rate of G test between IC patients in different temperaturegroups(P>0.05).Conclusion G test has high diagnostic value in IC patients.It can distinguish Pathogenic bacteria and colonization bacteria,and has certain value for the identification of IC and IA.The positive rate of G test isrelated to the neutrophil deficiency and the type of pathogen,and not related to body temperature in IC patients.【期刊名称】《中国真菌学杂志》【年(卷),期】2019(014)002【总页数】5页(P78-82)【作者】申旺;杨文丽;叶丽燕;谭晓宇;黄晨娟;张鑫【作者单位】暨南大学附属五邑中医院检验科,江门 529000;江门市中心医院病理科,江门 529030;暨南大学附属五邑中医院检验科,江门 529000;暨南大学附属五邑中医院检验科,江门 529000;暨南大学附属五邑中医院检验科,江门 529000;江门市中心医院病理科,江门 529030【正文语种】中文【中图分类】R519.3;R446.5近年来,随着现代治疗手段的大量开展,广谱抗生素和免疫抑制剂的广泛应用,肿瘤、血液病、糖尿病等发病率不断上升,导致侵袭性真菌病(invasive fungal disease,IFD)逐年上升,其中又以侵袭性念珠菌病(invasive candidiasis,IC)为主,约占60%~80%[1-2]。
侵袭性真菌病的G试验和GM试验
侵袭性真菌病的G试验和GM试验侵袭性真菌病(invasive fungal disease, IFD)系指真菌侵入人体,在组织、器官或血液中生长、繁殖,并导致炎症反应及组织损伤的感染性疾病。
随着器官移植、肿瘤化疗、免疫抑制剂使用、侵袭性操作等不断增多,侵袭性真菌病的发病率越来越高,尤其是免疫功能低下者。
早期诊断及恰当的抗真菌治疗是降低病死率的关键,但IFD的临床表现相对缺乏特异性,仅根据临床症状难以早期诊断,故误诊率高。
因此,所有国内外IFD指南中均明确指出,临床诊断和确诊的依据必须包括病原微生物的实验室检查,后者是诊断标准极为重要的组成部分。
临床上迫切希望能有更加简便、快速、创伤性小、耐受性好、敏感性和特异性均较高的检测方法,帮助临床早期诊断和及时治疗。
因此,近些年来,G试验和GM试验得到了大家的关注和热门推崇,其在临床上用于诊断侵袭性真菌病具有非常重要的价值和意义。
什么是G实验?G试验是用于检测真菌细胞壁主要成分之一的(1-3)-β-D葡聚糖,因为其他微生物、动物及人的细胞成分和细胞外液均不含有此成分,且人体发生侵袭性深部真菌感染过程中,(1-3)-β-D葡聚糖可持续释放入血及其他体液中,使其含量增高(浅部真菌感染无类似现象)。
在临床表现、微生物学证据及胸部高分辨率CT出现征象前,血清中(1-3)-β-D葡聚糖水平已经高于正常值(比发热或其他临床症状平均早4~5天,比胸部高分辨率CT平均早9.3天),且不受机体免疫状态影响。
因此,血液中检测到(1-3)-β-D葡聚糖是诊断深部真菌感染的有效依据,对除了隐球菌和接合菌之外的所有侵袭性深部真菌感染的早期诊断具有重大意义,即可用于念珠菌属、镰刀菌属、曲霉属、青霉/拟青霉、毛孢子菌等真菌所致侵袭性感染的诊断,能很好地指导临床及早使用抗真菌药物,尤其是对于念珠菌血症,G试验是首选检验,可在1.5-2小时快速出结果。
另外强调G 试验对于检测耶氏肺孢子菌(PJP)也有很大价值,在排除其他侵袭性真菌病的情况下,2 次或 2 次以上的血清BDG ≥80 pg/mL,可以考虑PJP,但阴性排除PJP 的价值高于阳性诊断PJP 的价值。
G试验和GM试验对侵袭性真菌病诊断价值的Meta分析
采用Q检验分析纳人研究之间是否存在异质 性,以,2估算分析异质性的大小,<25%表示异质性
较小,25%~50%表示中度异质性,>50%表示存在
高度异质性。若存在异质性,则采用随机效应模型
对原始数据进行汇总处理,反之采用固定效应模型 进行后续的Meta分析,各效应量均用95%CI表示。 结
果
优势,尚未得到一致的认识;G试验和GM试验联合
0bjecⅡve
To
no吩i愕舭d‘cof uni掣e那i£y,№叫增2加D29,C^ino
(10rre印ondi凡g
【Abstract】
evaluale and
compare
the
diagnostic and
value
of(1—3)一p-D—glucan a11d
galactomannan in IFD diagnosis
com
指在宿主免疫功能低下或缺陷时,由于条件致病性 真菌侵入人体,在组织、器官或血液中生长、繁殖,并 导致炎症反应及组织损伤的疾病。IFD在血液病、 恶性肿瘤、器官移植及长期应用广谱抗生素、糖皮质
万方数据
主垡盟塑瘗痘盘查(皇王题2些生盟旦箜!鲞笠!塑堕!』坚坚堕!(旦型!型!塑2:蛔!墅垒!堂!:堂呈
或其它病理类型;③文章提供了G试验及GM试验
在各病例组的真阳性、真阴性、假阳性、假阴性例数 或通过文章提供的数据可以计算;④每组患者病例 数均>20。
226例,其中IFD 613例,非IFD
1
613例。各研究
的研究设计见表1及表2(G试验和GM试验的检 测方法、cutoff值及真阳性、假阳性、假阴性、真阴性 的例数)。 三、异质性检验 以DOR作为效应量,分析G试验和GM试验的 异质性,Q检验显示Cochmn.Q分别为62.01和 64.83,P均<0.05,,2分别为80.6%和81.5%;分析联
侵袭性真菌病诊断标准与方法进展
一种创新思维方式,对学生思维的发散性、求异性、 逆向性等进行有效的培养。通过动画可以模拟事物 变化过程,从而引导学生学会观察、提出猜想、进行 探索、合理论证、发现规律,促使学生积极思维,引发 学生的创新意识。利用多媒体丰富的表现手法,使教 学内容生动,富有启发性,提高学习效果,进而优化 教学质量。
参考文献
医学教育探索2010年3月第9卷第3期ResearchesinMedicalEducation,March 2010,V01.9,No.3
一423一
・医学新进展・
侵袭性真菌病诊断标准与方法进展
胡淑玲周发春徐防
【中图分类号】R379
【文献标识码】B
【文章编号】1谈教育动画及其设计与制作叨.山东省青年管理干部 学院学报,2004,(9):103—105. 【2】王庆福,胡海涛.应用GoldWave处理多媒体课件中的音频信息
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侵袭性真菌病(Invasive fun【gBl disease,IFD)既往称侵袭 性真菌感染,指由真菌感染引起的疾病。近年来,随着恶性肿
瘤、免疫缺陷病、各类移植患者增多以及广谱抗生素的长期 应用、体内留置导管时间延长等因素影响,国内外IFD发生 率呈逐年上升趋势,死亡率亦居高不下。据调查显示:上世纪
血浆(1,3)—β—D—葡聚糖检测在侵袭性深部真菌感染中的价值及
血浆(1,3)—β—D—葡聚糖检测在侵袭性深部真菌感染中的价值及预后评估随着广谱抗生素、免疫抑制剂的使用,器官移植技术的开展,真菌感染的发生率逐年升高,真菌感染诊断的金标准组织病理标本不易获取,真菌培养耗时长,而检测血浆(1,3)β-D-葡聚糖含量操作简单、特异度及灵敏度均较高,有助于临床早期诊断真菌感染,从而提前抗真菌药物的使用时间,有效控制感染,且可通过血浆中BG含量的高低初步鉴别真菌种种类,动态随访BG则有助于对治疗效果及预后的评判。
标签:侵袭性真菌感染;(1,3)-β-D-葡聚糖;疗效评估近年来,随着医疗技术的发展,器官移植、造血干细胞移植等技术的开展,广谱抗生素的使用,大剂量免疫抑制剂、激素及放化疗药物的使用以及各种导管如中心静脉置管、尿管、胃管的置入,有创呼吸机的使用等均使的真菌感染的发生率在临床上升高,如何快速检测出真菌感染已成为临床上迫切需要解决的问题。
真菌感染也成为许多危重患者的严重并发症及死亡因素之一。
根据肺部真菌感染的诊断标准与治疗原则,目前临床上对侵袭性肺部真菌感染(Invasive pulmonary fungal infection,IFI)的诊断分为确诊IFI、拟诊IFI和临床诊断IFI[1]。
确诊IPFI:至少符合1项宿主因素,肺部感染的1项主要或2项次要临床特征及1项微生物学或组织病理学依据。
拟诊IPFI:至少符合1项宿主因素,肺部感染的1项主要或2项次要临床特征。
临床诊断IPFI:至少符合1项宿主因素,肺部感染的1项主要或2项次要临床特征及1项微生物学检查依据。
目前临床上对真菌感染的诊断方法主要有以下几种,宿主因素、临床特征、微生物学检测及组织病理学检查。
其中组织病理学检查为真菌感染的金标准,但组织病理学检查为有创性检查,由于患者病情所限,不易获得有效的组织标本。
而微生物学检查中的培养耗时较长,是否为目标病原菌,有时也不能很好判断,不能早期有效指导临床诊断。
血清学检查血浆中真菌细胞壁成分(1,3)-β-D-葡聚糖[(1,3)-β-D-glucan,以下简称BG]抗原其灵敏度和特异度均较高[2-5],且结果快速,能早期为临床诊断提供帮助。
G试验在侵袭性真菌感染诊断中的意义
G试验在侵袭性真菌感染诊断中的意义一、概述葡聚糖广泛存在于真菌细胞壁中,1,3-β-D-葡聚糖占真菌壁成分50%以上,是真菌细胞壁上的特有成分,或称为真菌的分子标志物。
(1,3)-β-D-葡聚糖特性:1、对热极为稳定,高压121℃并不能使其灭活。
在念珠菌和曲霉菌细胞壁中含量较多,对G试验灵敏。
2、当真菌进入人体血液或深部组织后,经吞噬细胞的吞噬、消化等处理后,(1-3)-β-D-葡聚糖可从胞壁中释放出来,从而使血液及其它体液中含量增高。
当真菌在体内含量减少时,机体免疫系统可将其清除。
3、在浅部真菌感染中,(1-3)-β-D-葡聚糖未被释放出来,故其在体液中的量不增高。
因此能区分定植和感染。
G试验是检测人体体液中真菌细胞壁成分1,3-β-D-葡聚糖(Glucan)的试验,故称G试验。
二、标本要求1、应使用无菌、无热原的真空采血管,推荐使用BD真空采血管。
2、标本为血清。
3、标本采集应无菌操作。
4、标本采集后应在2小时内进行血清分离。
血清在室温下6小时内检测部影响检测结果。
5、按照3000r/min(1600g),10min的规范方法分离血清。
6、黄疸、溶血和乳糜血应视为不合格标本。
目前公司尚未生产针对其他标本如脑脊液、胸腹水、肺泡灌洗液的处理液,故不建议开展,不能用处理血清的处理液处理其他标本。
三、试验局限性该试验不能用于隐球菌和接合菌(毛霉、犁头霉和根霉)感染。
对于黄疸、溶血、乳糜血标本,可干扰试验结果。
假阳性原因有(1)污染(试管、枪头和蒸馏水被环境中细菌或真菌污染)(2)应用含有葡聚糖的纤维素膜进行血液和腹膜透析患者(3)手术中使用的纱布或其他医疗物品中含有葡聚糖(4)静脉制剂(白蛋白、凝血因子、免疫球蛋白等)(5)某些细菌败血病患者(尤其是链球菌败血症)(6)抗肿瘤类药物(香菇多糖、裂殖菌多糖)(7)磺胺类、阿莫西林/克拉维酸、头孢类药物、多粘菌素、厄他培南(8)蘑菇类食物(9)新生儿足跟采样假阴性原因有:(1)近平滑念珠菌感染(2)免疫复合物形成(3)使用某些抗真菌药,如卡泊芬净,该药能非竞争抑制1,3-β-D-葡聚糖合成(4)标本在室温放置时间过长(超过6小时)超出可报告范围结果处理:标本测量结果若小于10pg/ml,以<10pg/ml表示;标本测量结果若大于1000pg/ml,以>1000pg/ml表示,不建议再进行稀释检测。
侵袭性真菌感染实验室诊断与临床应用-PPT
大家有疑问的,可以询问和交流
可以互相讨论下,但要小声点 9
侵袭性真菌感染现状-确诊困 难
ICU患者侵袭性曲霉感染尸检检出率高达59%,远 高于临床所见。
Meersseman W et al. Am J Respir Crit Care Med .2004;170:621–625
10
百分比
侵袭性真菌感染现状-需及时治疗
微生态学杂志, 2016, 28(10):1152-1156.
G试验与GM试验试验联合检测 有助于真菌属的鉴别
31
结果判读
➢ 阳性:GM≥0.95μg/L ➢ 阴性:GM<0.75μg/L ➢ 灰区:0.75≤GM<0.95μg/L,建议连续多
次检测并应结合临床资料综合评价
32
GM试验干扰因素
念珠菌甘露聚糖 (Mannan, Mn试验)
曲霉菌 IgM/IgG抗体 (ELISA,胶体金)
念珠菌 IgM/IgG抗体 (ELISA,胶体金)
真菌筛查 曲霉菌 隐球菌 念珠菌 曲霉菌 念珠菌
14
隐球菌感染
隐球菌为圆形菌体,外周有荚膜, 内有反光孢子,但无菌丝。
隐球菌属已知有37个不同的种, 但具致病性的多为新型隐球菌, 其特点是菌体由一层很厚的多糖 荚膜所包被。
确诊需侵入性手段获得组织标本 但侵入性操作常常难以实施
真菌检测项目开展相对不足或滞后
12
真菌传统检测方法及局限性
13
基于血清学的非培养检测技术
抗原 检测
血清学检测
抗体 检测
(1-3)-β-D葡聚糖 (Glucan, G试验)
曲霉半乳甘露聚糖 (Galactomannan ,GM试验)
隐球菌荚膜多糖 ( GXM试验,ELISA,胶体金)
血清β-D葡聚糖、半乳甘露聚糖、Cand-Tec抗原检测在侵袭性真菌病诊断中的应用价值
血清β-D葡聚糖、半乳甘露聚糖、Cand-Tec抗原检测在侵袭性真菌病诊断中的应用价值张建【摘要】目的:探讨血清β-D葡聚糖(βDG)、半乳甘露聚糖(GM)、和Cand-Tec 抗原检测在诊断侵袭性真菌病的应用价值.方法:选择收治的疑似侵袭性真菌病住院患者136例作为研究对象,根据相关诊断标准确定是否发生侵袭性真菌病分为感染组82例和未感染组54例,使用Latex凝集法检测血清Cand-Tec抗原,使用ELISA 法检测GM抗原,使用酶促反应检测βDG水平,分析三者联合诊断侵袭性真菌病的灵敏度和特异度.结果:感染组患者βDG阳性检出率为52.44%,GM阳性检出率为69.51%,Cand-Tec阳性检出率为80.49%,三者联合检出率为91.46%,组间比较差异具有统计学意义(P<0.05);三者联合检测时灵敏度、特异度和符合度分别为95.12%,98.78%、92.68%,均明显高于三项指标单独检测值,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:血清βDG、GM抗原和Cand-Tec抗原联合应用能够提高IFD诊断的敏感度、特异度和符合度,均高于单独选择某种试验,在实际工作中建议三者联合使用,同时可结合其他检测方法和技术进行综合诊断进一步提高诊断的准确率.【期刊名称】《陕西医学杂志》【年(卷),期】2019(048)001【总页数】3页(P125-127)【关键词】侵袭性真菌病;血清β-D葡聚糖;半乳甘露聚糖;Cand-Tec抗原;诊断;对比研究【作者】张建【作者单位】内蒙古自治区巴彦淖尔市医院检验科巴彦淖尔015000【正文语种】中文【中图分类】R519侵袭性真菌病(Invasive fungal disease, IFD)是指真菌侵入机体的组织、血液后生长、增殖,造成组织损害、器官功能障碍以及各种炎症反应等病理改变和和病理过程。
如果感染发生在深层组织患者临床并不会表现出明显的特异性,这就在很大程度上耽搁诊治的时间,增加治疗的难度,对患者生命安全造成严重的威胁[1]。
真菌体外敏感性及临床意义解读
Li zhang,He wang,yingchun Xu. PLOS ONE ,2014, 9(12),1-12
比较方法
• 采用酵母菌稀释法新折点进行分析 • Essential agreement(EA):MIC值相差两个稀释度以内 • Categorical agreement(CA):分类一致,如两个药敏结果均为S、SDD(I)或者 R
• 棘白菌素类:卡泊芬净、米卡芬净、阿尼芬净
抗真菌药作用机制
细胞膜
• 多烯类:插入含麦角固醇的细胞膜,形 成通道,造成K+外排 • 唑类:阻断麦角固醇合成
DNA/RNA合成
• 5-氟胞嘧啶
细胞壁
• 棘白菌素类:阻断葡聚糖合成
PUMCH W.Yao
Atlas of fungal Infections, Richard Diamond Ed. 1999 Introduction to Medical Mycology. Merck and Co. 2001
接种量 孵育条件
1×103~3×103 CFU/ml 35℃ 培养至产孢良好
30
非皮肤丝状真菌孢子菌悬液的制备
• 接种物:分生孢子或孢囊孢子菌悬液0.4×104~5×104 CFU/ml,重复性好
– 诱导产孢:大部分霉菌PDA 35±2⁰C 7d或至产孢良好,毛霉和曲 霉48h,镰刀菌35±2⁰C 48~72h然后28~30±2⁰C培养至第7天 – 1ml 0.85%盐水,可加入1滴或0.01ml吐温20,尽量去除菌丝片段 。 – 静置3~5min,取上清转移至无菌管,振荡15s(注意气溶胶) – 使用1cm比色杯,测定530nm光密度:
11
CLSI M27-A3酵母菌 微量肉汤稀释法判读时间和标准
G试验和GM试验检测的方法及临床意义
G试验和GM试验检测的方法及临床意义侵袭性真菌病即是以往所说的深部真菌病,是指致病性真菌侵犯皮下组织、粘膜、肌肉和内脏器官等所引起的真菌感染性疾病。
引起侵袭性真菌病的病原菌有270余种,常见病原菌有念珠菌(占70%-90% )和曲霉菌(占 10%-20%)。
常引起侵袭性真菌病的高危因素有严重粒细胞缺乏、免疫功能低下、移植、糖尿病、肾衰、血透、慢阻肺、实体器官移植、长期激素治疗以及入住ICU 等。
侵袭性真菌感染病早期诊断和治疗面临着巨大挑战,临床表现缺乏特征性,发病率高、死亡率高、漏诊率高且诊断困难,特异性诊断指标有限,继发性真菌感染常被基础疾病和治疗药物所掩盖。
和检验科相关的辅助诊断方法有培养法和非培养法。
血培养作用有限,阳性率较低(念珠菌感染患者血培养阳性率只有38%)。
相对而言,非培养技术就突显出其优越性。
真菌的检测的非培养技术常见的有G实验和GM试验。
此实验敏感性高,阳性检出率高,能早期快速诊断,为临床用药提供帮助。
G试验是检测1,3-β-D-葡聚糖的试验,采用的方法是动态显色法。
1,3-β-D-葡聚糖是真菌细胞壁的一种成分,广泛存在与各种真菌,只有当真菌进入体内被吞噬细胞吞噬,细胞壁被破坏,1,3-β-D-葡聚才能释放入血,定植情况该实验为阴性,所以G试验可区分定植和感染。
G试验可检测除隐球菌和接合菌外的多种真菌感染,对于念珠菌血症而言, G试验检测是首选检查方法。
G试验检测一般先于临床症状平均4天,平均早于发热5天,是早期检测的重要手段。
G试验检测值<70pg/ml定义为阴性,此时不建议抗真菌治疗,当检测值在70-95pg/ml 时定义为灰区,此为观察期,应连续监测,当检测值>95pg/ml定义为阳性, 建议结合临床症状诊断治疗。
GM试验是检测半乳甘露聚糖抗原的试验,采用的方法是酶免法。
半乳甘露聚糖(GM)是曲霉细胞壁的一种成分,GM从薄弱的菌丝顶端释放,曲霉菌感染的患者血液内存在GM。
侵袭性真菌感染诊断与治疗
检出率(%)
实体器官移植易导致患者发生侵袭性真菌感染
一项对243例实体器官移植患者的尸检研究结果
一项自1985年至1994年进行的对243例实体器官移植后死亡患者的尸检研究,目 的在于分析实体器官移植患者真菌感染的流行病学。
血液恶性肿 瘤
(n =3,640) (n =1,010)
骨髓移植 (n =377)
HIV (n =263)
新生儿监护 病房
(n =54)
实体器官移 植
(n=886)
实体肿瘤 (n =863)
外科 (非移植)
合计
(n =1,906) (n =6031)
81.7 42.6 31.6 32.7 96.3 57.2 89.2 91.2
、Blumberg HM et al. Clin Infect Dis. 2001;33:177-186.
曲霉菌:宿主因素
侵袭性曲霉感染多伴发器官功能衰竭
100% 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0%
发生侵袭性曲霉感染(n=37) 未发生侵袭性曲霉感染(n=74)
GM(半乳甘露聚糖)试验 --曲霉感染检测的影响因素
假阴性
假阳性
• 半乳甘露聚糖在血中存
在时间短,建议:
—高危人群每周至少检测 2次,动态观察
—结合影象学、培养 结果综合分析诊断
• 三唑类降低GM • 低侵袭性曲霉菌病 • 低曲菌负荷量
哌拉西林/他唑巴坦,colistin, cefazolin,
侵袭性真菌感染的诊断与治疗
山东省中医院ICU
真菌D葡-聚糖检测对侵袭性肺部真菌感染的临床意义
5 Ca t sr HC, n a RB, b q e q e G, ta . n k e o t r mb n o Zi g I l Al u u r u m e S a e v n m h o i - 1
lk n y sfo rp i s o CelMo i c , 0 4, : 43 8 6. ie e z me r m e tl et n w. l a o lLf S i2 0 61 8 - 5 e
参 考 文 献
1 Ta e a , a u a I , h ma M , t 1 k y ma M S k r Y S i e a.He a i — i d c d n i i r pr n n u e ih b t y o
e fc so r t r mb n c mp e o c n r t n g o a e t o a mo - f t fa p oh o i o l x c n e t e o lb lt ss fh e  ̄a e a
含 量 , 与 4 健 康 志 愿 者 ( 常 对 照组 ) 并 0例 正 比较 。结 果
正 常 对 照 组 ( , )BD 葡聚 糖 水 平 为 2 3 1 3 一— 一 . 2~1. 5
凝块的形成 , 使凝血效应 局限在 血管破损 处 , 而且可 以避 免凝
血 酶 向循 环 中扩 间 的 不 纤
( 收稿 日期 :0 0一l 21 O一1 ) 9
d i1 . 9 9 j is . 0 2-7 8 . 0 1 0 . 3 o :0 3 6 / .sn 10 36 2 1 .30 0
38 7
河 北 医药 2 1 0 1年 2月 第 3 3卷 第 3期
表 3 手 术 前 后血 红蛋 白量 及凝 血 4项 水 平 比较 i±
2022侵袭性真菌病实验室诊断方法临床应用专家共识(完整版)
2022侵袭性真菌病实验室诊断方法临床应用专家共识(完整版)摘要侵袭性真菌病的诊断引起临床多学科关注,早期确切诊断是改善患者预后的关键。
其方法主要包括真菌直接镜检、真菌培养和鉴定、真菌血清学检查、分子生物学检测和组织病理学检查。
为了促进临床医师深入了解并合理应用这些方法,提高侵袭性真菌病诊断水平,我们邀请多学科专家共同编写了此共识。
本共识对侵袭性真菌病诊断方法的应用人群、送检要求、结果解读及临床意义进行了介绍并提出建议,强调对于侵袭性真菌病高危患者,应综合应用多种诊断方法、正确取材送检、提高结果解读能力、了解不同方法的临床意义,以便合理应用,更好地服务于患者。
侵袭性真菌病的患病率及病死率呈持续上升趋势,严重威胁患者健康。
常见的病原真菌包括念珠菌、曲霉、隐球菌和毛霉等。
这些致病真菌引发的疾病临床特征迥异;新发致病菌及多药耐药菌种不断出现,增加了诊疗难度。
侵袭性真菌病起病隐匿且临床症状不典型,早期诊断困难。
国内外近期推出的针对侵袭性真菌病临床诊疗指南或共识指出,对侵袭性真菌病的诊断均需依靠适宜的微生物学、组织病理学及影像学方法[1, 2, 3, 4]。
2020年,欧洲癌症研究和治疗组织(EORTC)和真菌病研究组教育研究协会(MSGERC)发布侵袭性真菌病诊疗共识修订版,该版共识除上述常规方法外,更强调分子生物学诊断的价值[1]。
我国医院内进行真菌相关微生物检查的实验室主要为检验科微生物室。
近期对全国348家医院微生物室真菌检验能力的调查显示,我国常规真菌检验项目(真菌涂片染色、真菌培养)及部分血清学检查(真菌1,3-β-D葡聚糖检测)覆盖率在70%以上,但真菌其他检验方法以及整体诊断能力较为欠缺,与国外差距较大[5]。
在进一步加强微生物实验室能力建设基础上,也需要将有重要价值的诊断方法介绍给广大临床医师,帮助大家加深认识,合理应用,提高侵袭性真菌病的诊断水平。
为此,我们邀请来自感染、呼吸、血液、重症等领域专家与医学真菌和临床微生物专家们共同参与制定本共识。
侵袭性肺真菌病诊治指南解读
侵袭性真菌病(invasive fungal disease, IFD)是临床常见的感染类型,其发病率在器官移植受体、恶性肿瘤等免疫抑制患者中高达20% ~ 40%[1-2]。
尽管有新的抗真菌药物问世,IFD仍是免疫抑制患者的重要死亡原因之一[2]。
我国IFD的主要病原体为曲霉、隐球菌和念珠菌,而肺是IFD最常见的靶器官,本文结合我国《侵袭性肺部真菌感染的诊断标准与原则》[3]、《肺真菌诊断和治疗专家共识》[4]以及美国感染病学会(IDSA)、美国胸科学会(ATS)的相关指南和共识[5-8]讨论侵袭性肺曲霉病、隐球菌病和念珠菌病的临床诊治。
1 侵袭性肺真菌病的分级诊断2002年,欧洲癌症研究和治疗组织/侵袭性真菌感染协作组与美国过敏和感染病研究所真菌病研究组(EORTC/MSG)发表了《癌症和造血干细胞移植患者机会性真菌感染定义的国际共识》,提出了确诊、临床诊断、拟诊3个诊断级别和相应的诊断标准,并在2007年加以修订[1]。
新定义的适用范围从癌症和造血干细胞移植拓展为所有器官移植所致的免疫抑制患者和慢性肉芽肿病、严重联合免疫缺陷病等先天性重症免疫缺陷病患者,但不包括重症监护病房(ICU)患者。
在新定义中,保留了确诊、临床诊断、拟诊3级诊断,但要求尽量减少拟诊。
确诊只需要具备组织学或无菌体液检测确定的微生物学证据,因此不涉及宿主因素;临床诊断由宿主因素、临床标准及微生物学标准3部分构成;拟诊指仅符合宿主因素和临床标准而缺少微生物学证据者。
新定义特别指出,宿主因素与危险因素不是同义词,前者指明确的好发获得性真菌病的个体特征,故将原来的体温(>38 ℃或<36 ℃)、发热4 d以上经广谱抗生素治疗无效和移植物抗宿主病(GVHD)等删除或改作为临床特征。
临床标准原来分主要标准和次要标准,新定义则不再区分,就下呼吸道真菌病而言仅列举了3种CT征象(浓密的境界清楚的病灶伴或不伴晕影、空气半月征或空洞,具备任何1种即可)。
真菌检测的临床意义
非白念念珠菌感染 毛孢子菌感染 地霉感染 镰刀菌感染 枝顶孢霉感染 暗色真菌感染
马尔尼菲青霉:目前已成为HIV阳性患者的主要 条件致病菌
真菌感染的实验室鉴定方法
形态学检查 培养+鉴定 血清学检查
分子生物学检查
其它:组织病理学,影像学
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真菌直接涂片的诊断价值
诊断阳性率高
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4
近年来,非白色念珠菌的分离率有所上升
全球ARTEMIS Disk研究结果显示: 1997-2003年非白色念珠菌分离率有所升高
18% 16% 14% 光滑念珠菌 热带念珠菌 近平滑念珠菌
11.5% 10.5%
(n=2475)
分 离 率
12% 10% 8% 6% 4% 2% 0%
10.7% 9.3%
(n=2047)
9.2%
(n=1112)
(n=2431)
10.2%
(n=2635)
(n=3974)
(%)
1997-1998
1999
2000
2001
2002
2003
MA Pfaller, et al. J Clin Microbiology. 2005:5848-5859.
侵袭性肺真菌感染的流行病学
临床常见的条件性真菌感染
念珠菌病: 最常见,血源感染的第4位。
曲霉菌病: 常见于干细胞移植、实体器官移 植、大剂量化疗患者和免疫缺陷患者。 隐球菌病: 艾滋病人患病率为10-20%。 接合菌病(毛霉病):多见于重症糖尿病、 烧伤病及器官移植病人。
临床有增多趋势的条件性真菌
如何正确解释真菌药敏结果及其与临床疗效的关系_2022年学习资料
如何正确解释真菌药敏结果及其与临床疗效的关系
真菌体外药敏实验判断标准-CLSI制定的药敏判断标准,(以浓度依赖性药-物为例:-一以不同药物进入体内后血 (体液)中最高浓-度与该药物体外最低抑菌浓度MIC-间的关系-所制定,如:--最高血药浓度Cmax/MIC 4-8-为S--最高血药浓度Cmax/MIc=1-2-为Ior-SDD--最高血药浓度cmax/MIc>1 为R
NCCLS/,CLSI推荐的药敏方法-适用菌种-适用药物-研发公司-M27-A肉汤-5-FC、AMB、氟康 酵母菌-稀释法-唑、伊曲康唑、伏立-M38-A-丝状真菌-肉汤稀释法-ATB半自动-法国生物梅里-埃生产敏系统-M44-A美兰-辉瑞制药研制-氟康唑、伏立康唑-纸片扩散法-瑞典AB-E-test-BIODISK 制
Volume 24-M44-A-纸片扩散法CLSI,M44-A-Method for Antifungal Disk Diffusion Susceptibiine-Scope-With a need to make antifungal su ceptibility testing more readily available to the cli ical laboratory,-NCCLS document M44-Method for Antifu gal Disk Diffusion Susceptibility Testing of Yeasts p ovides-an established methodology for disk diffusion esting of Candida spp.zone interpretive criteria forluconazole,and recommended quality control ranges for fluconazole and voriconazole.--标准提供氟康唑的直径解释折点,以及氟康唑和伏 康唑的质控范围-没有伏立康唑折点-CLINICAL AND-LABORATORY-STANDARDS-IN TIT风TE
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Ningxia Medical UniversityThesis for Application of Master’s DegreeEvaluation of fungal score in the diagnosis of Invasive CandidainfectionStudent’s Name:Xu YujieSuprevisor:Ma XiaoweiSubject Category:MedicineMajor:Emergency MedicineSpecialty:Critical Care MedicineSchool:Department of Clinical MedicimeCompletion Date:Mar. 2015真菌评分在侵袭性念珠菌感染诊断中的应用价值摘要目的:本研究旨在通过评价弗吉尼亚评分、Sevilla评分及Candida score评分三种预测危重症患者罹患侵袭性念珠菌感染的评分方法在侵袭性念珠菌感染诊断中的临床应用,探讨真菌评分在临床诊断侵袭性念珠菌感染的应用价值,为临床早期诊断与治疗侵袭性念珠菌感染提供有效依据。
方法:1、回顾性收集2011年1月到2014年12月宁夏医科大学总医院ICU科收治的106例侵袭性念珠菌感染高危患者的临床资料(个体的一般情况、患者预后、既往病史、细菌学相关培养等),以2007年中华医学会重症医学分会制定的“重症患者侵袭性真菌感染的诊断和治疗指南”制定的诊断标准,将患者分为确诊、临床诊断、拟诊和非感染四组;2、按照真菌评分系统制定的标准,对四组患者进行弗吉尼亚评分、Sevilla 评分及Candida score评分三种评分(评分阳性标准:弗吉尼亚评分≥30分,Sevilla评分≥12分,Candida score评分≥3分,评分阳性认为患者感染侵袭性念珠菌风险大)。
将确诊、临床诊断组作为阳性对照,将非感染组作为阴性对照,分别计算三种评分方法的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值,评价三种评分方法的临床应用价值。
结果:1、纳入的106例患者中,5例确诊为侵袭性念珠菌感染,44例临床诊断为侵袭性念珠菌感染,9例拟诊为侵袭性念珠菌感染,48例为非侵袭性念珠菌感染。
三种评分阳性结果在确诊、临床诊断、拟诊和非感染侵袭性念珠菌感染四组中所占比例分别是:①弗吉尼亚评分:60%、65.9%、55.6%、60.4%;②Sevilla评分:60.0%、50.0%、0%、8.3%;③Candida score评分:80%、72.7%、33.3%、29.2%。
2、将确诊、临床诊断组作为阳性对照,将非感染组作为阴性对照,三种评分的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别是:①弗吉尼亚评分:0.86、0.40、0.52、0.53;②Sevilla评分:0.55、0.96、0.93、0.68;③Candida score评分:0.74、0.71、0.72、0.72。
3、三种评分方法联合应用,(1)平行试验:①弗吉尼亚评分联合Sevilla评分灵敏度为0.84,特异度为0.4,阳性预测值0.59,阴性预测值0.70,约登指数0.24。
②Sevilla 评分联合Candida score评分灵敏度为0.80,特异度为0.71,阳性预测值0.77,阴性预测值0.77,约登指数为0.51。
③弗吉尼亚评分联合Candida score评分灵敏度为0.80,特异度为0.35,阳性预测值0.55,阴性预测值0.63,约登指数为0.15。
(2)序列试验:①弗吉尼亚评分联合Sevilla评分灵敏度为0.37,特异度为0.98,阳性预测值0.95,阴性预测值0.60,约登指数为0.35。
②Sevilla评分联合Candida score评分灵敏度为0.45,特异度为0.98,阳性预测值0.96,阴性预测值0.66,约登指数为0.43。
③弗吉尼亚评分联合Candida score评分灵敏度为0.59,特异度为0.79,阳性预测值0.80,阴性预测值0.66,Youden指数为0.38。
结论:1、弗吉尼亚评分灵敏度较高,但特异度较低,单独使用误诊率偏高。
2、Sevilla评分具有较好的灵敏度和特异度,可单独应用指导侵袭性念珠菌感染的早期诊断。
3、Candida score评分诊断侵袭性念珠菌感染与指南制定标准确诊、临床诊断侵袭性念珠菌感染总符合率最高,临床有应用价值。
4、Sevllia 评分与Candida score评分联合应用时,灵敏度及特异度均较单独使用增高,综合诊断能力好,联合应用指导早期诊断侵袭性念珠菌感染的临床意义更大。
关键词:真菌评分,侵袭性念珠菌感染,诊断Evaluation of fungal score in the diagnosis of Invasive CandidainfectionABSTRACTObjective: The study is designed to assess the ability of Virginia score,Sevilla score and Candida score which identify patients with high risk of invasive candida infection in clinical application,and provide efective basis of clinical esrly diagnosis and treatment of invasive candida infection.Methods: 1. Retrospectively collecting clinical data of 106 patients with high risk of invasive candida infection(general information of the individual, prognosis, medical history, bacteriology related training, etc) treated in the ICU department of Ningxia medical university general hospital from January 2011 to December 2014.,taking "Severe invasive fungal infection in patients with the diagnosis and treatment guidelines" formulated in intensive medical branch of Chinese medical association in 2007 as diagnostic criteria, we divided the patients into proven,probable,possible and non-invasive candida infections four groups.2.According to the standard of the fungal scoring system,marking the four groups of patients with Virginia score,Sevilla score and Candida score(positive:Virginia score≥30 points, Sevilla scoring≥ 12 points, Candida score≥ 3 points.Positive means the patients are at high risk of invasive candida infection) Taking the proven and probable two groups as the positive contrast,the non-invasive infection group as a negative control,we calculated and compare the difference of the three fungal scoring systems in sensitivity, specific, positive predictive value, negative predictive value, positive likelihood ratio,negative likelihood ratio and Youden index,and then evaluate the clinical value of them.Results:1. In 106 patients,5 cases were diagnosed as proven,44 cases as probable, 9 cases as possible and 48 cases as non-invasive infection. The positive results of the threefungal scoring systems in the proven,probable,possible and non-invasive candida infections are:Virginia score:60%,65.9%,55.6%,60.4%; Sevilla score: 60.0%,50.0%,0%,8.3%; Candida score:80%,72.7%,33.3%,29.2%.2.Taking the proven and probable two groups as the positive contrast,the non-invasive infection group as a negative control, the Sensitivity, specificity, positive predictive value, and negative predictive values of the three fungal scoring systems are:Virginia score: 0.86, 0.40, 0.52,0.53; Sevilla score:0.55,0.96,0.93,0.68;Candida score:0.74,0.71,0.72,0.72.3. Combine the three scoring systems: parallel test: Virginia score combined with Sevilla score:sensitivity is 0.84,specificity is 0.4, positive predictive value is 0.59, negative predictive value is 0.70, the Youden index of 0.24. Sevilla score combined CS :sensitivity is 0.80, specificity is 0.71, positive predictive value is 0.77, negative predictive value is 0.77, the Youden index is 0.51. Virginia score combined with CS: sensitivity is 0.80, specificity is 0.35, positive predictive value is 0.55, negative predictive value is 0.63, the Youden index is 0.15. Sequence test: Virginia score combined with Sevilla score: sensitivity is 0.37, specificity is 0.98, positive predictive value is 0.95, negative predictive value is 0.60, the Youden index is 0.35. Sevilla score combined CS:sensitivity is 0.45,specificity is 0.98, positive predictive value is 0.96, negative predictive value is 0.66, the Youden index is 0.43. Virginia score combined with CS: sensitivity degree is 0.59, specificity is 0.79, positive predictive value is 0.80, negative predictive value is 0.66, the Youden index is 0.38.Conclusion:1.Virginia score has higher sensitivity but low specificity, the misdiagnosis rate is high.2.There is well sensitivity and specificity both in sevilla scoring , which could guide the early diagnosis of invasive candida infection separately;3. Compared with the guide, there is highest total diagnosis coincidence rate in Candida score, which is conducive to clinical application ;4. Combined Sevilla scoring with CS , the sensitivity and specificity increased than usedalone, the comprehensive diagnosis is competent to guide the early diagnosis of invasive candida infection better .Keywords: Fungal score, Invasive Candida infections, diagnosis中英文缩略词表缩写英文全称中文全称ICI Invasive candida infection 侵袭性念珠菌感染APACHE II Acute physiology and chronic healthevaluation II score 急性生理和慢性健康状况评分IIICU Intensive care unit 危重病加强医疗科MDRA Multi diseases risk assessment program多种疾病风险评估方案CS Candida score 念珠菌评分Se Sensitivity 灵敏度Sp Specificity 特异度PPV Positive predictive value 阳性预测值NPV Negative predictive value 阴性预测值+LR Positive likelihood ratio 阳性似然比-LR Negative likelihood ratio 阴性似然比ROC Receive operating characteristic curve 受试者工作特征曲线IFI Invasive fungal infections 侵袭性真菌感染IFIRSS Invasive fungal infections risk scoring system 侵袭性真菌感染风险评分系统目录前言 (1)材料与方法 (4)结果 (8)讨论 (15)结论 (21)参考文献 (22)文献综述 (26)综述参考文献 (31)前言侵袭性念珠菌感染(Invasive Candida infection ICI)是指念珠菌侵入人体组织或血液,并在其中生长繁殖导致组织损害、器官功能障碍和炎症反应的病例改变及病理生理过程。