实验六 环境样品中细菌的分离与纯化

在自然界中，上壤是微生物生活的良好环境，其中生 活的微生物数量和种类都是极其丰富的，因此土壤是 人类开发利用微生物资源的重要基地。土壤中的微生 物数量与种类主要与土壤肥力有关，肥沃的土壤中多， 贫瘠土壤中少。其生理类群则与土壤的其他理化性质 （如通气、pH）有关，例如在通气良好的花园土中， 好气性微生物占有绝对优势。本实验以花园土为材料 分离土壤中的好气性细菌，并进行数量测定。
分离微生物时，一般是根据该微生物对营养、pH、氧 气等要求的不同，供给它们适宜的生活条件，或加入 某种抑制剂造成只利于该菌种生长，不利于其他菌种 生长的环境，从而淘汰不需要的菌种。
•单细胞挑取法
简易单细胞挑取法
micromanipulator
ຫໍສະໝຸດ Baidu
•平板分离法
•分离微生物常用的方法有稀释平板分离法和划线分离法， 根据不同的材料，可以采用不同方法，其最终目的是要在培 养基上出现欲分离微生物的单个菌落，必要时再对单菌落进 一步分离纯化。在用稀释平板法分离微生物时，还可以同时 测定待分离的微生物的数量。
三 实验器材
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus)和普通 变形菌(Proteus vulgaris)斜面菌种。
已灭菌的牛肉膏、高氏1号、土豆蔗糖培 养各1瓶，49.5 mL 无菌水（带玻璃珠）1 瓶、4.5 mL无菌水6 管、80%乙酸、10% 酚酸、95% 乙醇。
无菌培养皿12套、1 mL无菌移液管10 支、 土壤样品、天平等。
四 操作步骤 • 制备土壤稀释液
• 倾注平板
•培养
• 挑菌落
接种和分离工具 1．接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7. 接种锄 8.小解剖刀
isolation plate
•移接斜面
常用的接种方法 划线接种 点接种 穿刺接种 涂布接种 液体接种 注射接种
斜面接种时的无菌操作 (1)接种灭菌 (2)开启棉塞 (3)管口灭菌 (4)挑起菌苔 (5)接种 (6)塞好棉塞
模块 一 实验二 环境样品中细菌的 分离与纯化
一 实验目的 通过从环境中分离纯化细菌，初步掌握微
生物的分离纯化方法和无菌操作技术。 二 实验原理
- 常用的分离纯化方法
自然条件下，微生物常以群落状态存在，这种群 落往往是不同种类微生物的混合体。为了研究某 种微生物的特性或者要大量培养和使用某种微生 物，必须从这些混杂的微生物群落中获得纯培养， 这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。
•纯化（平板划线法）
倒平板——划线——培养——挑菌落——纯种（纯培养）
平板划线分离的方法
1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法
五 注意事项
制备土壤稀释液时，要注意使土样均匀分散在 稀释液中。
注意无菌操作。
六 思考题
试拟出从土壤中分离芽孢杆菌的主要实验步骤。 如何检验平板上某个单菌落是不是纯培养？