医疗器械产品无菌检验操作规程

医疗器械产品无菌检验操作规程

1 目的

通过无菌检验，确保灭菌后产品能够达到无菌的要求。

2 适用范围

适用于灭菌后医疗器械产品（列举）的无菌检验。

3 检验依据

本厂产品注册标准（编号）

EN1174-1996 医疗器械灭菌产品中微生物数量的评估

《中国药典》（2005年版）

GB14233.2-2005 医用输液、输血、注射器具检验方法第二部分：生物试验方法

GB15980-1995 一次性使用医疗用品卫生标准

4 仪器、设备

百级层流超净工作台、电热干燥箱、电热恒温培养箱、霉菌培养箱、压力蒸汽灭菌器、集菌仪（器）、电子天平、PH 计、冰箱、恒温水浴锅、酒精灯、三角烧瓶，接种环、无菌棉签、镊子，试管架，大试管若干等。

5 无菌检验室的环境要求

5.1 无菌检验应在环境洁净度10000级下的局部百级的单向流空气区域内进行。

5.2 缓冲区与外界环境、无菌检验室与缓冲区之间空气应保持正压，阳性对照室与缓冲区之间空气应保持负压。无菌检验室与室外大气之间静压差应大于10Pa。无菌检验室的室温应保持18～26℃，相对湿度：45～65%。

5.3 无菌检验室的单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的监测。每年至少检测一次。

5.4 无菌检验过程中应同时检查超净工作台单向流空气中的菌落数：每次操作时在层流空气所及台面的左中右置3个营养琼脂平板，暴露30min，于30～35℃培养48小时，菌落数平均应不超过1CFU/平板。

6 无菌检验前的准备

6.1 器具灭菌、消毒

6.1.1 灭菌：试验过程中与供试品接触的所有器具必须采用可靠方法灭菌。可经电热干燥箱160℃以上干烤2小时，或置压力蒸汽灭菌器内121℃蒸汽灭菌30分钟后使用（根据灭菌效果验证决定灭菌参数）。所有的灭菌物品不应超过2周即用毕，否则应重新灭菌。

6.1.2 消毒：凡检验中使用的器材无法灭菌处理的，使用前必须经消毒处理。如无菌检验室的试管架、电子天平、工作台面、工作人员的手、橡胶吸头等。可采用消毒剂浸泡或擦拭。消毒剂应每月更换，以防止产生耐药菌株。

6.1.3 标识：器具的灭菌、消毒后必须做好标识，标明灭菌、消毒时间和使用有效期。

6.2 人员、物料进入无菌检验室

6.2.1 开启紫外线灯或臭氧发生器进行空间灭菌处理，消毒时间不得少于30min。

6.2.2 物料进入无菌检验室流程

6.2.2.1 脱包：进入无菌检验室的物品若有双重包装的，需将外包装在传递窗/缓冲间拆除后，传入试验室。

6.2.2.2 消毒：进入无菌操作室的所有培养基、供试品等的外表都应采用适用的方法进行消毒处理，以避免将外包装污染的微生物带入无菌检验室。

6.2.2.3 传递：查看所有进入无菌检验室的器具上的灭菌、消毒标识，是否在有效期内。符合要求的经传递窗传入无菌检验室。

6.2.3 人员进入无菌检验室流程

6.2.3.1 更鞋脱衣：在一更区脱去一般区工作鞋，穿上无菌检验室工作鞋；脱去一般区工作服。

6.2.3.2 洗手：首先用肥皂或洗手液在手上揉擦出泡沫，再用流水连续冲洗20秒，洗净泡沫。

6.2.3.3 更衣：在二更区按照从上到下的顺序穿戴无菌工作服（包括衣、帽、口罩等），要求裤子掖在上衣里，口罩掩住口鼻，帽子包裹所有头发。

6.2.3.4 手消毒：用消毒液浸泡双手5秒以上或用浸过消毒液的棉球擦拭双手。消毒液可用洗必泰、新洁尔灭、碘伏、75%酒精等。

6.2.3.5 人员进入：经缓冲间进入无菌检验室。

6.2.4 人员进入无菌检验室后，进一步用消毒液擦拭工作台面，戴无菌手套。

7 无菌检验操作要求

7.1 全过程必须严格执行无菌操作，防止微生物污染。

7.2 使用玻璃器皿应轻取轻放，避免破损，以防培养物扩散。

7.3 所有操作均应在近火焰区进行，且不得有大幅度或快速动作，以免搅动空气中的尘埃微粒。

7.4 使用金属接种器具时，用前、用后均需灼烧灭菌。

7.5 在接种培养物时，动作应轻、准，防止培养物溅出，产生汽溶胶，造成污染。

7.6 操作过程中所有的带菌物品，用后均应作消毒、灭菌处理。可在检验过程中随用随时放入消毒液缸内浸泡或消毒桶内，或在检验完成后经传递窗传至一般区，立即用压力蒸汽灭菌锅121℃灭菌30分钟。

8 培养基制备

8.1需气菌、厌气菌培养基（硫乙醇酸盐流体培养基）的制备

8.1.1 所用试剂

酪胨（胰酶水解）15.0g

葡萄糖5.0g

L-胱氨酸0.5g

硫乙醇酸钠0.5g

（或硫乙醇酸）（0.3ml）

酵母浸出粉5.0g

氯化钠2.5g

新配制的0.1%刃天青溶液1.0ml 琼脂0.75g

水1000ml

8.1.2 制备

除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH为7.1±0.2。

8.1.3 硫乙醇酸盐流体培养剂氧化层的颜色要求

在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，否刚需经100℃水浴加热到粉红色消失（不超过20分钟）迅速冷却，只限加热一次，并应防止被污染。

8.2 霉菌培养基（改良马丁培养基）的制备

8.2.1 所用试剂

胨5.0g

酵母浸出粉2.0g

葡萄糖20.0g

磷酸二氢钾1.0g

硫酸镁0.5g

水1000 ml

8.2.2 制备

除葡萄糖外，取上述成分混和，微温溶解，调节pH值约为6.8，煮沸，加葡萄糖溶解后，摇匀，滤清，调节pH为6.4±0.2。

8.3 还可使用按处方生产的符合规定的脱水培养基，按照使用说明书配制。

8.4 培养基配制后应尽快灭菌，避免微生物繁殖。一般采用高压蒸汽121℃灭菌30分钟。

8.5 制备好的培养基应在2～25℃保存，在3周内使用。

8.6 培养基的无菌性检查

每批配制的培养基均应进行无菌性检查（可与产品无菌检验同步进行）。检查时，每批培养基随机取不少于5支（瓶）培养14天，应无菌生长。

9 稀释液、冲洗液的制备

9.1 0.1%蛋白胨水溶液

取蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清，分装后置入压力蒸汽灭菌器内，121℃灭菌30分钟后，于4℃保存备用。, 分装后置入压力蒸汽灭菌器内，121℃灭菌30分钟后，于4℃保存备用

9.2 pH7.0 氯化钠-蛋白胨缓冲液

取磷酸二氢钾3.56g、磷酸氢二钾7.23g、氯化钠4.30g、蛋白胨1.0g，加水1000ml。微温溶解，滤清，分装后置入压力蒸汽灭菌器内，121℃灭菌30分钟后，于4℃保存备用。

9.3 浸提介质：9g/L无菌氯化钠溶液，可直接从有证单位采购大输液。

10 对照菌液制备

10.1 无菌检验所用的菌株传代次数不得超过5代。

10.2取金黄色葡萄球的普通琼脂斜面培养物，接种一白金耳至营养琼脂培养基内，在30～35℃培养18～24h后备用，同时制备0.9%氯化钠溶液加入在6支小试管内，每支试管内加9.0ml的0.9%氯化钠溶液，在压力锅内经121℃灭菌30min备用。将已配好的金黄色葡萄球菌培养菌液取1.0ml加入第一支小试管内，稀释成浓度1:10的菌液；取第一支试管内1.0m l菌液加入第二支小试管内，稀释成浓度1:100的菌液，同法稀释成浓度1:106（每ml含菌量≤100CFU）即可。

10.3 采用平皿计数法测定活菌数。

11 无菌检验培养温度