植物叶蛋白提取技术及开发利用研究

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藜叶蛋白质提取方法比较试验

０ｍｎ次。Ｂ一胡萝卜虽小于菠菜，但远远高于芹菜和大白菜，分别３ｉ，过滤，干燥称重，重复３素
．．．是芹菜和大白菜的６３１９。据分析，在各类灰菜的干物１２２４絮凝剂加热法－和５倍
质中，平均每千克含消化能９１、代谢能８４、可消．９ＭＪ．０ＭＪ
体的优势藻类有绿藻门中的十字藻、盘星藻等；硅藻门中的光合细菌与使用消毒剂要间隔４ｄ以上。最后还要注意施用光合舟形藻、针杆藻等，这些藻类都是浮游动物和养殖鱼类的天细菌的浓度，并非浓度越高越好。一般水体泼洒５ｇｋ为～９ｍ／ｇ然优质饵料。光合细菌本身营养丰富，直接或间接为浮游动宜，作为饵料添加剂一般１％２％的添加量为佳。物和养殖动物提供高质量饵料。若在饲料中加人光合细菌，由于养殖水体的多样化、养殖品种的不同，光合细菌进能促进肠胃中有益菌的繁殖，增加消化吸收能力，促进水产行水质调节用法也不同，应因地制宜，正确使用，才能充分品生长的效果更明显。发挥它的作用，降低养殖成本。
繁殖力强，喜光、耐盐碱、耐热、耐旱、耐涝等特点，能适
材料一剪短一打浆一去渣一絮凝一过滤一干燥称重一计
应典型的大陆性气候，是撂荒地植被恢复的先锋植物。但由算提取率于藜常出现在作物栽培地中，一直被人们作为杂草防治，耗１２２试验设计．．
叶白取（零蛋提率）葺％＝
×％。。
（０。０．，Ｎ３。５．，兰州市榆中县夏官营镇）Ｅｌ４９９３５１１８验处理间差异的显著性。结果见表２。从表２以看出，酸化可Ｐ．５收获的藜地上部分，植株高１５～８ｃ不等。按试验设计进行加热法与絮凝剂加热法之间有显著性差异（＜Ｏ０），与其０ｍ样品处理。他方法之间无显著性差异（＞Ｏ０Ｐ．５）。

叶蛋白研究热点及发展趋势

叶蛋白研究热点及发展趋势作者：刘浪浪刘军海来源：《农业工程技术·农产品加工》2009年第09期摘要：简要介绍了叶蛋白的应用现状，综述了叶蛋白各种提取方法，探讨了其今后的发展方向。

关键词：叶蛋白提取发展方向0前言随着世界人口的迅速增加，蛋白质资源匮乏，人类对在短期内不可能满足从动物食品中对优质蛋白的摄取，且动物蛋白中含有大量对人体生长发育不利的饱和脂肪酸和胆固醇，可导致动脉粥僵硬化等疾病的发生。

研究表明，绿色植物茎叶是一种含量很大的天然蛋白质资源，从中提取出的叶蛋白具有营养丰富、不含动物性胆固醇，且能防衰抗老、强身健体等有点而备受人们青睐。

我国植物资源丰富，提取叶蛋白的原料有其来源主要有禾本科牧草、苋菜、苦荬菜、甜菜、萝卜等。

以及新鲜幼嫩的树叶和水生植物等。

叶蛋白的开发利用可以缓解当今世界蛋白质严重短缺的矛盾，对于增进人体健康有着十分重要的意义，也是当前叶蛋白研究的热点。

本文简要介绍了叶蛋白的种类及其应用，综述了叶蛋白的提取方法，并对以后的发展趋势进行了探讨。

1叶蛋白的应用现状1.1用于保健食品从植物新鲜绿叶中提取的叶蛋白，因其营养价值高而受到食品生产者的重视。

叶蛋白在叶中形成的初始蛋白，其蛋白分子链短、易被消化吸收，可将其用于食品如面食、糖果、奶粉等中作为添加剂。

用来提高食品中的营养物质成分，具有很高的营养价值和食用效果，既满足人体对蛋白质、胡萝卜素、多酚等营养物质的需要，也对食品的口感风味和其工艺特性等副作用。

法国教授D.c.Dillon研究认为，10kg体重的儿童如果每天摄入10g叶蛋白，就可满足对铁100％需求，对叶酸50％需求，对蛋白质40％需求，对VA3倍的需求。

也可将叶蛋白单独制成保健产品，可以提高血液中血红蛋白的水平，缓解由于蛋白质摄入不足而引起的贫血等功能，具有很大的开发空间。

叶蛋白含有不饱和脂肪酸、不含胆固醇，富含多种糖、维生素和矿质元素等优点。

1.2用于饲料工业随着养殖畜牧业的迅猛发展，蛋白质饲料在我国严重短缺，饲料工业如果仅依靠现有的饲料资源，将不利于我国畜牧业的持续快速发展，应尽快找到丰富的蛋白质资源。

烟草叶片蛋白3种提取方法的比较研究

烟草叶片蛋白3种提取方法的比较研究摘要:使用酚/SDS法､Tris-HCl法及TCA/丙酮沉淀法提取烟草(Nicotiana tabacum)叶片蛋白,从终产物形式､颜色､提取时间､蛋白产量､SDS-PAGE电泳图谱等方面对3种方法进行比较,对提取的烟草叶片蛋白进行Western Blotting检测来评价3种方法提取蛋白的效果｡结果表明,与2种常用方法相比,酚/SDS法具有快速､操作方便等特点,提取的蛋白纯度高､种类丰富,可用于Western Blotting检测,是一种合适的提取植物组织中蛋白的方法｡关键词:烟草(Nicotiana tabacum)叶片;蛋白;Tris-HCl法;TCA/丙酮沉淀法;酚/SDS法Comparison Study on Three Methods for Tobacco Leaf Protein Extraction Abstract: Protein was extracted from tobacco(Nicotiana tabacum) leaves by three methods, phenol/SDS method, Tris-HCl method and TCA/acetone precipitation method. The extracting efficiency of the three methods was evaluated through the color and form of product, extraction time, protein yield and SDS-PAGE. Furthermore, the extracted protein was detected by Western Blotting. The results showed that compared with the other two methods, phenol/SDS method was faster and more convenient, and the protein extracted was with high quality, rich in protein species, and suitable for Western Blotting, thus was an appropriate method for extracting protein from plant tissue.Key words: tobacco(Nicotiana tabacum) leaf; protein; Tris-HCl extraction method; TCA/acetone precipitation; phenol/SDS extraction method蛋白质组学(Proteomics)是随着基因组学发展而发展起来的､在整体水平上研究细胞内蛋白质的组成及其活动规律的学科｡由于其能够阐明基因表达产物——蛋白在生物体内的相对含量､修饰化信息,蛋白质与其他生物大分子的相互作用等诸多内容而日益成为现代生物学的研究热点｡在蛋白质组研究中,蛋白样品制备是分析的起始和基础,蛋白提取质量和效果对后续的研究分析有重要影响[1,2]｡植物组织含有较厚的细胞壁,给组织中蛋白质的提取增加了一定的难度｡目前常用的植物蛋白的提取方法有两种,一种是普通Tris-HCl提取法,该方法通过选择适当的提取缓冲液pH,将植物中的可溶性蛋白尽可能地溶解;另一种是TCA/丙酮沉淀法,该方法中TCA作为蛋白质变性剂,能有效抑制丝氨酸蛋白酶和巯基蛋白酶的活性,减少蛋白损失,因此得到较为广泛的使用[3-6]｡但以上两种方法都不能有效地去除产物中的非蛋白物质,会对后续的研究产生不利的影响｡而酚/SDS蛋白提取法中,利用酚在SDS这种阴离子型表面活性剂的存在条件下能充分溶解蛋白的特点,可以取得在较短的时间内充分溶解植物组织中蛋白的效果,得到的蛋白纯度更高[7,8]｡目前该方法在国内使用得较少,特别是在烟草样品中尚未见报道｡本研究同时使用酚/SDS法､Tris-HCl法及TCA/丙酮沉淀法3种方法从烟草叶片中提取蛋白质,从终产物形式､颜色､提取时间､蛋白产量､SDS-PAGE电泳结果等方面进行比较,并使用糖基转移酶抗体对提取的烟草叶片蛋白进行免疫学检测,以评价3种方法提取蛋白的效果,为植物蛋白的提取和蛋白组学研究提供参考｡1 材料与方法1.1 材料和试剂烟草叶片(W38)来自中南民族大学生命科学学院国家民委生物技术重点实验室｡主要试剂:NC膜购自Whatman公司;ECL Western Blot System购自碧云天公司;Tris､三氯乙酸等化学试剂为国产分析纯;糖基转移酶多克隆抗体由北京华大蛋白技术有限公司制备｡1.2 蛋白提取方法1.2.1 Tris-HCl提取法准确称取0.5 g叶片,剪碎后加入0.25 mL Tris-HCl溶液冰浴研磨,再加入0.75 mL提取液(7 mol/L尿素､2 mol/L硫脲､0.4% CHAPS､10 mmol/L DTT),研磨至匀浆后,转移至1.5 mL离心管中,10 000 r/min离心10 min,上清液为所需的总蛋白｡1.2.2 TCA/丙酮沉淀法取0.5 g叶片,用液氮研磨充分,加入5 mL预冷的TCA 提取液(含质量分数10%的TCA､20 mmol/L DTT､1 mmol/L PMSF的丙酮溶液)充分混合后,-20 ℃放置1 h;13 000 r/min､4 ℃离心15 min,取沉淀;再加入5 mL预冷的样品洗涤液(20 mmol/L DTT､1 mmol/L PMSF的丙酮溶液),充分混合后,-20 ℃放置1 h;13 000 r/min､4 ℃离心15 min,取沉淀;用密封膜封口,用针在膜上扎几个小洞,低温冷冻干燥｡置于-80 ℃保存或直接进行蛋白电泳｡1.2.3 酚/SDS蛋白提取法取0.5 g烟草样品,液氮中研磨至粉末,快速转移至7 mL试管,加入5 mL预冷的质量分数为10%的TCA丙酮溶液,振荡混合均匀后,12 000 r/min､4 ℃离心3 min,弃上清;加入5 mL含有0.1 mol/L乙酸铵的体积分数为80%的乙醇溶液,振荡混合后12 000 r/min､4 ℃离心3 min,弃上清;再加入5 mL体积分数80%的丙酮,涡旋振荡直至沉淀充分分散,12 000 r/min､4 ℃离心3 min,弃上清,室温干燥10 min以除去剩余的丙酮,加入2.5 mL苯酚/SDS溶液,振荡混匀后,放置5 min,12 000 r/min､4 ℃离心3 min;转移上层苯酚相(约1~2 mL)至新的7 mL 管中,加入含有0.1 mol/L乙酸铵的乙醇溶液,置-20 ℃中10 min或过夜,12 000 r/min､4 ℃离心5 min,小心弃上清｡用无水乙醇洗沉淀,再用体积分数80%的丙酮洗沉淀｡最后让蛋白自然干燥,或根据实验需要用缓冲液溶解蛋白,保存在-80 ℃冰箱,或直接进行蛋白电泳｡1.3 检测方法考马斯亮兰G-250法测蛋白含量[9];SDS-PAGE电泳检测,按照文献[10,11]所述方法进行;Western Blotting检测:取发育状况接近的烟草叶片,分别用3种方法提取总蛋白,进行SDS-PAGE电泳,然后通过蛋白转膜､丽春红染色检测､封闭､标记一抗､洗脱一抗､标记二抗和杂交､再洗脱､化学发光法显色检测结果等步骤进行分析[12,13]｡2 结果与分析2.1 3种方法提取的蛋白质质量和产量比较对3种提取方法得到的烟草叶片蛋白形式､颜色､提取时间及蛋白产量进行比较(表1),可以看出,Tris-HCl提取法所得产物为绿色,这是由色素等杂质成分未能被完全去除而导致｡该方法虽提取速度快､产量高,但蛋白质量不高,所含杂质较多｡TCA/丙酮沉淀法用液氮充分研磨烟草叶片,同时加入蛋白酶抑制剂PMSF,降低了蛋白降解损失,故蛋白产量最高｡但是多次洗脱后样品颜色仍为淡黄色,这可能是因为烟草叶片中的一些物质能与蛋白共沉淀,导致终产物含有杂质｡此外,此方法操作耗时较长,会导致蛋白样品的损失和降解｡使用酚/SDS法提取蛋白,酚能够有效溶解蛋白,并在SDS存在下,其溶解效果更好,可溶解的蛋白更多,且该方法能有效去除非蛋白物质,非蛋白类成分较其他两种方法都少,获得的产物为白色｡虽然该方法的蛋白产量较TCA/丙酮沉淀法低,提取所需时间长于Tris-HCl法,但蛋白较纯｡2.2 SDS-PAGE检测结果使用常规的SDS-PAGE对3种方法获得的烟草蛋白样品进行比较分析,在蛋白上样量为20 μg时,Tris-HCl法提取的蛋白中检测到10个条带,TCA/丙酮沉淀法提取的蛋白电泳检测出14条条带,酚/SDS法提取的蛋白有12条条带(图1)｡Tris-HCl 法提取的蛋白条带较少,说明只提取到了部分蛋白,可能是该方法采用冰浴研磨,细胞破碎不够充分,只能得到植物组织中的部分可溶性蛋白｡当蛋白上样量为40 μg时,酚/SDS法所得的蛋白条带最多(图2),说明该方法提取的蛋白种类最多,提取效果比较好｡2.3 Western Blotting检测结果使用Western Blotting,以烟草糖基转移酶抗体为探针检测3种方法获得的蛋白,结果显示普通Tris-HCl法和TCA/丙酮法提取的蛋白均未出现任何杂交信号,只有酚/SDS法提取的蛋白出现杂交信号(图3),这表明酚/SDS法提取的蛋白用于Western Blotting分析能得到较好的效果｡3 结论3.1 蛋白提取质量在蛋白提取中,杂质的去除是一个主要问题[2],本研究中酚/SDS法提取的蛋白颜色最浅,所含杂质少,有利于后续的蛋白质组分析｡另外,该方法步骤简单,提取时间较短,能在4~5 h内完成,具有操作方便､快速的特点｡其他两种方法提取的蛋白质均含有较多杂质,不利于后续实验的进行｡3.2 电泳和Western Blotting检测对3种方法提取的蛋白进行电泳检测,Tris-HCl法只提取到了部分蛋白｡TCA/丙酮沉淀法所得蛋白条带虽多,但是该方法需要的时间长,容易产生蛋白样品的降解,从而导致蛋白电泳结果不稳定｡而酚/SDS蛋白提取法所得条带较多,重复性好,能够得到良好的一维电泳图谱｡此外,本研究使用Western Blotting对烟草叶片蛋白中的糖基转移酶进行了检测｡结果显示酚/SDS法提取的烟草叶片蛋白表现良好,可用于后续分析｡酚/SDS法提取植物蛋白,可获得高质量和较高产量的目标产物,为有效提取植物叶片蛋白提供了有力的依据,也为后续的蛋白分析实验打下了良好的基础｡参考文献:[1] WANG W, VIGNANI R, SCALI M, et al. A universal and rapid protocol for protein extraction from recalcitrant plant tissues for proteomic analysis[J]. Electrophoresis,2006,27(13):2782-2786.[2] 兰彦,钱小红.蛋白质组分析中蛋白质分步提取方法的建立[J]. 生物化学与生物物理进展,2001,28(3):415-418.[3] 曾亚. 水稻抗病基因介导的抗病反应中蛋白质表达谱的比较分析[D]. 武汉:华中农业大学,2008.[4] 严顺平. 水稻响应盐胁迫和低温胁迫的蛋白质组研究[D]. 北京:中国科学院研究生院,2005.[5] 赵敏. 水稻两优培九不同氮素处理叶片和籽粒蛋白质组学研究[D]. 福州:福建农林大学,2008.[6] 汪家政,范明.蛋白质技术手册[M]. 北京:科学出版社,2000. [7] WANG W, SCALI M, VIGNANI R, et al. Protein extraction for two-dimensional electrophoresis from olive leaf, a plant tissue containing high levels of interfering compounds[J]. Electrophoresis,2003,24(14):2369-2375.[8] FAUROBERT M, PELPOIR E, CHA B J. Phenol extraction of proteins for proteomic studies of recalcitrant plant tissues[J]. Methods in Molecular Biology,2006,355:9-14.[9] LI F F,WANG Y Y,LIU G F, et al. Cloning and expression of wheat heat-shockprotein 60(HSP60) gere in E. coli[D]. 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一种从植物叶片中同步提取植物多酚和植物蛋白并制备植物蛋白水解

专利名称：一种从植物叶片中同步提取植物多酚和植物蛋白并制备植物蛋白水解肽的方法
专利类型：发明专利
发明人：程镜蓉,刘学铭,唐道邦,王旭苹,陈智毅,杨怀谷,邹金浩
申请号：CN202010843624.5
申请日：20200820
公开号：CN112125948A
公开日：
20201225
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种从植物叶片中同步提取植物多酚和植物蛋白并制备植物蛋白水解肽的方法，包括以下步骤：(1)选取植物叶片粉，加入TCA/丙酮溶液，震荡后静置过夜；(2)将溶液离心，收集沉淀和上清液；(3)上清液先经过浓缩回收丙酮，利用大孔树脂吸附，先用水洗，再采用洗脱液洗脱，所得目标物经浓缩，即为植物多酚；(4)向沉淀中加入预冷丙酮提取，洗涤，收集沉淀，晾干，得植物叶片蛋白粗提物；(5)将粗提物溶于水中，加入酶进行酶解；(6)调节酶解产物的pH值，离心，收集上清液，即得植物蛋白肽。

该方法能同时获取植物多酚、植物蛋白以及植物蛋白水解肽，且该方法原料来源广，操作工艺简单，能耗少，可大规模生产。

申请人：广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所
地址：510610 广东省广州市天河区东莞庄一横路133号
国籍：CN
代理机构：广州知友专利商标代理有限公司
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论文紫花苜蓿蛋白提取

酸热法提取紫花苜蓿鲜草叶蛋白的工艺参数研究摘要苜蓿（Medicago Sataiva L.）是世界上分布最广泛、最古老的豆科栽培牧草之一。

苜蓿富含蛋白质、多种维生素和矿物质，是多种家畜喜食的优质蛋白质饲草和能量饲草，它既可用于饲料产业，同时近年也被用来开发研制成各种食品。

苜蓿叶片中含有丰富的蛋白质，为一种良好的提取叶蛋白的原材料。

本课题以紫花苜蓿鲜叶为材料，提取方法为酸热法。

主要内容是用酸热法提取苜蓿鲜叶中的叶蛋白，本实验通过设置不同的提取温度、pH值、絮凝时间三个单因素进行酸热实验来研究提取率。

实验结果表明，酸热法实验各单因素最佳参数分别为：温度为50℃，pH值为4，絮凝时间为10min。

并在单因素基础上设计了响应面试验。

然后对提取的叶蛋白进行氨基酸含量的测定分析。

采取方法：本实验先用打浆机将苜蓿叶打浆，加盐，通过酸热、离心、干燥得到苜蓿叶蛋白，用凯氏定氮法测定不同条件下的蛋白质提取率，并作响应面试验选择最优条件。

用选取的最优条件提取叶蛋白，做叶蛋白氨基酸的测定分析。

通过氨基酸分析结果表明,苜蓿叶蛋白氨基酸种类全,含量高,氨基酸组成比例协调, 与成人氨基酸模式基本相符，因此苜蓿叶蛋白为优质蛋白质原。

关键词苜蓿；叶蛋白；酸热法；提取AbstractAlfalfa (Medicago Sataiva L.) is one of the world's most widely distributed and the oldest cultivated forage legume . Alfalfa is rich in protein, vitamins and minerals, is favorite for livestock,a variety of high quality forage protein and energy forage,which it can be used for feed industries, while also being used in recent years develop into a variety of food. Alfalfa leaves are rich in protein, as a good raw materials for leaf protein extraction.The topic is alfalfa fresh leaves for the materials, samples are extracted with acid heating. Main content is that alfalfa leaf protein is extracted by acid heating, by setting different extraction temperature, pH, flocculation time of three single factor experiments extraction rate is studied the hot acid. The result of the experiment shows that in the single factor acid thermal method experiment ,the best parameters is temperature 50° C，pH=4,coagulation time is 10 minutes. Based on a single factor the response surface experimental is design. Then extracted leaf protein amino acid content is analysised. Methods is that: This study will first use the beater to beat alfalfa leaf, adding salt, by acid, heat, centrifugation, dried alfalfa leaf protein, with the Kjeldahl nitrogen determination method for the determination of protein under different conditions, yield, and test for response surface choose the best conditions. Select the optimum conditions with leaf protein extract, made the determination of leaf protein amino acid analysis.The amino acid analysis show that all types of alfalfa leaf protein amino acid, high content of amino acid composition of coordination, in line with the adult basic amino acid pattern, so alfalfa leaf protein is the original high quality protein.Key words: Alfalfa; leaf protein; acid heating; extraction目录摘要 (Ⅰ)Abstract (Ⅱ)第1章绪论 (1)1. 1 紫花苜蓿概况 (1)1. 1. 1紫花苜蓿的营养品质 (1)1. 1. 2紫花苜蓿的应用价值 (2)1. 1. 3苜蓿产品的开发应用现状 (3)1. 2 植物叶蛋白的研究概况 (4)1. 3 苜蓿叶蛋白提取 (5)1. 3. 1苜蓿叶蛋白提取原理及方法 (5)1. 3. 2提取叶蛋白后的副产品开发利用 (6)1. 4 本论文研究的意义与主要内容 (7)1. 4. 1本论文研究的意义 (7)1. 4. 2本论文研究的主要内容 (7)第2章酸热法提取紫花苜蓿叶蛋白工艺研究 (8)2. 1 实验材料与仪器 (8)2. 1. 1实验材料与试剂 (8)2. 1. 2实验仪器 (8)2. 2 实验测定方法 (8)2. 2. 1 凯氏定氮法测定溶液中蛋白质含量 (8)2. 2. 2氨基酸分析 (9)2. 3实验内容及方法 (11)2. 3. 1实验工艺流程 (11)2. 3. 2操作步骤 (11)2. 3. 3苜蓿叶蛋白酸热工艺参数单因素实验 (11)2. 3. 4酸热工艺响应面试验设计 (12)2. 3. 5氨基酸含量分析 (13)2. 4 计算公式 (13)第3章结果分析 (14)3. 1 酸热提取苜蓿粗蛋白单因素实验 (14)3. 1. 1 提取温度对粗蛋白提取率的影响 (14)3. 1. 2 pH对粗蛋白提取率的影响 (14)3. 1. 3酸热时间对粗蛋白提取率的影响 (15)3. 2 苜蓿叶蛋白酸热提取步骤的响应面实验 (16)3. 2. 1实验结果及方差分析 (15)3. 2. 2响应面分析及等高线图 (15)3. 3 氨基酸分析 (19)3. 4 实验细节分析与注意事项 (22)3. 4. 1实验细节分析 (22)3. 4. 2注意事项 (22)结论 (24)参考文献 (25)第1章绪论1. 1 紫花苜蓿概况紫花苜蓿具有适应性广、高产优质、改良土壤迅速、经济效益高、生态功能齐全的特性，素有“牧草之王”的美称，苜蓿在我国种植已有2000多年的历史，其具有特殊植物学和生物学特性体现在生物量、营养价值和可食性等诸多方面的优异生产性能和经济价值，奠定了它在饲草生产中的基础地位。

植物叶蛋白研究进展

2.2.3 叶蛋白分离纯化
电泳法：带电荷的供试品(蛋白质粗提液)在惰性支持介质(如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等)中，于电场的作用下，向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动，使组分分离成狭窄的区带，达到对不同物质的分离。谢正军等[14]用十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）将苜蓿叶提取的粗蛋白分成不同的组分，确定其分子量大小。Silas Pessini Rodrigues等用SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和二维聚丙烯酰胺凝胶电泳（2D-PAGE）从番木瓜叶中提取出15 种蛋白。离子交换层析：根据蛋白带电性质的不同，与交换剂发生交换，改变洗脱液pH 或离子强度，将其洗脱而达到分离的目的。Sharma P等用DEAE从水稻叶中分离出具有活性的两种蛋白。
发酵法：利用乳酸菌产生的乳酸等改变浆液的 pH 到蛋白质的等电点，使蛋白沉淀，再通过离心得到叶蛋白。曾凡枝等用该法从苜蓿中提取叶蛋白。发酵法提取叶蛋白的优点是使植物叶中对动物机体有害的物质失去活性，提高了蛋白质品质，能耗少，提取效率高，是生产叶蛋白的一种节能环保的优良工艺。有机溶剂沉淀法：这种方法较为常见，其优点是沉淀快、絮凝物结构紧密，易过滤收集。且经有机溶剂脱色生产的脱色叶蛋白具有含糖量低、蛋白成分较为单一等高营养价值，可用于抗癌、营养保健食品的开发。Walter J.Bray 等用聚丙烯酰胺A150可高效的提取紫花苜蓿和黑麦草汁液中的白色叶蛋白。等电点沉淀法：阚欢等将辣木样品预处理后，进行均质、离心处理，取上清液，等电点时离心取沉淀，然后调pH值溶解从而提取分离叶蛋白，等电点分离 pH为4.0 - 5.0 时，产品的蛋白质含量达68.86%，蛋白质提取率达70%。

叶蛋白提取实验报告

一、实验目的1. 了解叶蛋白的提取原理和方法；2. 掌握植物叶蛋白提取的实验步骤；3. 探讨不同提取方法对叶蛋白提取效果的影响。

二、实验原理叶蛋白（Leaf Protein，LPC）是一种从新鲜植物叶片中提取的高质量浓缩蛋白质，具有丰富的营养价值。

叶蛋白提取的原理主要是利用蛋白质在不同溶剂、不同pH 值、不同温度下的溶解度差异，以及分子大小和形状差异，将蛋白质从植物组织中分离出来。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜植物叶片、食盐、乙醇、氢氧化钠、硫酸铵、离子交换树脂等；2. 实验仪器：离心机、恒温水浴锅、pH计、分光光度计、滤纸等。

四、实验方法1. 叶蛋白粗提（1）将新鲜植物叶片洗净，晾干，剪碎；（2）将剪碎的叶片放入烧杯中，加入适量的水，用搅拌器搅拌30分钟；（3）将搅拌好的溶液过滤，得到滤液；（4）将滤液用食盐沉淀，静置一段时间；（5）取上清液，用乙醇沉淀，静置一段时间；（6）取沉淀，用蒸馏水洗涤，得到叶蛋白粗提物。

2. 叶蛋白精提（1）将叶蛋白粗提物用氢氧化钠溶液调节pH值至8.0；（2）将调节pH值后的溶液用硫酸铵沉淀，静置一段时间；（3）取沉淀，用蒸馏水洗涤，得到叶蛋白精提物。

3. 叶蛋白含量测定采用分光光度法测定叶蛋白含量。

将叶蛋白精提物溶解于适量的缓冲溶液中，在特定波长下测定吸光度，根据标准曲线计算叶蛋白含量。

五、实验结果与分析1. 叶蛋白粗提效果通过实验，得到叶蛋白粗提物的得率为 5.0%。

叶蛋白粗提物中含有丰富的蛋白质，但杂质较多。

2. 叶蛋白精提效果通过实验，得到叶蛋白精提物的得率为3.2%。

叶蛋白精提物的纯度较高，蛋白质含量为85.0%。

3. 不同提取方法对叶蛋白提取效果的影响（1）食盐沉淀法：食盐沉淀法是叶蛋白粗提的主要方法，通过实验发现，食盐浓度越高，叶蛋白提取效果越好；（2）乙醇沉淀法：乙醇沉淀法用于叶蛋白精提，通过实验发现，乙醇浓度越高，叶蛋白提取效果越好；（3）pH值调节：叶蛋白精提过程中，pH值调节对叶蛋白提取效果有显著影响，pH 值为8.0时，叶蛋白提取效果最佳；（4）硫酸铵沉淀法：硫酸铵沉淀法是叶蛋白精提的主要方法，通过实验发现，硫酸铵浓度越高，叶蛋白提取效果越好。

化妆品中植物提取物的应用与效果研究

化妆品中植物提取物的应用与效果研究在当今的化妆品市场中，植物提取物的应用越来越广泛，成为了消费者关注的焦点。

植物提取物凭借其天然、温和、安全等特性，为化妆品带来了诸多独特的功效和价值。

本文将深入探讨化妆品中植物提取物的应用及其效果。

一、植物提取物在化妆品中的常见应用1、保湿补水许多植物提取物具有出色的保湿能力。

例如，芦荟提取物富含多糖类物质，能够在皮肤表面形成一层保湿膜，防止水分流失，同时增加皮肤的水分含量。

透明质酸是一种常见的从植物中提取的保湿成分，它能够吸收并锁住大量水分，使肌肤保持水润。

2、抗氧化自由基是导致皮肤衰老的重要因素之一，而植物提取物中的抗氧化成分可以有效对抗自由基。

葡萄籽提取物富含原花青素，具有强大的抗氧化能力，能够保护皮肤细胞免受氧化损伤，延缓皮肤衰老的进程。

绿茶提取物中的茶多酚也是一种优秀的抗氧化剂，能够减少皮肤的氧化应激，提亮肤色。

3、舒缓抗敏一些植物提取物具有舒缓和抗敏的作用，适用于敏感肌肤。

洋甘菊提取物中的黄酮类化合物具有抗炎和舒缓的效果，能够减轻皮肤的红肿和瘙痒。

金缕梅提取物可以收缩毛孔，减少炎症反应，缓解皮肤过敏症状。

4、美白祛斑植物提取物在美白祛斑方面也发挥着重要作用。

熊果苷是从熊果叶中提取的一种天然美白成分，它能够抑制酪氨酸酶的活性，减少黑色素的生成，从而达到美白的效果。

甘草提取物中的甘草黄酮具有抗氧化和美白双重功效，能够淡化色斑，均匀肤色。

5、祛痘控油茶树精油是一种常见的用于祛痘控油的植物提取物。

它具有抗菌和消炎的作用，能够减少痤疮丙酸杆菌的数量，调节皮脂分泌，改善痘痘肌肤。

薄荷提取物能够带来清凉感，收缩毛孔，控制油脂分泌。

二、植物提取物的作用机制1、调节细胞代谢植物提取物可以通过影响皮肤细胞的代谢过程来发挥作用。

例如，一些提取物能够促进胶原蛋白和弹性纤维的合成，增强皮肤的弹性和紧致度。

2、抑制炎症反应炎症是许多皮肤问题的根源，植物提取物中的抗炎成分可以抑制炎症介质的释放，减轻炎症反应，改善皮肤的健康状况。

从雷竹叶竹渣中提取粗蛋白的实验研究

收稿日期：２０－８３０９０．１
基金项目：南平市科技局 “ 夷高教园科研开发项目”资助（０７０ —）武Ｎ２０Ｚ１１作者简介：童晓滨（９７）男，江杭州人，夷学院环境与建筑工程系教授１４一，浙武
第ｌ期
童晓滨，等
有大量的黄酮、生物活性多糖、特种氨基酸、芳香成分和锰、锌、硒多种微量元素等功能性成分【．ｌ】随着世界人口的增加，人类的食品资源逐步趋于紧张，我国又是一个蛋白质资源相对贫乏的国家，将大量廉价的竹叶蛋白源转化为人类的优质食品蛋白，具有重要的社会和经济意义．从植物中提取蛋白质方法有：有
收集各步所得的残渣为６，并经正丁醇纯化，得到粗蛋白成品０１０ｇ．ｇ８．２．粗蛋白得率为４９３．％，经换算５竹渣中粗蛋白含量远高于文献中碱法提取的鲜藜、地中海藜及紫花苜蓿叶中的含量［，考虑到各步制备中蛋白７】
的损失，原竹叶材料中的粗蛋白含量应更高，可见竹叶为较好的粗蛋白来源之一．２．氮及蛋白质含量的测定（氏定氮法）．２２凯通过凯氏定氮法可得到提取物的纯蛋白含量达７６．％，经换算，竹渣中的粗蛋白含量为３０／６５ｍｇ竹渣１０，０ｇ
氮法，得到提取物中纯蛋白含量达７６．％，竹渣中的粗蛋白含量达３０ｍｇ６５／竹渣１０ｇ０，粗蛋白得率为４５％．用红外进．９
行了提取物成分的初步认定．
关键词：雷竹叶；蛋白质；碱法提取；红外测定中图分类号：Ｑ４．９６１文献标识码：Ａ文章编号：１７．０５２１）１０４ —３６３２６（０００．０２０

苜蓿叶蛋白研究概述

维普资讯
安徽农学通报，ｈｉｇｉＳｉＢｌ２０１（：４－４Ａｎｕｒｃ．ｕ１０７，３７）４Ａ．．６
苜蓿叶蛋白研究概述
曾凡枝田丽萍
（１石河子大学生命科学学院，新疆石河子
薛琳
８２０）３０３
超声波从草叶中分离叶蛋白添加到食品中销售；０世纪２
７年代初，国、国、０英美日本、大利等７多个国家在叶蛋意０白生产技术、叶蛋白成分及其副产品的利用方面进行了大量的研究；２０世纪８年代初，０国际上专门成立了 “ 色植绿物研究协会 ” 简称ＳＶ）负责协调和交流叶蛋白的研（ＧＲ，究和开发；ＧＲ还在俄罗斯Ｄｎ州立大学的饲料及食ＳＶｏ州
８２０２石河子市蔬菜研究所，３０３；新疆石河子
摘
要：本文从苜蓿的分布，国内外苜蓿叶蛋白研究进展，用于提取叶蛋白的原料、提取原理、取方法等方面对苜蓿提
叶蛋白产业做了较全面的介绍，并对苜蓿叶蛋白产业面临的问题进行分析，对该产业的前景做出展望。关键词：苜蓿；叶蛋白；叶蛋白提取
对提取率的影响；丁毅、晓颖等（９８进行了苜蓿叶蛋刘１９）
白脱色及色素的研究；勇等（９８９９进行了籽粒邓１９，１９）芜、营养酸模叶蛋白提取工艺的研究。另外刘晓庚（９３１９）等对国内外叶蛋白生产技术进行了综述或就某些领域进行了专门报道，我国叶蛋白的研究和开发起到了很大的对促进作用。苜蓿产业化的实质在于利用现代化的技术进行专业化商品生产。苜蓿产品除用于种子业外，包括干草捆、主要草饼、及草颗粒等草产品。在世界苜蓿产业化进程中，草粉美国、罗斯一直处于领先地位，拿大、国紧随其后。目俄加法前，亚洲已成为世界上最大的苜蓿草产品买方市场。Ｊ我国苜蓿种植地区以西北、华北、为主，东北苜蓿草产品主要为草捆和草粉，１９据９７年统计，苜蓿草产品总量为７．６９万ｔ出口仅３７，．８万ｔ蓿种子生产以陕西、。苜甘肃、宁夏、和内蒙古为主，产种子不足１青海年生０万ｔ畜牧，与

3种水生植物中叶蛋白的提取及营养物质含量测定

作者简介迟桂荣（１９６８－），女，山东夏津人，硕士，讲师，从事微生物资源方面的研究。
收稿日期２００７! ０５!０９
１．２．２营养物质分析。将收集的鲜草清洗干净，取适量样品
于５５０ ℃干燥４ｈ，测定水草的灰分含量。Ｎ含量用凯氏定
３种水生植物叶蛋白中 β! 胡萝卜素的含量为菹草７８５．９ μｇ／ｇ，蒲草６４２．３ μｇ／ｇ，浮萍４７６．８ μｇ／ｇ。３种水生植物叶蛋白的体内可消化性为６９．０％～８６．７％，其中浮萍叶蛋白
（下转第８２２６页）
８２２６
近年来，水体营养化加剧了水草的生长，水草的种群密度若达到有害程度势必会影响天然水体的有效利用，造成水体中的生态破坏［１］。因此，必须采取一些措施来限制某些水草的生长。其中，机械或人工采集清除这些植物是非常有效的方法［２］，这就产生了一大批可收割的水草物质，若自然抛弃这些水草物质，它们会在适当环境下再扎根生长，从而使水草过盛问题更加复杂，所以，对这些收割的水草物质加以利用，既能保护生态平衡，又可实现废弃物的经济效益。为此，笔者通过凝固法提取了菹草、蒲草、浮萍３种山东德州地区常见水生植物中的叶蛋白含量，并测定了叶蛋白中各种营养物质的含量，旨在为这些水草作为动物草料或绿叶蔬菜等的合理利用提供科学依据。１材料与方法１．１材料菹草（Ｐｏｔａｍｏｇｅｔｏｎｃｒｉｓｐｕｓ）、蒲草（Ｔｙｐｈａａｎｇｕｓｔｉｆ－ｏｌｉａ）、浮萍（ＬｅｍｎａｍｉｎｏｒＬｉｎｎ．）均从德州地区附近池塘采集，德州地区位于１１５°４５′～１１７°２４′Ｅ、３６°２４′～３８°０′Ｎ，所有植物均采自２００６年７月份，在绿色繁茂状态下收集。所有试剂均为国产分析纯。恒温干燥箱、凯氏定氮仪、索氏脂肪抽提器、纤维测定仪，ＵＶ!Ｖｉｓ分光光度计（Ａｇｉｌｅｎｔ８４５３，美国Ａｇｉｌｅｎｔ公司生产）。１．２方法１．２．１叶蛋白的提取。将所收集的鲜草切割成２～３ｃｍ的草段，匀浆，过滤，得浆液。取适量浆液于５００ｍｌ烧杯内，置水浴摇床，加热至７０ ℃，缓慢滴加凝固剂，摇动１０ｍｉｎ，将凝固的浆汁全部移入过滤布袋，吊挂过滤，收集凝集物，用超纯水洗涤两次，冷冻干燥，４ ℃保存。

植物中叶片蛋白的提取

植物中叶片蛋白质的提取一、实验目的熟悉植物叶蛋白的几种提取原理和方法，了解其意义及其应用价值。

二、实验原理植物叶蛋白或称绿色蛋白浓缩物(leaf protein concentration，简称LPC)，是从新鲜植物叶片中提取的高质量浓缩蛋白质，不仅是畜禽生长发育和生产畜产品的主要营养物质，而且目前也正成为人类的保健营养理想食品之一。

天然蛋白存在于为数甚多的植物体内，对其分离应依据人们的利用目的及提取蛋白含量和品质加以考虑。

天然蛋白质一般在溶液中呈稳定的亲水胶体状态，故LPC 亦称叶蛋白胶。

其特点是：(1)水化作用即蛋白质分子表面附有能有效防止蛋白质分子沉淀析出的水化膜；(2)电荷排斥作用水化膜外还有电荷层(具阴、阳离子)能有效地防止蛋白质分子的凝集。

故溶液蛋白质颗粒(溶质)呈溶解状态；(3)欲提取植物组织中的蛋白质必须利用溶解度的差异进行分离纯化(如盐析、有机溶剂分级沉淀法、疏水层析、结晶、加热、离心分离等法)，利用分子大小和形状差异进行分离纯化(分子筛层析法)；还可利用电荷性质的差异分离纯化(离子交换法)。

只要创造上述影响因素，即可使蛋白质从植物叶片中分离并沉淀出来。

植物叶蛋白提取一般遵循如下基本原则：尽可能提高样品蛋白的溶解度，抽提最大量的总蛋白，减少蛋白质的损失；减少对蛋白质的人为修饰；破坏蛋白与其他生物大分子的相互作用，并使蛋白质处于完全变性状态。

根据该原则，植物叶蛋白制备过程中一般需要有四种试剂①离液剂：尿素和硫脲等；②表面活性剂：又称去垢剂，早期常用NP-40、Tritonx-100等非离子型去垢剂，离子型去垢剂有SDS、胆酸钠、LiDS 等，还有象CHAPS(含它的蛋白溶液可以冻存)与Zwittergent 等双性离子去垢剂；③还原剂：DTT、DTE、TBP、Tris-base 等；④蛋白酶抑制剂及核酸酶：EDTA、PMSF、蛋白酶抑制剂混合物(Protease inhibitor cocktails)等，如为了去除缓冲液中存在的痕量重金属离子，可在其中加入0.1～5mmol/LEDTA，同时使金属蛋白酶失活。

三种不同来源(植物、细菌和真菌)蛋白酶的纯化、性质及应用研究共3篇

三种不同来源（植物、细菌和真菌）蛋白酶的纯化、性质及应用研究共3篇三种不同来源（植物、细菌和真菌）蛋白酶的纯化、性质及应用研究1蛋白酶是一类具有水解蛋白质能力的酶，广泛存在于细胞中并参与多种生物学过程。

在生物制药等领域，蛋白酶的纯化、性质及应用研究具有重要的现实意义。

本文将重点介绍来自植物、细菌和真菌三种不同来源的蛋白酶在纯化、性质和应用方面的研究进展。

一、植物蛋白酶的纯化、性质和应用植物蛋白酶主要存在于种子、果实、根茎等植物组织中，其中的大多数是半胱氨酸蛋白酶。

植物蛋白酶的纯化主要采用柱层析法和电泳法等技术。

研究表明，植物蛋白酶的氨基酸序列存在着相似性和区别性，其中一些同源物可以分为家族或亚家族。

此外，植物蛋白酶的活性受到温度、pH值和抑制剂等因素的调节。

植物蛋白酶在食品加工和医药制品等方面可发挥重要作用。

例如，灵芝多肽可以被植物蛋白酶水解成具有生物活性的多肽物质，这对于灵芝多肽的生产具有重要意义。

另外，复合酶制剂SiOpro可以通过作用于面团中的酯酶、氧化酶和蛋白酶等多种酶的协同作用，达到改善松软度、延长保质期等目的。

二、细菌蛋白酶的纯化、性质和应用细菌蛋白酶主要可分为内质网蛋白酶和外源性蛋白酶两种。

前者在细胞内、后者在菌体周围均有分布。

细菌蛋白酶的纯化常常采用柱层析技术和亲和层析技术等，具有高效、快速、经济等优势。

细菌蛋白酶在医药、食品及皮革制品等方面应用广泛。

例如，基于外源性蛋白酶的制剂Accutase是用于脱离培养细胞的酶，具有无细胞毒性、操作简单等特点；生产蛋白药物方面，葡萄球菌的外源性蛋白酶已被用于制备重组蛋白；在食品加工过程中，外源性蛋白酶可以提高油脂的提取效率和品质。

三、真菌蛋白酶的纯化、性质和应用真菌蛋白酶可分为胶原酶和无胶原酶两大类。

前者主要用于胶原的加工，后者则广泛应用于食品加工、纸张制品、色谱等领域。

真菌蛋白酶的纯化方法有很多种，包括柱层析、电泳、反向相色谱法等。

真菌蛋白酶在pH值、温度、金属离子和阻碍剂等条件下均表现出不同的活性和特异性。

有前途的蛋白质资源——牧草叶蛋白

时问。
性，碱性蛋白质适合用偏酸性的提取液提取，而酸性蛋白质适合用偏
碱性的提取液提取。
３直接加热法。利用加热法、．
我国有４多亿亩的草原、草０山坡、还有许多滩涂。可是目前我国对于牧草深加工利用的研究
和７２０万吨。０
青绿植物的生长组织（、叶）为茎
原料，经打浆压榨，利用蛋白质等电点原理从汁液中提取的高蛋白浓
缩物。叶蛋白的粗蛋白质含量高达３％～５％，高于一般大豆的粗蛋２８白质含量。氨基酸组成与大豆比
王晋峰用（Ｈ）Ｏ盐析法提取叶Ｎ。Ｓ蛋白的研究表明，（Ｈ）Ｓ和ＮｚＯ饱
絮凝温度。但试验只研究了获得的叶蛋白纯度，而对叶蛋白的产量
并没有研究，在实际生产中运用意义不大。也有研究表明，在叶蛋白的提取过程中，对于不同的植物应采取不同的方法。杨超英研究表明，酸加热法提取黑麦草叶蛋白，叶蛋白的提取率高达６．％，且５３７
鲜叶压榨而得的绿色汁液经分离叶蛋白后的残液称为棕色液，占原料鲜重的４％一Ｏ０５％。其中，干物质占６１％，粗蛋白占２．，．０２％５钙１．９毫克／、镁１毫克／、钾克．３克８毫克／、硫Ｏ克．克／、磷Ｏ８毫克．９毫克，（克以上都以干物质为基础计算），以及一些促生长因子等。叶蛋白提取残液还可用来提取超氧

鲁梅克斯叶蛋白提取的研究

作者简介：刘建华（ "!F" Y ），女（汉族），助教，本科 $
— DB —
吉林医药学院学报& DBBE 年 B@ 月& 第 DG 卷
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3种水生植物中叶蛋白的提取及营养物质含量测定

迟桂荣德学生系山德５２（州院物，东州２０）３３
摘要『目的１生植物中叶蛋白进行提取，其营养物质含量进行测定。法１山东德州地区３种水生植物菹草、对水并对『方以蒲草和浮萍为试材，用凝固法提取菹草、运蒲草和浮萍中的叶蛋白，测定了叶蛋白中各种营养物质的含量。结果１种水生植物叶蛋白提取率并『３为２６２４％（鲜样品计算）Ｎ含量为２２．％～．３８按，．４％～．ｌ３５％，叶蛋白中粗蛋白和粗脂肪为３．～１８９％５．６％和ｌ．％～５２１ｌ．２％，一萝Ｂ胡素含量为４６７．８％～８．Ｉ／，纤维含量和体内可消化性为１～．％和６．～６７水生植物叶蛋白中含有大量矿物元素，７５ｇ粗９ｇｘ．１０６９８．％。０钙磷丰富，、含量分别为１８．％和０３０９『钙磷．％２９９８．％～．％。６８结论１菹草、蒲草和浮萍中叶蛋白含量较高，优质的植物性蛋白质饲料，是具有
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安徽农业科学，ｕｎｌｆｎｕＡｒＳｉ２０，５２）８１，２６ＪｒａｏＡｈｉｇ．ｃ．０７３（６：２２８２ｏｉ
责任编辑姜丽责任校对王森
３种水生植物中叶蛋白的提取及营养物质含量测定
Ｃｍｉｏｇ（ｐｒｎｆｉｌｇ，ｚｏｏｌｇ，ｅｈｕＳａｄｎ５０３）Ｇｕ－ｎｒＤｅａｔｔｏｏｙＤｅｈｕＣｌｅＤｚｏ，ｈｎｏｇ２３２ｍｅｏＢｅ

桑叶蛋白营养价值与开发利用

2019年第3期《四川蚕业》15桑叶蛋白营养价值与开发利用李霞I刘耕I肖建中I叶添梅I颜新培I李飞鸣I罗安乐$（1.湖南省蚕桑科学研究所，湖南长沙410127；2.湖南桑叶加农业科技有限公司，湖南宁乡410604）摘要：桑叶蛋白作为桑叶深加工产物，其营养价值高、氨基酸丰富，现已被业界所熟知。

本文针对桑叶蛋白营养价值、制备方法及开发利用前景作一综述，为桑叶多元化利用提供参考。

关键词：桑叶蛋白营养价值制备方法利用前景近年来，我国桑产业面临诸多困境和挑战，种桑养蚕模式过于单一、栽采人工成本较高、桑资源利用效率低、科技水平落后.严重制约了我国桑产业的可持续发展。

因此，利用现代科学技术大力开发桑资源,深入研究桑叶功能成分及其提取工艺，实现桑叶多元化利用，对于我国蚕桑产业转变发展方式具有重要的意义。

桑叶蛋白属植物叶蛋白的一种，从桑叶中提取桑叶蛋白.不仅可拓宽桑资源开发利用途径，而且对丰富我国蛋白质资源起重要补充作用。

本文对桑叶蛋白营养价值、制备方法以及开发利用前景作一综述，以期为桑叶多元化（蛋白）开发利用提供参考1桑叶蛋白营养价值1.1桑叶中蛋白质含量植物叶蛋白是世界上最大的可再生蛋白质资源之一.其营养均衡且不含胆固醇，具有不可估量的经济价值叭植物叶中蛋白质的含量直接影响植物叶蛋白提取率叫桑叶营养丰富且叶中蛋白质含量较高。

王雯熙等內采集29种桑叶并测定其营养成分发现,桑叶中粗蛋白含量在222.1-323.8g/Kg（干物质,DM）C紫花苜蓿、多年生黑麦草、羊草与桑叶中蛋白质含量（干物质）对比结果显示（见表1）,桑叶中粗蛋白略高于紫花苜蓿，明显高于多年生黑麦草和羊草量对比（干物质）单位:g/Kg DM表1紫花苜蓿、多年生黑麦草、羊草与桑叶中蛋白质含项目紫花苜蓿冋多年生黑麦草问羊草他桑叶蛋白质含量123-26119271.4222.1-323.8 1.2桑叶蛋白氨基酸组成现代营养学表示，蛋白质营养在很大程度上是氨基酸营养，为保证合理蛋白质营养,一方面要有足够数量的必需氨基酸和非必需氨基酸,另一方面还须注意各种必需氨基酸之间以及必需氨基酸与非必需氨基酸之间的比例。