血清碱性磷酸酶ALP测定
碱性磷酸酶(ALP)测定(速率法)标准化操作程序文件
碱性磷酸酶（ALP）测定（速率法）标准化操作程序文件1：概述碱性磷酸酶英文简称AKP或ALP，是广泛分布于人体各脏器器官中，其中以肝脏为最多其次为肾脏，骨骼、肠、和胎盘等组织,。
它不是单一的酶，而是一组同功酶。
目前已发现有AKP1 、AKP2 、AKP3 、AKP4 、AKP5 与AKP6 六种同功酶。
碱性磷酸酶（ALP）：是从牛肠粘膜或大肠杆菌中提取。
从大肠杆菌提取的AP分子量为80kD，酶作用的最适pH为8.0；用小牛肠黏膜提取的AP分子量为l00kD，最适pH为9.6.一般采用对硝基苯磷酸酯（p-NPP）作为底物。
它可制成片状试剂，使用方便。
产物为黄色的对硝基酚，在405nm有吸收峰。
用NaOH终止酶反应后，黄色可稳定一段时间。
2标本的收集新鲜无溶血标本，血清或血浆样本均不溶血。
血浆样本只能采用肝素或EDTA抗凝。
样本在4摄氏度可稳定7天。
采血前病人应禁食12小时，采集静脉3ml,待凝固后（最好放在37摄氏度水浴箱内45分钟）通常为加抗凝剂的血液在30-60分钟凝血析出血清。
3000r/min离心5-10分钟，分离出血清备用。
不建议采用血浆标本。
3：方法原理样本中的碱性磷酸酶催化水解磷酸对硝基苯酚，生成游离的对硝基苯酚和磷酸，引起405nm处的光吸收值升高，，通过检测405nm处光吸收值上升的速率，可以测定碱性磷酸酶的活力。
4剂来源，配置及储存试剂来源：迪瑞试剂配置：试剂一和试剂二均为液体试剂，可直接使用。
启用后在2-8度可稳定30天。
若试剂混浊，或以蒸馏水为空白在405nm处的光吸收值低于0.8A,应予丢弃。
试剂储存：试剂避光储存2-8摄氏度可稳定至标签所示失效期。
5分析仪器CS-600B全自动生化分析仪分析参数：样品量4 u/l 试剂量：第一试剂200 u/l（R1）；第二试剂50 u/l测光点23—38 测定模式：速率法正反应分析波长：405nm/505nm(主波长/副波长)6计算方法ALP(U/L)=( A/min*Tv*1000)(18.8*Sv*P)式中Tv=总反应体积Sv=样本体积18.8=NADH在405nm处的毫摩尔消光系数P=比色杯光径（cm）7 线性范围：本实验的线性范围：0----850U/L8 参考范围：男性：1---12岁《500 U/L12—15岁《750 U/L》25岁40--150 U/L女性：1---12岁《500 U/L》15岁40--150 U/L9 失控控理1：立即重测同一质控品，如重测后结果仍不再允许范围，请进行下一步。
血清碱性磷酸酶磷酸对硝基苯酚法测定
血清碱性磷酸酶（ALP）磷酸对硝基苯酚法测定1.实验原理碱性磷酸酶的活性由在pH值为10.4，2-氨基-2甲基-1-丙醇（AMP）存在的情况下测量p-硝基-磷酸苯酯（pNPP）的转换速率决定。
ALPpNPP + AMP -----------﹥pNP+AMP-PO4在410/480nm测定pNP的生成速率，它与标本中ALP的活性成正比。
2. 标本采集与处理：2.1 病人准备：无特殊要求。
2.2 标本类型：标本最好是无溶血的血清或肝素化的血浆。
2.3 血清分离：应在收集后两小时内分离出来。
避免使用含EDTA或草酸盐的血浆。
3. 标本存放：2～3天内的活性损失：15～25℃保存：<10%；标本稳定性：4～8℃保存稳定7天；-20℃保存至少可稳定2个月标本。
如果分析延迟8小时以上，最好把血清冷藏。
冷冻的血清在融解后会表现出血清值的显著降低。
4. 标本运输：常温条件下运输5. 标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。
6. 实验材料：6.1 上海申能ALP测定试剂盒（141 0417170 1 试剂1 6×64 ml ＋试剂2 6×16 ml）6.1.1 试剂组成试剂1：2-氨基-2甲基-1-丙醇（AMP）缓冲液0.90mol/L（pH:10.4）醋酸镁 1.6mmol/L硫酸锌0.4mmol/LHEDTA 2.0mmol/L试剂2：磷酸对硝基酚16.0mmol/L6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存：原试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。
6.1.5 注意事项：碱性磷酸酶试剂中含叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜。
反应过程中产生的对硝基苯酚有毒性，切勿吸入、吞食、接触皮肤或粘膜。
若反应液与皮肤或粘膜接触，请速用水冲洗。
6.2 校准品：使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
ALP测定
三、实验用品
半自动生化分析仪
ALP测定试剂盒；
刻度吸管
微量加样器
人血清
目录
四、实验过程 按 表 加 量
试剂 工作液 蒸馏水 样品 空白管 样品管 1.00mL 1.00 mL 0.02 mL — — 0.02 mL
混匀，在反应温度37°C保温60秒，入=405nm处使用半自动生 化分析仪测定和读取ALP值（U/L） 。 正常参考值 37℃下，20-50岁男性：53-128；60岁以上男性：56-119 20-50岁女性：42-98； 60岁以上女性：53-141
目录
六、实验注意事项
1.血清标本新鲜，避免溶血；
2.正确操作半自动生化分析仪；
3.注意试剂安全，避免直接接触皮肤和 眼睛，切勿吞咽。
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半自动生化分析仪的使用
目录
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半自动生化分析仪的使用
吸液键 吸液管
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ห้องสมุดไป่ตู้录
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ALP
对硝基苯酚(4-NP)
＋磷酸盐
4-NPP在碱性溶液中为无色，在ALP催化下， 4-NPP水解产生游离的4-NP。 4-NP在碱性溶液中 转变为黄色，在405nm下有最大吸收峰。 4-NP 形成的速率与血清中ALP的活性成正比，测定 405nm处吸光度增加速率（△A/min），即可计 算ALP的活性。
目录
五、实验结果与分析
1、实验结果 2、实验分析 3、临床意义 正常人血清中ALP主要来自肝脏和骨骼，所 以ALP常作为作为肝胆疾病和骨骼疾病的辅助 诊断指标。 血清ALP活性病理性增高可见于： （1）肝胆疾病 阻塞性黄疸、胆道梗阻等； （2）骨骼疾病 佝偻病、骨质软化病等。 血清ALP活性生理性增高见于妊娠期与儿童 生长发育期。
血清碱性磷酸酶ALP测定
血清碱性磷酸酶ALP测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2 实验原理本试剂以国际临床化学会（IFCC）推荐方法为基础，所采用的反应原理与反应式如下。
ALP对-硝基苯磷酸盐 + H2O ----------- 对硝基酚 + 磷酸在上述反应中，对-硝基苯酚的生成速率与样本中碱性磷酸酶的活力成正比。
通过在405 nm处监测吸光度的上升速率，即可测得样本中碱性磷酸酶的活性。
3 标本采集与处理：3.1 病人准备：无特殊要求。
3.2 标本类型：标本最好是无溶血的血清。
3.3 血清分离：应在收集后两小时内分离出来。
避免使用含EDTA或草酸盐的血浆。
3.4 标本存放：2～3天内的活性损失：15～25℃保存：<10%；标本稳定性：4～8℃保存稳定7天；-20℃保存至少可稳定2个月标本。
如果分析延迟8小时以上，最好把血清冷藏。
冷冻的血清在融解后会表现出血清值的显著降低。
3.5 标本运输：常温条件下运输3.6 标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。
4 实验材料：4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司ALP试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成试剂1（R1）：乙酸镁3.0mmol/L硫酸锌 1.5mmol/LHEDTA 3.0mmol/LAMP缓冲液420mmol/L试剂2（R2）：对-硝基苯磷酸盐81.5mmol/LAMP缓冲液420mmol/LHEDTA5.0mmol/L4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存：在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂（盒）自生产之日起有效期为12个月。
试剂启用后，在2～10℃避光的条件下可稳定14天。
4.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。
4.1.5 注意事项：试剂中含有稳定剂，可能存在一定的刺激作用或毒性，请勿直接接触皮肤、眼睛。
血清碱性磷酸酶的活性测定
思考
结合参考值范围、临床意义分析本小组 的实验结果
12
1.生理性增加：如儿童、妊娠期、进食 高糖高脂肪食物等使ALP活性升高
2.病理性改变 A.升高：肝胆疾病（主要见于阻塞性黄
疸，急或慢性黄疸型肝炎，肝硬化，肝 癌） 骨骼疾病（纤维性骨炎、变型 性骨炎、成骨不全症、骨质软化病、佝 偻病、肿瘤骨转移等） B.降低:主要见于呆小症、磷酸酶过少症 等
8
计算公式
9
注意事项
1.铁氰化钾应避光保存，如出现蓝绿色 即作废。铁氰化钾 的水溶液受到光线 的作用，就会分解成黄血盐钾 K4[Fe(CN)6]
2.底物液中不应含有酚，如含有酚时空 白管显红色，说明磷酸苯二钠开始分解， 不宜继续使用
3.加入铁氰化钾后必须迅速混匀，否则 显色不充分
10
临床意义
6
试剂
碳酸盐缓冲液（0.1mol/L PH10.0) 无水碳 酸钠6.36g、碳酸氢钠3.36g、4-氨基安替 比林1.5g溶于800ml蒸馏水中，定容至1L。 棕色瓶贮存。
磷酸苯二钠底物液（20mmol/L) 先将 500ml蒸馏水煮沸，迅速加入磷酸苯二钠 2.18g，冷却后加氯仿2ml，4℃冰箱保存。
血清碱性磷酸酶活力的测定
磷酸苯二钠法
1
实验目的
1.熟悉酶活力测定方法的一般原理 2.掌握血清碱性磷酸酶(ALP)的测定原理
与临床意义。 3.酶活力测定的目的是了解组织提取液、
体液中酶的存在于含量。
2
实验原理
一.基本概念 1.酶活力测定 酶的催化功能可以用在一定条件下
酶所催化的某一特定化学反应的速度来表示。反 应速度越快，酶活力越高;反之，活力越低。测定 酶活力实际上是测定酶促反应速率。 2.酶的活力单位 a.国际 在特定的条件下，1min内将1μmol底物转 化为产物所需的酶量为1个国际单位(IU)。 1IU=16.67×10-9Katal b.临床上采用金氏（Kings）的定义：每100ml血清 在37℃与底物作用15min，产生苯酚1mg的酶量为1 个金氏单位。 c.Kat单位 在特定条件下，每秒钟转化1mol底物的 酶量。1Kat=6×107 IU
alp参考值
alp参考值
ALP参考值是指血清碱性磷酸酶的正常范围，它是一种酶类蛋白质，主要存在于肝脏、骨骼、肠道和胆道等组织中。
ALP参考值的测定可以帮助医生判断患者的肝功能、骨代谢和胆道疾病等情况。
在正常情况下，成人的ALP参考值一般在40-150 U/L之间，但是不同的实验室可能会有略微不同的参考值范围。
如果ALP参考值超出正常范围，可能意味着患者存在某些疾病或病理情况。
高于正常范围的ALP参考值可能是肝功能异常的表现。
肝脏是人体内最重要的代谢器官之一，如果肝脏受到损伤或疾病的影响，就会导致肝功能异常，从而使ALP参考值升高。
常见的肝脏疾病包括肝炎、肝硬化、肝癌等。
高于正常范围的ALP参考值也可能是骨代谢异常的表现。
骨骼是人体内最重要的支撑结构之一，如果骨骼受到损伤或疾病的影响，就会导致骨代谢异常，从而使ALP参考值升高。
常见的骨骼疾病包括骨质疏松、骨折等。
高于正常范围的ALP参考值还可能是胆道疾病的表现。
胆道是人体内最重要的消化器官之一，如果胆道受到损伤或疾病的影响，就会导致胆道疾病，从而使ALP参考值升高。
常见的胆道疾病包括胆囊炎、胆管炎等。
ALP参考值是衡量人体内肝功能、骨代谢和胆道疾病等情况的重要
指标之一。
如果ALP参考值超出正常范围，需要及时就医，进行进一步的检查和治疗。
同时，我们也应该注意保持健康的生活方式，预防肝脏疾病、骨骼疾病和胆道疾病的发生。
血清碱性磷酸酶(ALP)
血清碱性磷酸酶（ALP）血清碱性磷酸酶（ALP）介绍：血清碱性磷酸酶正常人血清中的碱性磷酸酶主要来自肝和骨骼，碱性磷酸酶测定主要用于诊断肝胆和骨骼系统疾病，是反映肝外胆道梗阻、肝内占位性病变和佝偻病的重要指标。
血清碱性磷酸酶（ALP）正常值：(1)酶速率法(37℃)：成人：40～160U/L；儿童：<350U/L；(2)磷酸苯二钠法：成人：3～13Kat单位；儿童：5～30kat单位；(3)动态法：成人：20~110U/L；青少年：1.男性：<750U/L；2.女性：<500U/L；儿童：<500U/L；婴儿：50~240U/L。
(注：具体参考值请根据各实验室而定。
)血清碱性磷酸酶（ALP）临床意义：(1)升高：①无黄疸：肝硬化、肝细胞癌、胆管疾病(胆管癌，肝内结石)、局限性肝损害(转移性肝癌、肝脓疡、肉芽肿性肝损伤)、其他肝疾病(慢性肝炎、脂肪肝)、骨疾病(佝偻病骨软化症、或骨肉瘤)、转移性骨癌、甲状腺功能亢进症，甲状旁腺功能亢进症，慢性肾功能健康搜索不全，恶性肿瘤(骨、肝转移)等。
②有黄疸：病毒性肝炎、酒精性肝炎、药物性肝损害、肝炎病毒以外的病毒引起的肝损害、原发性胆汁性肝硬化、其他肝内胆汁瘀滞、阻塞性黄疸(胆管癌、胆管细胞癌、胰头癌，总胆管结石火罐网，硬化性胆管炎)。
(2)降低：牛奶-碱综合征、坏血病、甲状腺功能减退症、维生素D 摄入过多、恶性贫血、重症慢性肾炎、呆小病、恶病质等。
血清碱性磷酸酶（ALP）注意事项：1、空腹抽血，抽血前禁食10小时。
2、使用某些药物如避孕药等可引起ALP结果升高。
血清碱性磷酸酶（ALP）检查过程：暂无相关信息。
血清碱性磷酸酶(ALP)—生化检测项目
血清碱性磷酸酶（ALP）
一、检测原理
ALP水解磷酸对硝基苯酯（PNPP）形成硝基苯酚，硝基苯酚吸光度与ALP的活性成正比，加入2-氨基-2-甲基-1-丙醇（AMP）缓冲液维持反应的PH值10.3—10.4，AMP中镁离子及锌离子起激活、维持酶反应。
二、参考区间
血清：男性46—125U/L 女性35—135U/L
三、临床意义
1、各种肝内外胆管阻塞性疾病如胰头癌、胆道结石引起的胆管阻塞，原发性胆汁性肝硬化，肝内胆汁淤积等，碱性磷酸酶明显升高，并且与血清胆红素升高相平行。
2、用于鉴别黄疸的鉴别诊断，碱性磷酸酶转氨酶血清胆红素同时测定有助于黄疸的鉴别诊断。
3、骨骼疾病，纤维性骨炎，佝偻病，骨软化症，成骨细胞瘤及骨折愈合期，碱性磷酸酶升高，主要用于变形性骨炎，
原发性甲旁亢，骨质软化和佝偻病的诊断。
4、生长中的儿童，妊娠中晚期碱性磷酸酶生理性增高。
碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒标准操作程序
碱性磷酸酶(ALP)测定标准操作程序1.摘要碱性磷酸酶（ALP）存在于成骨细胞、干细胞、白细胞、肾、脾、胎盘、前列腺和小肠内。
测定血清或肝素化血浆中的碱性磷酸酶活力，做临床辅助诊断用。
2.适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清、血浆中碱性磷酸酶（ALP）的活力。
3.职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定碱性磷酸酶（ALP）活力的工作人员要严格按照本SOP程序进行,室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的碱性磷酸酶（ALP）试剂盒采用的是AMP缓冲液法。
5.原理在AMP的缓冲环境下，磷酸对硝基苯在碱性磷酸酶的作用下，可以水解成磷酸盐和对硝基苯酚。
在一定底物浓度范围内,磷酸对硝基苯的水解产物对硝基苯酚会引起405nm处吸光度的上升，其上升速率与血清中碱性磷酸酶的活力成正比。
−→−+OH−−磷酸盐对硝基苯酚磷酸对硝基苯碱性磷酸酶+26.仪器日立7600自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分：R1：AMP缓冲液（PH10.50）、乙酸镁；R2：AMP缓冲液（PH8.85）、磷酸对硝基苯、乙酸镁。
AMP：2-氨基-2-甲基-1-丙醇7.3试剂稳定性：试剂在2-8℃避光保存，有效期1年。
试剂工作液在2-8℃避光保存，可稳定4周，15-25℃可保存稳定4天。
7.4试剂准备：试剂为即用式。
8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用某某公司提供的标准品对自动分析仪进行校准。
按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品响应量通过合适的数学模型绘制校准曲线。
8.2质控品某某公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。
每日在测定前做一次质控。
该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。
血清碱性磷酸酶测定试剂盒(ALP)安全风险分析报告【最新版】
血清碱性磷酸酶测定试剂盒(ALP)安全风险分析报告1. 总则血清碱性磷酸酶测定试剂盒(以下简称ALP 测试盒)是一种临床检验体外诊断化学试剂中酶类试剂。
因为检查并不在人体内或人体体表上进行，所以不会对受检的患者或人员构成直接的风险。
然而，在某些情况下，由于体外诊断试剂有关的危害，导致或促成错误的决定，可构成间接风险。
另外，与使用有关的危害及其伴生风险也应给以考虑。
本安全风险分析报告主要根据YY/T0316-20xx《医疗器械一风险管理一第一部分风险分析的应用》要求中的附录A《用于判定医疗器械可能影响安全的特征问题》和附录B《体外诊断医疗器械风险分析指南》以及GB7826-87《系统可靠分析技术失效模式和效应分析(FMEA)程序》进行全面的安全风险分析。
2. 有关医疗器械定性和定量的判定2.1 预期用途和目的ALP 测试盒是一种体外诊断试剂，是根据生物酶反应和光化学反应的原理，通过测定单位时间内吸光度的变化，实现对样品中ALP 的测定。
ALP 测试盒预期用途为用于肝胆和骨骼系统疾病的诊断。
2.2 产品是否与患者或其他人员接触ALP 测试盒为体外诊断试剂，与患者无接触，一般情况下也不与操作人员皮肤接触。
2.3 产品制造材料安全性ALP 测试盒，制造原料均为AR级化学分析纯，该试剂盒所使用化学物质均为目前临床生化常规试剂，NaN3有一定毒性但含量极少，其余物质均无毒性，因此在使用试剂盒时应尽量避免接触皮肤等。
废瓶、废液处理应符合环保要求。
2.4 是否有能量施加给患者或从患者身上获取无施加于患者的能量，也不从患者身上获取。
2.5 是否有物质提供患者或从患者身上获取ALP测定试剂盒不与患者接触，但间接由医务人员从患者身上抽取血液。
2.6 试剂盒是否由器械处理后再用吸液器从ALP 测试盒中提取的试剂均为一次性使用，不存在处理后再使用的情况。
2.7 产品是否以无菌形式提供或准备由使用者灭菌后使用产品为医用化学试剂分析纯，在10万级净化室配制、检测和包装，不需使用者灭菌处理后使用。
碱性磷酸酶ALP测定标准操作程序SOP文件
CALIBRATION POINT [ 2 ]
POINT(4) [ 0 ]
SPAN POINT [ 2 ]
WAVELENGTH(PRIMARY) [ 450 ]
DUPLICATE LIMIT(%) [ 5 ]
SECONDARY [ 480 ]
DUPLICATE LIMIT(ABS) [ 10 ]
版序：ABCD
页码：第3页，共4页
增高可见于下列情况：
a）肝胆疾病：阻塞性黄疸，急性或慢性黄疸型肝炎，肝癌等。
b)骨骼疾病：由于骨的损伤或疾病使成骨细胞内所含高浓度的碱性磷酸酶释放入血液中，引起血清碱性磷酸酶活力增高。如纤维性骨炎、成骨不全症、佝偻病、骨软化病、骨转移癌和骨折修复愈合期等。
C）生理性增高：见于处于骨骼生长期的儿童和青少年。
其它适合的质控品
贮存条件：置2-8℃冰箱至有效期。
ABCD医院
生化实验室
文件编号：
ABCD-SOP-04-17
ALP测定
版序：ABCD
页码：第2页，共4页
准备：直接使用。
质控间隔时间及限制：应视不同地区及各自实验室情况而定。质控结果应在限定的范围之内，如果超出范围，实验室应根据情况采取措施。
5仪器
ROCHE MODULAR P或日立7060生化分析仪。
3标本
血清，肝素或EDTA抗凝血浆，处理方法见标本准备。
稳定性：4 -8℃7天
20-25℃7天
-20℃8周
4试剂
4.1试剂
来源：ROCHE配套试剂（详见试剂说明书）。
贮存条件及稳定性：未打开试剂盒：2－8℃储存至效期末
R1：打开后机上稳定14天（应用试剂罩）
血清碱性磷酸酶ALP测定
血清碱性磷酸酶ALP测定1.实验原理ALP对硝基酚磷酸盐+ H2O —————→磷酸+ 对硝基酚Mg2+在镁离子存在下, 对-硝基酚磷酸盐被ALP分解成磷酸和对-硝基酚,在405nm 的波长下, 对-硝基酚的吸光度增加与ALP的活性成正比。
2. 标本：2.1 病人准备：新鲜血清，采血后应及时分离，避免溶血。
2.2 类型：血清、肝素或EDTA血浆，应避光保存。
3. 标本存放：15～25℃保存可稳定2天；2～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定3个月，如冰冻保存，不可反复冻融！。
4. 标本运输：冰冻条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染、脂血等存运输的标本。
6. 实验材料6.1 试剂：中生碱性磷酸酶试剂盒（试剂1＋试剂2）6.1.1 试剂组成6.1.3 试剂稳定性与贮存试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂有效期为12个月。
试剂必需避光保存。
试剂不可冰冻。
6.1.4 变质指示：当试剂空白吸光率A405nm(1.0cm)>1.0，或有混浊和可见颗粒时，请不要再使用。
6.1.5 注意事项：试剂请勿直接接触皮肤、眼睛，如有接触，请用大量清水清洗。
请勿吞服。
6.2 校准品：使用OLYMPUS提供的多项校准品对自动分析仪进行校准，参见生化检验校准品和质控品.SOP文件6.3 质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件7. 仪器：奥林巴斯AU640生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU640生化分析仪项目测定参数.SOP文件。
8.2仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU640生化分析仪操作规程.SOP 文件。
9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。
11. 计算方法：以OLYMPUS校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果无需手工计算，以U/L报告。
血清中碱性磷酸酶的测定
• 测定ALP的方法主要分为二种，一是测定底物 解离下的磷酸根来计算酶活力，如β-甘油磷酸 钠法，但存在血清本身有磷酸根及磷酸化的缺 点；二是测定底物解离磷酸根后的羟基化合物， 这种方法又可分为：1，酚化合物在显色剂的 作用下显色比色测定。2，生成的酚化合物本 身在一定的条件下就可显色，如磷酸对硝基酚 法。
当肝脏受到损伤或者障碍时经淋巴道和肝窦进入血液，同时由 于肝内胆道胆汁排泄障碍，反流入血而引起血清碱性磷酸酶明显升 高。
碱性磷酸酶偏高的原因可以分为生理性原因和病理性原因，具 体讨论如下：
1、生理性原因 儿童骨骼发育期、孕妇、骨折愈合期，这些情 况下骨组织中的碱性磷酸酶很活跃，所以检测时值会偏高。
2、病理性原因 当人体患有阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性 肝癌、胆汁淤积性肝炎等时，肝细胞过度制造ALP，经淋巴道和肝
1．生理性增高：儿童在生理性的骨骼发育期，碱性磷酸酶活力可 比正常人高1～2倍。处于生长期的青少年，以及孕妇和进食脂肪含量 高的食物后均可以升高。
2．病理性升高： (1)骨骼疾病如佝偻病、软骨病、骨恶性肿瘤、恶性肿瘤骨转移等； (2)肝胆疾病如肝外胆道阻塞、肝癌、肝硬化、毛细胆管性肝炎等； (3)其他疾病如甲状旁腺机能亢进。 3．病理性降低：见于重症慢性肾炎、儿童甲状腺机能不全、贫血 等。
• （二）试剂
（1）0.1mol/L碳酸缓冲液（pH=10.0)：称取无水碳酸钠6.36g、碳酸氢 钠3.36g、4-氨基安替比林1.5g，溶于800ml蒸馏水中，定容至1L,置于 棕色瓶内储存。
（2）20mmol/L磷酸苯二钠溶液：先将500ml蒸馏水煮沸，迅速加入磷酸 苯二钠2.18g（磷酸苯二钠如含2分子结晶水，应称取2.54g)，冷却后加 氯仿2ml防腐，在4℃冰箱内保存。用剩的溶液不应再倒回瓶中。
血清碱性磷酸酶活性测定
优选血清碱性磷酸酶活性测定
主要内容：
⑴ 实验目的 ⑵ 实验原理
⑶ 实验器材与试剂 ⑷ 实验操作 ⑸ 计算 ⑹ 临床意义 ⑺ 注意事项
基本概念
酶活力：称酶活性，是表示催化某一特定反应 的能 力。可以用在一定条件下所催化的某一特 定化学速度表示。
酶催化反应速度越快，酶活力升高，反之活力愈 低。
底物液
铁氰化钾溶液 血清
4．酚标准工作液（0.05mg/ml） 购买合格的二级 标准品。
实验操作
取4支试管，如下操作：
血清（ml） 酚标准液 蒸馏水
测定管 0.100 —— ——
pH10碳酸盐缓冲液 1.00
标准管 —— 0.100 —— 1.00
空白管 —— —— 0.100 1.00
对照管 —— —— —— 1.00
2．20mmol/L磷酸苯二钠溶液 先将500ml蒸馏水 煮沸，迅速加入磷酸苯二钠2.18g(磷酸苯二钠如含2 分子结晶水，则应称取2.54g) ，冷却后加氯仿2ml防 腐，在4℃冰箱保存。（用剩的溶液不应再倒回瓶中）
3．显色液（铁氰化钾的硼酸溶液） 称取铁氰化 钾2.5g，硼酸17g，各自溶于蒸馏水400ml中，两液混 合后，加蒸馏水至1L，置棕色瓶中避光保存(如出现 蓝绿色即弃去)。
试剂与仪器
器材： 5ml移液管，1ml移液管，100或200ul微量可调式移液 器，721E分光光度计，1cm比色皿，37℃ 恒温水浴
试剂： 1．0.1mol/L碳酸盐缓冲液(pH10.0) 无水碳酸钠
6.36g，碳酸氢钠3.36g，4-氨基安替比林1.5g，溶于 800mL蒸馏水中，定容至1L。置棕色瓶中保存。
思考
如何测定酶活力的大小？
血清碱性磷酸酶的活性测定
实验原理
三.核心原理 ALP催化磷酸苯二钠转变成苯酚的速率 可用分光光度计监测，从而计算ALP活 力的大小 ALP 磷酸苯二钠+H2O----------苯酚+磷酸氢 PH 10 二钠 苯酚+4-氨基安替比林--铁氰化钾---红色醌 亚胺衍生物
试剂
碳酸盐缓冲液（0.1mol/L PH10.0) 无水碳 酸钠6.36g、碳酸氢钠3.36g、4-氨基安替比 林1.5g溶于800ml蒸馏水中，定容至1L。棕 色瓶贮存。 磷酸苯二钠底物液（20mmol/L) 先将 500ml蒸馏水煮沸，迅速加入磷酸苯二钠 2.18g，冷却后加氯仿2ml，4℃冰箱保存。 显色液 铁氰化钾K3[Fe(CN)6]2.5g、硼酸 17g，各溶于400ml蒸馏水，混合后加蒸馏 水至1L，棕色瓶避光保存。 酚标准工作液0.05mg/ml
实验操作
试剂/ml 血液 酚标准液 蒸馏水 PH10碳酸盐 缓冲液 底物液 铁氰化钾溶 液 血清 测定管（T） 0.100 ----1.00 标准管（S) --0.100 --1.00 空白管（B） 对照管（C） ----0.100 1.00 ------1.00
混匀，37℃水浴保温5min，同时将底物液预热
临床意义
1.生理性增加：如儿童、妊娠期、进食 高糖高脂肪食物等使ALP活性升高 2.病理性改变 A.升高：肝胆疾病（主要见于阻塞性黄 疸，急或慢性黄疸型肝炎，肝硬化，肝 癌） 骨骼疾病（纤维性骨炎、变型 性骨炎、成骨不全症、骨质软化病、佝 偻病、肿瘤骨转移等） B.降低:主要见于呆小症、磷酸酶过少症 等
血清碱性磷酸酶活力的测定
磷酸苯二钠法
生化试验第三组
实验目的
alp检测原理
alp检测原理
ALP检测原理：
①ALP即碱性磷酸酶是一种广泛存在于人体多种组织细胞内的酶类物质在肝脏骨骼肠道等部位活性尤为显著；
②ALP检测常用于临床生化检验中通过测定血液样本中ALP活性水平评估相关器官健康状况特别是肝胆疾病诊断；
③常用检测方法之一为化学发光法该法基于ALP催化底物分解过程中释放出光子信号强度与酶浓度呈正比关系；
④实验开始前需采集静脉血放置于含有EDTA或者其他抗凝剂试管内避免血液凝固影响检测结果准确性；
⑤血清分离通过离心机高速旋转将血液分成不同密度层次用移液器吸取上清液即为待测血清样本备用；
⑥加入试剂将定量血清与含有ALP特异性底物如4-甲基伞形酮磷酸盐缓冲溶液混合后放入恒温水浴中保温一段时间；
⑦发光反应由于ALP能够催化底物分解产生荧光物质在特定激发波长照射下发光强度可通过荧光分光光度计测量；
⑧标准曲线制作使用已知浓度ALP溶液按照同样步骤处理绘制出标准曲线用于计算未知样品中ALP含量；
⑨数据分析将测试得到发光值对照标准曲线得出样品中ALP活性浓度并与正常参考区间比较判断是否存在异常；
⑩干扰因素考虑实验过程中需注意溶血黄疸高脂血症等因素可能对结果造成干扰必要时重复实验验证；
⑪结果解读结合患者临床症状及其他检查结果综合分析ALP升高或降低背后潜在病理机制为医生提供诊断依据；
⑫质控措施定期使用质控品监控仪器性能稳定性确保每次检测数据可靠可比避免假阳性或假阴性现象发生；。
检验科生化碱性磷酸酶测定的标准规程
碱性磷酸酶测定的标准规程【目的】体外检测血清中碱性磷酸酶（ALP ）的含量。
【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP ，室负责人监督落实。
2.本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
【标本类型及实验前准备】1.受检者的准备病人空腹12h ，不饮酒24h 后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
对于体检对象抽血前应有2周时间保持平时的饮食习惯，应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.静脉采血除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
【仪器设备】东芝TBA-FX8全自动生化分析仪，低速离心机一、检测原理本试剂方法学原理以IFCC 推荐的方法为基础。
该方法采用对-硝基苯磷酸盐为底物，在最适反应条件下，样本中的碱性磷酸酶（ALP ）催化下述转磷酸反应：磷酸硝基酚-对O H 硝基苯磷酸盐-对2++−−→−ALP在上述反应中，对-硝基酚的生成速率与样本中碱性磷酸酶的活力成正比，通过在405nm 波长处测定吸光度的上升速率，即可测得样本中碱性磷酸酶的活力1.试剂本科使用上海复星长征医学科学有限公司ALP试剂盒，为液体双试剂，其各组分如下：试剂1（R1）乙酸镁 3.0 mmol/L硫酸锌 1.5 mmol/LHEDTA 3.0 mmol/LAMP缓冲液420 mmol/L试剂2（R2）对 - 硝基苯磷酸盐 81.5 mmol/LAMP缓冲液420 mmol/LEDTA 5.0 mmol/L2.校准要求2.1校准品：使用与试剂配套使用的复星长征临床化学校准血清（货号：4490050/4590050）对测定进行校准。
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血清碱性磷酸酶ALP测定
1 检验目的
指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2 实验原理
本试剂以国际临床化学会（IFCC）推荐方法为基础，所采用的反应原理与反应式如下。
ALP
对-硝基苯磷酸盐 + H2O ----------- 对硝基酚 + 磷酸
在上述反应中，对-硝基苯酚的生成速率与样本中碱性磷酸酶的活力成正比。
通过在405 nm处监测吸光度的上升速率，即可测得样本中碱性磷酸酶的活性。
3 标本采集与处理：
3.1 病人准备：无特殊要求。
3.2 标本类型：标本最好是无溶血的血清。
3.3 血清分离：应在收集后两小时内分离出来。
避免使用含EDTA或草酸盐的血浆。
3.4 标本存放：2～3天内的活性损失：15～25℃保存：<10%；标本稳定性：4～8℃保存稳定7天；-20℃保存至少可稳定2个月标本。
如果分析延迟8小时以上，最好把血清冷藏。
冷冻的血清在融解后会表现出血清值的显著降低。
3.5 标本运输：常温条件下运输
3.6 标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。
4 实验材料：
4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司ALP试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成
试剂1（R1）：
乙酸
镁
3.0mmol/
L
硫酸锌 1.5mmol/L
HEDTA 3.0mmol/
L
AMP缓冲液420mmol/L
试剂2（R2）：对-硝基
苯磷酸盐
81.5mmol
/L
AMP缓冲液420mmol/L
HEDTA
5.0mmol/L
4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存：在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂（盒）自生产之日起有效期为12个月。
试剂启用后，在2～10℃避光的条件下可稳定14天。
4.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。
4.1.5 注意事项：试剂中含有稳定剂，可能存在一定的刺激作用或毒性，请勿直接接触皮肤、眼睛。
一旦接触，即用大量清水冲洗。
请勿吞服。
4.2 校准品：使用上海复星长征医学科学有限公司提供的ALP校准品对自动分析仪进行校准。
4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。
5 仪器
AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪
6 操作步骤
6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。
6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。
6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。
6.4仪器操作步骤：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪操作规程。
7 质量控制
在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
8 计算方法
以ALP复合校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以U/L报告。
9 参考值范围
成年人
男性 20～50岁 53～128U/L
男性 60岁以上 56～119U/L
女性 20～50岁 42～ 98U/L
女性 60岁以上 53～141U/L
儿童
男性女性
1～30天 75～319U/L 48～406U/L
1个月～1岁 82～383U/L 124～341U/L
1岁～3岁 104～345U/L 108～317U/L
4岁～6岁 93～309U/L 96～297U/L
7岁～9岁 86～315U/L 69～325U/L
10岁～12岁 42～362U/L 51～332U/L
13岁～15岁 74～390U/L 50～162U/L
16岁～18岁 52～171U/L 47～119U/L
参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。
根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。
我室参考值 35-125 U/L
10 临床意义
碱性磷酸酶（ALP）是一种在碱性条件下具有较强活性的水解酶，并以多种形态存在于血液中，其大多来自骨骼的成骨细胞和肝脏，也来源于其他一些组织例如肾脏、胎盘、肠、睾丸、胸腺、肺及肿瘤。
在儿童生长期和妊娠期，血清中ALP 生理性活性增高，骨疾病与肝胆疾病等引起ALP病理性活性增高。
在肝胆疾病中引起ALP活性增高的原因包括胆道梗阻，例如因胆结石、肿瘤或炎症造成的胆汁郁积。
在传染性肝炎中也可发现ALP活性增高。
在骨疾病中，Paget病、骨软化症（佝偻病）、骨转移瘤和甲状旁腺功能亢进等，使成骨活性升高引起ALP活力增高。
11 操作性能
11.1 试剂空白：
a) 试剂空白吸光度应不大于0.800。
b）试剂空白吸光度变化率（ΔA/min）：应不大于0.0015。
11.2 分析灵敏度：10U/L样本的吸光度变化率（ΔA/min）应不小于0.003。
11.3 线性范围：试剂（盒）线性范围应覆盖[10～1000]U/L。
a) 线性相关系数（r）应不小于0.990；b) [≤50]U/L 范围内的线性偏差应不超过±6.0U/L，[＞50]U/L 范围内的线性偏差应不超过±10％。
11.4 准确度：相对偏差（B）应不大于±10%。
11.5 精密度：(1)重复性：变异系数（CV）应不大于5%；(2)批间差：相对极差（R）应不大于5%。
11.6 稳定性：试剂（盒）在2～8℃避光、密封的环境中贮存至12个月末，试剂性能应符合试剂空白、分析灵敏度、线性范围、精密度（重复性）和准确度的要求。
12 超出范围结果处理
本试剂的线性范围为[10～1000]U/L。
当样本中碱性磷酸酶活性高于1000U/L时当样品测定值超过上限时，应将样品用9 g/L氯化钠溶液作1：9稀释，重新测定，结果乘以10。
13 病危报警值的处理
无警告/危急值
14 方法局限性
14.1 测定结果的准确性依赖于对所使用分析仪器校准、测定温度和测定时间的控制。
14.2 样本中血红蛋白的浓度≤500mg/dL、胆红素浓度≤340μmol/L、甘油三酯浓度≤4mmo1/L对测定无干扰。
14.3 有关可能干扰本测定的药物或物质，请参阅参考文献16.3。
14.4 若试剂混浊或以水为空白在波长405nm处的吸光度值大于0.8时，则不能使用。
15 补救措施
当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。
16 参考文献
16.1 叶应妩，王毓山，申子瑜主编·全国临床检验操作规程·中华人民共和国卫生部医政司编·(第四版)
16.2 钱士匀主编.临床生物化学及生物化学检验实验指导.人民卫生出版社，2012年第5版
16.3 府伟灵,徐克前主编.临床生物化学检验.北京.人民卫生出版社,2012年第5版
16.4 试剂说明书。