单宁含量测定(三种方法)..

四、实验步骤
1、标准曲线的绘制 按下表编号，分别加入试剂 于50mL容量瓶，加完后，剧 烈 振摇，以蒸馏水稀释至刻度，充分混合，于30℃恒温箱中放 置 ， 1.5h后，用分光光度计在波长680处测定吸光值，并 绘制标准曲线。
管号 试剂
标准单宁溶液/ml 乙醇（75%）/ml 60g/L偏磷酸溶液/ml 蒸馏水 /ml
四、注意事项
1.单宁遇Fe3+会发生颜色反应，因此处理样品时，不能与分歧 接触，切碎样品应采用不锈钢刀。
2.单宁容易被氧化，样品处理后应立即进行测定。同时要注意 控制加热温度，加热过程中要加些摇动数次，意识反应完全。
４．结果计算
(c1V1 10c2V2 ) 0.1556 x 100 m
1、材料： 香蕉（未熟透）5g 2、仪器：容量瓶 电子天平 研钵 碱式滴定管
3、试剂： ①1.000 mol/L醋酸锌标准溶液：准确称取Zn(Ac)2·H2 O 21.95g,用水溶解后定容至100mL。 ②0.0500 mol/L乙二胺四乙酸二钠（EDTA）标准溶液：准确称 取乙二胺四乙酸二钠9.306g,溶解于水，并用水稀释至500mL. ③pH=10的NH3-NH4Cl缓冲溶液：称取54gNH4Cl 加水溶解后加入 浓氨水350mL,用水定容至1000mL。 ④铬黑T指示剂：称取0.59铬黑T，溶于10mL pH=10的NH3-NH4Cl 缓冲溶液中，用95%乙醇定容至100mL。
0
0 1.7 0.1 25 2.5 10
1
0.1 1.7 0.1 25 2.5 10
2
0.2 1.7 0.1 25 2.5 10
3
0.4 1.7 0.1 25 2.5 10
Hale Waihona Puke Baidu
4
0.6 1.7 0.1 25 2.5 10
5
0.8 1.7 0.1 25 2.5 10
6
1.0 1.7 0.1 25 2.5 10
式中: χ——样品中单宁的质量分数，％
Ｃ１——Ｚｎ（Ａｃ）２标准溶液的浓度，ｍｏｌ／Ｌ Ｖ１——吸取Ｚｎ（Ａｃ）２标准溶液的体积，mL
Ｃ２——EDTA标准溶液的浓度，ｍｏｌ／Ｌ
V2——滴定时消耗ＥＤＴＡ标准溶液的体积， mL 0.1556——由实验得出的比例常数，ｇ／ｍｍｏｌ
ｍ——样品质量，ｇ
10——分取倍数，及样品络合沉淀后定容至100mL，吸取其中的 1/10进行滴定。
方法二、EDTA络合滴定法
一、 实验目的
了解单宁的性质及熟练掌握单宁含量的测定方法
二、实验原理
根据单宁可与重金属离子形成络合物沉淀的性质，在样品提取 液中加入过量的标准Zn(Ac)2溶液，待反应完全后，再用EDTA 标准溶液滴定剩余的，根据EDTA标准溶液的消耗量，可计算出 样品中单宁的含量。
三、材料、仪器与试剂
四、实验步骤
1.样品处理 称取切碎混匀的样品5~10g，置于研钵中，加少许石英砂 研磨成浆状（干样品经磨碎过筛后，准确称取1~2g），转入 150mL锥形瓶中，用50mL水分多次洗净研钵，洗液一并转入锥 形瓶中，振动、提取10~15min. 2.络合沉淀 在100mL容量瓶中，准确加入Zn（Ac）2标准溶液5mL、浓氨 水3.5mL，摇匀（开始有白色沉淀产生，摇动使沉淀溶解）。 慢慢将提取物转入容量瓶中，不断振摇，在35℃水浴中保温
不同方法测定单宁（tannin）含量
的比较研究
测定单宁含量的方法
一、比色法
二、EDTA络合滴定法 三、高锰酸钾滴定法
三种方法的比较
方法一、 比色法
一、 实验目的
了解单宁的性质及熟练掌握单宁含量的测定方法
二、实验原理
样品中的单宁在碱性溶液中将磷钨钼酸还原，生成深蓝 色化合物，其颜色的深浅与单宁的含量成正比，可与标准 进行比较定量。
三、材料、仪器与试剂
1、材料： 香蕉（未熟透）50g 2、仪器： 天平 组织捣碎机 烧杯 移液管 分光光度计 容量瓶 恒温箱 （30℃） 3、试剂 ：
① 标准单宁酸溶液（0.5mg/mL）：准确称取标准单宁 酸50 mg，溶解后用水稀释至100 mL，用时现配。 ② F-D( Folin-Donis)试剂：称取钨酸钠（Na2WO4· H2O） 50g、磷钼酸10g，置于500mL锥形瓶中，加375mL水溶解， 再加磷酸25mL，连接冷凝管，在沸水浴上加热回流2h，冷却 后用水稀释至500mL。 ③ 60g/L 偏磷酸溶液。 ④ 1 mol/L碳酸钠溶液：称取无水碳酸钠53g，加水溶解并稀释 至500mL。 ⑤ 95%和75%乙醇溶液。
F-D试剂 /ml 1mol/l 碳酸钠溶液/ml
2、样品测定 果实去皮，迅速称取50g，加入95%乙醇 50mL、偏磷酸 50mL、水50mL，置于高速组织捣碎机中打浆1min（或在研钵 中研磨成浆状）。称取匀浆20于100容量瓶中，加75%乙醇 40mL，在沸水浴中加热20min，冷却后用75%乙醇稀释至刻 度。充分混合，以慢速定量滤纸过滤，弃去初滤液。 吸取上述滤液2置于已盛有25mL蒸馏水、2.5mLF-D试剂的 50mL容量瓶中，然后加入，剧烈振摇后，以水稀释至刻度， 充分摇匀（此时溶液的蓝色逐渐产生）。同时做空白试验。 于30 ℃恒温箱中放置后，用分光光度计在波长处，以试剂 空白调零，测定吸光值。
20~30min.冷却，用水定容至100mL，充分混匀，静置、过滤
（处滤液弃去）。 3.滴定 准确吸取滤液10mL，置于150mL锥形瓶中。加水40mL、 NH3-NH4Cl缓冲溶液12.5mL、铬黑T指示剂10滴，混匀。用 0.0500mol/L的ＥＤＴＡ标准溶液滴定，溶液由酒红色变为纯 蓝色金额为终点。
四、结果计算
c 10 x 100 m K
式中:
x—样品中单宁的质量分数，%； c— 比色用样品溶液中单宁的含量（由标准曲线查得 ）， μg； m — 样品质量，g； K —稀释倍数，如按上述方法取样50时，K=（20/200） ×（2/100）=1/500
6
五、注意事项
1、样品处理时要尽快进行，以免单宁氧化而造成误差。 2、维生素C也能与F-D试剂作用产生蓝色，因此当样品含 有维生素C时需要进行校正，1㎎维生素C相当于0.8㎎单宁 酸。