石斛质量标准的制定

石斛
Shihu
CAULIS DENDROBII
本品为兰科植物金釵石斛Dendrobium nobile Lindl.、铁皮石斛 D.candidum Wall.ex Lindl.、马鞭石斛D.fimbriatum Hook.var/oculatum Hook.鼓槌石斛Dendrobium chrysotoxum Lindl.、流苏石斛Dendrobium fimbriatum Hook．var．oculatum Hook．新鲜或干燥茎。

全年均可采收，以春末夏初和秋季采收者为好，鲜用者采收后以湿沙贮存。

干用者去净根、叶，用开水略烫，蒸透或以砂炒后，反复搓去叶鞘，晒干。

铁皮石斛剪去部分根后，边炒变扭成螺旋状或弹簧状，烘干，习称“铁皮枫斗（耳环石斛）”。

【性状】鲜石斛圆柱形或扁圆柱形长约30cm，直径0.4-1.2cm。

表面黄绿色，光滑或有纵纹，节明显，色较深，节上有膜质叶鞘。

肉质，多汁，易折断。

气微，味微苦而回甜，嚼之有黏性。

金釵石斛扁圆柱形，长20-30cm，直径0.4-0.6cm，节间长2.5-3cm。

表面金黄色或黄中带绿色，有深纵沟。

质硬而脆，断面较平坦。

味苦。

铁皮石斛螺旋状或弹簧状，一般有2-4个旋纹，茎直拉后长3.5~8cm。

直径0.2~0.3cm。

表面黄绿色，有细纵纹，一段可见茎基部留下的短须根。

质坚实，易折断，断面平坦。

嚼之有黏性。

马鞭石斛、流苏石斛等呈长圆柱形，长4020～120150cm，直径0.5～0.81.2cm，节明显，节间长32～4.56cm。

表面黄色至暗黄色，有深纵槽。

质疏松，断面平坦或呈纤维性。

味淡或微苦，嚼之有粘性。

鼓槌石斛茎呈粗纺锤形, 具3～7节,中部直径1~3 cm。

表面光滑，金黄色，有明显凸起的棱。

质轻而松脆，断面海绵质。

气微，味淡，嚼之有粘性。

【鉴别】（1）本品横切面：金钗石斛表皮细胞1列，扁平，外被鲜黄色角质层。

基本组织细胞大小较悬殊，有壁孔，散在多数外韧型维管束，排成7～8圈。

维管束外侧纤维束新月形或半圆形，其外侧薄壁细胞有的含类圆形硅质块，木质部有1～3个导管直径较大。

含草酸钙针晶细胞多见于维管束旁。

铁皮枫斗表皮细胞外壁及侧壁稍增厚、微木化。

维管束略排成4～5圈，外侧小型薄壁细胞中有的含硅质块。

含草酸钙针晶束细胞多见于近表皮处。

鼓槌石斛表皮细胞扁平，外壁及侧壁增厚，胞腔狭长形；角质层淡黄色。

基本组织细胞大小差异较显著。

多数外韧型维管束略排成10~12圈。

木质部导管大小近似。

有的可见含草酸钙针晶束细胞。

流苏石斛等表皮细胞扁圆形或类方形，壁增厚或不增厚。

基本组织细胞大小相近或有差异，散列多数外韧型维管束，略排成数圈。

维管束外侧纤维束新月形或呈帽状，其外缘小细胞有的含硅质块；内侧纤维束无或有，有的内外侧纤维束连接成鞘。

有的薄壁细胞中含草酸钙针晶束和淀粉粒。

马鞭石斛表皮细胞扁圆形，外壁及侧壁增厚，木化，有层纹。

基本组织细胞大小相近，有壁孔，维管束略排成3～4圈。

粉末灰绿色或灰黄色。

角质层碎片黄色；表皮细胞表面观呈长多角形或类多角形，垂周壁连珠状增厚。

束鞘纤维成束或离散，长梭形或细长，壁较厚，纹孔稀少，周围具排成纵行的含硅质块的小细胞。

木纤维细长，末端尖或钝圆，壁稍厚，纹孔点状、斜裂缝状、十字状、人字状，或具缘纹孔。

网纹、梯纹或具缘纹孔导管直径12～50μm。

草酸钙针晶成束或散在。

（2）金钗石斛取本品（鲜品干燥后粉碎）粉末1g，加甲醇10 ml，超声处理30 分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。

另取石斛碱对照品适量，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶
液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取供试品溶液20 μl、对照品溶
液5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚-丙酮（7:3）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以碘化铋钾试液。

供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

鼓槌石斛取本品（鲜品干燥后粉碎）粉末1g，加甲醇50 ml，超声处理45 分钟，滤过，取续滤液25 ml, 蒸干，残渣加甲醇5 ml使溶解，作为供试品溶液。

另取毛兰素对照
品适量，加甲醇制成每1 ml含0.2 mg的溶液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法(附录VI B)
试验，吸取供试品溶液5～10µl、对照品溶液5 μl，分别点于同一高效硅胶Ｇ薄层板上，
以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯（6:4）为展开剂，展开，展距8 cm，取出，晾干，喷以10％
硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。

供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

流苏石斛等取本品（鲜品干燥后粉碎）粉末1g，照上述鼓槌石斛项下的方法，同法
制成供试品溶液。

另取石斛酚对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法（附录ⅥB）试验，吸取供试品溶液5～10µl和对照品溶液5µl，分别点于同
一高效硅胶Ｇ薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯（6:4）为展开剂，展开，展距8 cm，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。

供试品色谱中，在与对
照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

【浸出物】水溶性浸出物含量不得低于35％。

【检查】水分干石斛不得过 12.0%（附录Ⅸ H第一法）。

总灰分干石斛不得过5.0 % （附录IX K）。

【含量测定】金钗石斛照气相色谱法(附录VI E)测定。

色谱条件与系统适用性试验弹性石英毛细管柱(柱长30m，内径0.25mm，膜厚度
0.25µm)DB-1(100%二甲基聚硅氧烷)；程序升温；初始温度为80 ℃，以每分钟10 ℃的速率
升温至250 ℃，保持5 分钟；进样口温度为250 ℃，检测器温度为250 ℃。

理论板数按石
斛碱峰计算应不低于10000。

校正因子测定取萘对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含25μg的溶液，作为
内标溶液。

取石斛碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含25μg的对照品溶液，
摇匀。

精密量取内标溶液1ml置5 ml量瓶中，加对照品溶液至刻度，摇匀，吸取1μl注入
气相色谱仪，计算校正因子。

测定法取本品（鲜品干燥后粉碎）粉末（过三号筛）约0.25 g，精密称定，置100 ml 圆底烧瓶中，精密加入含0.05 %甲酸的甲醇溶液50 ml，密塞，称定重量，加热回流3 小时，放冷，再称定重量，用含0.05 %甲酸的甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液备用。

精密量取内标溶液1ml置5 ml量瓶中，加续滤液至刻度，摇匀，吸取1 μl注入气相色谱仪，测定，即得。

本品按干燥品计算，含石斛碱（C
16H
25
NO
2
）不得少于0.40 %。

鼓槌石斛照高效液相色谱法(附录VI D)测定。

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.05%磷酸溶液(37：63)为流动相；检测波长为230 nm。

理论板数按毛兰素峰计算应不低于6000。

对照品溶液的制备取毛兰素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含 15 µg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品（鲜品干燥后粉碎）粉末（过三号筛）约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 ml，称定重量，浸渍20 分钟，超声处理（功率250W，频率40kHz）45 分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤
液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 µl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品按干燥品计算，含毛兰素(C
18H
22
O
5
)不得少于0.030%
【炮制】干品除去残根，洗净，切段，干燥。

【性味与归经】甘，微寒。

归胃、肾经。

【功能与主治】益胃生津，滋阴清热。

用于阴伤津亏，口干烦渴，食少干呕，病
后虚热，目暗不明。

【用法与用量】6～12g，鲜品15～30g。

入复方宜先煎，单用可久煎。

【贮藏】干品置通风干燥处，防潮；鲜品置阴凉潮湿处，防蛀。

石斛质量标准的起草说明
一、来源
《中国药典》（2005年版）来源仅有金釵石斛Dendrobium nobile Lindl.、铁皮石斛D.candidum Wall.ex Lindl.、马鞭石斛D.fimbriatum Hook.var/oculatum Hook.的新鲜或干燥茎，经调查，还来源鼓槌石斛Dendrobium chrysotoxum Lindl.、流苏石斛Dendrobium fimbriatum Hook．var．oculatum Hook．等。

二、鉴别
性状鉴别：
1．石斛（金钗石斛）茎下部圆柱形，中部及上部扁圆柱形，向
上稍呈"之"字形弯曲，长18～42（～60）cm，中部直径4～10mm，
节间长1.5～6cm。

表面金黄色或绿黄色，有光泽，具深纵沟及纵
纹，节稍膨大，棕色，常残留灰褐色叶鞘。

质轻而脆，断面较疏松。

气微，味苦。

鲜茎直径1～1.5cm，黄绿色，肉质而脆；折断面较
平坦。

2．粉花石斛（环草）茎细长圆柱形，常弯曲、盘绕成团或捆成把，长11～
40cm，直径1～2（～3）mm，节间长0.4～2.3cm。

表面金黄色有光泽，具细
纵纹。

质柔韧而实，断面较平坦。

气无，味淡，有粘性。

3．束花石斛（黄花）茎细长圆锥形，长23～200cm，直径2～5mm，节间
长2～3.5cm。

表面金黄色或棕黄色，有纵纹。

体轻质实，易折断，断面略
纤维性，嚼之有粘性。

（照片左）
4．铁皮石斛（耳环石斛）茎呈螺旋形或弹簧状，一般2～4
个旋纹，拉直后长3.5～8cm，直径0.15～0.3cm，节间长1～
3.5cm。

表面黄绿色或黄色，有细纵纹，有的一端可见茎基部留
下的短须根。

质坚实，易折断，断面平坦，嚼之有粘性。

5．流苏石斛（马鞭石斛）茎呈细长圆锥形，上部有少数分枝，长30～
150cm，直径2～8mm，节间长2～4.5(～5.1)cm。

表面棕黄色，有8～9
条深纵沟。

质疏松，断面呈纤维性。

气微，味微苦。

商品常切成1.5～
3cm长段，切面灰白色。

（照片右）
干品均以色金黄、有光泽、质柔韧者为佳；耳环石斛以色黄绿、饱满、
结实者为佳。

显微鉴别：
1．石斛（金钗石斛）茎中部节间（直径约7mm）横切面：扁圆形，边缘有浅波。

表皮细胞1列，扁平，侧壁微木化；角质层橙黄色，厚5～8μm。

基本薄壁组织细胞大小较显著，散列多数有限外韧型维管束，略排成7～8圈。

维管束外侧纤维群有1～4（～6）列纤维，纤维直径22～35（～42）μm，壁厚1.5～5（～7）μm，其外缘嵌有细小薄壁细胞，有的含类圆形硅质块，直径5～9μm；韧皮部较大，约至20余细胞；木质部导管有1（～4）个较大，直径至51μm；内侧无纤维或有1～2列纤维，直径15～42μm，壁厚2～3（～5）μm。

本品含草酸钙针晶束，长50～130μm。

石斛
左：茎横切面组织简图（×6）右：维管束构造（×175）
2．粉花石斛（环草）茎中部节间（直径约3mm）横切面：基本薄壁组织细胞大小近似，维管束略排成3～4圈。

维管束外侧纤维群新月形或半圆形，有2～5列纤维，纤维直径约27μm，壁厚1.6～3μm，硅质块直径5～10μm；木质部导管有1～2个较大，直径至30（～40）μm；内侧无纤维或有1～2列纤维。

含草酸钙针晶细胞多见于维管束旁，针晶束长50～74μm。

粉花石斛
左：茎横切面组织简图（×18）右：维管束构造（×315）
3．束花石斛（黄草）茎中部节间（直径约5mm）横切面：基本薄壁组织细胞大小较近似，维管束略排成5～6圈。

外侧纤维群半月形，有1～6列纤维，纤维直径至29μm，壁厚1.5～5μm，硅质块直径3～10μm；木质部导管有1～3个较大，直径至48μm；内侧无纤维或有1～2列纤维。

含草酸钙针晶细胞多见于维管束旁，针晶束长（33～）47～83μm。

束花石斛
左：茎横切面组织简图（×10）右：维管束构造（×216）
4．铁皮石斛（耳环石斛）茎中部节间（直径约4.5mm）横切面：基本薄壁组织细胞大小较近似，维管束略排成4～5圈。

外侧纤维群帽状，有1～4（～5）列纤维，纤维直径至21μm，壁厚3～6μm，硅质块直径5～11μm；木质部导管大小近似，直径至24μm；内侧纤维群有1～2（～3）列纤维。

含草酸钙针晶束细胞多见于近表皮处，，针晶束长60～108μm，针晶直径至3μm。

铁皮石斛
左：茎横切面组织简图（×15）右：维管束构造（×270）
5．流苏石斛（马鞭石斛）茎中部节间（直径约8mm）横切面：略呈扁圆形，边缘有8～9个深波。

表皮细胞扁圆形，外壁及侧壁增厚，木化，有层纹。

皮下层3～4列纤维壁稍厚。

维管束略排成6～7圈。

外侧纤维群近圆形，有2～8列纤维，纤维直径至29μm，壁厚3～8μm，硅质块较多，直径6～16μm；木质部导管有1～4个较大，直径至54μm；内侧无纤维或有1列纤维。

草酸钙针晶束少见。

流苏石斛
左：茎横切面组织简图（×10）右上：表皮及皮下层细胞（×249）右上：维管束构造（×249）理化鉴别
薄层层析样品制备：取本品粗粉或碎块0.5g，置25ml带塞三角瓶中，加浓氨水6滴，使粉末润湿，密塞放置15分钟，加氯仿5ml，冷浸过夜，再于50℃温浸6小时，放冷滤过，滤液浓缩至干，加氯仿0.1ml溶解，供点样用。

点样量10μl，以石斛碱为对照。

吸附剂：硅胶G（青岛），加0.5%CMC溶液，湿法铺板，105℃活化半小时。

展开剂：氯仿-甲醇（10∶0.8），氨蒸气饱和下。

展距10cm。

显色剂：改良碘化铋钾试液，喷雾后斑点均显桔红色。

石斛薄层层析图谱
S：石斛碱 1.钩状石斛 2.流苏石斛 3.石斛 4.罗河石斛
5.束花石斛
6.铁皮石斛
7.重唇石斛
8.粉花石斛
三、石斛中总多糖的含量测定
1.材料、仪器与试药
1.1材料
迭鞘石斛药材于2007年5月购于四川夹江县华头镇，经成都中医药大学中药鉴定教研室陈新副教授鉴定其为兰科迭鞘石斛Dendrobium denneanum Kerr.的干燥根。

1.2仪器与试剂
Uv-1100紫外-可见分光光度计（上海天美科学仪器有限公司）；BP121S电子分析天平（万分之一）（德国sartorius公司）；BP211D电子分析天平（十万分之一）（德国sartorius公司）；SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；R-21型旋转仪（上海申胜生物科技有限公司）；苯酚，浓硫酸、乙醇等均为分析纯（成都科龙化工试剂厂）
2.方法与结果
2.1溶液的制备
2.1.1对照品溶液的制备
精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品10.30mg。

置100ml容量瓶中加适量蒸馏水溶解，稀释至刻度，摇匀，即得（没1ml含葡萄糖0.1030mg）
2.1.2 供试品溶液的制备
取迭鞘石斛粗粉2.5g，精密称定，置于圆底瓶中，加80%乙醇100ml回流提取1小时，趁热过滤，药渣挥干，加蒸馏水85ml，回流1小时，趁热过滤，用5吗；热水洗烧瓶和药渣3次，待冷却后移入250ml容量瓶中，用蒸馏水定容，摇匀，即得。

2.1．3苯酚显色液的制备
将50ml浓硫酸缓缓加入10ml水中冷却至室温，加0.6g苯酚晶体搅拌至溶解，即得。

2.2 迭鞘石斛多糖的精制
取迭鞘石斛粗粉50g，加石油醚250ml，回流提取1小时脱脂，过滤，挥干溶剂，以80%乙醇回流提取1小时，趁热过滤，挥干溶剂，加入500ml蒸馏水回流提取2次，没1小时一次，减压浓缩至150ml，用0.1%的活性炭脱色，过滤，加入95%乙醇是溶液含醇80%，静止过夜，沉淀物依次用无水乙醇，丙酮洗涤，60℃减压干燥，制得灰白色粉末状迭鞘石斛多糖。

2.3最大吸收波长的选择
分别精密称吸取供试品溶液0.5ml、对照品1.0ml分别置于具塞试管中，加水至2ml，再加显色剂5.0ml，摇匀，放置5min，置于沸水浴中加热30min后，取出，迅速冷却至室温，。

另取2.0ml水做同上平行操作，做空白对照，在400~600nm，之间扫描。

结果表明，对照品溶液和供试品溶液在490nm处有最大吸收峰，故选择490nm作为测定波长。

2.4标准曲线的制备
精密移取对照品溶液0.1ml、0.2 ml、0.4 ml、0.8 ml、1.0 ml分别置具塞试管中，按照“2.3”项下的方法，自“加水至20ml”起操作。

另取2.0ml蒸馏水同法操作，做空白对照，在490nm处测定吸光度。

以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线经计算得回归方程A=0.0506C+0.0631，相关系数r=0.9995.结果表明，葡萄糖浓度在1.47~14.7ug/ml 范围内，线性关系良好，结果见图
2.5显色稳定性试验
取葡萄糖标准溶液1.0ml。

按“2.3”项下操作显色，在不同的时间点测定其吸光度。

结果表明，显色在4小时内稳定性良好，结果见表1
2.6换算因素的测定
精密称取60℃干燥至恒重的迭鞘石斛多糖50.87mg置于100ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，即可。

精密吸取0.5ml，按照“2.3”项方法，自“加水至2ml”起操作，另取2.0ml水为空白，在490nm处测定吸光度。

另精密去葡萄糖对照品0.8ml，，同法作测定吸光度。

按照下面公式换算因素f=(w*1000)/C*D(其中W：称取多糖的重量（mg）C：溶液中单糖的浓度（ug/ml）；D：稀释因素。

即稀释后总体积)。

2.7 精密度试验
精密吸取对照品溶液1.0ml, 按照“2.3”项方法，自“加水至2ml”起操作，在490nm 处测定吸光度,连续测定6次，其RSD=0.73%,表明仪器精密度良好，结果见表2
2.8 加样回收率实验
取已知含量的迭鞘石斛药材6份，每份0.1g，精密测定，分别精密加入石斛多糖17mg，按样品测定方法，计算，结果见表3.
2.9样品的测定
取各批迭鞘石斛药材样品（见表4）粉末各2.5g，精密称定，按照“2.1“项下供试品溶液的制备样品溶液。

精密吸取各样品溶液0.5ml，按照“2.3”项方法，自“加水至2ml”起操作，另取2.0ml水为空白，在490nm处测定吸光度。

另精密吸取葡萄糖对照品溶液0.5ml，同法操作，测定吸光度。

按照下面公式计算样品中石斛多糖的含量：
多糖含量（%）=（C*D*f*10-6）/W*100%
(其中C：样品提取液中按标准曲线计算出的单糖浓度（ug/ml）;D:稀释因素，即稀释后的总体积；f：换算因素；W：样品重量（g）)
3讨论
3.1本文用改进后的浓硫酸-苯酚法对多糖含量进行测定，传统的硫酸-苯酚法的操作是：加5%苯酚溶液后，再加浓硫酸，振荡显色，加入浓硫酸时，系统显色温度相差较大，而造成相应的偶然偏差。

而改进后的方法，由于先把水和硫酸混合，对浓硫酸起到了稀释作用，待冷却最后加入苯酚晶体，配成显色液，通过沸水浴加热来使其显色，保证了系统温度一致，很好解决了检测重现性与准确性。

3.2实验过程中，仅收集了四批迭鞘石斛药材药材，还需进一步扩大样本量，才能全面反映各地药材的质量信息。

本研究为迭鞘石斛药材的质量评估提供依据，为其进一步开发利用打下基础。

参考文献
《中国药典》（2005年版）
《迭鞘石斛中总多糖的含量测定》刘友平张玲李惠勇，范倩娴等（成都中医药大学四川成都 610075）
1李2王3张4刘5陈6杨7赵8黄9周10吴11徐12孙13胡14朱15高16林17何18郭19马20罗21梁22宋23郑24谢25韩26唐27冯28于29董30萧31程32柴
33袁34邓35许36傅37沈38曾39彭40吕41苏42卢43蒋44蔡45贾46丁
47魏48薛49叶50阎51余52潘53杜54戴55夏56钟57汪58田59任60姜61范
62方63石64姚65谭66廖67邹68熊69金70陆71郝72孔73白74崔75康76毛
77邱78秦79江80史81顾82侯83邵84孟85龙86万87段88曹89钱90汤91尹
92黎93易94常95武96乔97贺98赖99龚100文。