细胞核的分离与鉴定设计型实验设计报告_(2)
实验3 细胞核的分离与核酸的鉴定
实验3 细胞核的分离与核酸的鉴定【实验目的】1.掌握细胞核及细胞质的分离和纯化的一般原理和操作方法。
2.了解DNA在细胞中的分布和核酸鉴定的原理。
3.进一步掌握离心机的工作原理及正确使用方法。
【实验原理】1.DNA主要存在于细胞核， RNA主要存在于细胞质。
2.细胞内不同结构的比重和大小都不相同，在同一离心场内的沉降速度也不相同，根据这一原理，常用不同转速的离心法，将细胞内各组分分级分离出来。
肝组织破碎后，柠檬酸能抑制脱氧核糖核酸酶的活性，维持染色质的正常结构和活性。
如将此种细胞核保存在等渗（0.25M）蔗糖溶液中（内含微量钙离子，防止核聚集和脆性），可以比较好地保存其完整的正常结构。
在此条件下离心分离得到的是细胞核的粗制品，如离心时通过0.88M蔗糖的高渗溶液。
适当调整离心力，可得到纯化的细胞核沉淀。
3.脱氧核糖核酸的鉴定：【操作步骤】1、0.5g肝组织＋5ml的1.5%柠檬酸溶液，研磨2、肝匀浆，倾入离心管，离心：3000r/min；15′3、离心结束后，上清液移入另外一个试管中备用（此为细胞质液）4、沉淀中加入1ml的0.25mol/L 蔗糖-柠檬酸溶液，玻棒搅匀后，为核悬液。
5、另外取离心管一只，加9ml 的0.88mol/L蔗糖-柠檬酸液。
用滴管吸取核悬液。
沿管壁缓慢铺于液面上。
6、离心：2000r/min；10′.上层液，弃去；沉淀为初步纯化的细胞核。
7、核洗液5ml洗涤沉淀，离心：2000r/min，10 ′白色沉淀为纯化的细胞核。
8、加10ml 0.02mol/L NaOH溶解细胞核，即为待测的核液。
9、脱氧核糖核酸的鉴定（1）水解：取离心管二支，编号，按下表操作混合各管沸水浴(10’)离心3000r/min;5′上清液(2)鉴定：取试管三支，编号，按下表操作:混合各管沸水浴(15’)冷却比较各管颜色(595nm) 编号 1 2细胞质（ml） 2.0 -核液（ml）- 2.01M过氯酸(ml） 2.0 2.0[结果分析]标准曲线法：分别计算细胞质和细胞核中的含量。
细胞核的分离和鉴定
细胞核的分离和鉴定细胞核的分离和鉴定是生物学实验中的一项重要技术，用于研究细胞核的结构和功能。
以下是细胞核的分离和鉴定的实验步骤和注意事项。
一、实验步骤1.准备实验材料：动物细胞、低速离心机、离心管、磷酸缓冲液（PBS）、生理盐水、DAPI染色液、荧光显微镜、紫外分光光度计等。
2.制备细胞核悬液：将动物细胞在低速离心机中进行离心，去除细胞质和细胞器，得到细胞核悬液。
3.分离细胞核：将细胞核悬液在离心管中进一步离心，去除细胞质和细胞器，得到纯净的细胞核。
4.鉴定细胞核：将分离到的细胞核进行染色，使用DAPI染色液将DNA染色，在荧光显微镜下观察细胞核的形态和染色体的分布。
同时，也可以使用紫外分光光度计检测细胞核中的DNA含量。
二、注意事项1.实验前需要熟悉实验步骤和操作流程，确保实验的准确性和安全性。
2.在制备细胞核悬液时，需要控制离心速度和时间，避免对细胞核造成损伤。
3.在分离细胞核时，需要保证细胞的纯净度，避免其他细胞器和细胞的污染。
4.在鉴定细胞核时，需要选择合适的染色方法和观察条件，确保实验结果的准确性和可靠性。
5.实验结束后需要妥善处理实验材料，保证实验室的安全和卫生。
三、结论细胞核的分离和鉴定是研究细胞核结构和功能的重要技术之一。
通过该技术，我们可以获得高纯度的细胞核样本，进一步研究细胞核内染色体的分布、DNA的含量和基因表达等生物过程。
同时，该技术也可以应用于临床诊断和治疗中，如检测肿瘤细胞的恶性程度和治疗效果等。
因此，掌握细胞核的分离和鉴定技术对于生物医学领域的研究和应用具有重要意义。
四、建议与展望在未来的研究中，可以进一步探索细胞核的分离和鉴定技术的新方法和新技术。
例如，使用新型的分离介质和设备提高细胞核的纯度和提取效率；开发新的染色方法和荧光探针，提高细胞核鉴定的准确性和灵敏度；利用人工智能和机器学习等技术对细胞核图像进行分析和处理，提高实验数据的可重复性和准确性等。
此外，还需要加强对于细胞核结构和功能的深入研究，为临床诊断和治疗提供更多有用的信息和技术支持。
细胞核的分离与核酸的鉴定
冷却 离心
2000r/min;5′
上清液 2．鉴定：取试管三支，编号，按下表操作: ．鉴定： 试管三支，编号，按下表操作 三支 1 2 3 编 号 细胞质水解液（滴） 细胞质水解液（ 核水解液（ 核水解液（滴） 1mol/L过氯酸（滴） 过氯酸（ 过氯酸 二苯胺试剂（ 二苯胺试剂（滴） 20 20 20 20 20 20 比较各管颜色 立即混合各管 冷却
表1.核糖核酸的鉴定 核糖核酸的鉴定
试管编号 现 象
1
2
3
表2.脱氧核糖核酸的鉴定 脱氧核糖核酸的鉴定
试管编号 现 象
1
2
3
1．规范操作，防止滴管、试剂的污染。 ．规范操作，防止滴管、试剂的污染。 2. 细核悬液的平铺要轻柔。 细核悬液的平铺要轻柔。 3. 本次实验要使用很多酸性较强的溶液，取用要 本次实验要使用很多酸性较强的溶液， 小心。 小心。 4. 各项混匀的工作，要充分，并且要注意安全， 各项混匀的工作，要充分，并且要注意安全， 防止液体溢出。 防止液体溢出。 5. 实验中多次用到离心机，注意配平原则；转速 实验中多次用到离心机，注意配平原则； 从低到高。 从低到高。 6. 沸水浴操作时，要注意自己和别人的安全，防 沸水浴操作时，要注意自己和别人的安全， 止液体溅出。 止液体溅出。
H N
蓝色化合物
ω －羟基－γ－酮基戊醛 羟基－ －
（1）分离细胞质与细胞核 ） （2） 核酸的鉴定 ）
（1 ） 分 离 细 胞 实 质 和 验 细 流 胞 程 核
0.5g肝组织 ＋ 少许石英砂研磨 肝组织 柠檬酸溶液， 加5ml的1.5%柠檬酸溶液，研磨，双层纱布过滤 的 柠檬酸溶液 研磨， 肝匀浆， 肝匀浆，倾入离心管
细胞核分离与鉴定
医学细胞生物学设计型实验设计报告姓名吴远依班级医检12-1班学号1210850116 评分实验项目：细胞核的分离与鉴定实验原理：1.细胞是由膜包围着含细胞核、线粒体、核糖体、内质网等结构及其细胞质构成。
细胞内的这些结构的比重和大小等不相同，同一离心场内其沉降速度也不同。
根据这一原理，常用不同介质和转速离心，将细胞各组分分级分离出来，即细胞的分级分离。
2.常用的分级分离法有差速离心法和密度梯度离心法。
差速离心法是指由低速到告诉逐级沉降分离，当离心力低、离心时间短时，较大的颗粒如细胞核先沉淀到管底。
密度梯度离心是用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。
本实验只需把细胞核沉降下来即可，因此不需要使用密度梯度离心法。
然而，差速离心法的使用，必须要把细胞裂解使细胞器暴露出来。
3.细胞核的结构由核膜、染色质、核仁和核基质构成。
本实验采用鸡血细胞，因为鸡血细胞容易吸水胀破。
加入蒸馏水是低渗环境，所以可以使得细胞膜低渗破裂，而由于核膜的组成（蛋白质及脂类的种类、数量、比例）与细胞膜有差别，因此核膜在低渗环境下破裂需要更长的时间，所以控制相对较短的时间，可使细胞核暴露出来。
实验步骤：一、原料的准备取新鲜鸡血5ml加入已经配置好的5g/L的柠檬酸钠抗凝剂5ml 置于烧杯中（柠檬酸钠抗凝剂的制备0.1g加入20ml的蒸馏水）。
二、裂解细胞向烧杯中加入5ml蒸馏水，用玻璃棒沿着同一个方向搅拌1min。
离心取已经处理过的鸡血细胞5ml置于离心管中，以2000r/min离心5min。
涂片取上清液制成一张涂片，标记为①。
将原离心管中剩余上清液吹打沉淀成悬液（如果上清液多，可以倒掉些），标志为②。
染色分别在涂片①②上滴加甲苯胺蓝染液，染色5~7min。
洗涤冲去染液，晾干显微镜下观察注意事项：1.取到鸡血时不能过较长时间才加入抗凝剂；2.裂解鸡血细胞时，一定要严格控制时间，否则时间过长细胞核也会裂解；3.制片过程中要把握涂片的力度，以免涂片过厚；洗涤切片时，时间不要太长，以免把染料全部冲去，观察不到细胞核。
细胞核分离纯化和核酸含量的测定2
是非题
RNA都存在于细胞浆中。 （NO） RNA在过氯酸溶液中加热水解后，其核糖部分可脱水形成
糠醛。 （NO） 在DNA双链结构中，碱基位于内侧，两条链的碱基之间以
氢键相接触。 （YES）
单选题
1.——可用于测定DNA的浓度。（B）
A.OD280 B.OD260 C. OD240 D.OD220 2. Tm值与DNA的分子大小和所含碱基中的————比例成
管号
1
2
ห้องสมุดไป่ตู้
3
2.0
—
—
—
2.0
—
—
—
2.0
2.0
3.0
2.0
3. DNA标准曲线的制作： 标准曲线在墙上。
四、结果与计算
1. 样品中RNA含量（g/mL）=碱水解液中RNA含 量（g/管）稀释倍数（细胞质稀释6倍，核液稀释 3倍）。 2. 样品中DNA含量（mg/ml）=酸水解液中DNA含 量（mg/管）稀释倍数（细胞质与核液均稀释2倍） 细胞质与核液的实际用量（均为2ml） 3. 分别计算出细胞质和细胞核中RNA：DNA的比值。
2. 显色及比色： 取试管3支，编号。按表10-1加入试剂立 即混匀，置沸水浴中10min，取出冷却，在660nm波长 处比色。以第3管作空白，读取光密度，查RNA标准曲 线，获得细胞质和细胞核水解液中RNA的含量。
表中 RNA含量测定显色及比色时试剂加入方法
试剂（ml）
细胞质水解液 核水解液 0.3 mol/L三氯乙酸 苔黑酚液
管号
1
2
3
1.0
—
—
—
2.0
—
1.0
—
2.0
3.0
细胞的分离与鉴定
可以利用分离细胞核所需要的离心力将 细胞核分离出来， 细胞核分离出来，再运用细胞化学法 进行鉴定。 进行鉴定。分离细胞核最常用的方法 是将组织制成匀浆， 是将组织制成匀浆，在均匀的悬浮介 质中用特定的离心力进行离心、分离， 质中用特定的离心力进行离心、分离， 然后进一步分析鉴定。其基本过程包 然后进一步分析鉴定。 括组织匀浆、分级分离和分析3个步骤。 括组织匀浆、分级分离和分析3个步骤。
三、实验步骤
断 头
开腹 取肝
生理盐水 10ml
洗涤 2-3次
称取约 1g肝 1g肝 离心
预冷蔗糖预冷蔗糖-CaCl2 8ml
剪碎 低温匀浆
过滤 配平 涂片① 涂片① 涂片② 涂片②
2500rpm 15min 甲苯胺蓝 5-7min
上清液 沉淀制成悬液
染色
冲洗、晾干、 冲洗、晾干、镜检
四、结果观察
高倍镜下可见肝细胞核已游离 出来，被染成蓝紫色，圆形， 出来，被染成蓝紫色，圆形，中央 有2-4个甚至更多个深蓝色的核仁。 个甚至更多个深蓝色的核仁。
五、注意事项
1 匀浆的规范操作 2 离心机的正确使用 3 涂片技巧 保持实验台的卫生（ 4 保持实验台的卫生（纱布清洗 干净等） 干净等）
细胞生物学实验
细胞核的分离与鉴定
一、实验目的
1 2 3 掌握分离细胞核的原理 熟悉细胞核的鉴定方法 了解细胞核的分离过程
二、实验原理
细胞核的比重和大小与细胞内其他组 分不同， 分不同，在同一离心场内其沉降速度也 不同，所以，常用不同介质和不同的离 不同，所以， 心力离心（即差速离心）， ），将细胞内各 心力离心（即差速离心），将细胞内各 细胞器 和组分分级分离 出来。 出来。
实验仪器
细胞核的分离和鉴定 (2)
• •
镜检
四、注意事项
• 1.用三氯醋酸处理时，时间不能过长或过短，过长 会使核膜裂解，过短会使抽取的核酸不足。 • 2.在染色时时间一定要足够，否则染色不完全得不 到理想的结果。 • 3.去掉胞质的核体贴附能力弱，应注意在固定、三 氯醋酸处理、染色时尽量避免胞核的脱落。
五、预期结果
• 在低、高倍镜下 ，可观察到经 1﹪碱性固绿染 色的肝细胞涂片 b的细胞核体被 染成绿色。说明 这是碱性蛋白， 即细胞核已游离 出来。
三、操作流程
• 颈椎脱臼法处死小白鼠 剪碎置于盛有0.9﹪NaCl烧杯中，反复洗涤，用 滤纸吸去表面的液体 • 取鼠肝1g • 去污 • • • 量取8ml预冷的0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液 先加入少量，加入肝组织后全部加入 匀浆过滤 研磨3~5次，用3层纱布过滤，制作涂片a，自然干燥 •
三、操作流程
•
离心
2500r/min离心15min ，离去上清液
•
•
悬浮
• • • • • •
• 涂片放入1﹪碱性固绿中染色10min，冲洗，晾干
6ml0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液悬浮沉淀物， 再以2500r/min离心15min ，离去上清液 ，制成悬液制作涂片b，自然干燥 固定 涂片a、b放入70﹪乙醇溶液固定5min，晾干 处理 固定好的涂片浸入90℃ 5﹪三氯醋酸溶液2min，冲洗，滤纸吸干多余水分 染色
二、实验用品
• ⑴材料：小白鼠肝脏 • ⑵试剂：0.9﹪NaCl溶液、0.25mol/L蔗糖0.003mol/L氯化钙溶液、70﹪乙醇溶液、 5﹪三氯醋酸溶液、1﹪碱性固绿。 • ⑶仪器设备：显微镜、普通离心机、天平 、离心管、滴管、玻璃漏斗、量筒、25毫 升烧杯、解剖剪、镊子、冲洗瓶、纱布、 玻璃匀浆器、载玻片、盖玻片、染色盘架 、气管。
细胞核的分离与鉴定
细胞核的分离与鉴定
细胞核是细胞中的重要组成部分，它包含了细胞所有的遗传信息。
因此，分离和鉴定细胞核对于研究细胞生物学极为重要。
本文将介绍细胞核的分离和鉴定的方法。
1. 利用离心法分离细胞核
离心法是将混合物沉淀分离出不同密度组分的方法。
分离细胞核的常见离心法有两种：
(1) 不同速度离心分离法：此方法中，首先将细胞用生理盐水洗涤后，用一定浓度的卵白酶消化除了细胞表面的蛋白质。
接下来，用卵白酶抑制剂中和卵白酶的作用，以避免对细胞核的影响。
然后，将细胞用离心管离心，分离出胞浆和细胞核，离心速度根据细胞类型和实验目的来定。
(2) 密度梯度离心分离法：此方法中，首先制备密度梯度液，将细胞悬液添加到密度梯度液上层，离心分离，从而得到不同密度的细胞组分。
具体实验步骤可参考文献。
染色质是细胞核中的主要成分，其中包括染色体。
因此，利用染色体分离技术可以鉴定细胞核。
常见的染色体分离方法有两种：
(1) 干切片染色体分离法：此方法中，将细胞用生理盐水洗涤，再用一定比例的低渗盐溶液或isotonic KCl溶液处理，使其肿胀和膨胀，然后涂在玻璃片上，用过的废染液或乙醇固定。
接着，将涂有细胞的玻片在高温下加热，使其变薄，再进行染色和观察。
(2) 体外染色体分离法：此方法中，取同种细胞制备成细胞核悬液，再加入5倍体积的低渗盐溶液，使染色质膨胀，不同染色体在离心过程中分离。
然后，制备成干片，进行染色和观察。
细胞核的分离与鉴定设计型实验设计报告_(2)
细胞核的分离与鉴定设计型实验设计报告_(2)一、实验目的1.熟悉细胞分离和鉴定的基本操作方法。
2.掌握用离心技术从小鼠肝脏中提取细胞核的方法。
3.通过细胞核染色体形态的观察，了解细胞核在生物体中的作用。
二、实验原理细胞分离和鉴定是细胞学的基础实验，也是细胞学研究的重要手段之一。
细胞分离是将组织或细胞块中相关性高的细胞或不同类型的细胞分离开，以便进行对其性质和功能的分析和研究。
细胞鉴定是针对某种细胞类型，利用某种特异性分辨手段，对该细胞的特定结构或成分进行检测和区分，以便识别该细胞类型的性质和角色。
2.离心技术离心是利用离心机中高速旋转的离心头，通过离心力的作用，使样品中不同的物质沉淀到零件上，从而实现分离的技术手段。
离心用于分离固体及液体的混合物，也可用于分离生物学样品中的细胞、细胞器、酶和其他生物大分子，常用于提取细胞核或线粒体等细胞器。
三、实验步骤1.制备小鼠肝脏组织样品取2只小鼠，用无菌注射器注射适量无菌生理盐水溶液，待小鼠麻醉后，将小鼠放在消毒过的工作台上，采用外科手术的方法，将小鼠的腹部切开，取出小鼠肝脏，用无菌生理盐水清洗小鼠肝脏，用吸水纸吸干水分后，将小鼠肝脏组织分为小块状，存放于无菌离心管中备用。
2.分离细胞核将小鼠肝脏样品加入预冷的离心管中，用等体积的细胞破碎缓冲液A混合，使溶液刚好能淹没样品。
再次加入等体积的细胞破碎缓冲液B，使样品浓度适当。
将混和物在冰上慢慢摇晃，5分钟后，离心5分钟，去除上清液，洗涤后继续离心5分钟，去除上清液，洗涤后再次离心5分钟，去除上清液，离心操作后小鼠肝脏组织在管底沉淀下来。
3.制备细胞核标本将离心完成后的小鼠肝脏组织中的细胞核有效部分，制备成固定标本。
首先，将组织标本样品用福尔马林固定10-20分钟；然后，在干净玻璃片上滴上碘静（10-15μL），用酒精进行漂白，再用氢氧化钠溶液中和酒精，将玻璃片在空气中晾干，制备成细胞核标本。
4.细胞核染色滴一滴核染色剂（主要成份为酸性染料FOSCIN）在经过固定、漂白、中和后的细胞核标本中央，静置2-3分钟，漂洗干净后，在细胞核标本切片下滴上甘油凝胶，覆盖上玻片，并晾干即可。
实验设计-细胞核的提取与鉴定
医学细胞生物学设计型实验设计报告姓名：李飘班级：K—10班学号：1020151004 评分【实验项目】：动物细胞细胞核的分离与鉴定【实验原理】：核体的制备核体是指含有少量细胞质并由质膜包裹的细胞核。
因为在实际中我们不可能100%的得到细胞核，因此,我们只能制备含有少量细胞质的核体，核体的制备方法主要有吸出法和原生质体破裂法等。
在本实验中我们采用排除法来制备核体。
排除法制备核体是通过细胞松弛素和高速离心的作用使细胞核排出，然后从离心管底部沉淀中收集获得核体。
细胞核的鉴定因为细胞核中主要含DNA，是碱性蛋白。
因此将分离出的核体经三氯醋酸处理,抽提掉核酸后，用碱性固绿溶液染色，可以使细胞核内的碱性蛋白显示出来。
【实验步骤】：1．细胞培养：将欲分离微核体和细胞质的动物接种于脱核塑料圆板上，使适宜的培养基中于37 ℃的条件下培养，使细胞固定在脱核塑料圆板上，脱核塑料圆板的直径应稍小于离心管的直径，使用前先用水洗干净再经过乙醇杀菌处理。
2．秋水仙碱处理：细胞培养一段时间以后，加入0.1ug/ml的秋水仙碱，处理细胞48～60h 滤纸，使细胞形成多个大小不同的核体。
3．细胞松弛素处理：在离心管内加入5ml预热至37 ℃的细胞松弛素B溶液将固定有动物细胞的圆板面朝下放入离心管内，固定圆板位置后，再加入10ml37 ℃的CB溶液。
4．离心：在1000～15000r/min核体从细胞排出。
5．收集核体：由于核体的贴附力弱，可以从离心管底部的沉淀中收集。
6．固定：将收集的核体涂于玻片上制成涂片，滴加15%乙醇于涂片上，固定5min，室温晾干。
7．三氯醋酸处理：将已固定的血涂片浸在90 ℃的三氯醋酸溶液中处理20min，细流水反复冲洗玻片上的三氯醋酸直至冲尽。
用滤纸吸于玻片上多余水分晾干。
8．染色：将制作好的涂片放入0.1%碱性固绿染液中染色10～15min，细流水冲去多余染液，晾干，镜检。
【注意事项】：1．在离心管内加入的5ml细胞核松弛素B溶液要预热到37 ℃，因为只有这样才接近动物的最佳体温37 ℃。
细胞核的分离与鉴定实验报告
细胞核的分离与鉴定实验报告细胞核的分离与鉴定实验报告细胞是构成生物体的基本单位，而细胞核则是细胞中最为重要的部分之一。
细胞核内包含了遗传物质DNA，控制着细胞的生物学活动。
因此，对细胞核的分离与鉴定具有重要意义。
本实验旨在通过一系列操作步骤，成功分离和鉴定细胞核。
实验材料与方法：实验所需材料包括：小麦胚芽、细胞壁溶解液、细胞质溶解液、显微镜玻片、盖玻片、显微镜、荧光染色剂。
首先，将小麦胚芽切碎并加入适量的细胞壁溶解液，用振荡器摇匀，使细胞壁完全溶解。
然后，离心胚芽悬液，将上清液收集到离心管中。
接下来，加入适量的细胞质溶解液，使细胞质溶解。
再次离心，将上清液收集到另一个离心管中。
最后，将收集到的上清液滴在显微镜玻片上，加入荧光染色剂，覆盖盖玻片，用显微镜观察。
实验结果与讨论：在显微镜下观察，我们可以清晰地看到细胞核的存在。
细胞核呈现出圆形或椭圆形的形态，大小约为细胞的1/10左右。
细胞核内部有明显的染色质，即DNA。
通过荧光染色剂的作用，细胞核呈现出明亮的荧光信号，进一步证实了细胞核的存在。
细胞核的分离与鉴定实验是一项基础的生物学实验，它为我们研究细胞的结构和功能提供了重要的手段。
通过分离细胞核，我们可以更加深入地了解细胞核的组成和特点。
细胞核是细胞中的遗传信息中心，它包含了细胞的遗传物质DNA，控制着细胞的生物学活动。
因此，研究细胞核的结构和功能对于我们理解生命的本质和生物体的发育过程具有重要意义。
此外，细胞核的分离与鉴定还可以应用于其他领域的研究。
例如，在医学领域，通过细胞核的分离和鉴定，可以帮助医生诊断疾病。
某些疾病的发生与细胞核的异常有关，通过对细胞核的观察和分析，可以发现异常细胞核的存在，从而提前发现和治疗疾病。
细胞核的分离与鉴定实验虽然简单，但对于我们理解细胞结构和功能具有重要意义。
通过这个实验，我们可以直观地观察到细胞核的存在和形态，进一步认识细胞的基本组成和结构。
同时，这个实验还可以应用于其他领域的研究，为我们的科学研究和医学诊断提供有力的支持。
细胞核的分离与鉴定实验报告
细胞核的分离与鉴定实验报告实验报告：细胞核的分离与鉴定一、实验目的1.掌握细胞核分离与鉴定的原理和方法。
2.了解细胞核的结构和功能。
3.探究不同细胞类型中核仁的大小和形状。
二、实验原理细胞核是细胞的重要组成结构，其内含有DNA、RNA、核糖体等重要物质，对细胞的遗传、代谢和增殖等生命活动起着关键作用。
细胞核的分离与鉴定是生物科学研究中的基本技术之一，通过对细胞核的观察和分析，可以深入了解细胞的结构和功能，为研究细胞的生理和病理过程提供依据。
本实验采用差速离心法进行细胞核的分离与鉴定。
差速离心法是一种常用的分离细胞器的方法，通过在不同转速下进行离心，使不同质量的细胞器和细胞碎片得到分离。
通过观察细胞核的形态和结构，可以初步鉴定细胞的类型。
三、实验步骤1.准备实验材料：新鲜组织样品（如肝脏、肾脏等）、生理盐水、PBS缓冲液、DAPI染色液、离心管、移液器、离心机等。
2.组织样品处理：将新鲜组织样品用生理盐水清洗干净，用滤纸吸干水分，称重后加入适量PBS缓冲液，用匀浆器进行匀浆化处理。
3.细胞核分离：将匀浆化的组织样品进行差速离心，先以低速离心去除大部分细胞质和细胞碎片，再以高速离心获得较纯的细胞核沉淀。
4.细胞核鉴定：将分离到的细胞核沉淀用DAPI染色液进行染色，观察细胞的形态和结构，记录不同细胞类型中核仁的大小和形状。
5.数据分析：对观察到的细胞核形态和结构进行统计和分析，计算不同细胞类型中核仁的平均大小和形状因子等指标。
四、实验结果与数据分析1.实验结果（请附上观察到的细胞核图片）（1）肝脏细胞核：形态规则，核仁明显，颜色深蓝。
（2）肾脏细胞核：形态相对不规则，核仁较小，颜色较浅。
（3）肌肉细胞核：形态规则，核仁不明显，颜色浅蓝。
（4）神经细胞核：形态不规则，核仁较大且形状多变，颜色深蓝。
2.数据分析（请附上表格记录不同细胞类型中核仁的平均大小和形状因子）通过数据分析，我们发现不同细胞类型中核仁的大小和形状存在差异。
细胞核的分离与鉴定
细胞分化与发育
细胞核内的基因表达在不同细 胞类型和发育阶段中具有特异 性，对细胞的分化与发育起着 关键作用。
疾病发生与发展
许多疾病的发生和发展与细胞 核内的基因变异和异常表达密 切相关，因此对细胞核的研究 有助于疾病的诊断和治疗。
02
细胞核的分离
细胞核分离的方法
差速离心法
利用不同转速离心，将细胞内不同组分进行分离。
100%
核膜和核孔
细胞核具有核膜和核孔，核膜是 细胞核的边界，核孔则是核内外 物质交换的通道。
80%
染色质和核仁
染色质是DNA和蛋白质的复合物， 呈细丝状，而核仁则是染色质较为 密集的区域，与某种RNA（rRNA） 的合成有关。
细胞核的染色和观察
染色原理
染色是通过化学反应将细胞核 中的DNA或蛋白质着色，以便 在显微镜下观察。
方差分析
通过方差分析方法，比较不同处理组之间的差异， 以确定实验因素对细胞核分离效果的影响。
3
相关性和回归分析
通过相关性和回归分析方法，探讨细胞核形态特 征与染色质状态之间的关系，以及其对细胞分裂 的影响。
05
结论
研究成果总结
成功分离出细胞核
01
通过优化实验条件，我们成功地从不同类型的细胞中分离出了
细胞核的分离与鉴定
目
CONTENCT
录
• 引言 • 细胞核的分离 • 细胞核的鉴定 • 实验结果和数据分析 • 结论
01
引言
目的和背景
目的
细胞核是细胞内最重要的细胞器之一，负责储存遗传物质、转录 和翻译等重要功能。对细胞核的分离与鉴定有助于深入了解细胞 核的结构和功能，为研究细胞生物学、遗传学和疾病机制提供重 要基础。
细胞核的分离与鉴定实验报告
细胞核的分离与鉴定实验报告实验目的：通过一定的操作，成功分离出细胞核，并鉴定分离所得物质为细胞核以及其特征。
实验原理：细胞是生命的基本单位，所有的生物体都由细胞构成。
在细胞的组织中，有一个特别的细胞器叫做细胞核。
细胞核是一个直径大约为 5-10 微米，由一个或数个核仁、核膜和染色体组成的细胞器。
细胞核对细胞的生命活动起到基础性的作用，包括维持遗传物质的稳定性和传递性、控制代谢和生长等。
因此，对细胞核进行分离和鉴定，是细胞学领域的基本实验。
实验器材：人口笔尖、离心机、pH 滴定管、研钵、离胶鞭、显微镜、注射器、过滤纸、胶体金颗粒。
实验步骤：1. 取出一只新鲜、健康的葫芦果实，用小刀将果实表面横截开，取出其中白色的组织（葫芦瓢），放入研钵中，加入 2ml 的 0.9% 的生理盐水，用人口笔尖将其研碎。
2. 将研钵中的混合细胞悬液倒入离心管中，用离心机离心，离心 5 分钟，5000 转/分钟。
离心后取出上清液，用 pH 滴定管测试 pH 值，若 pH 值大于 7，用 HCl 调酸直至 pH 值等于 7，然后离心涂片。
3. 取出过滤纸，放在玻璃片上，再利用离胶鞭将离心管中上清液吸起，滴在纸上，并尽量将离沉淀分段滴在纸上，用过滤纸将滴在纸上的混合溶液涂于玻璃片上，然后用注射器精心吸取膏状沉淀，点于玻璃片上。
4. 取出一张干净的玻璃片，用口将玻璃片收口的一角（如舌部）点至饱和，将收口反转，顺着玻璃片推开成 45 度，使一部分水超过玻璃片口，不断滴移，使水不断流淌，整个玻璃片上涂成薄薄的水膜。
5. 将小规模的胶体金颗粒加入玻璃片上，用滴管滴加几滴，然后用注射器加入一到两滴分离所得的溶液，在玻璃片上用注射器底部均匀的推压，将溶液和胶体金颗粒充分混合。
6. 斜插一只中型显微镜，用低倍物镜初步观察是否有细胞核出现，再用高倍物镜进一步观察，如未能找到核，可重新进行实验，直至找到核为止。
实验结果：通过以上实验操作，成功分离出细胞核，并用胶体金颗粒标记来鉴定所得物质为细胞核。
细胞核的分离与鉴定
细胞核的分离与鉴定细胞核的分离与鉴定是生物学实验中的一项重要技术，主要用于研究细胞核的结构和功能。
以下是细胞核的分离与鉴定的详细步骤：一、实验准备1.实验器材：离心管、移液管、滴管、显微镜、冷冻离心机、细胞刮刀、细胞计数器等。
2.实验试剂：非离子表面活性剂（如Triton X-100）、低熔点琼脂糖、LDS样品缓冲液、蛋白酶抑制剂等。
3.实验样品：哺乳动物细胞或组织样本。
二、实验步骤1.细胞培养：将哺乳动物细胞或组织样本在适宜的培养条件下进行培养，以便获得足够的细胞用于实验。
2.细胞处理：将培养细胞用细胞刮刀轻轻刮下来，收集到离心管中。
加入适量的非离子表面活性剂，使细胞膜溶解，以便分离细胞核。
3.细胞核分离：将处理后的细胞用低熔点琼脂糖进行分离，低熔点琼脂糖能够根据密度不同将细胞核与细胞质分开。
将分离出的细胞核洗涤、离心，去除残留的细胞质和其他杂质。
4.细胞核鉴定：将分离出的细胞核溶解在LDS样品缓冲液中，加入蛋白酶抑制剂，以防止蛋白质降解。
通过蛋白质印迹技术或免疫荧光技术对细胞核进行鉴定，以确定其质量和纯度。
5.数据分析：对鉴定结果进行分析，比较不同样品之间的差异，为后续研究提供依据。
三、注意事项1.实验过程中要严格控制实验条件和操作步骤，以确保实验结果的准确性和可靠性。
2.细胞处理时要注意轻柔操作，避免对细胞造成损伤。
3.低熔点琼脂糖分离细胞核时要注意温度控制，避免温度过高导致琼脂糖糊化。
4.鉴定细胞核时要注意选择合适的抗体和二抗，以确保检测结果的特异性。
5.数据分析时要对数据进行统计检验和比较分析，以确定差异的显著性和可靠性。
6.实验结束后要及时将实验数据整理成实验记录，以便后续查阅和分析。
7.实验过程中要注意安全问题，如戴手套、避免直接接触化学试剂等。
8.实验结束后要及时清理实验场地和废弃物，以免对环境和健康造成影响。
9.本实验结果仅用于学习和研究目的，不能用于临床诊断或其他非科学研究用途。
细胞生物学设计性实验：细胞核的分离鉴定
细胞生物学设计性实验：细胞核的分离鉴定医学细胞生物学设计型实验设计报告班级10级k-7班评分实验项目：细胞核的分离与鉴定实验原理：1、细胞内各种结构的比重和大小不同，在同一离心场内其沉降速度也不同。
所以，用差速离心法可将细胞内各种细胞器及组分分级分离出来。
差速离心法也是用来研究亚细胞成分的化学组成，理化特性及其功能的主要手段。
2、分离细胞核最常用的方法是将组织制成匀浆，在特定的条下进行离心分离，然后分析鉴定。
3、匀浆是指在低温条下，将组织放入匀浆器，加入等渗匀浆介质进行研磨，破碎细胞，使之成为各种细胞器及其包含物的匀浆液。
实验步骤：1、处死：断头处死小白鼠，手提尾部使其学业尽量流出。
2、取材：迅速开腹取肝，在盛有生理盐水的小烧杯中反复洗涤，称取湿重约为1g的肝组织放在烧杯中。
3、匀浆：加油8ml预冷的0.25mol/L蔗糖0.003mol/L绿化高永夜于烧杯中，尽量剪碎肝组织，将剪碎的刚组织倒入玻璃匀浆器，是匀浆器下端侵入盛有冰块的器皿（如冰盘）。
左手握持匀浆器，右手将匀浆捣杆垂直插入管中匀浆，直至看不到明显的组织块。
4、过滤：用8层纱布（先用少量生理盐水或蔗糖液润湿纱布）过滤匀浆液于离心管中。
5、离心：在天平上平衡每对离心管，2500r/min离心15min，取上清液于另一离心管中。
6、涂片：取上清液制一张涂片（涂片1）。
将原离心管中剩余上清液吹打成沉淀成悬液，另制一张涂片（涂片2），自然干燥。
7、染色：分别在涂片1和2上低价甲苯胺蓝染液，染色5到7分钟（即滴染）。
8、洗涤：冲去染液，晾干。
9、镜检：结合实验结果的描述，镜下观察分析。
注意事项：1.操作规范，防止试剂污染。
2.细胞悬液的涂片制作要轻柔。
3.使用离心机要注意平衡，转速从低到高。
预期结果：低倍镜下找到标本，再换高倍镜，可见肝细胞核已游离出来，被染成蓝紫色，圆形，中央有2到4个甚至更多个深蓝色的核仁。
实验用品：材料：小白鼠肝脏。
试剂：生理盐水、0.25mol/L蔗糖0.003mol/L氯化钙溶液、1%甲苯胺兰染液。
细胞核的分离与鉴定设计型实验设计报告_(2)
实验项目：细胞核的分离与鉴定实验原理：分离细胞核的可用方法有吸出法、原生质体破裂法、差速离心法排和排除法。
差速离心法是根据细胞内各种细胞结构的比重和大小不同，因而在同一离心场内的沉降速率不同从而将细胞内的结构分级分离出来。
本实验就采用差速离心法。
细胞核的鉴定，因为细胞核中主要含DNA，而DNA是碱性蛋白，可用甲苯胺蓝染液可使细胞核内碱性蛋白呈现出来。
实验器材：显微镜，普通离心机，离心管，滴管，玻璃漏斗，纱布，烧杯，解剖剪，镊子，玻璃匀浆器，载玻片/盖玻片，染色盘架，小白鼠肝脏。
实验试剂：甲苯胺蓝染液，蒸馏水，0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L的CaCl2溶液，生理盐水实验步骤：（1）、用颈椎脱臼法处死小白鼠，迅速解开其腹腔取出肝脏，去出结缔组织，剪成小块，尽快置于盛有0.9%NaCl的烧杯中。
反复洗涤尽量除去血污，用滤纸吸去表面的液体。
（2）、将湿重为1g的肝组织放入烧杯中，用量筒取8ml预冷的0.25mol/L 蔗糖-0.003mol/L的CaCl2溶液，先加少量溶液于烧杯中，尽量剪碎肝组织后全部加入。
（3）、将剪碎的肝组织导入匀浆管中，使匀浆器下端侵入盛有冰块的器血中，左手持，右手将匀浆捣杆垂直插入管中，上下转动研磨3-5次。
用3层纱布过滤于匀浆管中，然后制备一张涂片①，自然干燥。
（4）、将装有滤液的离心管配平后，放入普通离心机以2500r/min离心15min,弃去上清液。
（5）、用6mol 0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L的CaCl2溶液悬浮沉淀物，以2500r/min离心15min 弃去上清液，将残留液体用气管吹成悬液，滴一滴于干净的载盖玻片上，制成涂片②，自然干燥。
（6）在①·②上滴加甲苯胺蓝染液，染色5-7min，洗涤干燥后镜检。
⑺记录观察结果注意事项：（1）尽可能充分剪碎肝组织，缩短匀浆时间，整个分离过程不宜过长，以保持组分生理活性。
（2）将匀浆液置于蔗糖溶液上层时要沿管壁小心加入，同时及时离心，以防止浆液中的颗粒自然下沉过快，影响后面的离心分层效果。
医学细胞生物学设计型实验——细胞核的分离与鉴定
细胞核的分离和鉴定
注意事项：
（1）尽可能充分剪碎肝组织，缩短匀浆时间，整 个分离过程不宜过长，以保持组分生理活性。
（2）将匀浆液过滤于离心管中后应及时离心，以 防止浆液中的颗粒自然下沉过快，影响后面的离 心分层效果。
（3）涂片制作过程中把握好涂片的力度，不可太 厚。
细胞核的分离和鉴定
（4）染色后的洗涤要注意时间，不可过长，避 免将染色洗去，观察不到细胞核。 （5）开腹取出肝后，用生理盐水反复冲洗，避 免血细胞对实验的影响。
第一大组
医学细胞生物学设计型实 验设计报告——细胞核
的分离与鉴定
成员：彭英、向欢欢、令狐琪琦、杨秀麟、敬 昱宸、李明先
细胞核的分离和鉴定
实验原理
一、分离细胞质与细胞核
１.破碎细胞自溶法 酶处理 表面活性剂处理法
细胞破碎的方法
物理法
细胞核的分离和鉴定
差速沉降离心法 离 心 方 法 速率区带离心法
密度梯度区 带离心法
等密度区带离心法
细胞核的分离和鉴定
差速离心differential centrifugation
低速
加速
高速
差速沉降离心法一般用于分离沉降速度相 差较大（一般为10倍）的颗粒。
细胞核的分离和鉴定
实验步骤：
1、 颈椎脱臼法处死小白鼠。迅速开腹取肝，在盛有 生理盐水的小烧杯中反复洗涤。
另外，肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色 性物质遇到甲苯胺蓝可呈易染性紫红色，因此可用 于肥大细胞的检测，例如色素性荨麻疹。
细胞核的分离和鉴定
预期结果：
低倍镜下找到标本，再换到高倍镜， 可见肝细胞的细胞核已经游离出来，圆形， 被染成蓝紫色，核仁有2到4个。
细胞核的分离和鉴定
细胞生物设计型实验
实验仪器、设备、器具表
普通光学显微镜、 离心机、 恒温水浴 箱、 离心管、 胶头滴管、 载玻片、盖玻片、 Alsver液、生理盐水、GKN液、50% PEG 液
注意事项:
⑴、胞融合对温度的敏感很高，过高和过低的温度 都会严重影响细胞融合，其温度应该控制在 37℃～39℃范围内。 ⑵、PEG有毒性，此次实验对PEG的浓度要求很高， 实验时应该选用分子量在1500～6000PEG的浓度 以50%为好。 ⑶、PH是该验细胞融合成功的关键，所以这次实验 所配制的试剂PH应控制在7.0～7.2。 ⑷、在镜检观察时候应注意区别细胞融合与重叠的 蟾蜍血红细胞。
实验步骤：
1、处死：断头处死小鼠，手提尾部使腹内血液尽量流出。 2、取材：迅速开腹取肝，在盛有生理盐水的小烧杯中反复洗涤，取湿重 约1g的肝脏组织放在烧杯中。 3、匀浆：加入8ml预冷的0.25mol/L蔗糖-0.003mol/LCaCl2中溶液于烧杯 中，尽量剪碎组织，再将剪碎的组织放入玻璃匀浆器中进行匀浆， 匀浆器要处在低温环境中，直到看不到明显的组织块为止。 4、过滤：用8层纱布（生理盐水或蔗糖溶液润湿的纱布）过滤匀浆液。 5、离心：将过滤后的匀浆液转入离心管中，再在天平上平衡每对离心管， 2500r/min离心15min，取上清液于另一离心管中。剩下的沉淀和上 清液和沉淀制成悬液。 6、涂片：取上清液和悬液分别各制作一张涂片，编号为a 、b再自然干 燥。 7、染色：分别在涂片a 、b上滴加甲苯胺蓝染液，染色5～7min。 8、洗涤：冲去染液，晾干。 9、镜检：结合实验结果的描述，镜下观察分析。
实验步骤：
1、先将蟾蜍处死取蟾蜍血2ml和2ml Alsver液混合后，再加 上6ml Alsver混匀后制悬液。（可在4℃下保存） 2、取①溶液1ml加上4ml 0.85%的NaCl溶液进行一下两次离 心处理。 ①1200r/min离心5min(去上清液再加入5ml 的 0.85%NaCl溶液 ②1000-1200r/min离心5min 3、将上步最后一次的沉降雪球（去上清液后，约0.10.2ml）,加入GKN液，至1-2ml使之成10%的细胞悬液） 4、取上述10%的血球悬液1ml,加入3ml GKN液，使每毫升 含血球15000万个，即15×107个/ml 5、取步骤4中所得悬液1ml+0.5ml的PEG液，均匀滴片，在 常温下2-3min后即可镜下观察。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验项目：细胞核的分离与鉴定
实验原理：
分离细胞核的可用方法有吸出法、原生质体破裂法、差速离心法排和排除法。
差速离心法是根据细胞内各种细胞结构的比重和大小不同，因而在同一离心场内的沉降速率不同从而将细胞内的结构分级分离出来。
本实验就采用差速离心法。
细胞核的鉴定，因为细胞核中主要含DNA，而DNA是碱性蛋白，可用甲苯胺蓝染液可使细胞核内碱性蛋白呈现出来。
实验器材：显微镜，普通离心机，离心管，滴管，玻璃漏斗，纱布，烧杯，解剖剪，镊子，玻璃匀浆器，载玻片/盖玻片，染色盘架，小白鼠肝脏。
实验试剂：甲苯胺蓝染液，蒸馏水，0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L的CaCl2溶液，生理盐水
实验步骤：
（1）、用颈椎脱臼法处死小白鼠，迅速解开其腹腔取出肝脏，去出结缔组织，剪成小块，尽快置于盛有0.9%NaCl的烧杯中。
反复洗涤尽量除去血污，用滤纸吸去表面的液体。
（2）、将湿重为1g的肝组织放入烧杯中，用量筒取8ml预冷的0.25mol/L 蔗糖-0.003mol/L的CaCl2溶液，先加少量溶液于烧杯中，尽量剪碎肝组织后全部加入。
（3）、将剪碎的肝组织导入匀浆管中，使匀浆器下端侵入盛有冰块的器血
中，左手持，右手将匀浆捣杆垂直插入管中，上下转动研磨3-5次。
用3层纱布过滤于匀浆管中，然后制备一张涂片①，自然干燥。
（4）、将装有滤液的离心管配平后，放入普通离心机以2500r/min离心15min,弃去上清液。
（5）、用6mol 0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L的CaCl2溶液悬浮沉淀物，以2500r/min离心15min 弃去上清液，将残留液体用气管吹成悬液，滴一滴于干净的载盖玻片上，制成涂片②，自然干燥。
（6）在①·②上滴加甲苯胺蓝染液，染色5-7min，洗涤干燥后镜检。
⑺记录观察结果
注意事项：
（1）尽可能充分剪碎肝组织，缩短匀浆时间，整个分离过程不宜过长，以保持组分生理活性。
（2）将匀浆液置于蔗糖溶液上层时要沿管壁小心加入，同时及时离心，以防止浆液中的颗粒自然下沉过快，影响后面的离心分层效果。
（3）涂片制作过程中把握好涂片的力度，不可太厚。
（4）染色后的洗涤要注意时间，不可过长，避免将染色洗去，观察不到细胞核。
（5）开腹取出肝后，用生理盐水反复冲洗，避免血细胞对食盐的影响。
预期结果：
在低、高倍镜下，可以观察到经.0.1%碱性固绿染色的小白鼠肝细胞的细胞核体被染成绿色。
说明这是碱性蛋白，即细胞核已游离出来。
涂片在高倍镜下可见肝细胞核已游离出来，被染成蓝紫色、圆形、中央有
2—4个甚至更多个深蓝色的核仁。
细胞核呈紫红色，上面附着少量胞质及浅蓝色碎片。