血清碱性磷酸酶ALP磷酸对硝基苯酚法测定

血清碱性磷酸酶ALP磷酸对硝基苯酚法测定

1.实验原理

碱性磷酸酶的活性由在pH值为10.4，2-氨基-2甲基-1-丙醇（AMP）存在的情况下测量p-硝基-磷酸苯酯（pNPP）的转换速率决定。

ALP

pNPP + AMP -----------﹥pNP+AMP-PO4在410/480nm测定pNP的生成速率，它与标本中ALP 的活性成正比。

2. 标本采集与处理：

2.1 病人准备：无特殊要求。

2.2 标本类型：标本最好是无溶血的血清或肝素化的血浆。

2.3 血清分离：应在收集后两小时内分离出来。避免使用含EDTA或草酸盐的血浆。

3. 标本存放：2～3天内的活性损失：15～25℃保存：<10%；标本稳定性：4～8℃保存稳定7天；-20℃保存至

少可稳定2个月标本。如果分析延迟8小时以上，最好把血清冷藏。冷冻的血清在融解后会表现出血清值的显著降低。

4. 标本运输：常温条件下运输

5. 标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。

6. 实验材料：

6.1 上海奥林巴斯ALP测定试剂盒试剂1 ＋试剂2

6.1.1试剂准备：试剂为即用式。

6.1.2 试剂稳定性与贮存：原试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。

6.1.3 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。

6.1.4 注意事项：碱性磷酸酶试剂中含叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜。反应过程中产生的对硝基苯酚有毒性，切勿吸入、吞食、接触皮肤或粘膜。若反应液与皮肤或粘膜接触，请速用水冲洗。

6.2 校准品：使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分

析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。

6.3 质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。

7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪

8. 操作步骤

8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件

8.2 仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件

9. 检验结果的判断与分析

10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I 与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。

11. 计算方法：以TruCal U复合校准品ALP校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。

不使用校准品进行ALP活力检测，可以直接使用

ΔA/min均值乘以计算因子得到结果，但是这样所得结果的可靠性不如使用校准品。计算ALP活力的计算因子见下：

ΔA/min×因子= ALP活力[U/L]

底物起始的反应（37℃）样品起始的反应（37℃）

05 nm 3433 2757

12. 参考值范围

成年人[4]

男性20～50岁53～128U/L

男性60岁以上56～119U/L

女性20～50岁42～98U/L

女性60岁以上53～141U/L

儿童[5]

男性女性

1～30天75～319U/L 48～406U/L

1个月～1岁82～383U/L 124～341U/L

1岁～3岁104～345U/L 108～317U/L

4岁～6岁93～309U/L 96～297U/L

7岁～9岁86～315U/L 69～325U/L

10岁～12岁42～362U/L 51～332U/L

13岁～15岁74～390U/L 50～162U/L

16岁～18岁52～171U/L 47～119U/L

参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。

13. 临床意义[1,2]：碱性磷酸酶（ALP）是一种在碱性条件下具有较强活性的水解酶，并以多种形态存在于血液中，其大多来自骨骼的成骨细胞和肝脏，也来源于其他一些组织例如肾脏、胎盘、肠、睾丸、胸腺、肺及肿瘤。在儿童生长期和妊娠期，血清中ALP生理性活性增高，骨疾病与肝胆疾病等引起ALP病理性活性增高。在肝胆疾病中引起ALP活性增高的原因包括胆道梗阻，例如因胆结石、肿瘤或炎症造成的胆汁郁积。在传染性肝炎中也可发现ALP活性增高。在骨疾病中，Paget病、骨软化症（佝偻病）、骨转移瘤和甲状旁腺功能亢进等，使成骨

活性升高引起ALP活力增高。

14. 操作性能

14.1 线性范围2～850U/L

14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的典型方法5，AU2700批内不精密度小于5%，总不精密度小于10%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则7。

批内精密

度

n=20

x

(U/L)

s

(U/L)

CV

(%)

批间精密

度

n=20

x

(U/L)

s

(U/L)

CV

(%)

样品1 97.8 1.15 1.18 样品1 103 1.06 1.02 样品2189 1.82 0.96 样品2188 1.04 0.55 样品3235 1.68 0.72 样品3236 1.64 0.70

14.3 方法学比较：本公司试剂盒(y)与某商品化试剂盒

(x)，同时对78个样品进行ALP活力检测，将检测结果

作方法学比较，其统计结果如下：y=1.00x+0.00U/L；r