碱性磷酸酶(AKP)
碱性磷酸酶高
碱性磷酸酶高【导读】碱性磷酸酶（ALP或AKP）是广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织经肝脏向胆外排出的一种酶。
临床上测定碱性磷酸酶，用于骨骼、肝胆系统疾病的诊断和鉴别诊断，尤其是黄疸的鉴别诊断。
碱性磷酸酶高可能是生理性原因，也可能是病理性原因。
想了解更多关于碱性磷酸酶高的原因及危害吗？妈网百科为你解答您。
碱性磷酸酶高一般是指碱性磷酸酶检查中碱性磷酸酶的值高于正常参考值范围。
碱性磷酸酶高的正常参考值为：女性的正常参考值是50～135U/L，男性的是45～125U/L。
碱性磷酸酶广泛存在于人体各器官组织中，以肝脏细胞中最多，许多人对碱性磷酸酶陌生。
平时到医院临床进行肝功能检查时，结果中会包含碱性磷酸酶（ALP或AKP）这项，部分人会出现碱性磷酸酶偏高的现象。
如果检查发现碱性磷酸酶高，不要着急，而是要了解清楚为什么会偏高，再对症下药。
尤其是对于发育期的儿童、孕妇、以及处于骨折愈合期这三类人群，碱性磷酸酶高是较常见的，因此也要格外注意，可以定时到医院进行检查，使其不至于偏高很多，控制在一定范围内。
碱性磷酸酶高的原因根据科学研究证明，碱性磷酸酶高的主要原因主要有以下几点：1、某些药物导致。
临床患者采用抗生素（红霉素、庆大霉素、氯霉素、卡那霉素、氨苄青霉素等）进行治疗时，会导致碱性磷酸酶偏高，同时，用巴比妥类药物治疗时也会出现碱性磷酸酶偏高。
像这种药物导致的碱性磷酸酶偏高，一般是不需要进行特殊的治疗，停药后即恢复正常。
2、骨骼疾病。
由于骨组织中碱性磷酸酶也很活跃，因此如果有骨骼疾病的患者会出现碱性磷酸酶偏高。
如：佝偻病、软骨病、骨折愈合期、骨质疏松、骨恶性肿瘤、恶性肿瘤骨转移等骨骼疾病的患者一般会出现碱性磷酸酶偏高。
3、肝胆疾病。
由于肝脏细胞中碱性磷酸酶最多，因此如果肝胆出现问题，碱性磷酸酶偏高是必然的。
临床如：阻塞性黄疸、病毒性肝炎、肝癌（原发性、继发性）、肝硬化、胆汁淤积性肝炎等都可引起碱性磷酸酶偏高。
碱性磷酸酶(AKP)
AP的生理及研究作用
①可直接参与磷代谢，在钙、磷的消化、吸收、分
泌及骨化过程中发挥了重要作用 ②在基因工程中主要是应用该酶处理经限制性内切 酶切割后的载体DNA，去除载体DNA两末端的5′-磷 酸残基，以防止载体DNA自我环化，从而提高其重
组效率 。
谢谢
金属离子的作用
②酶与底物以金 属离子Zn为桥接 点，金属将底物 磷酸引导到正确 的位置（Ser-活 性部位），使酶 促反应顺利进行。
金属离子的作用
③金属Zn1中和
离去基团的负电
荷，是RO―能
够顺利离去。
金属离子的作用
④Mg定位了水
分子，催化Ser-
102的质子化和
去质子化的反应。
金属离子的作用
Zn1原子配位的氢氧根离 子进攻磷酸基，形成POH键，最终形成无机磷 酸盐与底物的非共价结 合形式。
碱性磷酸酶的提取
b）利用分光光度计测吸光度
c）设计标准曲线计算蛋白质含量
使用BCA法测定蛋白含量的原因
a) 对酶的比活力测定中蛋白定量发现BCA法在本样品体系中灵敏度 高、抗干扰能力强，适合采用此法进行蛋白含量测定。
b）与Lowery法相比，BCA蛋白测定方法灵敏度高，操作简单，试 剂及其形成的颜色复合物稳定性俱佳，并且受干扰物质影响小。 与Bradford法相比，BCA法的显著优点是不受去垢剂的影响。
丙酮:沉析作用更强，用量省，但毒性大，应用范围不广. 正丁醇:能去除与pro结合的脂类物质，使pro溶解在溶液中.
提取操作流程 a）
取动物组织于 研钵中剪碎
加0.01M醋酸镁0.01M醋酸钠
滤液
(V)
弃渣
室温静置20分钟 用滤纸过滤
研磨2-3分钟
转移入刻度 离心管
于离心管中加 入正丁醇，用 玻棒充分搅拌
2分钟左右
提取操作流程 b）
滤液
(V)
加入等体积冷丙酮，立即 混匀后离心（200上清液
加入0.5M醋酸镁，用玻棒充分 搅拌,记录体积(V1)
向溶液中缓慢加入95%冷乙醇X1ml (X1=0.46V1)，使乙醇终浓度达30%
向溶液中缓慢加入95%冷乙醇X1ml (X1=0.46V1)使乙醇终浓度达30%
b) 原理：在pH10环境中，AKP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠， 苯酚与4-氨基安替比林反应生成色素原，该色素原经铁氰化钾氧化生 成红色醌亚衍生物。测定红色衍生物的吸光度就可以计算酶活性的大 小。
② AKP的蛋白含量测定—BCA法
原理：BCA(bicinchonininc acid)与二价铜离子的硫酸铜等其他试剂组成的试剂，混合 一起即成为苹果绿，即BCA工作试剂。在碱性条件下，BCA与蛋白质结合时，蛋白质 将Cu2+还原为Cu+，一个Cu+螯合二个BCA分子，工作试剂由原来的苹果绿形成紫色 复合物，最大光吸收强度与蛋白质浓度成正比。
医学检验·检查项目：碱性磷酸酶(ALP,AKP)_课件模板
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相关症状： 碱性磷酸酶增高、婴儿肋骨外翻、黄疸、 腹部肿块、腹水、食欲异常。
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临床意义：
④变形性骨炎、成骨细胞癌、佝偻病、 骨软化、甲状腺及甲状旁腺功能亢进、肾 小管性酸中毒、遗传性磷酸酶过多症 ⑤ 很多药物可使碱性磷酸酶增高，如巴比妥 类、抗生素(红霉素、庆大霉素、氯霉素、 卡那霉素、氨苄青霉素等)。 减低： 常 见于重症慢性肾炎、乳糜泻、贫血、恶病 质、儿童甲状腺功能不全或
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简介： 碱性磷酸酶是一种磷酸单酯酶，广泛
存在于人体组织和体液中，以骨、肝、乳 腺、肠粘膜、肾，胎盘中。
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临床意义：
增高： ①阻塞性黄疸、肝硬化、肝 坏死，碱性磷酸酶明显升高(肝细胞性黄 疸则升高不明显)。 ②原发性和继发性肝 癌时碱性磷酸酶亦明显升高，与癌组织中 或癌肿周围肝细胞合成碱性磷酸酶增加有 关。 ③其他肿瘤如乳腺癌、肺癌、卵巢 癌、骨细胞瘤、骨肉瘤等，碱性磷酸酶增 高时，提示可能有肝脏转移。
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临床意义： 减退、维生素C缺乏症坏血病)。营养不良、 呆小症、遗传性低磷酸酶血症。
生化大实验--AKP(碱磷酶)的表达与纯化
三、AKP表达纯化
实验设计
培养表达，收集菌体 表达菌体超声破碎
纯化监测
紫外监测
高速离心去沉淀
浓度测定
离子交换层析粗分离
OD280
加热除杂,高速离心
比活力
硫铵沉淀富集
SDS-PAGE
分子筛层析进一步分离
透析浓缩
纯化方案的评估
组分 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ 体积 mL 蛋白 mg/mL 总蛋 白 mg 活力 U/mL 总活 力 U 比活力 U/mg 提纯 倍数 1 回收 率 100％
5. 鉴 定 方 法 电泳：琼脂糖电泳、聚丙烯凝胶电泳 免疫分析：凝集反应、免疫扩散、固相免疫吸附、 免疫印迹等 色谱：气相色谱、高压液相色谱、质谱 特定的化学反应、PCR、生物芯片、DNA测序、 DNA重组杂交技术、表型变化等 6. 标记技术 7. 实验数据的测量、记录、处理与分析 8. 试剂的配制与保存 9. 样品的保存与处理
相对误差：绝对误差在真实值中所占的百分率。
精确度和偏差：精确度表示在相同条件下，进行多次实验的测定值相近 的程度。一般用偏差来衡量分析结果的精确度。 偏差：绝对偏差、相对偏差。
误差来源
1、系统误差（可测误差）： 测定过程中，某些经常发生的原因所造成的，它对测定结果的影响比较稳定， 在同一条件下重复测定中常重复出现，使测定结果不是偏高，就是偏低，而 且大小有一定规律，它的大小与正负往往可以测定出来，至少从理论上来说
提高实验准确度的方法
减少系统误差：
设置标准对照和空白试验 、校正仪器 减少偶然误差： 平均取样、多次取样 减少责任误差： 提高认识、端正实验态度、加强管理等
分子筛层析：
将上述离心上清上样、洗脱（Buffer A）
洗脱流速为15 mL/小时，每管接收2 mL
生物化学大实验-akp的浓度测定与活性检测
用于制备样品和分离细 胞或组织中的不同组分。
用于保持反应温度恒定。
用于精确移取一定量的 样品和试剂。
PART 04
实验步骤与方法
REPORTING
WENKU DESIGN
AKP的浓度测定步骤与方法
准备试剂和设备
01
根据实验要求准备所需的试剂和设备，如AKP标准品、酶标仪、
酶标板等。
配置标准品溶液
改进建议
为了更准确地测定AKP的浓度和活性，建议采取以下措施：首先，确保试剂的纯度，避免使用含有杂质或污染物 的试剂；其次，严格控制实验条件，如温度、pH值等，确保实验条件的一致性和准确性；最后，采用更先进的 检测方法和技术，如色谱法、质谱法等，以提高实验结果的准确性和可靠性。
PART 07
参考文献
数据处理
根据标准品溶液的浓度和光密 度值绘制标准曲线，并计算待
测样本中AKP的浓度。
AKP的活性检测步骤与方法
准备试剂和设备
01 根据实验要求准备所需的试剂
和设备，如底物、终止液、分 光光度计等。
配置反应体系
02 将底物溶解在适当的缓冲液中
，加入待测样本，设置空白对 照。
启动反应
03 将反应体系在恒温条件下孵育
进行AKP的浓度和活性检测。
PART 02
实验原理
REPORTING
WENKU DESIGN
AKP的浓度测定原理
酶联免疫吸附法（ELISA）
利用抗原与抗体的特异性结合，通过酶与底物反应的显色反应，测定AKP的浓 度。
分光光度法
利用特定波长下的吸光度值与AKP浓度的线性关系，通过测定吸光度值计算 AKP的浓度。
掌握AKP的浓度测定 与活性检测方法
碱性磷酸酶的提取
碱性磷酸酶的提取碱性磷酸酶的提取、分离纯化方案及采用的技术的原因，在分离纯化过程中怎样检测纯度一、碱性磷酸酶1、碱性磷酸酶的提取碱性磷酸酶（AKP或ALP）是一种底物特异性较低，在碱性条件下能水解多重磷酸单脂化合物的酶，需要镁和锰离子为激活剂。
AKP 具有磷酸基团转移活性，能将底物中的磷酸基团转移到另一个含有羟基的接受体上，如磷酸基团的接受体是水，则其作用就是水解。
·KP最适ＰＨ范围为８.６－１０，动物中AKP主要存在于小肠粘膜、肾、骨骼、肝脏和胎盘等组织的细胞膜上。
血清AKP主要来自肝，小部分来自骨骼。
AKP可从组织中分离纯化，也可以采用基因工程表达的方式获得：将碱性磷酸酶基因克隆到重组载体，转入宿主菌中进行重组表达，并从表达菌提取，并进行酶动力学分析。
2、碱性磷酸酶的分离纯化及采用的技术AKP分离纯化的方法与一般蛋白质的分离纯化方法相似，常用中性盐盐析法、电泳法、色谱法、有机溶剂沉淀法等方法分离纯化。
有时需要多种方法配合使用，才能得到高纯度的酶蛋白。
其中，用盐分级沉淀是一种应用非常广泛的方法。
由于硫酸铵在水中溶解度很大（20℃，每升可溶760克），并且对许多酶没有很大的影响，因此它是最常用的盐。
3、碱性磷酸酶的纯度检测酶的纯浓度越高酶的比活性也就越高。
根据国际酶学委员会规定，酶的比活性用每毫克蛋白质具有的酶活性来表示，单位（U/mg?pr）来表示。
因此，测定样品的比活性必须测定：a每毫升样品中的蛋白质毫克数；b每毫升样品中的酶活性单位数。
在蛋白质或酶的分离提取过程中由于酶蛋白容易变性而失活，为了获得较好的分离提取效果，在酶的制备过程中，每经一步处理，都需测定酶的活力和比活力。
唯有比活力提高较大，提纯步骤才有效。
二、设计实验本实验采用有机溶剂沉淀法从肝匀桨中分离纯化碱性磷酸酶(简称AKP)。
先用低浓度醋酸钠(低渗破模作用)制备肝匀浆。
醋酸镁则有保护和稳定AKP 的作用。
匀浆中加入正丁醇可使部分杂蛋白变性，释出膜中酶，过滤后，以去除杂蛋白。
AKP说明书
碱性磷酸酶 (U / gprot)
=
测定管吸光度 标准管吸光度
×
标准管含酚的量 (0.003mg)
÷
取样量中的蛋白克数
= 0.081 × 0.003 ÷ (1.29 ×10−3 × 0.03) = 32.37U / gprot 0.194
南京建成生物工程研究所 南京建成科技有限公司
地 址： 南京市中央路 258－27 号 电 话：（025）83360321
基质液(ml)
0. 5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
充分混匀,37℃水浴 15 分钟
显色剂(ml)
1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5
立即混匀,在 520nm 处,1cm 光径,0 管调零,测各管 OD 值
以所测得的吸光度为纵坐标，以相应的标准浓度单位为横坐标，绘制标准曲线。
×
100ml 0.05ml
= 0.404 × 0.005 × 100 = 16.16金氏单位 /100ml
0.250
0.05
1
本试剂盒仅用于科研、实验室
南京建成
（二）、组织匀浆中 AKP 的测定：
1、 操作表：
测定管
标准管
空白管
1%组织匀浆(ml)
0.03
0.1mg/ml 酚标准液(ml)
三、操作：
Байду номын сангаас
(一)、血清（浆）中 AKP 的测定： 1、操作表：
测定管
标准管
空白管
血
清（ml）
0.05
0.1mg/ml 酚标准应用液（ml）
0.05
双 蒸 水（ml）
0.05
碱性磷酸酶是什么指标
碱性磷酸酶是什么指标
生命的意义在于健康，其中含有无限的奥秘。
通过查看碱性磷酸酶的指标可以反映人的健康情况，一旦在健康上发现了异常的情况，需要及时进行的治疗，能够帮助更好地恢复健康。
那么，碱性磷酸酶是什么指标？
碱性磷酸酶（ALP 或AKP ）是广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织经肝脏向胆外排出的一种酶。
因此，对碱性磷酸酶进行检测，能够更好地知道肝脏、骨骼、肠等器官的健康情况，如果器官有问题，碱性磷酸酶的指标就会发生变化的情况。
碱性磷酸酶的指标正常范围是1-12岁小于500U/L；大于15岁，40-150U/L；一般来说，低值要比高值少见。
碱性磷酸酶偏低有着实际临床意义，在临床上一般碱性磷酸酶偏高说明有肝胆系统疾病。
碱性磷酸酶指标低也可以见于慢性肾炎，贫血，甲状腺机能不全等。
经过临床试验研究表明，碱性磷酸酶是目前免疫诊断试剂产品最常用的标记酶之一。
主要用于阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等的检查。
通过检查，能够准确地查明病因，帮助鉴别。
时刻关注身体上的变化情况，定期进行身体检查，早发现早治疗，不耽误病情。
通过碱性磷酸酶的指标后发现器官有异常，要积极配合医生的治疗，服用相应的药物，培养积极乐观的心态面对，当身体的碱性磷酸酶发生异常时，以平静镇定的态度面对，这样生活才能越来朝着自己想要的轨迹发展。
酶的纯化实验报告
实验名称：碱性磷酸酶的分离纯化实验实验日期：2023年11月15日实验地点：生化实验室实验目的：1. 掌握碱性磷酸酶（AKP）的分离纯化技术。
2. 了解不同纯化方法对AKP纯度的影响。
3. 学习AKP的比活性测定与动力学分析。
实验原理：碱性磷酸酶（AKP）是一种在碱性条件下能水解多种磷酸单脂化合物的酶，需要镁和锰离子为激活剂。
AKP具有磷酸基团转移活性，能将底物中的磷酸基团转移到另一个含有羟基的接受体上，如磷酸基团的接受体是水，则其作用就是水解。
AKP最适范围为pH 9.5-10.5，动物中AKP主要存在于小肠粘膜、肾、骨骼、肝脏和胎盘等组织的细胞膜上。
血清AKP主要来自肝，小部分来自骨骼。
AKP的分离纯化方法与一般蛋白质的分离纯化方法相似，常用中性盐盐析法、电泳法、色谱法、有机溶剂沉淀法等方法。
本实验采用有机溶剂沉淀法从兔肝匀浆液中提取分离AKP。
实验材料：1. 兔肝匀浆液2. 正丁醇3. 丙酮4. 氯化钠5. 磷酸盐缓冲液6. 酶活性测定试剂盒7. 其他实验试剂及仪器实验步骤：1. 样品制备：将兔肝匀浆液用磷酸盐缓冲液稀释至一定浓度。
2. 有机溶剂沉淀：向稀释后的匀浆液中加入正丁醇，充分混匀，静置一段时间，过滤除去杂蛋白，收集滤液。
3. 丙酮沉淀：向滤液中加入丙酮，充分混匀，静置一段时间，过滤收集沉淀。
4. 复溶于磷酸盐缓冲液：将沉淀用磷酸盐缓冲液复溶于一定体积。
5. AKP活性测定：按酶活性测定试剂盒说明书进行AKP活性测定。
6. 比活性测定：计算AKP的比活性。
7. 动力学分析：进行AKP的动力学分析，确定米氏常数（Km）和最大反应速率（Vmax）。
实验结果：1. 有机溶剂沉淀法：通过有机溶剂沉淀法，从兔肝匀浆液中成功提取了AKP。
2. 比活性测定：AKP的比活性为0.6 U/mg。
3. 动力学分析：AKP的米氏常数为0.5 mM，最大反应速率为1.2 U/min。
讨论：本实验采用有机溶剂沉淀法成功从兔肝匀浆液中提取了AKP，并通过比活性测定和动力学分析，对AKP的纯度和特性进行了研究。
碱性磷酸酶实验报告
实验日期：2023年10月25日实验地点：生化实验室实验目的：1. 了解碱性磷酸酶（AKP）的分离纯化原理和方法。
2. 掌握碱性磷酸酶活性测定的原理和方法。
3. 通过实验验证碱性磷酸酶的动力学特性，计算其米氏常数（Km）和最大反应速度（Vmax）。
实验原理：碱性磷酸酶（AKP）是一种非特异性磷酸单酯酶，主要存在于动物和微生物体内，具有磷酸基团转移活性。
在碱性条件下，AKP能水解多种磷酸单酯化合物，生成相应的醇和磷酸盐。
本实验采用有机溶剂沉淀法从兔肝匀浆液中提取分离AKP，并通过比色法测定其活性。
实验材料：1. 兔肝匀浆液2. 丙酮3. 0.1 mol/L Tris-HCl缓冲液（pH 8.0）4. 磷酸苯二钠5. 4-氨基安替比林6. 铁氰化钾7. 移液管、移液枪、试管、试管架、恒温水浴箱、分光光度计实验步骤：1. 碱性磷酸酶提取：- 将兔肝匀浆液与丙酮以体积比1:1混合，室温下静置过夜。
- 4,000 rpm离心10分钟，弃去上清液。
- 将沉淀用0.1 mol/L Tris-HCl缓冲液（pH 8.0）溶解，得到碱性磷酸酶粗提液。
2. 碱性磷酸酶活性测定：- 取6支试管，分别加入0.02 mol/L磷酸苯二钠溶液、0.1 mol/L Tris-HCl 缓冲液（pH 8.0）、4-氨基安替比林溶液和铁氰化钾溶液。
- 在上述溶液中加入不同浓度的碱性磷酸酶粗提液，混匀后置于恒温水浴箱中反应10分钟。
- 在510 nm波长下测定吸光度，以酶活力单位（U）表示。
3. 米氏常数（Km）和最大反应速度（Vmax）计算：- 以酶活力单位（U）为纵坐标，底物浓度（mol/L）为横坐标，绘制酶活力曲线。
- 利用双倒数法（Lineweaver-Burk plot）计算米氏常数（Km）和最大反应速度（Vmax）。
实验结果：1. 碱性磷酸酶活性曲线：- 随着底物浓度的增加，酶活力逐渐增加，但在一定浓度后趋于稳定。
2. 米氏常数（Km）和最大反应速度（Vmax）：- 米氏常数（Km）为0.05 mol/L，最大反应速度（Vmax）为150 U/min。
碱性磷酸酶是检查什么
碱性磷酸酶是检查什么很多人都不是专业的医疗人员，很难明白一些治疗的意义，或是一些医生的做法。
有时候自己由于自己不明白自己的情况，就会呆滞一些问题的产生，容易导致和医生发生冲突。
所以大家还是要增长一些医生的知识。
下面小编带大家去关注一个问题，碱性磷酸酶是检查什么？碱性磷酸酶是检查什么碱性磷酸酶（ALP或AKP）是一种磷酸单酯酶，血清中ALP来源于不同的组织（肝、骨、肾、小肠、胎盘等），主要以游离形式存在，极少量与脂蛋白和免疫球蛋白结合。
正常情况下，体内ALP是来源于肝（肝ALP）和骨（骨ALP）各半。
某些病理原因（如各种肝、骨等疾病）和生理性原因（如儿童生长发育期、妊娠2个月后等）均可引起血清ALP水平改变，临床主要为肝胆和骨骼疾病所引起。
碱性磷酸酶检查偏高怎么回事1、代谢异常原因主要用于阻塞性黄疸、肝癌、胆汁淤积性肝炎等的检查，阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎都会使碱性磷酸酶偏高。
胆道排泄异常碱性磷酸酶是需要经过肝脏，然后由胆汁排出，当排泄过程中出现异常，那就会引起碱性磷酸酶偏高。
2、骨骼组织原因由于骨组织中此酶亦很活跃。
因此，孕妇、骨折愈合期、骨软化症。
佝偻病、骨细胞癌、骨质疏松等血清碱性磷酸酶会升高。
3、肝胆疾病：血清总ALP病理性升高，机会60%是由肝脏和胆道疾病引起的。
ALP是胆汁淤积性疾病的敏感指标。
其他肿瘤如乳腺癌、肺癌、卵巢癌、骨细胞瘤、骨肉瘤等，碱性磷酸酶增高时，提示可能有肝脏转移。
以上就是小编对于碱性磷酸酶是检查什么这一问题的有关资料整理。
一些定期的体检也是可以体现这样的一个问题，在体检中也可以发现一些小的问题，检查就是为了发现问题，也可以起到一个预防的作用，所以大家一定要多多注意。
小编祝大家身体健康！。
碱性磷酸酶
碱性磷酸酶（英语：Alkaline phosphatase，简称ALP或ALKP）(EC 3.1.3.1) 是一类水解酶，可在核苷酸、蛋白质、生物碱等分子上去除磷酸基，进行去磷酸化作用，在碱性环境下最为有效，故得名碱性磷酸酶。
碱性磷酸酶是广泛分布于人体各脏器器官中，其中以肝脏为最多其次为肾脏，骨骼、肠、和胎盘等组织。
这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团，从而使DNA或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端。
但它不是单一的酶，而是一组同功酶。
目录1化学特征2存在影响3物质来源4相关信息1 化学特征碱性磷酸酶碱性磷酸酶名字alkaline phosphatase (ALP 或AKP)现多用ALP系统名phosphate-monoester phosphohydrolase (alkaline optimum)其他名称还有alkaline phosphomonoesterase; phosphomonoesterase; glycerophosphatase; alkaline phosphohydrolase; alkaline phenyl phosphatase; orthophosphoric-monoester phosphohydrolase (alkaline optimum);basic phosphataseCAS 号: 9001-78-9碱性磷酸酶(AKP或ALP)属于同源二聚体蛋白，分子量为56KDa。
每个单体由449个氨基酸组成，完整的AKP分子呈现典型的α/β的拓扑结构，同时每个单体均具有一个活性中心，活性中心区域由Asp101-Ser102-Ala103三连体、Arg166、水分子、三个金属离子及其配体氨基酸组成。
AKP 被phoA 基因编码，与很多分泌蛋白一样，在细胞质内合成氨基末端带有信号肽的单体前体，信号肽引导前体跨内膜运输后被切除，同源二聚体形成。
碱性磷酸酶是一种能够将对应底物去磷酸化的酶，即通过水解磷酸单酯将底物分子上的磷酸基团除去，并生成磷酸根离子和自由的羟基，这类底物包括核酸、蛋白、生物碱等。
碱性磷酸酶染色试剂盒(改良Gomori钙钴法)
碱性磷酸酶染色试剂盒(ALP/AKP,改良Gomori钙钴法) 产品简介：碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH 9.2~9.8。
此酶主要存在于物质交换活跃之处（细胞膜），如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮。
此酶还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌之细胞膜及吞饮小泡。
现用金属沉淀法来显示碱性磷酸酶活性。
此法以天然存在的β-甘油磷酸钠为底物，经酶水解释放出磷酸，立即被钙离子沉淀为磷酸钙，再依次被置换为磷酸钴和硫化钴,最终产物为黑色硫化钴沉淀。
产品组成：自备材料：1、蒸馏水2、温箱或水浴锅操作步骤（仅供参考）：(一)石蜡切片染色1、石蜡切片脱蜡至蒸馏水。
2、切片入ALP孵育液中，37℃孵育2~12h。
3、流水洗2min，入蒸馏水。
4、入硝酸钴溶液中，37℃孵育5min。
5、流水洗5min后，入蒸馏水。
6、在上述过程中，配制硫化工作液，即取试剂(C)用蒸馏水或者去离子水稀释50倍, 即为硫化工作液，即配即用。
切片入硫化工作液，孵育2min。
7、流水洗10min，入蒸馏水。
8、石蜡切片常规脱水、透明，树胶封片。
(二)冰冻切片染色1、冰冻切片在丙酮-氯仿等量混合液内，4℃固定2~5min。
2、切片入ALP孵育液，37℃孵育5~15min。
3、流水洗2min，入蒸馏水。
4、入硝酸钴溶液中，37℃孵育5min。
5、流水洗5min后，入蒸馏水。
6、在上述过程中，配制硫化工作液，即取试剂(C)用蒸馏水或者去离子水稀释50倍, 即为硫化工作液，即配即用。
切片入硫化工作液，孵育2min。
8、流水洗10min，入蒸馏水。
9、冰冻切片用甘油明胶封片。
染色结果：酶所在阳性部位黑色硫化钴沉淀阴性对照(可选)：1、试剂(D)为不含底物的孵育液。
碱性磷酸酶的提取
碱性磷酸酶的提取、分离纯化方案及采用的技术的原因，在分离纯化过程中怎样检测纯度一、碱性磷酸酶1、碱性磷酸酶的提取碱性磷酸酶（AKP或ALP）是一种底物特异性较低，在碱性条件下能水解多重磷酸单脂化合物的酶，需要镁和锰离子为激活剂。
AKP具有磷酸基团转移活性，能将底物中的磷酸基团转移到另一个含有羟基的接受体上，如磷酸基团的接受体是水，则其作用就是水解。
·KP最适ＰＨ范围为８.６－１０，动物中AKP主要存在于小肠粘膜、肾、骨骼、肝脏和胎盘等组织的细胞膜上。
血清AKP主要来自肝，小部分来自骨骼。
AKP可从组织中分离纯化，也可以采用基因工程表达的方式获得：将碱性磷酸酶基因克隆到重组载体，转入宿主菌中进行重组表达，并从表达菌提取，并进行酶动力学分析。
2、碱性磷酸酶的分离纯化及采用的技术AKP分离纯化的方法与一般蛋白质的分离纯化方法相似，常用中性盐盐析法、电泳法、色谱法、有机溶剂沉淀法等方法分离纯化。
有时需要多种方法配合使用，才能得到高纯度的酶蛋白。
其中，用盐分级沉淀是一种应用非常广泛的方法。
由于硫酸铵在水中溶解度很大（20℃，每升可溶760克），并且对许多酶没有很大的影响，因此它是最常用的盐。
3、碱性磷酸酶的纯度检测酶的纯浓度越高酶的比活性也就越高。
根据国际酶学委员会规定，酶的比活性用每毫克蛋白质具有的酶活性来表示，单位（U/mg•pr）来表示。
因此，测定样品的比活性必须测定：a每毫升样品中的蛋白质毫克数；b每毫升样品中的酶活性单位数。
在蛋白质或酶的分离提取过程中由于酶蛋白容易变性而失活，为了获得较好的分离提取效果，在酶的制备过程中，每经一步处理，都需测定酶的活力和比活力。
唯有比活力提高较大，提纯步骤才有效。
二、设计实验本实验采用有机溶剂沉淀法从肝匀桨中分离纯化碱性磷酸酶(简称AKP)。
先用低浓度醋酸钠(低渗破模作用)制备肝匀浆。
醋酸镁则有保护和稳定AKP 的作用。
匀浆中加入正丁醇可使部分杂蛋白变性，释出膜中酶，过滤后，以去除杂蛋白。
什么是碱性磷酸酶偏高
什么是碱性磷酸酶偏高什么是碱性磷酸酶偏高碱性磷酸酶（ALP或AKP）是广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织经肝脏向胆外排出的一种酶。
这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团，从而使DNA或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端。
但它不是单一的酶，而是一组同功酶。
碱性磷酸酶偏高主要见于：1、肝胆疾病：阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等。
2、由于骨组织中此酶亦很活跃。
因此，孕妇、骨折愈合期、骨软化症。
佝偻病、骨细胞癌、骨质疏松等血清碱性磷酸酶会升高。
3、白血病、甲状腺机能亢进时，血清碱性磷酸酶亦可升高。
如果有条件可以做一下碱性磷酸酶同功酶，或者要求医院用热稳定试验鉴别是来自肝脏还是来自骨骼。
4、也可能是胆囊方面的问题，还有很多免疫系统疾病也会引起碱性磷酸酶偏高。
引起碱性磷酸酶偏高的原因碱性磷酸酶高原因很多，如生理性增高（孩子生长期），缺钙，肝炎，肿瘤等等。
年轻人一般就是前3种原因可能性比较大，建议检查一下肝炎标志物，如果没有问题，可能就是生理原因，定期监测看这项结果，如果一直稳定并且随着时间的延长有所下降就是正常的了。
1、骨骼疾病。
由于骨组织中碱性磷酸酶也很活跃，因此如果有骨骼疾病的患者会出现碱性磷酸酶偏高。
如：佝偻病、软骨病、骨折愈合期、骨质疏松、骨恶性肿瘤、恶性肿瘤骨转移等骨骼疾病的患者一般会出现碱性磷酸酶偏高。
2、肝胆疾病。
由于肝脏细胞中碱性磷酸酶最多，因此如果肝胆出现问题，碱性磷酸酶偏高是必然的。
临床如：阻塞性黄疸、病毒性肝炎、肝癌（原发性、继发性）、肝硬化、胆汁淤积性肝炎等都可引起碱性磷酸酶偏高。
3、怀孕期间。
临床孕妇也会出现碱性磷酸酶偏高的现象，导致孕妇碱性磷酸酶偏高的原因是孕妇的新陈代谢增强，导致肝脏不甚重负，从而使肝功能出现障碍，导致碱性磷酸酶偏高。
4、某些药物导致。
临床患者采用抗生素（红霉素、庆大霉素、氯霉素、卡那霉素、氨苄青霉素等）进行治疗时，会导致碱性磷酸酶偏高，同时，用巴比妥类药物治疗时也会出现碱性磷酸酶偏高。
碱性磷酸酶（AKP）特性研究探究.doc
碱性磷酸酶(AKP)特性研究探究碱性磷酸酶(AKP)是在碱性条件下水解多种磷酸酯并具有转磷酸基作用的一组酶，并且在较高温度下仍具有活性。
本实验由含pET21a-AKP表迗质粒的大肠杆菌制备碱性磷酸酶，通过一系列分离纯化的实验提纯了碱性磷酸酶。
本实验通过对纯化之后的AKP进行酶促反应速率曲线的测定、测定激活剂和抑制剂对AKP活性的影响、测定抑制剂对酶的动力学参数的影响、测定AKP的最适温度和pH以及AKP 的变性和复性等实验来研究AKP的特性。
关键词：碱性磷酸酶(AKP);反应速率曲线；激活剂；抑制剂；变性；复性；酶活力大肠杆菌碱性磷酸酶(EC. 3. 1. 3.1)，是同二聚体金属酶，能催化非特异性磷酸单酯水解，分子量是56Kda。
它的两个单体结合成具有两个活性中心的对称的活性酶，每个活性中心包含3个金属原子，即两个锌原子和一个镁原子。
大肠杆菌碱性磷酸酶被phoA基因编码，和其他分泌蛋白质一样，以在氨基末端带有一个信号肽的前体合成，转录后穿过细胞膜进入细胞质，信号肽被除去，两个成熟的单体二聚化。
碱性磷酸酶即AKP来源广泛，可来源于细菌、真菌、藻类、无脊椎动物及脊椎动物。
AKP广泛存在于各种生物体内，参与细胞磷代谢和信号肽转导的一种磷酸酶。
AKP能催化除去DNA、RNA、三磷酸核糖核苷和三磷酸脱氧核糖核苷的5’磷酸基团；去除线状DNA两端的5’磷酸可以最大限度地减少质粒DNA的自身环化；蛋白质的去磷酸化。
大肠杆菌碱性磷酸酶是一种有用的工具酶，在免疫学研究中常用作酶联试剂，将AKP与显色剂或去磷酸化后能发光的底物相互作用来揭示靶与检测酶复合物的存在。
AKP作为一种工具酶在表位连锁图谱、组织化学、免疫印迹、突变分析等方面有广泛应用，在临床上作为同工酶，疾病诊断，研究磷的代谢等。
本实验对碱性磷酸酶的特性研究主要是通过对酶活力的测定来分析的。
酶活性也称为酶活力，按照国际酶学委员会的规定，1个酶活力国际单位是指在最适反应条件（指最适pH、温度25°C等）下，1分钟内能催化1微摩尔底物转化为产物所需的酶量。
caco2细胞上下室中akp比值标准
caco2细胞上下室中akp比值标准在细胞培养中，尤其是涉及碳酸钙沉淀的研究中，上下室中的AKP（碱性磷酸酶）比值是一个重要的指标。
然而，关于Caco-2细胞上下室中AKP比值的“标准”或“正常范围”并没有一个明确的定义，这主要是因为AKP比值会受到多种因素的影响，如细胞培养条件、细胞密度、培养时间等。
Caco-2细胞是一种常用于研究肠道吸收和分泌过程的细胞模型，这种细胞在适当的培养条件下可以形成类似于肠道上皮的紧密连接，从而允许进行一些模拟肠道生理学的实验。
在这些实验中，AKP的比值通常被用作反映细胞功能状态的一个指标。
一般来说，AKP比值在Caco-2细胞上下室中升高或降低可能意味着一些重要的变化。
例如，AKP比值的升高可能表明细胞的分化和成熟程度提高，或者钙化过程正在进行。
相反，AKP比值的降低可能意味着细胞的健康状况出现问题，或者细胞正在经历一些不正常的变化。
然而，由于AKP比值是如此容易受到各种因素的影响，因此不能简单地将一个“正常范围”应用于所有情况。
在研究过程中，通常需要对实验条件进行严格的控制，并对数据进行仔细的分析，以得出有意义的结果。
为了确定Caco-2细胞上下室中AKP比值的“标准”，需要进行更多关于这种细胞模型在各种条件下的行为的研究。
这将需要一个详尽的数据库，包括在不同条件下的AKP比值数据，以及对这些数据背后的生物学过程的深入理解。
总的来说，虽然AKP比值是一个有用的生物标志物，但它并不能简单地应用于Caco-2细胞培养中作为一个“标准”。
对于任何涉及Caco-2细胞和AKP比值的研究，都需要对实验条件进行严格的控制，并对数据进行深入的分析和理解。
在未来，随着我们对Caco-2细胞培养和AKP比值的理解加深，我们可能会看到一个更加精确的“正常范围”被定义出来。
这将需要对这种细胞模型进行更深入的研究，包括对AKP比值在各种条件下的变化进行更全面的了解。
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Zn2
Asp-369、Asp-51的羧基 的其中一个氧 His-370的咪唑氮 H2O 磷酸酯的氧原子
Mg
Asp-51的另一个氧 Thr-155、Glu-322羧 基上的一个氧原子 三个水分子
与Mg配位的OH-，使Ser 去质子化，则Ser的氧 原子有更强的亲核性
AP的生理及研究作用
①可直接参与磷代谢，在钙、磷的消化、吸收、分
泌及骨化过程中发挥了重要作用 ②在基因工程中主要是应用该酶处理经限制性内切 酶切割后的载体DNA，去除载体DNA两末端的5′-磷 酸残基，以防止载体DNA自我环化，从而提高其重
组效率 。
谢谢
金属离子的作用
②酶与底物以金 属离子Zn为桥接 点，金属将底物 磷酸引导到正确 的位置（Ser-活 性部位），使酶 促反应顺利进行。
金属离子的作用
③金属Zn1中和
离去基团的负电
荷，是RO―能
够顺利离去。
金属离子的作用
④Mg定位了水
分子，催化Ser-
102的质子化和
去质子化的反应。
金属离子的作用
Zn1原子配位的氢氧根离 子进攻磷酸基，形成POH键，最终形成无机磷 酸盐与底物的非共价结 合形式。
Mg配位的水分子现在 作为一个质子酸，将 一个质子给Ser-102， 则P-Ser键断裂
金属离 Lewis酸的作用， 极化底物，使之 成为一个良好的 亲电试剂。
催化机理
H2O取代无机磷酸， 完成催化反应
底物磷酸酯嵌 其它的磷酸的氧原子则与Arg-166 中间体的磷原子 入酶的结合部 的胍基形成氢键 断裂P-OR 键 位，磷酸酯的 两个氧原子分 别与Zn1和Zn2 配位，形成两 个Zn原子之间 的磷酸盐桥
去质子化的 磷酸酯被绑定 Ser进攻磷原 子，从而导致 到Ser-102中的 Ser-残基的 磷酸化，并形成共价 活性位点 Ser磷酸盐中间体(仍然与Zn 配位)
碱性磷酸酶（ALP）
功能
结构
催化机理
金属离子的作用
碱性磷酸酶（ALP）
功能：将底物分子(核酸、蛋白质、生物碱)上的磷酸
基团除去，并生成磷酸根离子和自由的羟基。
一般用于催化核酸分子脱掉5’磷酸基团，从而使DNA 或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端。 来自肝脏：ALP1、ALP2、ALP6
①锌离子在碱性磷酸酶中有广义Lewis酸的作用，极化底 物，使之成为一个良好的亲电试剂。 ②酶与底物以金属离子Zn为桥接点，金属将底物磷酸引
导到正确的位置（Ser-活性部位），使酶促反应顺利进行。
③金属Zn1中和离去基团的负电荷，是RO-能够顺利离去。 ④Mg定位了水分子，催化Ser-102的质子化和去质子化的 反应。
同 工 酶
来自骨细胞：ALP3
来自胎盘及癌细胞：ALP4
来自小肠绒毛上皮与成纤维细胞：ALP5
结 构
二聚体蛋白 中央：10层β-折叠；两侧：15个 不等的α-螺旋； 顶部：单一的α-螺旋、三层β-折叠。 每个亚基含499个AA，均具有一个活性中心 酶中心有一个空腔口袋，用于与磷酸酯结合。
配位环境 Zn1