研究生-分子生物学Ⅱ笔记整理版
分子生物学笔记
1.原核DNA复制特点1)复制起始在拓扑异构酶I的作用下解开DNA负超螺旋后,与解链酶共同作用,在复制起点处解开双链,解链过程中SSB蛋白稳定被解开的单链保证局部不恢复回双链。
解链过程中需要ATP提供能量。
解链后,由引发酶直接在DNA前导链模板上合成引物;由蛋白n、n`、n``、DnaB、C、I共同组成引发体在后随链上合成引物RNA。
2)复制延伸延伸过程中,前导链连续延伸;后随链上,引发体延5`→3`方向前进并合成RNA引物,再由DNA聚合酶Ⅲ断断续续合成小的DNA片段。
小片段上RNA引物被RNase H降解,DNA片段被DNA聚合酶I连接成完整DNA链。
3)复制终止当复制叉遇到由22个碱基组成的Ter序列时,Ter-Tus复合物使DnaB停止DNA解链,阻挡复制叉前移。
在反方向复制叉到达后,停止复制,其间50-100bp 未被复制的片段由DNA修复机制补齐。
然后两条链分开,并在拓扑异构酶Ⅳ作用下使复制叉解体,释放子链。
2.原核RNA转录1)模板识别原核RNA聚合酶可直接与启动子区结合,完成转录起始2)转录起始RNA聚合酶先与启动子可逆结合,形成封闭复合物。
之后DNA双链构象发生变化,封闭复合物转为开放复合物,使RNA聚合酶结合的DNA序列中有一小段双链被解开。
解链后,开放复合物与最初两个NTP 结合形成磷酸二酯键并转变为RNA 聚合酶-DNA- 新生RNA 链三元复合物。
之后,转录起始后直到形成 9个核苷酸短链是通过启动子阶段,此时RNA聚合酶一直处于启动子区,新生的 RNA链与 DNA模板链的结合不够牢固,很容易从DNA链上掉下来并导致转录重新开始。
一旦RNA聚合酶成功地合成 9个以上核苷酸并离开启动子区,转录就进入正常的延伸阶段。
3)转录延伸当RNA聚合酶催化新生RNA链长度超过9-10个核苷酸时,σ因子脱离转录复合物,RNA聚合酶离开启动子,核心酶延模板移动使新生RNA链不断延伸。
4)转录终止RNA聚合酶碰到终止信号后,与模板脱离并释放新生RNA。
最新现代分子生物学-复习笔记
现代分子生物学复习提纲第一章绪论第一节分子生物学的基本含义及主要研究内容1 分子生物学Molecular Biology的基本含义⏹广义的分子生物学:以核酸和蛋白质等生物大分子的结构及其在遗传信息和细胞信息传递中的作用为研究对象,从分子水平阐明生命现象和生物学规律。
⏹狭义的分子生物学:偏重于核酸(基因)的分子生物学,主要研究基因或DNA的复制、转录、表达和调控等过程,也涉及与这些过程相关的蛋白质和酶的结构与功能的研究。
1.1 分子生物学的三大原则1) 构成生物大分子的单体是相同的2) 生物遗传信息表达的中心法则相同3) 生物大分子单体的排列(核苷酸、氨基酸)的不同1.3 分子生物学的研究内容●DNA重组技术(基因工程)●基因的表达调控●生物大分子的结构和功能研究(结构分子生物学)●基因组、功能基因组与生物信息学研究第二节分子生物学发展简史1 准备和酝酿阶段⏹时间:19世纪后期到20世纪50年代初。
确定了生物遗传的物质基础是DNA。
DNA是遗传物质的证明实验一:肺炎双球菌转化实验DNA是遗传物质的证明实验二:噬菌体感染大肠杆菌实验RNA也是重要的遗传物质-----烟草花叶病毒的感染和繁殖过程2 建立和发展阶段⏹1953年Watson和Crick的DNA双螺旋结构模型作为现代分子生物学诞生的里程碑。
⏹主要进展包括:遗传信息传递中心法则的建立3 发展阶段⏹基因工程技术作为新的里程碑,标志着人类深入认识生命本质并能动改造生命的新时期开始。
⏹第三节分子生物学与其他学科的关系思考⏹证明DNA是遗传物质的实验有哪些?⏹分子生物学的主要研究内容。
⏹列举5~10位获诺贝尔奖的科学家,简要说明其贡献。
第二章染色体与DNA第一节染色体1.作为遗传物质的染色体特征:⏹分子结构相对稳定⏹能够自我复制⏹能够指导蛋白质的合成,从而控制整个生命过程;⏹能够产生遗传的变异。
2 真核细胞染色体组成(1) DNA(2) 蛋白质(包括组蛋白和非组蛋白)(3) 少量的RNA组蛋白:呈碱性,结构稳定;与DNA结合形成、维持染色质结构,与DNA含量呈一定的比例非组蛋白:呈酸性,种类和含量不稳定;作用还不完全清楚3.染色质和核小体染色质是一种纤维状结构,由最基本的单位—核小体(nucleosome)成串排列而成的。
分子生物学考试整理笔记
分⼦⽣物学考试整理笔记第⼀章1.请定义DNA重组技术和基因⼯程技术。
DNA重组技术:是将不同的DNA⽚段按照⼈们的设计定向连接起来,在特定的受体细胞中与载体同时复制并得到表的,产⽣影响受体细胞的新的遗传性状。
基因⼯程技术:是将不同的DNA⽚段按照⼈们的设计定向连接起来,在特定的受体细胞中与载体同时复制并得到表的,产⽣影响受体细胞的新的遗传性状。
还包括其他可能使⽣物细胞基因组结构得到改造的体系。
第⼆章2.什么是核⼩体?简述其形成过程。
由DNA和组蛋⽩组成的染⾊质纤维细丝是许多核⼩体连成的念珠状结构。
核⼩体是由H2A,H2B,H3,H4各两个分⼦⽣成的⼋聚体和由⼤约200bp的DNA组成的。
⼋聚体在中间,DNA分⼦盘绕在外,⽽H1则在核⼩体外⾯。
每个核⼩体只有⼀个H1。
所以,核⼩体中组蛋⽩和DNA的⽐例是每200bpDNA有H2A,H2B,H3,H4各两个,H1⼀个。
⽤核酸酶⽔解核⼩体后产⽣只含146bp核⼼颗粒,包括组蛋⽩⼋聚体及与其结合的146bpDNA,该序列绕在核⼼外⾯形成1.75圈,每圈约80bp。
由许多核⼩体构成了连续的染⾊质DNA细丝。
核⼩体的形成是染⾊体中DNA压缩的第⼀阶段。
在核⼩体中DNA盘绕组蛋⽩⼋聚体核⼼,从⽽使分⼦收缩⾄原尺⼨的1/7。
200bpDNA完全舒展时长约68nm,却被压缩在10nm的核⼩体中。
核⼩体只是DNA压缩的第⼀步。
核⼩体长链200bp→核酸酶初步处理→核⼩体单体200bp→核酸酶继续处理→核⼼颗粒146bp3. 简述DNA的⼀,⼆,三级结构的特征DNA⼀级结构:4种核苷酸的的连接及排列顺序,表⽰了该DNA分⼦的化学结构DNA⼆级结构:指两条多核苷酸链反向平⾏盘绕所⽣成的双螺旋结构DNA三级结构:指DNA双螺旋进⼀步扭曲盘绕所形成的特定空间结构4.原核⽣物DNA具有哪些不同于真核⽣物DNA的特征?(1)结构简练:原核DNA分⼦的绝⼤部分是⽤来编码蛋⽩质,只有⾮常⼩的⼀部分不转录,这与真核DNA的冗余现象不同。
分子生物学笔记
分子生物学笔记中心法则(Central dogma)DNA的组成DNA的融解温度Tm,高GC含量使得DNA的Tm升高,以及GC的体积较小,使得测得密度较大DNA变性的条件:有机化合物,高pH,低盐浓度探针和DNA杂交基因组是一个生物体的所有遗传信息的集合。
染色体的组成:DNA、蛋白质、RNA组蛋白Histones:五种H1、H2A、H2B、H3、H4核小体核心由8个组蛋白组成H2A、H2B、H3、H4各两个(组蛋白八聚体)146bpDNA核小体核心+H1+linkerDNA组成了染色体组蛋白的修饰乙酰化:转录激活,结构变松散DNA复制半保留复制DNA聚合酶只能从5‘到3’合成DNA(前导链)2. 3‘到5’的DNA聚合酶移动是半不连续复制(后随链,也是从5’-3‘合成)冈崎片段(DNA+RNA引物),后随链绕DNA聚合酶一圈,使得两者的复制方向相同细菌的后随链片段约1000nt,真核细胞中约200nt3. 引物和模板依赖DNA聚合酶不能从头合成DNA,必须前面由10-12nt的RNA引物提供3’羟基引物酶在合成DNA前加上一小段RNA引物复制叉两条母链解开时形成复制叉(replication fork)拓扑异构酶(DNA旋转酶,gyrases):去除DNA的超螺旋结构DNA解旋酶(DNA helicase):DnaB作用以及DnaA、DnaC等其他蛋白质SSBP:单链结合蛋白,稳定解旋后的单链引物酶:合成RNA引物,需要引发体DNA聚合酶Ⅲ(原核):同时合成两条链,链伸长DNA聚合酶Ⅲ:从5‘-3’合成DNA片段,然后删去RNA引物(具有核酸外切酶5‘-3’活性),发生缺口平移(缺口出现在引物和冈崎片段之间)DNA连接酶:去除引物后,连接冈崎片段和之前合成的片段滑动夹:保持DNA聚合酶不从DNA上掉下来端粒酶(telomerase):DNA复制酶只能5‘-3’合成DNA片段,因此DNA两端5’的RNA引物去除后不能让DNA聚合酶Ⅲ生成替换RNA引物的DNA片段(末端隐缩)。
分子生物学笔记
1、分子生物学(狭义):即在核酸与蛋白质水平上研究基因的复制,基因的表达(包括RNA转录、蛋白质翻译),基因表达的调控以及基因的突变与交换的分子机制。
2、分子生物学(广义):即在分子水平上研究生命现象,或用分子的术语描述生物现象的学科。
3、克里克认为分子生物学基于两个基本原理:①序列假说:是指核酸片段的特异性完全由其碱基序列决定,而且这种序列是某一蛋白质氨基酸的密码。
②中心法则:是指DNA的遗传信息经RNA一旦进入蛋白质,也就不可能再行输出。
4、分子生物学作为所有生命物质的共性学科所遵循的三大原则:①构成生物大分子的单体是相同的。
共同的核酸语言,即构成核酸大分子的单体均是A、T(U)、C、G;共同的蛋白质语言,构成蛋白质大分子的单体均是20种基本氨基酸。
②生物大分子单体的排列(核苷酸,氨基酸)决定了生物性状的差异和个性特征。
③生物遗传信息的表达的中心法则相同。
5、生物学的三大发现:DNA 双螺旋结构的揭示、遗传密码子的破译、信使RNA的发现。
奠定了DNA-RNA-蛋白质三者之间关系的基础。
第二章:基因概念的演变与发展1、遗传学家摩尔根根据对果蝇的遗传试验提出了基因是:基因像念珠(bead)一样孤立地呈线状一样排列在染色体上,是具有特定功能、能独立发生突变和遗传交换的、“三位一体”的、最小的遗传单位。
2、等位基因:是指野生型基因(A)发生突变后形成的突变基因(a),它与野生型基因位于相同染色体的同一基因座位上。
当野生型基因(A)向不同方向发生突变形成不同状态的等位基因,又总称为复等位基因。
3、拟等位基因:将紧密连锁、控制同一性状的非等位基因定义为拟等位基因。
4、科学家们通过对噬菌体突变体与表型之间的关系的研究,提出了顺反子理论:顺反子是基因的同义词,认为基因是一个具有特定功能的、完整的、不可分割的最小遗传单位。
在一个基因内可以发生突变、重组(交换)。
该理论认为:基因(即顺反子)是染色体上的一个区段,在一个顺反子内有若干个交换单位,最小的交换单位称为交换子;在一个顺反子中有若干个突变单位,最小的突变单位被称为突变子。
生物化学与分子生物学知识点总汇-研究生考试必备
第一章蛋白质结构的基本组件1按侧链(R )基团的结构不同:脂肪族gly ala val lue ile 芳香族:Phe,Trp,Tyr 杂环族:His,Pro 2按侧链(R )基团的极性性质不同:带正电荷(碱性氨基酸)带负电荷(酸性氨基酸)asp glu asn gln(1) 疏水氨基酸包括Ala, Val, Leu, Ile, Met, Pro,Phe 和Trp(8)。
(2) 极性氨基酸包括Gly,Ser, Thr, Asn, Gln, Cys 和Tyr (7) 。
(3) 荷电氨基酸包括Asp, Glu, Arg ,His 和Lys(5)。
4构型:原子在空间的相对分布或排列称为分子的构型。
原子在空间的相对分布或排列称为分子的构型。
[ [ [ 当一种构型改变为另一种构型时必须有共价键的断裂当一种构型改变为另一种构型时必须有共价键的断裂和重新形成。
这种异构体在化学上可以分离,但不能通过简单的单键旋转相互转换和重新形成。
这种异构体在化学上可以分离,但不能通过简单的单键旋转相互转换]]5构象:是组成分子的原子或基团绕单键旋转而形成的不同空间排布。
是组成分子的原子或基团绕单键旋转而形成的不同空间排布。
[[一种构象转变为另一种构象不要求有共价键的断裂和重新形成,在化学上难于区分和分离的键的断裂和重新形成,在化学上难于区分和分离的] ]6 优势构象与旋转异构体任何除Gly 以外的氨基酸侧链中的组成基团都可以绕着其间的C-C 单键旋转,从而产生各种不同的构象。
在化学上有一个一般的原则,对二个四面体配位的碳原子,“交错构象”是能量上最有利的排布,在这种构象中,在这种构象中,一个碳原子的取代基正好处于另一个碳原子的二个取代基之间。
一个碳原子的取代基正好处于另一个碳原子的二个取代基之间。
一个碳原子的取代基正好处于另一个碳原子的二个取代基之间。
侧链中的每一个这种侧链中的每一个这种C 原子,都有三种交错构象,它们彼此以120°旋转相关。
分子生物学知识点总结
分子生物学知识点总结分子生物学是研究生物体中分子结构、功能和相互作用的学科。
它在解释细胞和生命现象的分子基础方面发挥着重要作用。
以下是分子生物学的几个核心知识点总结:DNA的结构和功能DNA是生物体中遗传信息的储存和传递的分子。
它由核苷酸组成,每个核苷酸包含一个磷酸基团、一个五碳糖(脱氧核糖)和一个氮碱基。
DNA的双螺旋结构由两股互补的链组成,通过氢键相连。
DNA的功能包括遗传信息的复制、转录和翻译,是细胞遗传信息的储存库。
RNA的结构和功能RNA也是由核苷酸组成的分子,与DNA的结构类似,但包含的糖是核糖,而不是脱氧核糖。
RNA起到多种功能,其中包括转录DNA信息、参与蛋白质合成等。
mRNA是将DNA信息转录成蛋白质合成的模板,tRNA通过与mRNA和氨基酸的配对作用,在翻译过程中帮助氨基酸正确排列。
基因表达调控基因表达调控是细胞根据内外环境调节基因转录和翻译的过程。
它包括转录因子、启动子、启动子结合因子、RNA干扰等。
转录因子结合在DNA上的启动子区域,促进或抑制转录的发生。
通过不同的基因表达调控方式,细胞可以在不同的发育和环境条件下产生不同的蛋白质。
基因突变和遗传疾病基因突变是DNA序列发生突变或改变的现象。
它可以是点突变、插入突变、缺失突变等。
基因突变可能导致蛋白质功能的改变,从而引起遗传疾病。
例如,单基因遗传病如囊性纤维化和苯丙酮尿症,以及复杂遗传病如癌症,都与基因突变有关。
PCR技术聚合酶链反应(PCR)是一种体外扩增DNA的技术,可以从微弱的DNA样本中扩增特定片段。
PCR由三步循环组成:变性、退火和延伸。
它广泛应用于分子生物学研究、基因工程和医学诊断等领域。
基因克隆和DNA测序基因克隆是将特定的DNA片段插入载体DNA(如质粒)中,形成重组DNA分子。
通过基因克隆,可以大量复制目标DNA片段。
DNA 测序是确定DNA序列的过程,它有助于揭示基因的结构和功能,促进遗传学和进化生物学的研究。
《分子生物学导论》笔记_学习笔记
《分子生物学导论》笔记第一章:分子生物学概述1.1分子生物学的定义与发展1.2分子生物学的研究对象1.3分子生物学与其他学科的关系1.4分子生物学的重要性第二章:DNA的结构与功能2.1DNA的双螺旋结构2.2DNA的复制机制2.3DNA的修复与重组2.4DNA的功能与基因表达第三章:RNA的类型与作用3.1信使RNA(mRNA)3.2转运RNA(tRNA)3.3核糖体RNA(rRNA)3.4小RNA及其功能第四章:蛋白质的合成与功能4.1转录与翻译过程4.2蛋白质的结构层次4.3蛋白质的折叠与修饰4.4蛋白质的功能与作用机制第五章:基因调控机制5.1基因表达调控的基本概念5.2转录因子与增强子5.3表观遗传学与基因表达5.4RNA干扰与基因沉默第六章:分子生物学的应用6.1分子生物学在医学中的应用6.2分子生物学在农业中的应用6.3分子生物学在生物技术中的应用6.4未来发展与挑战第1章:分子生物学概述分子生物学的定义与发展分子生物学是研究生命现象的分子基础的科学,主要关注生物大分子的结构、功能及其相互作用。
其核心内容包括DNA、RNA和蛋白质的相互关系。
分子生物学的起源可以追溯到20世纪初,随着显微镜技术的发展,科学家们对细胞组成的认识逐渐深入。
1940年代,随着DNA的双螺旋结构被发现,分子生物学开始正式形成。
关键概念包括:DNA(脱氧核糖核酸):遗传信息的载体,结构为双螺旋。
RNA(核糖核酸):在基因表达中起到中介作用,主要类型有信使RNA(mRNA)、转运RNA(tRNA)和核糖体RNA(rRNA)。
蛋白质:由氨基酸构成,承担细胞内外的多种功能。
重要发展里程碑:1953年,沃森和克里克提出DNA双螺旋结构。
1961年,霍普金斯等人发现RNA的转译机制。
1970年代,基因工程技术的引入,推动了分子生物学的应用。
考点:分子生物学定义的准确描述DNA、RNA和蛋白质的基本功能和相互关系重要历史事件及其影响分子生物学的研究对象分子生物学的研究对象主要包括核酸(DNA和RNA)、蛋白质、酶及其相互作用。
分子生物学笔记
1、Allele(等位基因):是指位于染色体的相同位置上控制着同一个性状的基因。
2、Cistron(顺反子):是基因的同义词,是染色体上的一个区段,在一个顺反子内有若干个交换单位,即交换子(recon);在一个顺反子中有若干个突变单位,即突变子(muton),它的提出是对“基因概念”的一种修正。
3、Operon(操纵子):为了使基因表达调控更有效,生物体往往将功能相关的一组基因连续排列,协调控制它们的表达,组成一组连续排列,协调表达的基因组,即操纵子。
(必考)4、Gene(基因):是指可遗传的,可自我复制,可表达功能,可以突变的,最小的功能单位。
5、RNA与DNA在结构上的差别:RNA中的核糖的2'位含有OH基,DNA中没有;RNA碱基中没有胸腺嘧啶T,只有尿嘧啶U;RNA分子多为单链分子,DNA分子为双琏分子;RNA分子的化学稳定性差,易发生降解;RNA与DNA在功能上的差别:DNA作为主要遗传物质,控制着生物的代谢和遗传;RNA在细胞中mRNA、tRNA和rRNA,其中mRNA,作为DNA转录的产物,直接翻译蛋白质,是DNA和蛋白质之间的信使,起到遗传信息的传递作用,tRNA在翻译中将携带氨基酸与核糖体结合,起到运输氨基酸的载体作用,rRNA又叫核糖体RNA,与核糖体的合成有关,是核糖体的成分之一,也与蛋白质的合成有关。
6、双螺旋(double helix)的结构特点:每一单链具有5'→ 3'极性;两条单链间以碱基间的氢键连接;两条单链,极性相反,反向平行;以中心为轴,向右盘旋(B-form);双螺旋中存在大沟(2. 2nm)和小沟(1. 2nm)7、维持双螺旋结构的作用力:(注意一下影响双螺旋结构稳定性的因素)横向作用力——氢键和碱基堆积力(非特异性结合力,同一条核苷酸链中,相邻碱基的疏水作用力和范德华力)→弱键,可加热解链纵向作用力——磷酸酯键→强键,需酶促解链8、Tm值(变性/熔解/退火温度):DNA的双螺旋结构降解一半时的温度或OD增加值的中点温度(一般为85-95℃)影响Tm值的因素:☆在A, T, C, G 随机分布的情况下,GC%愈高,Tm值愈大,GC%愈低,Tm值愈小☆GC%含量相同的情况下,AT形成变性核心,变性加快,Tm值小,碱基排列对Tm 值具有明显影响(除变性核心外)相同的碱基组成,不同的排列,碱基堆积力不同☆对于大片段D.S. DNA分子,片段长短对Tm值的影响较小, 与组成和排列相关,而对于小于100bp 的D.S DNA分子,片段愈短,变性愈快,Tm值愈小☆变性液中含有尿素,酰胺等有机试剂,可与碱基间形成氢键,从而改变碱基对间的氢键,一般Tm值可降至40℃左右☆盐浓度的影响,由于单链DNA主链的磷酸基团,而使DNA存在负电荷的静电斥力,会导致两条单链DNA的分离,而Na盐的浓度可以消除DNA单链上磷酸基团间的静电斥力,使DNA趋于稳定☆极端pH条件的影响,改变氢键的形成与结合力总之,一切减弱氢键,减弱碱基堆积力的因素均将使Tm值降低9、变性与复性变性:D.S. DNA经加温,极端pH,尿素,酰胺变为S.S. DNA的过程复性:变性条件解除后S.S. DNA重新变为D.S. DNA复性过程依赖于单链分子间的随机碰撞10、超螺旋结构的形成规律:L=T+W (L:双链DNA的交叉数,T:双链DNA的缠绕数,W:超螺旋的数目)W=负值(negative superhelix)W =正值( positive superhelix)11、生物体内主要是以右旋B—DNA为主,且生物体内DNA多数以负超螺旋(松弛态)存在(见书47)12、目前,仅在生活在极端高温环境下(如温泉)中的嗜热微生物体内发现了正超螺旋(紧缩态)DNA,是由于高温容易使DNA变性,双链解开。
研究生-分子生物学Ⅱ笔记整理版
分子生物学Ⅱ专题一细胞通讯与细胞信号转导(一)名词解释(1)信号分子(signal molecule):是指在细胞间或细胞内进行信息传递的化学物质。
(2)受体(receptor):是指细胞中能识别信息分子,并与之特异结合、引起相应生物效应的蛋白质。
(3)蛋白激酶(protein kinase):是指使蛋白质磷酸化的酶。
(二)简答分析(1)细胞通讯的方式及每种作用方式的特点。
答:细胞通讯方式细胞间隙连接膜表面分子接触通讯化学通讯各类方式特点①两个相邻的细胞以连接子相联系;②细胞间的直接通讯方式。
①细胞通过其表面信号分子(受体)与另一细胞表面的信号分子(配体)选择性地互作,最终产生细胞应答;②细胞间的直接①细胞分泌一些化学物质(如激素)至细胞外,作为信号分子作用于靶细胞,调节其功能;②细胞间的间接接通讯方式;③包括内分泌,旁分泌和通讯方式。
自分泌三种形式。
(2)膜受体介导的信息传递途径的基本规律。
答:配体→膜受体→第二信使→效应蛋白→效应。
(3)试以肾上腺素、干扰素、胰岛素、心纳素为例,阐述其信息转导过程。
答:①肾上腺素:cAMP-PKA途径;过程:首先肾上腺素与其受体结合,使G蛋白被激活;然后G蛋白与膜上的腺苷酸环化酶相互作用,后者将ATP转化为cAMP;最后cAMP磷酸化PKA,从而产生一系列生物学效应。
②胰岛素:受体型TPK途径;过程:胰岛素与其靶细胞上的受体结合后,可使其受体中的TPK激活,随后通过下游的Ras途径继续传递信号,直至发生相应的生物学效应。
③干扰素:Jak-STAT途径;过程:首先干扰素与受体结合导致受体二聚化,然后受体使JAK(细胞内TPK)激活,接着JAK将下游的STAT磷酸化形成二聚体,暴露出入核信号,最后STAT进入核内,调节基因表达,产生生物学效应。
④心钠素:cGMP-PKG途径;过程:心钠素与其受体结合,由于该受体属于GC型酶偶联受体,具有鸟苷酸环化酶的的活性,因此结合后可直接将GTP转化为cGMP,进而激活下游的PKG,最终产生一系列的生物学效应。
分子生物学核心笔记
医学分子生物学九阴真经第一章~第八章酶。
然后再病毒RNA聚合酶的作用下以病毒基因组基因genes:基因是负责编码RNA或一条多肽链DNARNA为模板合成出负链,在以负链为模板复制病毒片段,包括编码序列、编码序列外的侧翼序列及插入RNA,并以复制的病毒RNA和衣壳蛋白自我装配成序列。
是决定遗传性状的功能单位。
为成熟的病毒颗粒。
这些病毒称为单股正链RNA病结构基因structure genes:基因中编码RNA或蛋白毒。
2单股负链RNA病毒需要先合成与其互补的质的DNA序列称为结构基因。
MRNA:先以病毒基因组RNA为模板转录生成互补基因组genome:一个细胞或病毒的全部遗传信息。
RNA,再以这个互补RNA作为mRNA翻译出遗传密(细胞或生物体的一套完整单倍体的遗传物质的总码所决定的蛋白质。
3、双链RNA病毒基因组含有正、和。
)真核生物基因组是指一套完整单倍体DNA(染负两条RNA链。
4、部分RNA病毒基因组可以被反色体DNA)和线粒体DNA的全部序列,包括编码序转录为DNA:有一类特殊的单股正链RNA病毒,即列和非编码序列。
逆转录病毒,在这些病毒颗粒中带有依赖RNA的GT-AG法则:真核生物基因的外显子与内含子接头DNA聚合酶,即逆转录酶,能使RNA反向转录生成处都有一段高度保守的一致性序列,即:内含子5’DNA。
逆转录病毒基因组一般包括三个基本的结构基端大多数是以GT开始,3’端大多是以AG结束。
因,即:gag,pol,env,分别编码核心蛋白、逆转录酶端粒:以线性染色体形式存在的真核基因组DNA末和膜蛋白。
三、DNA 病毒基因组有环状DNA分子和端都有一种特殊的结构叫端粒。
该结构是一段DNA线性DNA分子。
四、其他:形式多样、大小不一、序列和蛋白质形成的一种复合体,仅在真核细胞染色基因重叠;、动物/细菌病毒与真核/原核基因相似:内体末端存在。
端粒DNA由重复序列组成,人类端粒含子;具有不规则的结构基因;基因编码区无间隔:一端是TTAGGG另一端是AATCCC. 通过宿主及病毒本身酶切;无帽状结构;结构基因没操纵子:是指数个功能上相关的结构基因串联在一有翻译起始序列。
考研分子生物学知识点浓缩
考研分子生物学知识点浓缩分子生物学是生物学领域中关于生物分子结构、功能和相互作用的研究。
作为生物技术的主要基础,分子生物学相关知识在考研中占据重要的一部分。
本文将对考研分子生物学涉及的重要知识点进行浓缩总结,帮助考生快速复习和掌握。
1. DNA的结构与功能DNA是生物体内贮存遗传信息的重要物质,其分子结构与功能对于理解生物遗传学至关重要。
DNA分子由脱氧核苷酸组成,包含糖基、碱基和磷酸基团。
碱基有腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)、鸟嘌呤(G)和胞嘧啶(C)四种,通过碱基配对的方式两根DNA链互补结合。
DNA分子的功能包括遗传信息的存储和传递,以及生物体内的基因表达和蛋白质合成等。
2. DNA复制与遗传信息传递DNA复制是生物体遗传信息传递的基础过程。
在DNA复制过程中,DNA双链解旋、DNA聚合酶的作用和DNA链的延伸是关键步骤。
DNA复制遵循半保留复制的原则,即在复制过程中,每一条亲本DNA 链作为模板合成一条新的DNA链,从而保证遗传信息的准确传递。
DNA复制还需要基因组复制起始位点、原始转录和DNA连接酶等参与。
3. RNA的结构与功能RNA与DNA类似,是一种核酸分子。
RNA分子由核苷酸组成,包括核糖、碱基和磷酸基团。
与DNA不同的是,RNA中的胞嘧啶被尿嘧啶(U)取代。
RNA分子包括mRNA(信使RNA)、tRNA(转运RNA)和rRNA(核糖体RNA)等多种类型。
这些RNA在生物体内承担重要的功能,如mRNA传递DNA信息、tRNA参与蛋白质合成等。
4. 基因调控与表达基因调控是生物体遗传信息在不同细胞和组织中表达差异的关键。
基因调控机制包括转录调控和转录后调控两个层次。
在转录调控中,启动子、转录因子和转录起始位点等参与基因转录的关键元件。
而在转录后调控中,包括剪接、RNA稳定性和蛋白质翻译等过程。
通过这些调控机制,生物体能实现基因表达的精准控制和调节。
5. 基因工程与基因组编辑基因工程是分子生物学在应用层面的重要领域。
(整理)分子生物学辅导笔记.
分子生物学辅导笔记.txt求而不得,舍而不能,得而不惜,这是人最大的悲哀。
付出真心才能得到真心,却也可能伤得彻底。
保持距离也就能保护自己,却也注定永远寂寞。
(前4章注意概念就行了,重点是转座子,RNA编辑)Chapter1真核生物基因组结构与功能的特点本章应掌握的基本概念细胞核基因组的大小;C值矛盾;重复序列;基因家族;真核基因的断裂结构基因家族(gene family) 指核苷酸序列或编码产物的结构具有一定程度同源性的一组基因。
假基因(pseudogene) 在多基因家族中有的成员并不能表达出有功能的产物。
1、核酸序列相同:即为多拷贝基因如rRNA基因家族,tRNA基因家族,组蛋白基因家族。
2、核酸序列高度同源:如人类生长激素基因家族包括三种激素的基因,人生长激素、人胎盘促乳素和催乳素,它们之间高度同源。
3、编码产物有同源功能:基因序列的相似性可能较低,但基因编码的产物具有高度保守的功能区。
如src癌基因家族4、编码产物具有小段保守基序:有些基因家族中各成员的DNA序列可能不明显相关,而所编码的产物却有共同的功能特征,存在小段保守的氨基酸基序。
基因超家族(gene superfamily) 指一组由多基因家族及单基因组成的更大的基因家族,它们的结构有不同的同源性,但功能并不一定相同。
如免疫球蛋白基因超家族。
真核基因的断裂结构断裂基因(split gene) 基因与基因间的非编码序列为间隔DNA( spacer DNA).内含子(intron)无编码意义的DNA片段外显子(extron)具有编码意义的DNA片段Chapter2 叶绿体基因组本章应掌握的基本概念叶绿体DNA的信息含量;叶绿体基因组的结构;叶绿体基因的组成;(记忆每个大标题,了解就可以了)叶绿体基因的一些结构特征。
★p33. RNA编辑Chapter3线粒体基因组本章应掌握的基本概念.线粒体基因组的大小;.线粒体基因组的组织结构;.线粒体基因组的组成;.线粒体基因的一些特征;.★p44. RNA编辑;(注意概念,分类,★意义).遗传信息在基因组之间的流动。
分子生物研究生考试知识点
分子生物研究生考试知识点第一部分:DNA和RNA的结构与功能DNA和RNA是生物体内重要的核酸分子,对于研究生阶段的学生来说,了解它们的结构与功能是非常重要的。
1. DNA的结构与功能DNA是一种双链螺旋结构的分子,由核苷酸单元组成。
每个核苷酸单元由一个糖分子、一个磷酸分子和一个碱基分子构成。
DNA的碱基有腺嘌呤(A)、鸟嘌呤(G)、胸腺嘧啶(T)和胞嘧啶(C)四种,它们之间通过氢键相互连接,形成DNA的双螺旋结构。
DNA的功能主要有两个方面:遗传信息的存储和传递。
DNA是生物体内遗传信息的主要携带者,通过遗传密码的方式,将信息传递给下一代。
此外,DNA还参与了细胞的复制和修复等过程。
2. RNA的结构与功能与DNA类似,RNA也是由核苷酸单元组成的分子,但它是单链结构。
RNA的碱基有腺嘌呤(A)、尿嘧啶(U)、鸟嘌呤(G)和胞嘧啶(C)四种,其中尿嘧啶(U)取代了DNA中的胸腺嘧啶(T)。
RNA通常存在于细胞的核糖体中,参与蛋白质的合成过程。
RNA的功能主要有三个方面:信使RNA(mRNA)负责将DNA的信息传递到核糖体中,通过蛋白质合成的过程,实现遗传信息的表达;核糖体RNA(rRNA)是核糖体的主要组成部分,参与蛋白质的合成;转运RNA(tRNA)则负责将氨基酸运输到核糖体中,参与蛋白质的合成。
第二部分:基因表达与调控基因表达与调控是分子生物学研究中的重要内容,了解基因的表达过程及其调控机制对于研究生考试中的相关问题非常有帮助。
1. 基因表达的过程基因表达是指基因中的遗传信息通过转录和翻译过程,最终转化为蛋白质的过程。
具体来说,基因表达包括三个步骤:转录、剪接和翻译。
•转录是指DNA模板链上的信息被转录为一条新的RNA链,即mRNA。
转录的过程依赖于RNA聚合酶酶和转录因子的参与。
•剪接是指mRNA的前体分子在转录后经过一系列剪接反应,将其中的内含子(intron)切除,形成成熟的mRNA。
(完整版)分子生物学笔记完全版
(完整版)分子生物学笔记完全版分子生物学笔记第一章基因的结构第一节基因和基因组一、基因(gene) 是合成一种功能蛋白或RNA分子所必须的全部DNA序列.一个典型的真核基因包括①编码序列—外显子(exon) ②插入外显子之间的非编码序列—内合子(intron) ③5'-端和3'-端非翻译区(UTR) ④调控序列(可位于上述三种序列中) 绝大多数真核基因是断裂基因(split-gene),外显子不连续。
二、基因组(genome) 一特定生物体的整套(单倍体)遗传物质的总和,基因组的大小用全部DNA的碱基对总数表示。
人基因组3X1 09(30亿bp),共编码约10万个基因。
每种真核生物的单倍体基因组中的全部DNA量称为C值,与进化的复杂性并不一致(C-value Paradox)。
人类基因组计划(human genome project, HGP)基因组学(genomics),结构基因组学(structural genomics)和功能基因组学(functional genomics)。
蛋白质组(proteome)和蛋白质组学(proteomics)第二节真核生物基因组一、真核生物基因组的特点:,①真核基因组DNA在细胞核内处于以核小体为基本单位的染色体结构中.②真核基因组中,编码序列只占整个基因组的很小部分(2—3%),三、基因家族(gene family) 一组功能相似且核苷酸序列具有同源性的基因.可能由某一共同祖先基因(ancestral gene)经重复(duplication)和突变产生。
基因家族的特点:①基因家族的成员可以串联排列在一起,形成基因簇(genecluster)或串联重复基因(tandemly repeated genes),如rRNA、tRNA和组蛋白的基因;②有些基因家族的成员也可位于不同的染色体上,如珠蛋白基因;③有些成员不产生有功能的基因产物,这种基因称为假基因(Pseudogene).Ψa1表示与a1相似的假基因.四、超基因家族(Supergene family ,Superfamily) 由基因家族和单基因组成的大基因家族,结构上有程度不等的同源性,但功能不同.第四节细菌和病毒基因组一、细菌基因组的特点。
现代分子生物学_复习笔记
现代分子生物学复习提纲第一章绪论第一节分子生物学的基本含义及主要研究内容1 分子生物学Molecular Biology的基本含义⏹广义的分子生物学:以核酸与蛋白质等生物大分子的结构及其在遗传信息与细胞信息传递中的作用为研究对象,从分子水平阐明生命现象与生物学规律。
⏹狭义的分子生物学:偏重于核酸(基因)的分子生物学,主要研究基因或DNA的复制、转录、表达与调控等过程,也涉及与这些过程相关的蛋白质与酶的结构与功能的研究。
1、1 分子生物学的三大原则1) 构成生物大分子的单体就是相同的2) 生物遗传信息表达的中心法则相同3) 生物大分子单体的排列(核苷酸、氨基酸)的不同1、3 分子生物学的研究内容●DNA重组技术(基因工程)●基因的表达调控●生物大分子的结构与功能研究(结构分子生物学)●基因组、功能基因组与生物信息学研究第二节分子生物学发展简史1 准备与酝酿阶段⏹时间:19世纪后期到20世纪50年代初。
➢确定了生物遗传的物质基础就是DNA。
DNA就是遗传物质的证明实验一:肺炎双球菌转化实验DNA就是遗传物质的证明实验二:噬菌体感染大肠杆菌实验RNA也就是重要的遗传物质-----烟草花叶病毒的感染与繁殖过程2 建立与发展阶段⏹1953年Watson与Crick的DNA双螺旋结构模型作为现代分子生物学诞生的里程碑。
⏹主要进展包括:❖遗传信息传递中心法则的建立3 发展阶段⏹基因工程技术作为新的里程碑,标志着人类深入认识生命本质并能动改造生命的新时期开始。
⏹第三节分子生物学与其她学科的关系思考⏹证明DNA就是遗传物质的实验有哪些?⏹分子生物学的主要研究内容。
⏹列举5~10位获诺贝尔奖的科学家,简要说明其贡献。
第二章染色体与DNA第一节染色体1、作为遗传物质的染色体特征:⏹分子结构相对稳定⏹能够自我复制⏹能够指导蛋白质的合成,从而控制整个生命过程;⏹能够产生遗传的变异。
2 真核细胞染色体组成(1) DNA(2) 蛋白质(包括组蛋白与非组蛋白)(3) 少量的RNA组蛋白:呈碱性,结构稳定;与DNA结合形成、维持染色质结构,与DNA含量呈一定的比例非组蛋白:呈酸性,种类与含量不稳定;作用还不完全清楚3、染色质与核小体染色质就是一种纤维状结构,由最基本的单位—核小体(nucleosome)成串排列而成的。
分子生物学笔记完全版第三、四章
分子生物学笔记完全版第三、四章--------------------------------------------------------------------------------作者: tonyloveyou 收录日期: 2006-07-13 发布日期: 2006-07-13第三章基因表达的调控基因表达:DNA→mRNA→蛋白质的遗传信息传递过程基因表达的调控第一节基因的活化基因的“开关”-染色质的活化一、活性染色质的结构间期核染色质:异染色质(heterochromatin),高度压缩(不转录);常染色质(euchromatin),较为松散,常染色质中约10%为活性染色质(更开放疏松)。
活性染色质→←非活性染色质二、活性染色质的结构特点(一)DNaseI敏感性转录活性(或有潜在转录活性)的染色质对DNase I更敏感.DNase I超敏感位点(DNase I HyperSensitive Sites,DHSS)(二)组蛋白H3的CyS110上巯基暴露,三、活性染色质结构的形成(一)、核小体位相(Phased positioning)1.核小体的旋转定位(rotational positioning)指核小体核心与DNA双螺旋在空间结构中的相互关系,主要包括DNA双螺旋的大沟是面向还是背向核心结构.‘2.核小体的平移定位(translational positioning)指核小体与特定DNA序列的结合位置和方式,特别是转录活性相关的DNA调控元件(启动子、增强子等)序列与核小体的相互位置关系。
(二)、组蛋白修饰1.H1组蛋白磷酸化促进染色体包装,影响转录活性,2.核心组蛋白修饰乙酰化:常发生在组蛋白的Lys,一般活性染色质是高度乙酰化的。
(三)HMG蛋白结合HMG(high mobility group)蛋白—高迁移率蛋白, 如HMG14/HMG17.与核小体核心颗粒结合,有利转录。
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分子生物学Ⅱ专题一细胞通讯与细胞信号转导(一)名词解释(1)信号分子(signal molecule):是指在细胞间或细胞内进行信息传递的化学物质。
(2)受体(receptor):是指细胞中能识别信息分子,并与之特异结合、引起相应生物效应的蛋白质。
(3)蛋白激酶(protein kinase):是指使蛋白质磷酸化的酶。
(二)简答分析(1)细胞通讯的方式及每种作用方式的特点。
答:(2)膜受体介导的信息传递途径的基本规律。
答:配体→膜受体→第二信使→效应蛋白→效应。
(3)试以肾上腺素、干扰素、胰岛素、心纳素为例,阐述其信息转导过程。
答:①肾上腺素:cAMP-PKA途径;过程:首先肾上腺素与其受体结合,使G蛋白被激活;然后G蛋白与膜上的腺苷酸环化酶相互作用,后者将ATP转化为cAMP;最后cAMP磷酸化PKA,从而产生一系列生物学效应。
②胰岛素:受体型TPK途径;过程:胰岛素与其靶细胞上的受体结合后,可使其受体中的TPK激活,随后通过下游的Ras途径继续传递信号,直至发生相应的生物学效应。
③干扰素:Jak-STAT途径;过程:首先干扰素与受体结合导致受体二聚化,然后受体使JAK(细胞内TPK)激活,接着JAK将下游的STAT磷酸化形成二聚体,暴露出入核信号,最后STAT进入核内,调节基因表达,产生生物学效应。
④心钠素:cGMP-PKG途径;过程:心钠素与其受体结合,由于该受体属于GC型酶偶联受体,具有鸟苷酸环化酶的的活性,因此结合后可直接将GTP转化为cGMP,进而激活下游的PKG,最终产生一系列的生物学效应。
(4)类固醇激素是如何调控基因表达的?答:类固醇激素穿膜后与细胞内(或核内)受体结合,使受体变构形成激素受体活性复合物并进入细胞核中,然后以TF的形式作用于特异的DNA序列,从而调控基因表达。
专题二基因分析的策略(一)名词解释(1)分子杂交(molecular hybridization):是指具有一定同源序列的两条核酸单链(DNA或RNA)在一定条件下,按碱基互补配对原则经退火处理,形成异质双链的过程。
(2)核酸分子杂交技术:是指采用杂交的手段(方式),用一已知序列的DNA或RNA片段(探针)来测检样品中未知核苷酸顺序。
(3)探针(Probe):是指用来检测某特定核苷酸序列的标记DNA或RNA片段。
(4)增色效应:是指DNA变性时260nm紫外吸收值增加的现象。
(5)解链温度(Tm):是指加热DNA溶液,使其对260nm 紫外光的吸光度达到其最大值一半时的温度,即50%DNA 分子发生变性的温度。
(6)转基因:是指是借助基因工程将确定的外源基因导入动植物的染色体上,使其发生整合并遗传的过程。
(7)生物信息学:是指利用现代计算机技术对这些原始数据进行收集、整理、管理以便于检索使用。
(二)简答分析(1)对一个已知基因的进行基因分析的策略? 答: 在染色体上的位置:FISH拷贝数的变化:Southern Blot 已知基因 RNA 的表达:Northern Blot, qRT-PCR 基因表达 蛋白质的表达:SDS-PAGE, 2D, IHC, Western Blot, 免疫荧光等(2)对一个未知基因的进行基因分析的策略? 答:基因的组成:序列测定 未知基因 在染色体上的位置:FISH拷贝数的变化:Southern Blot(3)基因表达分析应从哪些方面考虑,可采用什么技术?答:(4)杂交显影(检测)的方法主要有哪些?答:1. 放射自显影;2. 荧光素标记检测;3. 底物化学发光ECL ;4.底物荧光ECF ;5. 底物DAB 显色。
(5)印迹杂交的原理? 目前常用的印迹杂交有哪答:1.2.类型与特点:(6)要研究某组织中致病基因表达的变化,在RNA 水平和蛋白质水平可选择的杂交方法有哪些?每种方法的侧重有何不同答:1.在RNA水平可选择的方法有:Northern Blot等。
2.在蛋白质水平可选择的方法有:Western Blot等。
专题三核酸体外扩增(一)名词解释(1)核酸体外扩增(PCR):即聚合酶链式反应,是指利用DNA聚合酶依赖DNA模板的特征,模仿体内DNA的复制过程,在附加的一对引物之间诱导的聚合酶反应。
(二)简答分析(1)为什么能进行核酸体外扩增?答:基本原理:在模板、引物、4种dNTP和赖热DNA聚合酶存在的条件下,特异扩增位于两段已知序列之间的DNA 区段的酶促合成反应。
(2)怎样进行核酸体外扩增。
答:①变性:加热使双链DNA变为单链;②退火:降温使引物和互补模板在局部形成杂交链;③延伸:耐热DNA聚合酶按5′→3′方向催化以引物为起始点的延伸反应。
专题四基因打靶(一)名词解释(1)Gene targeting:即基因打靶,是指通过DNA定点同源重组,改变基因组中的某一特定基因,从而在生物体内研究此的基因功能。
(2)gene knockout:即基因敲除,是指通过DNA定点同源重组,定向敲除某个基因,从而在生物体内研究此的基因功能。
(3)gene knockin:即基因敲入,是指通过DNA定点同源重组,定向将一段基因序列代替另一段基因序列,从而在生物体内研究此的基因功能。
(4)chimeric mouse:即嵌合体小鼠,是指将ES细胞进行体外遗传操作后重新植回小鼠胚胎,可发育成胚胎的各种组织,从而最终形成的小鼠。
(二)简答分析(1)简述基因敲除的基本程序。
答:①打靶载体的构建;②打靶载体导入ES细胞;③基因敲除ES细胞注入胚泡;④胚泡植入假孕小鼠的子宫中;⑤嵌合体的杂交育种。
(2)试述基因打靶在医学中的应用。
答:(一)基因打靶与遗传病通过基因打靶建立基因缺陷型的遗传小鼠模型(基因敲除小鼠),研究遗传病的发生机制、分子基础及诊断的主要动物模型。
(二)基因打靶与肿瘤研究利用基因敲除或敲入小鼠模型,可研究肿瘤相关基因在什么情况下可导致组织细胞恶性生长,从而研究肿瘤发生、转移及转归的分子机制。
(三)基因打靶与生物制药有公司利用基因打靶技术将小鼠的免疫球蛋白基因从其基因组中除掉,然后将人的免疫球蛋白基因敲入到小鼠的基因组中,这种带有人免疫球蛋白基因的小鼠可以产生人源性抗体。
人源性抗体将成为治疗多种疾病的有效药物,其社会和经济价值是无法估量的。
专题五蛋白质组学研究技术(一)名词解释(1)proteomics:即蛋白质组学,是指一个细胞内的全套蛋白质,反映了特殊阶段、环境、状态下细胞或组织在翻译水平的蛋白质表达谱。
(2)Two-dimension protein electrophoresis:即双向蛋白质电泳,是指等电聚焦电泳和SDS-PAGE的组合,即先进行等电聚焦电泳(按照pI分离),然后再进行SDS-PAGE (按照分子大小),经染色得到的电泳图是个二维分布的蛋白质图。
(3)MALDI TOF MS:即飞行质谱,是指(4)Noncovalent interaction:即非共价相互作用,它在生物系统中极其重要,包括氢键,范德华力和疏水相互作用。
(5)complex macromolecules:即,是指(6)Protein localization:即蛋白质定位,是指决定蛋白质中离散的信号序列来将蛋白质引导到正确的位置,使其处在细胞中正确的腔室内,以便行使它们在细胞中的功能。
(7)Signal sequence:即信号序列,是决定蛋白质的正确运输方向,存在于其结构中的“分选信号”,对指导蛋白质的运输具有重要作用。
(8)nuclear pore complex:即核孔复合体,是指核孔的周围有八对排列规则的球状颗粒,孔的中央还有一粒,但并不充满全孔,其间自孔壁到中心还有一薄层无定形物质隔膜,并有细丝与周围的孔璧相连。
(9)hydrophobic interaction chromatography:即疏水作用层析,是根据分子表面疏水性差别来分离蛋白质和多肽等生物大分子的一种较为常用的方法。
其原理为蛋白质和多肽等生物大分子表面的疏水性基团与疏水性层析介质发生疏水性相互作用而结合,由于不同的分子疏水性不同,故它们与疏水性层析介质之间的疏水性作用力强弱也不同,可以此将不同生物大分子分离。
(10)Gel retardation assay:即凝胶阻滞实验,是指用于在体外研究DNA与蛋白质相互作用的一种特殊的凝胶电泳技术。
放射性标记的DNA由于同一种细胞蛋白质B结合,于是在凝胶电泳中移动速度变慢,在放射自显影中呈现滞后的条带。
(11)footprinting assay:即足迹实验,是指一类用于检测与特定蛋白质结合的DNA序列的部位及特性的专门的实验技术,可以形象地展示出一种特殊的蛋白质因子同特定DNA 片段之间的结合区域。
(二)简答分析(1)蛋白质组学研究的主要技术方法有哪些?答:双相电泳、飞行质谱和蛋白质芯片技术(2)叙述蛋白质所具有的功能。
答:1.催化功能;2.信号转导功能;3.运输和储存功能;4.支持与运动功能;5.营养和免疫功能;6.调节功能。
(3)蛋白质定位于不同的细胞器信号序列有何特征?答:信号序列的类型和特点如下:1.信号肽:引导经内质网膜合成蛋白质的运送途径。
2.导肽:指导线粒体,叶绿体和过氧化物酶体蛋白的运输。
3.入核信号:指核蛋白的运输。
4.锚定信号:当它插入内质网膜后,锚定不动,使新生肽链的转运停止。
5.其他信号序列:如指导氧化物酶体运送等。
(4)总结研究分析蛋白质的实验技术有哪些?并简述它们的作用。
答:①化学交联法:是通过交联剂将两个邻近的亚基或蛋白质共价偶联形成异多聚体,并利用放射自显影等技术鉴定与目的蛋白相互作用的蛋白质。
②GST融合蛋白pull-down 实验:将诱饵蛋白质和GST标签融合表达,一步纯化后,与含有目的蛋白质溶液培育,之后利用谷胱甘肽-Sepharose 将GST-融合蛋白-目的蛋白复合物沉淀下来,然后进行聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定与诱饵蛋白质相互作用的蛋白质。
③免疫共沉淀:用特异性的抗体与其中的一种蛋白质结合,之后通过蛋白质G-琼脂糖微珠将复合物沉淀下来,然后用SDS-PAGE鉴定。
④酵母双杂交:就是诱饵蛋白质基因与一个报道基因DNA结合区融合表达,而在目的蛋白质基因上融合表达报道基因的激活区,如果这两个蛋白质间有相互作用,则可以激活报道基因的表达,从而从文库中钓出特异作用的蛋白质。
⑤噬菌体展示:是将蛋白质文库整合到一个简单的噬菌体颗粒中,利用目的蛋白质与特异配基的亲合力,筛选和配基特异结合的蛋白质。
⑥荧光共振能量转移技术:通过荧光体之间的能量传递来确定蛋白质的相互作用。
⑦绿色荧光蛋白质近似成像技术:可以检测同种蛋白质形成的多聚体.⑧质谱:可以检测两个蛋白质形成的聚合体,也可以检测到多个蛋白质形成的大复合体.⑨原子作用力显微技术:通过和隧道扫描电镜技术一起应用,利用一个可弯曲的悬臂探测细胞表面轮廓的改变.⑩表面胞质团共振技术:通过检测一个传感芯片表面邻接培养基的介电常数的变化,来检测生物大分子之间的结合和解离,动态监控分子之间相互作用的过程。