牛蛙骨髓染色体标本的制备与观察
实验十二.青蛙骨髓染色体的制备及核型分析
• 【实验结果】 • 在显微镜下，染色体被染成紫红色，胞
浆完全不着色。对于分散好的染色体, 其间 相互散开, 短臂收缩适中, 二条姐妹染色单 体大致平行分离, 着丝粒清晰可见。
• 【实验报告】 • 1．通过对自己制做的青蛙染色体标本观察，
总结青蛙染色体的形态特征。 • 2．对于分散好的染色体，进行染色体计数。 • 3．请你分析一下在本实验中造成染色体标 本制作不佳的可能原因有哪些？本实验成 败的关键是什么？秋水仙素在本实验中起 什么作用？
实验十二.青蛙骨髓染色体的制备及 核型分析
• 【课前预习】 • 了解各步骤的原理
• 【目的要求】 • 1．掌握动物骨髓染色体的制备的基本过程，
了解操作步骤的原理； • 观察染色体的特点。
• 【基本原理】 • 凡细胞处于活跃增殖状态，或经过各种处理后，
细胞就可以进入分裂的动物组织，可用于染色体 分析。在正常动物体内，骨髓是处于不断分裂的 组织之一。给动物注射一定量的秋水仙素即可使 许多处于分裂的细胞停滞于中期，然后采用常规 的干燥法制备染色体，可得到大量的可分析的染 色体标本。
• 【实验用品】 • 1．器材：解剖器具、注射器、离心机、离
心管、恒温水浴箱、载玻片、酒精灯等； • 2．试剂 0.1%秋水仙素溶液、Carnoy’s固 定液（甲醇：冰醋酸＝3：1）、0.075 mol / L KCI溶液、Giemsa染液等。 • 3．材料：青蛙
• 【方法步骤】
1.按青蛙体重4ug/g注射秋水仙素; 2.5小时后处死青蛙，取出股骨和胫骨，去肌肉。 3.用5-8毫升生理盐水冲洗骨髓腔至小烧杯中；移 至离心管，1000rpm，8分钟； 4.去上清，加0.075mol/LkCl低渗液至6毫升， 37℃，20分钟后离心，1000rpm, 8分钟； 5.去上清，加卡诺固定液至5毫升，室温20分钟； 1000rpm，8分钟； 6.重复5 7.去上清，加少量固定液。 8..滴片； 9.Gimesa染色：扣染观察。
蛙骨髓染色体标本
•
实验材料于药品
• 有丝分裂中期染色体的照片
实验步骤
选材
测量 与计算
配对
绘图
分类
排列
1、选材： 、选材： 取清晰的底片放大出照片
2、测量与计算 、 （1）绝对长度：长臂、短臂和染色体总长度 ）绝对长度：长臂、短臂和染色体总长度. 以毫米为长度。 以毫米为长度。 （2）臂比＝ ）臂比＝
长臂 q 短臂 p
蛙骨髓染色体标本 的分析
•
实验目的 实验原理 实验材料与药品 实验步骤 作业
•
•
•
•
实验目的
观察动物染色体组的形态特征， 观察动物染色体组的形态特征，通 过分析有关数据， 过分析有关数据，掌握染色体组型分析 的方法。 的方法。
•
实验原理
• 染色体组型是指细胞在有丝分裂中期的 染色体表型，包括染色体数目、大小、 染色体表型，包括染色体数目、大小、形 态、着丝粒位置、次缢痕及随体有无等。 着丝粒位置、次缢痕及随体有无等。 染色体组型分析就是对染色体组中的染 色体作上述各种形态特征的描述， 色体作上述各种形态特征的描述，是细胞 遗传学、 遗传学、现代分类合进化理论的重要研究 手段。 手段。
随体染色体（ 标出， 随体染色体（sat)用*标出，计算染色体长度时， 用 标出 计算染色体长度时， 可以包括也可不包括随体，但均要注明。 可以包括也可不包括随体，但均要注明。
6、绘图 、
将配对排列好的染色体组型， 将配对排列好的染色体组型，贴在 白卡纸上。 白卡纸上。
7、实验结果 、
完整染色体组照片
1
2
配对好的染色体组型 3 4 5
6
7
8
9
10
11
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实验动物染色体标本的制备
5.吸走固定液，换入无水乙醇，蒸汽固定10-20分钟。 6.取出载玻片，缓缓倒去低渗液，用吸管将
固定液II(无水乙醇:冰醋酸=1:2)自载玻片 的一端缓慢滴下形成水幕，固定3-4次，直 立载玻片空气干燥。
Giemsa染色
改良苯酚品红染色
2020体标本的制备成败决定于取材， 若抽取的骨髓太少或太稀，细胞数目过少， 不易获得较多的中期分裂相。
2.低渗处理极为重要，低渗不够，则染 色体聚在一起，分散不好。太过，则造成细 胞破碎，染色体丢失。
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五、实验结果
取前肢1：找到关节所在。
四、实验步骤
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取前肢2：剪开肌肉，顺着关节外围剪开。
四、实验步骤
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四、实验步骤
注意，每组做2片 蒸汽固定法
3.在载玻片上滴1滴蒸馏水，然后滴加2滴第2步获得的骨髓细胞悬液。轻 轻晃动载玻片，使液体混匀，并在载玻片上铺展开。18-20℃下静置， 低渗处理20-30分钟。注意防止水分蒸发。
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人外周血淋巴细胞染色体（Giemse 染色）
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三、实验用品
• 试剂：0.65％生理盐水，甲醇—冰醋酸(3:1)固 定液, 蒸馏水，Giemsa染液。
• 器材：显微镜，离心机，搪瓷盘，剪刀，骨剪， 离心管，注射器，染色缸。
蛙骨髓染色体标本
正确操作显微镜
正确操作显微镜，调整焦距、光线等参数，以确保观察结果的准 确性和清晰度。
观察后的处理
记录观察结果
对观察到的染色体形态、数量和结构进行详细记录。
整理保存
将观察后的蛙骨髓染色体标本进行整理和保存，以便 后续的研究和分析。
数据处理与分析
对观察结果进行数据处理和分析，提取有用的信息， 为相关研究提供支持。
细胞计数
复苏后对细胞进行计数，以确保细胞数量符合实 验要求。
3
染色体分析
在需要时，可以对复苏后的细胞进行染色体分析， 以评估染色体的结构和数目。
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
运输
按照相关规定进行运输， 确保标本质量。
实验室处理
在实验室中对标本进行处 理和观察，确保实验结果 的准确性和可靠性。
02 蛙骨髓染色体标本的制备
制备方法
采集蛙骨髓
选择健康成年蛙，通过注射器抽取骨髓。
细胞培养
将抽取的骨髓在培养基中培养，促进细胞分裂和 生长。
染色体制备
在细胞生长到一定阶段时，用固定液固定细胞， 再经过染色、脱水等步骤制备成染色体标本。
05 蛙骨髓染色体标本的保存
保存方法
低温保存
将蛙骨髓染色体标本保存在低温环境中，如冰箱或冷冻柜，以减缓 细胞代谢和微生物繁殖。
加入保护剂
在保存液中加入适当的保护剂，如二甲基亚砜（DMSO）或甘油， 以保持细胞结构和染色体的完整性。
定期更换保存液
定期更换保存液可以去除细胞代谢产生的有害物质，并保持保存液的 清洁度。
在细胞生物学研究中的应用
细胞分裂与分化研究
实验七 牛蛙骨髓染色体标本的制备与观察
东北梅花鹿染色体R带带型
N带：专一显示染色体的核仁组织区 （nucleolus organizer region, NOR）
NOR一般位于染色体的次缢痕部位，是 rRNA基因（5SrRNA除外）部位。
硝酸银与NOR的蛋白质如nucleolin核仁 素、numatrix核基质素结合，呈黑色银 染物，这种银染阳性的核仁组织区称为 Ag-NOR。
Q带：70年代，瑞典化学家T. Caspersson首先应用
荧光染料喹吖因氮芥（quinacrine mustard）对 染色体标本染色，在荧光显微镜下每条染色体出现 了宽窄和亮度不同的纹，即荧光带。这些区带相当 于DNA分子中AT碱基对成分丰富的部分。
Q-banded metaphase spread from a phenotypically normal human male with an additional chromosome that is an isochromosome for
取骨
（2下肢, 1上肢）
剪去两端 膨大部分
6ml生理 盐水冲洗
离心 弃上清，
分装4管
3000rpm 5分钟
（1.2ml/管）
沉淀加
75μl生理
盐水悬浮
合并成
2管
每管加蒸 低渗
馏水1ml 20min
离心
3000rpm 5分钟
弃上清，
弃上清，
2 沉淀加
离心 沉淀加
1冰m醋l甲酸醇固-1固5m定in
3000rpm 5分钟
3．将骨髓冲出物中大块白色脂肪组织用针头挑 出，弃去。把6ml的骨髓细胞悬液转移至4只1.5ml 离心管中（每管1.2ml，如体积不满，可再加入适 量生理盐水，以保证离心平衡），3000转/分离心 5分钟。
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
通过制备动物骨髓细胞染色体标本，进一步了解细胞染色体的形态和结构，以及染色体在遗传学研究中的应用。
实验原理
动物骨髓细胞是一种快速分裂细胞，其中染色体数目和结构较为清晰，因此通常用于染色体分析和遗传学研究。
为了制备动物骨髓细胞染色体标本，需要经过细胞取样、细胞处理与固定、染色和镜检等几个步骤。
实验步骤
1. 取样：在实验动物体内取出一小段骨髓组织，置于离心管中，加入10ml生理盐水，轻轻摇晃，使细胞均匀分散。
2. 细胞处理和固定：取出适量的细胞液，加入等体积的去离子水后进行处理。
将细胞液滴于预先贴有载玻片上的正常细胞培养液中，使其渐渐均匀分散。
将玻片放置在室温下，使细胞贴附在玻片上并进行细胞固定。
细胞固定可用10%甲醛或70%乙醇，也可用50%醋酸处理。
3. 染色：将固定的细胞标本先置于1%琼脂糖中5～10分钟，用注射器吸取琼
脂糖，并把细胞标本冲洗干净，然后用生理盐水洗净。
若要染色，则滴上适量的霉素酚-吡啶溶液或可以染细胞核者，如吉姆萨红溶液或乙酰苯胺-三甲胺水溶液等，等颜色形成后即可洗净。
4. 镜检：放入顶匣，用显微镜观察染色后细胞形态和染色体。
如果需要拍照，则可利用显微摄影技术，对样本进行记录。
实验结果
通过实验可以观察到动物骨髓细胞染色体的形态、数量和结构，进一步了解染色体在遗传学研究中的应用。
同时，该实验对熟悉细胞培养和染色技术也有一定帮助。
实验结论
通过本次实验，我们可以获得动物骨髓细胞染色体标本，并学习了细胞处理、固定、染色和镜检等关键步骤。
实验结果可以为生物学研究提供相关实验基础。
5-牛蛙骨髓染色体标本的制备与观察
报告成绩实时记录成绩实验五牛蛙骨髓染色体标本的制备与观察学生姓名学号班级座位号：同组同学日期：年月日备注：【Introduction】（1）简述染色体显色技术：将没有染色的中期染色体经过预处理后，再用不同的方法和染料处理，使染色体上出现明暗相间或深浅不同的明显而稳定的斑带。
每条染色体都可被准确识别和鉴定，甚至染色体结构异常也可被检出。
染色体显色技术分为两大类，一类是产生的染色带分布在整个染色体上，如G、Q和R带；另一类是只能使少数特定的区域显带，如C、T和N带。
染色体显色技术极大地促进了细胞遗传学的发展，使每条染色体都可被准确识别和鉴定，甚至出现小的染色体结构异常也可被检出。
（2）制备中期染色体标本的原理和应用：识别染色体的形态特征的最佳时期是细胞有丝分裂中期和早后期。
这时染色体收缩程度最大，形态最稳定，并且分散排列、易于计数。
如果在同一时间内获得不同物种的染色体标本，就可以了解不同物种之间的染色体水平的异同；或者在同一时间内获得同一物种不同技术处理条件下的染色体标本，还可以了解不同技术处理对染色体的影响。
【Materials & methods】实验仪器：复式双筒显微镜（带油镜）；Motic数码互动系统；擦镜纸/盖玻片；载玻片/镊子；记号笔；小片滤纸；移液器/吸头；香柏油/二甲苯；搪瓷盘，剪刀，烧杯，小离心管，玻璃注射器；离心机，一次性手套，骨剪（实验班公用），冰箱（0℃）。
实验材料：肉用成体牛蛙（两组1只）。
实验试剂：0.65％生理盐水；甲醇—冰醋酸(3:1)固定液；蒸馏水；自来水;Giemsa染液。
实验操作：1．动物前期处理：牛蛙称重→注射秋水仙素→3.5~4小时后麻醉→取牛蛙→肢解。
2．取骨髓：剪下四肢→剔骨→剪开骨髓腔→生理盐水冲洗→分四个离心管离心→弃去上清液→生理盐水吹打沉淀物→合并于一管。
3．低渗：每管加蒸馏水1 ml→吹打混匀→30度下静置20 min。
4．固定：离心→弃去上清液→加甲醇-冰醋酸固定液l ml→固定15分钟→吹打悬浮→重复上面步骤一次→离心→弃去上清液→吹打悬浮。
蛙骨髓染色体标本的制备与观察 PDF PDF
蛙骨髓染色体标本的制备与观察 PDF PDF 实验描述：
本实验旨在通过制备蛙骨髓染色体标本，观察染色体在不同表观状态下的形态和结构。
实验步骤：
1.实验器材准备：离心机、组织培养纸、组织培养液、注射器、移液管、生理盐水、荧光素铵、显微镜、蛙卵、0.075mol/L KCl和醋酸盐-染色液。
2.取空心注射器，在其内端塞入一张组织培养纸，然后用组织培养液将其灌满，将卡扣锁紧。
3.将塞有组织培养纸和液体的注射器插入蛙卵中，轻轻旋转注射器，使蛋浆流出。
接着，用生理盐水冲洗卵母细胞，使细胞膜裂开，核外膜消失。
然后，在生理盐水中挂滴0.075mol/L KCl，使细胞外渗，退缩成球形，用固定液将其固定在玻片上。
4.经过细胞外渗的处理，将卵母细胞放置在醋酸盐-染色液中，使其染色体解开，然后取出细胞，嫁接于另一片玻片上，将其挤压，使细胞分裂。
5.将细胞再次放置于醋酸盐-染色液中，使染色体上颜色变浅的区域缩小或消失，此时，立即取出细胞固定。
6.倒掉固定液，用荧光素铵在玻片上滴上适量的荧光素铵溶液，静置2~3分钟，然后将其吹干。
7.将制备好的标本在显微镜下观察，记录染色体的数目、形态和结构等信息。
实验结果：
制备出的标本中，蛙骨髓染色体的数目、形态和结构均符合正常情况下的表皮状态。
染色体在荧光素铵的作用下呈现出明亮的荧光。
其中，常见的染色体形态有“V”字形、“L”字形和“T”字形等。
本实验制备出的蛙骨髓染色体标本可用于进行染色体形态和结构的观察，有助于我们更深入了解染色体的表皮状态。
同时，荧光素铵在染色体观察中可以得到有效应用。
实验七 动物染色体标本的制备与观察
实验七动物染色体标本的制备与观察实验目的1．初步掌握动物骨髓染色体标本制备过程，了解操作步骤的原理。
2．了解常用实验动物染色体的数目及特点。
实验原理染色体的分析往往是选择细胞处于活跃增殖状态，或者经过各种处理后细胞进入分裂的动物组织。
在正常动物体内，骨髓是处于不断分裂的组织之一。
给动物注射一定剂量的秋水仙碱即可使许多处于分裂的细胞停滞于中期，然后采用常规空气干燥法制备染色体，即可得到大量可分析的染色体标本。
在动物实验时，可在取材前经腹腔注射有丝分裂抑制剂，一般常用秋水仙素，这此方法对于动物的核型分析是非常有用的。
本方法简便、可靠，不需要经体外培养和无菌操作，易于推广。
因此骨髓细胞是用于动物细胞遗传学研究很好的材料。
实验用品一、材料无尾两栖类蛙属或蟾蜍属动物二、器材水平离心机、显微镜、刻度离心管（10ml）、注射器（1ml）、载玻片、烧杯（400ml）、量筒（100ml）、试管架、镊子、剪刀、解剖刀、吸管。
三、试剂1．1%柠檬酸钠溶液：称取1g柠檬酸钠（柠檬酸三钠，Tri-sodium citrate, AR）溶解于100ml 蒸馏水中。
2．500μm/ml、100mg/ml秋水仙素溶液。
3．Giemsa（姬姆萨）原液（pH6.8）Giemsa染粉1g甘油（丙三醇，glycerine, AR）33ml甲醇（methyl alcoholA, AR）45ml将染粉倾入乳钵，加几滴甘油，在乳钵内研磨直到无颗粒为止，此时再将全部剩余甘油倒入，放入60～65℃保温箱中保温2h后，加入甲醇搅拌均匀，保存于棕色瓶中备用。
4．0.067mol/L磷酸盐缓冲液（pH6.8）Na2HPO4·12H2O 11.81g(或Na2HPO4·2H2O 5.92g)KH2P04 4.5g溶解于蒸馏水中至1000 ml。
5．1:10 Giemsa磷酸缓冲液（pH6.8）：取1ml 姬姆萨原液用9ml 0.067mol/L 磷酸盐缓冲液(pH 6.8)稀释即可。
青蛙骨髓细胞染色体标本的制备及染色体的核型分析
青蛙骨髓细胞染色体标本的制备及染色体的核型分析陈钧瑜（中山大学生命科学学院08级生物技术广州510275）摘要：染色体组型具有物种的特异性，它们在遗传过程中是相对稳定的，因此可以作为物种分类的基本依据之一。
本实验以青蛙的骨髓为材料，制备了青蛙骨髓细胞染色体标本，选择形态完好的中期分裂相进行拍照放大，用常规统计方法测量染色体的相对长度、臂比和着丝粒指数等。
结果表明青蛙骨髓细胞二倍染色体数目为26，可配成13对同源染色体，其中有5对大型染色体（相对长度>9%）和8对小型染色体（相对长度<7%）；8对为中部着丝粒染色体，其余5对为亚中部着丝粒染色体。
青蛙骨髓细胞染色体核型公式为K(2n)=26 =13n=16m+10sm。
关键词：青蛙；骨髓细胞；染色体；核型1、引言核型一词首先由前苏联学者TA 列维茨基等在上世纪20 年代提出,它是指每种生物染色体的数目、大小和形态等特征的总和。
染色体核型或组型分析(Chromosome karyotype analysis) 是染色体研究中的一个基本方法。
染色体组型是细胞分类学的重要数据，也是从细胞遗传学角度了解物种间亲缘关系的有效途径，对染色体核型分析,不仅有助于了解生物的遗传组成、遗传变异规律和发育机制,而且对预测鉴定种间杂交和多倍体育种的结果、了解性别遗传机理以及基因组数、物种起源、进化和种族关系的鉴定都具有重要的参考价值[1]。
骨髓细胞具有丰富的细胞质和高度分裂能力，因此不必经体外培养，也不需要植物血球凝集素（PHA）的刺激，可直接观察到分裂的细胞。
经秋水仙素处理后，分裂的骨髓细胞被阻断在有丝分裂中期，再经离心、低渗、固定、滴片等步骤，便可制作出理想的染色体标本，是研究动物细胞遗传学的好材料。
用Giemsa染色法制备骨髓细胞染色体标本，所得标本清晰无缺失与重叠[2]，用显微拍摄技术采集染色体的电子图片信息，后期用Adobe公司的Photoshop软件优化处理照片[3]]，获得完整、清晰的染色体核型，并采用Levan[4]的方法进行核型分析。
实验十二.青蛙骨髓染色体的制备及核型分析
• 【基本原理】 • 凡细胞处于活跃增殖状态，或经过各种处理后，
细胞就可以进入分裂的动物组织，可用于染色体 分析。在正常动物体内，骨髓是处于不断分裂的 组织之一。给动物注射一定量的秋水仙素即可使 许多处于分裂的细胞停滞于中期，然后采用常规 的干燥法制备染色体，可得到大量的可分析的染 色体标本。
给动物注射一定量的秋水仙素即可使许多处于分裂的细胞停滞于中期然后采用常规许多处于分裂的细胞停滞于中期然后采用常规的干燥法制备染色体可得到大量的可分析的染的干燥法制备染色体可得到大量的可分析的染色体标本
实验十二.青蛙骨髓染色体的制备及 核型分析
• 【课前预习】 • 了解各步骤的原理
• 【目的要求】 • 1．掌握动物骨髓染色体的制备的基本过程，
• 【实验结果】 • 在显微镜下，染色体被染成紫红色，胞
浆完全不着色。对于分散好的染色体, 其间 相互散开, 短臂收缩适中, 二条姐妹染色单 体大致平行分离, 着丝粒清晰可见。
• 【实验报告】 • 1．通过对自己制做的青蛙染色体标本观察，
总结青蛙染色体的形态特征。 • 2．对于分散好的染色体，进行染色体计数。 • 3．请你分析一下在本实验中造成染色体标 本制作不佳的可能原因有哪些？本实验成 败的关键是什么？秋水仙素在本实验中起 解剖器具、注射器、离心机、离
心管、恒温水浴箱、载玻片、酒精灯等； • 2．试剂 0.1%秋水仙素溶液、Carnoy’s固 定液（甲醇：冰醋酸＝3：1）、0.075 mol / L KCI溶液、Giemsa染液等。 • 3．材料：青蛙
• 【方法步骤】
1.按青蛙体重4ug/g注射秋水仙素; 2.5小时后处死青蛙，取出股骨和胫骨，去肌肉。 3.用5-8毫升生理盐水冲洗骨髓腔至小烧杯中；移 至离心管，1000rpm，8分钟； 4.去上清，加0.075mol/LkCl低渗液至6毫升， 37℃，20分钟后离心，1000rpm, 8分钟； 5.去上清，加卡诺固定液至5毫升，室温20分钟； 1000rpm，8分钟； 6.重复5 7.去上清，加少量固定液。 8..滴片； 9.Gimesa染色：扣染观察。
蛙骨髓染色体标本的制备与观察
固定
以1000转/min,离心 转 离心 7min,弃上清，在沉淀 弃上清， 弃上清 物中加入4ml固定液， 固定液， 物中加入 固定液 适度吹打10min,再加 适度吹打 再加 入4ml固定液，静置 固定液， 固定液 20min,如此 次。 如此3次 如此
预固定
在低渗管中加 固定液， 入1ml固定液， 固定液 适度吹打5min 适度吹打
蛙骨髓染色体标本 的制备与观察
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实验目的 实验原理 实验材料与药品 实验步骤 作业
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实验目的
• 初步掌握动物组织细胞的固定、分 初步掌握动物组织细胞的固定、 析和染色体制备技术， 析和染色体制备技术，并观察动物染色 体组的形态特征， 体组的形态特征，以便进行染色体组型 分析
实验原理
• 大多数高等动植物都是二倍体， 大多数高等动植物都是二倍体，以2n 表示，每种生物的体细胞， 表示，每种生物的体细胞，都有其特定的 染色体组型，包括染色体的数目、大小、 染色体组型，包括染色体的数目、大小、 形态、着丝点的位置以及次缢痕、 形态、着丝点的位置以及次缢痕、随体的 有无等。 有无等。
取材
取洁净的股 骨、腓骨于盛有 0.4％KCl的小烧 ％ 的小烧 杯中剪碎
低渗
吸取中层的悬浮 液于低渗管中， 液于低渗管中， 加入0.4％ 加入 ％KCl至 至 7ml于37－40℃ 于 － ℃ 低渗40min 低渗
制冰片
将洁净的载玻片 洁净的载玻片 浸泡在蒸馏水中， 浸泡在蒸馏水中， 置于冰箱， 置于冰箱，用前 20min取冰块置于 取冰块置于 水面， 水面，制成冰 片
片
取细胞悬液于冰 片上方约50cm 片上方约 处滴片， 处滴片，立即过 火5－6次 － 次
牛蛙骨髓染色体标本的制备与观察
低渗
徐道觉如何发现 低渗处理的作用？
在每管细胞悬液中加蒸馏水lml，吹打混匀， 室温下静置，低渗处理20分钟。 低渗处理是凭借反渗透作用使动物细胞充分 吸水膨胀，染色体铺展分散，同时可使粘附于染 色体的核仁物质散开，以便能在一个平面上观察 所有染色体形态。 低渗的时间和温度必须 控制好！低渗不够，则 染色体聚在一起，分散 不好。太过，则造成细 胞破碎，染色体丢失。
值日的同学（每次4人）
1、切勿将动物组织碎片倒在水槽中，应集中到门口的大 垃圾筐中！ 2、白瓷盘、手术剪和注射器用完后立即清洗，否则不易 洗净，且容易堵住针筒！
把废物桶中垃圾集中倒入门口的大垃圾框中，并清扫实验室。
徐道觉
蒋有兴
人外周血淋巴细胞染色体（Giemsa 染色）
染色体显色技术
于1968年由瑞典Casperson首先建立。 是将未染色的中期染色体经过一定的预处理， 再用不同的方法及不同的染料处理染色体标本， 使染色体上出现明暗相间或深浅不同的明显而 稳定的斑带。 显带技术极大地促进了细胞遗传学的发展，使 每条染色体都可被准确识别和鉴定，甚至出现 小的染色体结构异常也可被检出。 分为两大类：
滴片
取细胞悬液20 μl ， 从高处滴加到预先冷冻、 用酒精浸泡的载玻片上 （滴加在载玻片靠近一端 处， 以节省染液），并 吹口气令细胞自然散开， 然后等待载玻片干燥。每 人做2片标本。
载玻片从冰箱取出应立 即滴加悬液。 滴片后待载玻片干燥应 在一端用记号笔做好标记， 以免搞错正反面
可预先 试验以 确保悬 液能滴 在载玻 片上
动物前 期处理
取骨髓
低渗
固定
滴片
染色
镜检
动物前期处理 牛蛙称重，按每克体重2微克的 剂量腹腔注射秋水仙素溶液(用0.65％ 生理盐水配制)。注射后3.5~4小时， 用过量乙醚或氯仿麻醉牛蛙。 每2组同学组合，派1名同学戴一 次性手套，以搪瓷盘取牛蛙置于其中。 回到实验桌后对牛蛙进行肢解。
实验七 动物骨髓细胞染色体的制备与观察.
实验七动物骨髓细胞染色体的制备与观察[实验目的]1. 通过青蛙或小白鼠骨髓细胞染色体的制备，初步掌握低渗法制备动物骨髓细胞染色体的方法。
2. 熟悉染色体的形态、种类及青蛙、小白鼠等动物染色体的数目或类别。
[实验原理]骨髓细胞是具有旺盛分裂能力的细胞，从这些分裂细胞中，可观察到处于分裂中期的染色体，能对一种动物染色体的形态特征、数目进行准确的观察和分析。
由于骨髓直接涂片观察到的分裂相少，效果差，因此要对骨髓细胞进行必要的处理。
这个处理方法称为低渗法，其基本要求首先是要获得较多的中期分裂相。
秋水仙素对分裂期纺锤丝的形成具有破坏作用，当动物被注射适量的秋水仙素后，处于分裂增殖中的骨髓细胞由于纺锤丝不能形成，中期染色体不能正常趋向两极，到达后期、末期，因而大量的细胞处于观察染色体形态最佳的分裂中期。
其次是要能够清楚的观察染色体的形态。
为了达到此目的，取出的骨髓细胞要经过低渗（kcl溶液）使细胞膨胀、染色体适当的分散。
固定（甲醇、冰醋酸）使染色体保持完好的形态。
染色（giemsa液）使染色体易分辨、观察。
制备优良的标本可获得满意的观察效果。
利用动物骨髓制作染色体观察标本取材容易，不需培养，不需无菌操作，比较简便，是生物学实验教学中常用的方法。
一般选用的动物有青蛙、蟾蜍、小白鼠、大白鼠等。
[实验用品]1. 动物：青蛙或小白鼠、大白鼠、蟾蜍，雌雄均可。
2. 试剂：0.02﹪秋水仙素、0.075mol/l氯化钾 (kcl)、3:1甲醇、冰醋酸固定液、吉姆萨（giemsa）染液、香柏油或液体石蜡、二甲苯。
3. 器材：解剖盘、小镊子、剪刀、注射器（2ml、5ml各一支）、刻度离心管、玻璃吸管、预冷载玻片、染色缸、玻片盒、量筒（10ml、50ml、100ml各一支），恒温水浴箱，盘架天平（配备等大的小烧杯两个）、电吹风、显微镜、吸水纸、擦镜纸、酒精灯、火柴。
[实验内容与方法]一、试剂配制1. 0.02﹪秋水仙素溶液：秋水仙素2mg，灭活生理盐水（蛙类0.65﹪、哺乳类0.85﹪的nacl）10ml溶解，避光保存。
染色体标本的制备及组型观察 实验报告
细胞生物学实验报告染色体标本的制备及组型观察1.实验目的：掌握染色体标本制作的基本方法；认识不同生物的染色体的状态，学会做染色体组型图。
2.实验用品：（1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、离心管、离心机、小烧杯、冰箱、酒精灯、小烧杯（1）实验药品：蒸馏水、0.9% NaCl溶液、0.3% KCl溶液，固定液（甲醇：冰醋酸=3:1）、秋水仙素（2）实验材料：小鼠3.实验原理：（1）制作染色体标本的意义：了解染色体的特征（形态、大小、数目）——绘制染色体组型图染色体组型：把真核动物一个体细胞各染色体按长度、形状、着丝粒位置排列成一定顺序。
染色体核型：某一物种特有的一组或一套染色体的形态特征。
（2）染色体组型图的应用①鉴别生物种类：兔44条；小鼠40条；大鼠42条；鸡78条；猫38条；狗78条；马64条②遗传病的诊断和研究：三体综合征（含三条21号染色体）、卵巢退化症（含45条染色体，比正常人缺少一条性染色体）、睾丸退化症（含47条染色体，比正常人多一条X或Y染色体）等因此，我们可以给孕妇抽取羊水检查器胎儿的染色体，做遗传病早期诊断。
（3）染色体标本的制作①观察：由于分裂期中期的染色体染色体凝集程度最高，因而我们应尽量使细胞停留在分裂期中期以便观察。
②细胞：为尽量看到多的染色体，我们应当选取具有旺盛分裂能力的细胞，这样的细胞可以来自:胸腺、骨髓、睾丸、小肠等。
我们在此实验中使用的是小鼠的精巢细胞。
在做人的染色体标本时，我们使用的是血液里的淋巴细胞。
③药物：PHA（植物细胞凝集素）：PHA具有促进细胞凝集和分裂的作用。
PHA可以使血液中的淋巴细胞还原至淋巴母细胞（只存在于骨髓中）秋水仙素：秋水仙素可以破坏微管的组装，纺锤体不能形成，细胞分裂停在中期。
与秋水仙素作用相同的药物还有长春花碱、鬼臼素、苯环己烯等。
可以促进胃管组装的药物有紫杉酚、重水等。
④空气干燥：使细胞与染色体易于分离⑤低渗作用：水进入细胞内，细胞内容空间变大，染色体距离变大，易于分离、展平。
牛蛙骨髓穿刺实验报告
实验目的：1. 学习骨髓穿刺术的操作方法。
2. 观察牛蛙骨髓的形态和结构。
3. 了解骨髓在牛蛙免疫系统中的作用。
实验材料：1. 实验动物：牛蛙1只（体重约200g）。
2. 实验器材：骨髓穿刺针、注射器、无菌手套、酒精棉球、生理盐水、显微镜、载玻片、盖玻片等。
实验方法：1. 将牛蛙放入水中适应一段时间，待其安静后，用酒精棉球消毒牛蛙背部皮肤。
2. 在牛蛙背部皮肤上找到腰椎，用手术刀在腰椎两侧各做一长约1cm的切口。
3. 用无菌手套包裹双手，将牛蛙背部的皮肤和肌肉轻轻分离，暴露出腰椎。
4. 在腰椎正中央位置，用骨髓穿刺针穿刺腰椎骨，抽取骨髓。
5. 将抽取的骨髓置于载玻片上，加入少量生理盐水，用盖玻片封片。
6. 将载玻片置于显微镜下观察骨髓的形态和结构。
7. 观察完毕后，将牛蛙放回水中，将穿刺部位进行消毒包扎。
实验结果：1. 观察到骨髓呈淡黄色，质地细腻，有黏性。
2. 骨髓中可见大量细胞，包括红细胞、白细胞和血小板。
3. 红细胞呈圆形，大小不一，无细胞核。
4. 白细胞分为两种，一种为小淋巴细胞，另一种为多核细胞。
5. 多核细胞体积较大，细胞核呈圆形或椭圆形，细胞质丰富。
6. 血小板呈圆形或椭圆形，无细胞核。
实验讨论：1. 骨髓是牛蛙体内重要的造血器官，负责生成红细胞、白细胞和血小板。
2. 骨髓穿刺术是一种常用的实验方法，可用于观察骨髓的形态和结构。
3. 通过本次实验，我们了解到牛蛙骨髓中红细胞的形态和数量，以及白细胞和多核细胞的分布情况。
4. 骨髓在牛蛙免疫系统中的作用不容忽视，白细胞和多核细胞在抵抗病原体入侵方面发挥重要作用。
实验结论：1. 成功进行了牛蛙骨髓穿刺实验，观察到了骨髓的形态和结构。
2. 骨髓是牛蛙体内重要的造血器官，具有生成红细胞、白细胞和血小板的功能。
3. 骨髓在牛蛙免疫系统中的作用不容忽视，白细胞和多核细胞在抵抗病原体入侵方面发挥重要作用。
注意事项：1. 实验操作过程中，应严格遵守无菌操作原则，防止感染。
07910青蛙染色体标本的制备与观
取出的骨髓细胞要经过低渗（kcl溶液）使细 胞膨胀、染色体适当的分散。固定（甲醇、 冰醋酸）使染色体保持完好的形态。染色 （giemsa液）使染色体易分辨、观察。制 备优良的标本可获得满意的观察效果。利用 动物骨髓制作染色体观察标本取材容易，不 需培养，不需无菌操作，比较简便，是生物 学实验教学中常用的方法。一般选用的动物 有青蛙、蟾蜍、小白鼠、大白鼠等。
4 将骨髓细胞转入离心管，平衡后离心， 以1000r/min离心8min； 5 去上清液，加入0.075mol/L KCl溶液 5mL，用吸管将细胞吸打均匀，低渗 20min ，平衡后离心（离心条件同上）； 6 去上清液，沿管壁缓慢进入加入卡诺固 定液（甲醇：冰乙酸）5mL，用吸管将细 胞吸打均匀，固定30min ，平衡后离心 （离心条件同上）； 7 离心完成后，吸去上清液，视管底细胞 多寡加入少量新配制固定液，将细胞轻轻 吸打成细胞悬液
几种动物染色体形态特征动物名染色体类型x染色体形态y染色体形态青蛙26中央亚中央着丝粒染色体中央着丝粒染色体介中央着丝粒染色体介小白鼠40全部为近端着丝粒染色体大小介于5大小介于1920号大白鼠42中央亚中央近端着丝粒染色体近端着丝粒染色体介近端着丝粒染色体介于1819号家兔44中央亚中央近端着丝粒染色体亚中央着丝粒染色体介于56号近端着丝粒染色体介于1920号二二实验原理实验原理
预备实验结果
四、实验作业： 1 绘制青蛙染色体图并计数。 2 你制备的青蛙染色体标本，分裂相是否多，染 色体分散程度如何？有什么不足，原因何在？ 3 简述秋水仙素的作用原理？秋水仙素处理的时 间以及浓度会对实验造成怎样的影响？ 4 制片过程中为什么要进行低渗处理？低渗的时 间长短对染色体制片效果有何影响？
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脂肪组织 在小烧杯中加入6ml0.65 用镊子挑出， ％生理盐水，取带针头的玻璃 弃去，否则 注射器，吸入2ml 0.65％生理 容易堵塞注 盐水，将针头沿骨的长轴方向 射器。 从骨的一端刺入骨中，缓慢推 动注射器活塞，将骨髓细胞冲 洗到小烧杯中。此6ml的生理 盐水要反复使用，直到把所 注意： 冲洗时动作 有材料中的骨髓冲出为止。 要徐缓，以免溶液喷 出，损失骨髓细胞。 骨髓腔发白！
注：镜检
三、实验仪器耗材和试剂
每人：
复式双筒显微镜（带油镜）、Motic数码互动系统
每组
香柏油 / 二甲苯；搪瓷盘，剪刀，烧杯，小离心管，玻璃注射器
常备：擦镜纸/盖玻片；载玻片/镊子；记号笔；小片滤纸；移液器/吸头； （如缺少可至准备处补充） 实验材料：肉用成体牛蛙（两组1只）； 试剂： 0.65％生理盐水；
徐道觉
蒋有兴
人外周血淋巴细胞染色体（Giemsa 染色）
染色体显色技术
于1968年由瑞典Casperson首先建立。 是将未染色的中期染色体经过一定的预处理， 再用不同的方法及不同的染料处理染色体标本， 使染色体上出现明暗相间或深浅不同的明显而 稳定的斑带。 显带技术极大地促进了细胞遗传学的发展，使 每条染色体都可被准确识别和鉴定，甚至出现 小的染色体结构异常也可被检出。 分为两大类：
实验五
牛蛙骨髓染色体标本的 制备和观察
上海交大生命学院
一、学习目的
1、了解制备中期染色体标本的原理； 2、初步掌握制备动物骨髓染色体的操作方法； 3、观察试验动物染色体的特点和核型。
二、实验原理
染色体制片技术
根据细胞分裂的特点，将生物细胞分裂旺盛的组织 经适当技术处理后，即可获得细胞分裂期的染色体 标本。优良的染色体制片是进行染色体显带、组型 分析、原位杂交等实验的先决条件。
取骨髓
剔骨， 取肱骨、 股骨和 胫腓骨 共3根
剪下牛 蛙四肢
骨剪剪 开露出 骨髓腔
生理盐 水冲洗
收集浓 缩骨髓 细胞
于取材，若抽取的骨髓太少或太稀，细胞数 目过少，不易获得较多的中期分裂相。
注意：骨髓染色体标本的制备成败决定
上肢1
下肢2
取 后 肢
剪开牛蛙后肢与躯干接合部的 肌肉，可看到膨大的关节部。
用剪刀顺着关节外围剪开，露出关节腔。
取 前 肢
确定前肢关节所在部位。
用剪刀剪开肌肉，顺着关节外围剪，露出关节腔。
取出肱骨、股骨和胫 腓骨等长骨，共3根， 用剪刀和镊子剥去上 面的肌肉组织。 用骨剪（使用骨剪 时要小心，不要剪到 硬骨部分损坏骨剪韧 口）剪开长骨两端的 膨大部的半透明软骨 （不能全部剪断）， 程度以刚刚露出红色 的骨髓组织为宜。
动物前 期处理
取骨髓
低渗
固定
滴片
染色
镜检
动物前期处理 牛蛙称重，按每克体重2微克的 剂量腹腔注射秋水仙素溶液(用0.65％ 生理盐水配制)。注射后3.5~4小时， 用过量乙醚或氯仿麻醉牛蛙。 每2组同学组合，派1名同学戴一 次性手套，以搪瓷盘取牛蛙置于其中。 回到实验桌后对牛蛙进行肢解。
牛蛙外形
头、颈（不明显）、躯干、四肢 体表无鳞、粘滑 雄性前肢拇指基部有婚瘤 鼓膜
获得3~10天的 染色体制片。
0.025%胰酶磷酸缓冲液 37℃预温。
37℃显带，处 理30~90s。
37℃预温生理 盐水或PBS漂洗 2次。
37℃吉姆萨染 色1~2m，自来 水冲洗。
标本片干燥 后油镜镜检。
染色体未出 现带纹，则 为显带不足； 若染色体边 缘发毛为显 带过头；应 根据具体情 况增减胰酶 处理时间。
冲洗过 程中随手将 骨髓冲出物 中大块白色
浓缩骨髓
把6ml的骨髓细胞悬液转移至4只1.5ml离心管中 （每管1.2ml，如体积不满，可再加入适量生理 盐水，以保证离心平衡），3000转/分离心5分钟。 用移液枪小心地吸去上清液（弃去）。向每一离 心管中加入75 μl的0.65％生理盐水，用吹打的方 法将沉淀物充分悬浮。将每2管中的细胞悬液合并 于一管，每管150μl细胞悬液 ），以后操作每组 的两人各做一份。
固定
将低渗处理后的细胞悬液3000转/分离心5分钟， 小心吸去上清液（弃去），每管加入甲醇-冰醋酸 固定液 lml，固定15分钟，用吹打法将细胞充分 悬浮。 重复上面步骤一次。 3000转/分离心5分钟，小心吸去上清液（每管约 900 μl弃去），留少量残液用吹打法将沉淀充分 悬浮。 为什么要固定2次？一般认为预固定作用：防止 离心时细胞间的相互黏连，对中期染色体的分散 质量有一定影响。
–一类是产生的染色带分布在整个染色体的长度上，如：Ｇ、Ｑ和Ｒ带 –另一类是局部性的显带，只能使少数特定的区域显带，如Ｃ、Ｔ和Ｎ带。
G带染色步骤
是最常用的分带技术，操作简单，带纹清晰，标本可长期保存，重复 性好。–动物中稳定，植物中不稳定。 一般认为，易着色的阳性带为含有ＡＴ多的染色体节段，而含ＧＣ多的染 色体节段不易着色。总的来说，Ｇ显带的机理尚未搞清。 Ｇ带预处理可用热、碱、胰蛋白酶、尿素、氯化铯和５－溴脱氧嘧啶等。
染色体标本制作技术四大发现
一、美籍华人徐道觉（Hsu T C，1952年） 从助手工作的失误中发现采用蒸馏水低渗 处理分裂细胞可使染色体展开； 二、蒋有兴（Tjio J H，1956年）发现秋水 仙素可使分裂的细胞停止在中期； 三、Li J. G.发现PHA（phytohemaggutin， 植物血球凝集素）可使淋巴细胞转化为淋 巴母细胞，呈分裂状态； 四、标本的空气干燥法使细胞和染色体展平。
甲醇—冰醋酸(3:1)固定液； 蒸馏水； 自来水; Giemsa染液
整个实验班
离心机，一次性手套，骨剪（实验班公用） ，冰箱（0℃）
四、实验内容
动物的骨髓中存在大量活跃的进行有丝分裂的细胞， 是染色体制备的理想材料。给动物注射了特异作用于微管 系统的秋水仙素后，可以抑制纺锤体的形成，使分裂细胞 阻断于有丝分裂中期，从而积累大量处于分裂中期的细胞。 然后收集骨髓细胞，低渗处理，使细胞质膜破裂，以利染 色体的分散。细胞经固定后，于预冷的载玻片上滴片，使 染色体散开，再用姬姆萨染色，便可以制成染色体标本。
低渗
徐道觉如何发现 低渗处理的作用？
在每管细胞悬液中加蒸馏水lml，吹打混匀， 室温下静置，低渗处理20分钟。 低渗处理是凭借反渗透作用使动物细胞充分 吸水膨胀，染色体铺展分散，同时可使粘附于染 色体的核仁物质散开，以便能在一个平面上观察 所有染色体形态。 低渗的时间和温度必须 控制好！低渗不够，则 染色体聚在一起，分散 不好。太过，则造成细 胞破碎，染色体丢失。