四色流式细胞术用于急性白血病免疫分型的中国专家共识(完整版)
中国成人急性淋巴细胞白血病诊断与治疗专家共识
附录 急性淋巴细胞白血病治疗方案 (CALLG2008)
1．预治疗： 2． 诱导治疗：VDCLP方案(I)： 3．早期巩固强化治疗： 4．晚期强化：
5．中枢神经系统白血病(CNSL)预防治疗：
6．维持治疗：
1．预治疗： 如果WBC≥50×109／L，或者肝、脾、淋巴结肿大明显 ，应给予预治疗，以防止肿瘤溶解综合征的发生。泼 尼松 60 mg／d， -3至-1 d；环磷酰胺(CTX) 200 mg · m-2 · d-l，静脉滴注，-3至-1 d。
2． 诱导治疗：VDCLP方案(I)： 长春新碱(VCR)2 mg，静脉注射，第1、8、15、22天(1.4 mg／m2 ，每次不超过 2 mg 或采用长春地辛，每次 4 mg)；柔红霉素(DNR) 40 mg／m2，静脉 滴注，第 1～3、15~16天 （根据血常规和第14 天骨髓象决定） 或去甲氧柔红霉素(IDA)8 mg ·m-2 · d-1， 第 1~3天；CTX 750 mg／m2，静脉滴注， 第 1、15天（美斯钠解救）；
岁以下的患者，未诊断CNSL时可以不进行头颅放疗。
6．维持治疗：
每月 1 个疗程，直至缓解后 3 年。 每 6 个月给予强化治疗 1 次； 维持治疗期间每 3 个月复查1次。 维持治疗方案：
6-MP 60 mg ·m-2 ·d-1，
口服，第 1~7天； MTX 20 mg ·m-2 · -1，口服，第8天。 d
4．晚期强化： ①VDLP 方案(V)（再诱导治疗）
②COATD 方案(Ⅵ) ③大剂量MTX＋L-Asp方案(Ⅶ) ④TA 方案(Ⅷ)
4．晚期强化：
①VDLP 方案(V)（再诱导治疗）：VCR 2 mg，静脉注 射，第1、8、15、22天；DNR 40 mg／m2，静脉滴 注，第 1~3天；L-Asp 6000 IU／m2，静脉滴注，第 11、14、17、20、23、26天；地塞米松8 mg · m-2 · d-1，口服或静脉滴注，第 1～7、15~21 天。
流式细胞术系列之-白血病免疫分型
CD13和/或CD33阳性 HLA-DR阳性 CD34阳性 CD11B，CD15等(+/-) >3%的幼稚细胞表达
MPO。
AML-M2（急性粒细胞白血病部分成熟型）
• 此类型白血病细胞除了占优势的幼稚细胞外还存在已 明显分化的细胞群体，至少已分化至早幼粒细胞或粒 细胞水平。
(immunology， I ) ( cytogenetics，C )
WHO分型(2001)
（MICM）
(morphology，M ) (immunology， I ) ( cytogenetics，C)
(molecular biology, M)
L1型
急淋
急
性
（ALL）
白
L2型 L3型
细 胞
M0: 微分化型髓系白血病；
标本来源
（1）外周血 （2）骨髓穿刺液， （3）骨髓活检标本 （4）淋巴组织穿刺
样本保存
要 求： •室温条件(16℃ -28℃ )存放； • 如非液态标本，则要在标本中加入足量的等渗液 体（如 生理盐水或组织培养液）。
保存时间
1. 肝素抗凝的外周血和骨髓标本，存放时限为48～72小时； 2. EDTA抗凝标本，存放时限只有12 ～ 24小时，因为髓细胞
胞内染色 CD3\CD79a\MPO
可以确定白血病分CD7
B系：CD10、CD19、CD20 表面染色 髓系：CD11b、CD13、CD14、CD15、CD33
非系列特异的抗体：CD34、HLA-DR 泛白细胞标志：CD45
进一步 细分
其它 CD4、CD8、CD61、CD56、CD38 必要时可以加用
中国成人急性淋巴细胞白血病诊断治疗的专家共识-医学资料
(三)．Ph阴性急性淋巴细胞白血病(Ph--ALL)的治 疗
NCCN2019关于Ph-ALL诱导治疗意见
• 年青成人和青少年(AYA)：临床试验或参考儿童方案的 多药化疗。(如GRAALL2019、CCG-1961、 CALGB10403、PETHEMAALL-96方案等)——VDLP 、VDCLP
的诊断标准。
2019年WHO造血和淋巴组织肿瘤的分类关于前体 淋巴细胞肿瘤的具体分型
1. B淋巴母细胞白血病/淋巴瘤(NOS，不另做分类) 2. 伴重现性细胞遗传学异常的B淋巴母细胞白血病/淋巴瘤 3. T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤
Burkitt淋巴瘤/白血病： (1)细胞形态学—典型BL；变异型：浆细胞样BL和不典
2．T系ALL(胞浆/膜CD3+)
早期前T-ALL(T-I)
CD7+
前T-ALL(T-II)
CD2+和/或CD5+
和/或CD8+
皮质T-ALL(T-III)
CD1a+
成熟T-ALL(T-IV)
膜CD3+，CD1a-
3．伴髓系抗原表达的ALL(My+ALL) 表达1或2个髓系标记，但又不满足混合表型(EGIL，2019修改)
1．B系ALL(CD19+和/或CD79a+和/或CD22+，至少 两个
阳性) 早期前B-ALL(B-I) 无其它B细胞分化抗原表达 普通型ALL(B-II) CD10+ 前B-ALL(B-III) 胞浆IgM+ 成熟B-ALL(B-IV) 胞浆或膜或+
四色流式细胞术用于急性白血病免疫分型的中国专家共识(完整版)
四色流式细胞术用于急性白血病免疫分型的中国专家共识（完整版）白血病免疫分型是利用不同单克隆抗体检测白血病细胞胞膜和胞质抗原，通过流式细胞术(FCM）分析其表型，实现对白血病细胞系列来源及其分化程度的诊断。
白血病免疫分型已成为诊断白血病的必要依据，同时也可为微小残留病（MRD)的检测以及白血病的治疗和预后提供重要信息。
白血病免疫分型是细胞形态学分型的重要补充和进一步深化，以荧光标记技术联合FCM检测并判定白血病免疫表型，具有准确、快速、客观、重复性好、特异性强等特点，提高了白血病诊断的准确性[1, 2]。
采用不同数量及组合的荧光标记免疫抗体处理白血病细胞并进行荧光检测及分型是免疫分型的关键环节。
准确诊断需要选择一定数量的抗体，白血病免疫分型涉及多个造血系列的抗原，但目前国内甚至国际上均无规范化的方案可以借鉴；国内不同的医疗单位所用的抗体数量和种类均有较大的异质性，有些单位由于应用的抗体数量较少或抗体选择不当，影响对疾病的诊断、分期和预后的判断。
鉴于国内的实际情况，中国免疫学会血液免疫分会临床流式细胞术学组经过多次讨论，提出以CD45/侧向散射光（SSC）为基础的中国FCM急性白血病免疫分型四色方案，本方案以2组表面抗原作为筛查抗原，试图利用相对少的抗体，达到对各个类型白血病进行较全面的检测，具有快速、客观、准确的特点。
已在国内的多家医疗单位试用，证明此方案能够满足临床的需要[3, 4]。
目前，虽然国际上有八色甚至十色方案[5, 6, 7]，但对仪器及操作人员的技术要求较高。
鉴于国内的实际情况，我们首先提出中国FCM急性白血病免疫分型四色方案，供从事急性白血病免疫分型的实验室参考，以期促进我国急性白血病免疫分型诊断的规范化及整体水平的提高。
一、四色方案的基本要求理想的急性白血病免疫分型方案应满足以下几点要求：①识别白血病细胞，能将其与正常细胞或反应性细胞相区别；②鉴别白血病细胞的系列来源；③根据细胞的分化程度对疾病进行亚型分型；④鉴别用于检测MRD 的白血病相关免疫表型(LAIP) ;⑤帮助判断某些特异分子改变，即基因型检测；⑥提供预后相关及治疗靶点的免疫标志检测结果。
流式细胞术在我院急性白血病免疫分型中的应用
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． １ １ ７ ４ ８ ／ ｂ ｊ ｍｙ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ６ ． １ ７ ０ ３ ． ２ ０ １ ３ ． ０ ６ ． ０ １ ６
Байду номын сангаас
Ａｐ ｐ ｌ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｆｌ ｏ ｗ Ｃｙ ｔ ｏ ｍｅ ｔ ｒ ｙ ｉ ｎ Ｉ ｍｍｕ ｎｅ ｆ ｒ ｏ ｍ ｔ ｈｅ Ｃｌ ａ ｓ ｓ ｉ ｉｃ ｆ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ａｃ ｕｔ ｅ Ｌｅ ｕｋ ｅ ｍｉ ａ
（ 福建 中医药大学附属三 明市 中西 医结合 医院， 福建 三 明 ３ ６ ５ ０ ０ １ ） 摘要： 目的 探讨本实验室所 用 １ ３种单抗对 白血病免疫分型的应用价值。方法 应 用流式细胞术 （ Ｆ Ｃ Ｍ） 使用 １ ３种单抗
对９ ９例急性 白血病 进行 免疫分型 ， 与形 态学分型相 比较。结果 使 用 １ ３种单 抗从 ９ ９例急性 白血 病 中分 出髓系 白血 病
（ Ａ ＭＬ ） ５ ９例 、 淋 系白血病 （ Ａ Ｌ Ｌ ） ２ ７例 、 混合 型（ Ｍ Ａ Ｌ ） ５例 、 未分化 型 （ Ａ Ｕ Ｌ ） ２例 ， 诊 断率达 ９ ３ ． ９ ％（ ９ ３ ／ ９ ９ ） 。Ａ ＭＬ中各 抗 原表达情况 ： ｃ Ｄ １ ３ ＞Ｃ Ｄ ”＞ ｃ Ｄ ｌ ４ 、 ｃ Ｄ ７ ＞ｃ Ｄ ２ 、 ｃ Ｄ ｌ ９＞ Ｃ Ｄ １ ０＞ Ｃ Ｄ ５＞ Ｃ Ｄ ２ ０ ， 其 中多表达 ｃ Ｄｌ ３ 、 ｃ Ｄ ３ ３ ； Ａ Ｌ Ｌ中各抗 原表 达情 况： Ｃ Ｄ ｌ ９ ＞Ｃ Ｄ ｌ ３ ＞Ｃ Ｄ ｌ ０ ＞Ｃ Ｄ ２ ０ ＞Ｃ Ｄ ３ ３ ＞Ｃ Ｄ ５ ＞Ｃ Ｄ ７ ＞Ｃ Ｄ ２ 、 Ｃ Ｄ …其中 Ｃ Ｄ ｌ ｕ 、 Ｃ Ｄ Ｃ Ｄ Ｃ Ｄ ２ ０ 表达率较高 。免疫分 型与形 态学分型结果相 比较 ， Ａ ＭＬ二者的吻合率 为 ９ ０ ． ５ ％（ ５ ７ ／ ６ ３ ） 、 Ａ Ｌ Ｌ二者 的吻合率 为 ７ ６ ． ５ ％（ ２ ６ ／ ３ ４ ） ； 其 中 １例 Ｍ ０免疫 分 型为 Ｂ ／ Ｍ混合 、 １ 例 Ｍｌ 免疫分 型为 Ｔ ／ Ｍ混合 、 １ 例Ｍ ａ 免疫分 型为 Ｔ ／ Ｍ 混合 、 １ 例Ｌ 。 免疫分型 为 Ｂ ／ Ｍ混 合 、 １例 Ｌ 免 疫分型为 Ｔ ／ Ｂ混合 、 １ 例Ｌ ： 免疫分型为 Ｌ ｙ ＋一 Ａ ＭＬ 、 ２例 Ｌ 免疫 分型 为 Ａ Ｕ Ｌ ； １ 例 形态学 为浆细 胞 白血 病的免 疫分 型为 Ａ ＭＬ 、 １ 例淋单混合型 白血病 Ｃ Ｄ 、 Ｃ Ｄ 。 、 Ｃ Ｄ 。 阳性 。结论 合型和未分化型 白血病 的诊断亦能 明确 。 关键词 ： 流式细胞术 ； 白血病 ； 免疫 分型
血细胞形态学分析中国专家共识(完整版)
血细胞形态学分析中国专家共识（完整版）血细胞形态学分析是血液病诊断分型的基本实验室检查，现今，国内不同单位在血细胞分析的操作、形态学描述术语和报告等方面极不统一。
为了规范血细胞形态学分析，中华医学会血液学分会实验诊断血液学学组组织国内有关专家在系统复习文献的基础上结合我国实际情况，经过反复讨论，形成了本共识。
一、名词与定义1．髓系原始细胞：髓系原始细胞包括原粒细胞、原单核细胞和原巨核细胞。
原粒细胞分为两类：一类是无嗜天青颗粒的原粒细胞（亦称原粒细胞Ⅰ型），另一类是有嗜天青颗粒的原粒细胞（亦称原粒细胞Ⅱ型）。
原粒细胞与早幼粒细胞的鉴别点是早幼粒细胞有清晰可辨的高尔基区（油镜下表现为核旁空晕区）。
幼单核细胞、急性早幼粒细胞白血病的粗颗粒和细颗粒早幼粒细胞、M2b 的异常中幼粒细胞为原始细胞等同细胞（应归人原始细胞计数中）。
原红细胞只有在诊断纯红系白血病时视为原始细胞等同细胞归入原始细胞计数中。
不成熟单核细胞以及小的发育异常巨核细胞和微巨核细胞不是原始细胞等同细胞，不应计人原始细胞计数中。
2．不成熟单核细胞：单核细胞包括原单核细胞、幼单核细胞、不成熟单核细胞和单核细胞。
不成熟单核细胞胞体比单核细胞小，胞质嗜碱性比幼单核细胞弱但比单核细胞强，胞核转曲／有切迹，核染色质比幼单核细胞更浓集，极少可见核仁。
从形态上区分幼单核细胞、不成熟单核细胞和单核细胞有利于急性髓系白血病(AML) M5b 与慢性粒一单核细胞白血病的鉴别诊断。
3．发育异常：发育异常(dysplasia)是指形态学上异常发育，并不是与骨髓增生异常综合征(MDS)同义。
这一名词只能用于3 个髓系系别，其他系别细胞表现相似而形态学上异常发育者，如淋巴细胞和浆细胞，应依惯例冠以“不典型(atypical)”，“不典型”也适用于肥大细胞。
造血发育异常可产生细胞学异常的红细胞[如异形红细胞或二形性(dimorphic)红细胞组群]或血小板（如巨型、少颗粒或有异常颗粒），然而，“发育异常”这一名词应限用于有核细胞。
流式细胞术对急性白血病免疫分型的临床意义
舭
． ｒ ａ ｎ ｎ ａ ｅ ｍａｋ ｒｗ ｒ ｘ ｒ ｓｅ ｎ４ ５ ｐ ｔ ｎｓ ｆ ｃ ｔ ｌｕ ｅ ａ Ｆ ｒ ｘ ｍｐ ｅ Ｃ ５ Ｃ ７、 Ｄ１ Ｃ Ｏ ｗｅ ｍｏ ｅｔ ｎ ｏ ｅ ｌ ｅ ｇ ｒｅ ｅｅ ｅ ｐ ｅ ｓｄ ｉ ０． ％ ａｉ ｔ ｕｅ ｅ ｋ ｍｉ ． ｏ ａ ｌ ， Ｄ ６、 Ｄ Ｃ ９、 ＤＩ ｒ ｈ ｉ ｅ ｏａ ｅ ｅ
Ｙｈｈ ，ｔ １（ ｅａｔｅｔｆＨ ｍ ｔ ｏｙａｄＲｅｍ ｔｓ ｉ ｒ ｉ ｉ ｏ ｉｌ Ｃａｇｈｎ １０２ ，Ｃ ／ ） ａ－ａ ｅ ａ．Ｄｐ ｒ ｎ ｏ ｅ ａｏ ｇ ｎ ｈｕ ａｉ ，Ｊｉ Ｐｏ ｎ ａ Ｈ ｓ ｔ ， ｈ ｎｃｕ ３０ １ ｈ ａ ｍ ｌ ｃ ｌ ｎ ｖｃ ｌ ｐ ａ ｎ Ａ ｓｒｃ： ｂｅｔ ｅ Ｔ ｖｓｇｔ ｔ ｌｉ ｌｉ ｉｃｎｅ ｆｌ ｙ ｍ ｔ （Ｃ ｂｔ ｔＯ ｊｃｉ ｏｉ ｅｔａ ｅ ｉ ｃ ｇ ｆａｃ ｗｅｔ ｅ ｒ Ｆ Ｍ）ｉ ｉ ｍ ｏｈｎｔ ｉ ｒ ｃｔ ｌ ｋｍ － ａ ｖ ｎ ｉ ｅ ｈ ｃｎ ａ ｓ ｎ ｉ ｏｆ ｏ ｏ ｅ ｎ ｎ ｎｐ ｅｏ ｐ ｇ ｏ ｕｅｅ ｅ ｉ ｍ ｙ ｎ ｆ ａ ｕ
４ ａｉｎｓｗ ｔ ｃ ｔ ｌｕ ｅ ａ Ｒｅ ｕｔ ｃ Ｄ３ ｃ Ｄ ９ 、ｃ Ｏ ｗ ｒ ｓ ｄ ａ ｎ ａ ｅｓ ｅ ｉｃ ｍａｋ ｒ ｓ ｅ ｔ ｌ ｒｒ ＡＬ Ｂ ＡＬ ２ ｐ ｔ ｔ ｉ ａｕ ｅ ｅ ｋ ｍｉ ． ｓ ｌ ｅ ｈ ｓ Ｃ 、 Ｃ ７ ａ ＭＰ ｅｅ ｕ ｅ ｓｌ ｅ ｇ ｐ ｃｆ ｒ ｅ ｓｒ ｐ ｃｒ ｙｆ － 【 — Ｌ ｉ ｉ ｅ ｅ ｏ ｒ 、
多色流式细胞术对40例急性白血病免疫分型的研究
。
用 ＡＤ Ｃ软件 包进行 相关 分析 。
结 果
采 用三 色 或 四色 直 接 免 疫 荧 光法 标 记 ， 中 其
ＦＴ Ｉ Ｃ标 记 的单 抗为 Ｃ ， Ｄ ， Ｄ ３ Ｃ ８ Ｄ Ｄ７ Ｃ ３ Ｃ ３ ， Ｄ ３ ，Ｃ
１ ４，ＣＤ Ｏ ， ２ ＣＤ ， ４ ＣＤ ５， ＣＤ ０， Ｐ １ Ｇ Ａ ， ＣＤ ５， １
所 有受 检 者均采 取 Ｅ ＴＡ 抗 凝骨 髓 液 或 静 脉 Ｄ 血 １ ｍＬ。有 核细胞 计数 后 ， Ｐ Ｓ调整 细 胞浓 ～２ 用 Ｂ 度 为 ５ Ｏ个 ／ ×１ ｍＬ备 用 。
４ 流 式 细 胞 术
ＣＤ３ ，Ｃ １ ＨＬ ＤＲ， ３ Ｄ ４， Ａ— ＣＤ４ ，ＣＤ６ １ １和 ＣＤ６ ≥ ４
血病 细胞抗 原 的分 布 ， 白血病 免 疫分 型 的结 果 更 使
为准 确和 客观 ｌ 。 ＿ １ ｊ
对 象 和 方 法 １ 病 例
上 ，Ｅ ｉ ｏ ｌ ｒ 式 细 胞 仪 发射 荧 光 ， 用 ｐｃ ＸＬ Ｃ ｕｔ 流 ｓ ｅ 采 氩 离子 激光 器 ， 发 波长 为 ４ ８ ｍ， 用 Ｅ Ｐ ２ 激 ８ｎ 采 Ｘ Ｏ ３
例 为 Ｍ２，６例为 Ｍ３ ３例 为 Ｍ４ ，２例为 Ｍ５ ６ ， ， 例 为 Ｍ６ １例 为 Ｍ７ ， 。
２ 材 料
剂 及 溶血剂 １ ０ Ｌ， ｎ后 ， 入膜 内单 抗 ２ Ｌ ０ ￣ ５ｍｉ 加 Ｏ 室温 避 光 孵 育 ２ ｍｉ ， Ｂ ０ ｎ Ｐ Ｓ洗 涤 ２次 ， ５ ０ Ｌ 加 ０
ＡＤ Ｌ ４Ｃ ｌｒ和 Ｅ Ｐ ２ＡＤ ａｙ ｉ 软件 Ｃ Ｘ ｏｏ Ｘ Ｏ ３ Ｃ Ａｎ ｌｓ ｓ 进行 数 据获 取 和分 析 。染 色 方 法 ： 膜 外 ： 用 细 ① 备
我国急性白血病免疫分型的四色方案
中国流式细胞术急性白血病免疫分型四色方案由于多参数流式细胞术(MFC)免疫分型具有客观、敏感、准确等特点，免疫表型已成为诊断急性白血病的重要依据之一。
因准确的诊断需要选择一定数量的抗体，涉及多个造血系列的抗原。
但目前国内甚至国际上没有规范化的方案可以借鉴。
而国内不同的医疗单位所用的抗体数量和种类均有较大的异质性，有些单位由于应用的抗体数量较少或抗体选择不当，影响对疾病的诊断、分期和预后的判断。
鉴于国内的实际情况，中国免疫学会血液免疫分会临床流式细胞术学组经过多次的讨论，提出以CD45/SSC为基础的中国流式细胞术急性白血病免疫分型四色方案，供参考。
本方案不包括标本的采集、保存、制备、试剂和仪器的调整及急性白血病的诊断标准，这些对免疫分型同样重要，可参考相应的指南。
1．适应范围：1.1急性淋巴细胞白血病(ALL):z B系：早B前体-ALL(Pro-B), 普通-B-ALL(Common-B),前体B-ALL(Pre-B),及与Burkitt淋巴瘤进行鉴别z T系：早T前体-ALL (Pro-T), 前体T-ALL(Pre-T),皮质-T-ALL和髓质-T-ALL.1.2急性早幼粒细胞白血病（APL）1.3急性髓细胞白血病（AML）z AML微分化型（AML-M0）z AML伴粒系和单核细胞分化型（AML-M1/2和AML-M4/5）z急性红白血病（AML-M6）z急性巨核细胞白血病（AML-M7）1.4前体树突细胞肿瘤1.5急性嗜碱性粒细胞和肥大细胞白血病1.6 混合表型白血病1.7 对上诉急性白血病治疗后检测MRD的标志进行筛查2.抗体的选择：根据检测的目的，需要检测不同的抗体：2.1 鉴别急性、慢性白血病:对于急性髓细胞白血病，可以根据CD45/SSC图型进行初步判断。
髓系白血病细胞CD45的表达较弱，往往位于正常淋巴细胞下方，且多数白血病细胞SSC较低（除去大颗粒APL患者）。
再根据CD34、CD117、CD38、HLA-DR、CD123的表达进行判断。
急性白血病系别判断的流式细胞免疫分型
三、急性白血病系别诊断标准
• EGIL诊断标准缺点： • （1）关于阳性定义，因为影响因素众多，有时存在歧义； • （2）对于某些覆盖率低、特异性高的标志，给予分值低或者未纳入，如CD64、CD14； • （3）对某些常见伴系表达标志予以极低分值，如CD7，未考虑荧光强度的差异； • （4）对于相对特异、在某系别易于伴发的标志，未考虑差异对待，如cCD79a、CD10
三、急性白血病系别诊断标准
• 鉴于几乎没有任何标志是绝对敏感和特异的，做全标志有助于降低误诊风险，因此 在系别筛查时如果出现系别标志表达过多或者过少，或者伴系表达标志的强度超过 标本中残留的正常细胞时，首先应该做全两个诊断标准涉及的相关系别标志，必要 时甚至需要增加CD371等新的髓系标志。
• 在此过程中可以选择一步法或者两步法。选择一步法的实验室，以目前常用3激光8 色机型为例，可供参考的5管法见表3；选择两步法的实验室，第一步进行系别筛查， 包括髓系MPO（或者CD33）和CD117，T系CD7和cCD3、B系CD19和CD22，根据 采用仪器型号不同可能有差异，4色方案可以参考2015年4色流式细胞术中国专家共 识，3激光8色推荐方案见表3。
三、急性白血病系别诊断标准
三、急性白血病系别诊断标准
• 注意几个标志的FCM检测： • （1）MPO：使用克隆号8E6、MPO-7的抗体需要小心，因为均有在B-ALL表达的
报道；阳性阈值虽然大多数沿用10%，但是建议结合荧光强度，并且不典型病例应 该做全其他髓系标志，并结合细胞化学和免疫组化MPO检测结果；FCM破膜处理 可能会使粒细胞的侧向角光散射（side scatter，SSC）降低，从而影响CD45/SSC设 原始细胞门的精确度，导致假阳性结果，正确的方法应结合原始细胞标志修订设门。
流式细胞术在白血病中应用
病例二（续1）
2008.11 化疗 第20个月： FCM：未见明显表型异常的残留白血 病细胞。（未附图） 基因：未做。 2009.09 化疗 第30个月： FCM：可见残留，在CD45dim/-区域可 见约1.87%的CD10+CD19+CD20-细胞和 约1.55%的HLA-DR+CD19+CD34+细胞， 考虑为残留白血病细胞。（见右图） 基因：未做。
Outline of Leukemic Diagnosis
Primary leukemi
a
Induction
Leukemic cells
1012 100%
Morphology: 1-5%, Cytogenetics: 1-5%, Flow cytometry: 0.1-0.01%, RT-PCR: 0.01-0.001%
病例二（续2）
2010.03 化疗+DC-CIK 第36个月： FCM印象：在CD45/SSC点图上设门分析， CD45阴性略向原始延伸的分布区域可见异常 细胞群体，与有核红细胞无分界，共约占有 核细胞的89%，主要表达HLA-DR、CD10、 CD15、CD19、CD20、CD22、CD34、CD38、 cCD79a、TdT。提示：结合病史，考虑急性B 淋巴细胞白血病（普通型B-ALL）复发。 基因：ALL基因筛查示TSL/ERG阳性，其余均 阴性。
白血病分子诊断的意义
白血病初发
系统诊断
MICM诊断
异常标记
免疫/遗传学靶标
精确诊断 准确预后 指导治疗 科研资料
残留监测 靶向治疗
WHO血液肿瘤新分类实验技术平台
实施WHO血液肿瘤新分类方案高 度依赖流式细胞、细胞遗传和分子生 物学实验技术平台以及掌握这类实验 技能并具有专业知识的人员。
四色流式细胞术用于急性白血病免疫分型的中国专家共识(2015年版)-2-
·270·中华血液学杂志2015年4月第36卷第4期Chin J Hematol ，April 2015，Vol.36，No.4CD117、CD25、CD9、类胰蛋白酶，部分细胞表达CD22和nTdT ，可对这些抗原进行检测。
4.混合表型：如果既表达髓系标志，又表达CD7或CD19，则可首先检测MPAL 的第3管，确定表7鉴别白血病的系列性及需要检测的抗体系列髓系T 系B 系需要检测的抗体cMPO +（FCM 、免疫组化或细胞化学）或单核细胞分化（至少2个标志：NSE 、CD11c 、CD64、CD14、溶菌酶）cCD3（FCM 应用的是抗ε链抗体，而免疫组化检测使用的是多克隆抗体，可与CD3的ζ链结合，后者不是T 细胞特异性的）或膜CD3（很少表达）强CD19和cCD79a 、cCD22、CD10中至少1个标志强表达；或弱CD19和cCD79a 、cCD22、CD10中至少2个标志强表达注：FCM ：流式细胞术图21例典型急性T 淋巴细胞白血病第1~2管抗原表达结果:CD45+CD7+CD117-CD33-CD19-CD10-CD34part+图31例急性髓系白血病M 2型第1~2管抗原表达结果：CD117+CD33+CD7dim+CD34+CD19-CD10-中华血液学杂志2015年4月第36卷第4期Chin J Hematol，April2015，Vol.36，No.4·271·是哪个系列的白血病，然后再完善检测该系列的其他标志。
在AML中有30%左右患者表达CD7，但通常表达较弱，多同时表达CD33和CD117。
而T-ALL中CD7多数表达较强，并多不表达CD33，20%左右表达CD117。
另外AML伴t（8;21）（q22;q22）/AML-ETO阳性患者中，60%左右表达CD19（弱），同时表达CD34、CD117、CD33（弱）、CD56，与典型B-ALL 可以鉴别。
流式细胞术在159例急性白血病免疫分型中的应用
仪上采用 Ｃ ４／Ｓ 双参数散 点图设门方法进行三色 流式 细胞术 分析 ， Ｄ ５ＳＣ 使得免疫分型 的结果更 为可靠 。
关键词 ： 白血病 ； 流式细胞术 ； 免疫分型
中图分类号 ：７ ３７ Ｒ ３ ．１ Ｇ ＯＨ ｉｌ Ｓ Ａ ￣ ｕｎ Ｇ Ｏ厶． Ｕ ｕ ｓ Ｈ Ｎｔ－ ａ ， Ｕ －ｍ， ｊ （ Ｌ ｏｉ ａ ａ １０ １ Ｃ ／ ） ｉ ｎｎ Ｄ ／ ｎ １６ １ ， ｈ ａ ａ ｇ ／ ｎ
（ 大连 医科 大学附属第一 医院中心实验室 ， 辽宁 大连 １６ １） １０ １ 摘要 ： 目的 探讨 急性 白血病免 疫分 型的特点及 其临床意 义。方法 利 用 Ｃ ４／ Ｓ Ｄ ５ ＳＣ双参数散 点图设 门方法进
行三色流式细胞术免疫表 型分 析。结果
（） １９例 Ａ Ｌ患者 中髓 系相关抗原 Ｃ １ （ １５ ％）Ｃ ｌ７ ８ ．７ 和 １在 １ Ｍ ． Ｄ ３ ９ ．９ 、 Ｄ １（６ ９ ％）
ｎ ｄｗｔ ｍ ｈｃｔ ａｔｅｓ Ｄ （４ ２ ％ ） Ｃ １（ ．８ ） Ａｌ ｆ ｅ２ ｓｓ ｆ Ａ工， ｅ ｏｉ ｅｒｅ Ｃ １ ｎ Ｌｋ ｉ ｉｌｙ ｐｏｙ ｎ ｇｎ－ ７ １ ．８ 和 Ｄ ９ １６ ％ ．ｌ０ 也 ｃ ｅ Ｉ ｔ ｓ ｖ ｔ ｅ ｌｌ ｅ ｉ Ｃ ９ａ ｏ ｈ ｐ ｔ ａ Ｄ ９ａｄＨ ￣ ｉ －
白血病流式免疫分型
白血病流式免疫分型白血病是一种造血系统恶性肿瘤，由于白细胞数量和质量的异常增加，导致机体免疫功能下降，造成多种系统和器官功能异常。
白血病的治疗首先需要确定其类型和分型，以便制定有效的治疗方案。
流式免疫分型作为一种先进的白血病诊断技术，已被广泛应用于临床实践中。
白血病流式免疫分型是将细胞标记物与荧光标记结合，通过流式细胞术对细胞进行定量、定性的分析，进而确定白血病的类型、分型。
它可以快速、灵敏地检测单个细胞，检测出极低浓度的异常白细胞，并对相关疾病进行准确的诊断和分类，特别是对淋巴瘤和白血病的鉴别诊断。
流式免疫分型在白血病治疗诊断中的应用既可以确定疾病的类型，也可以指导治疗方案的制定。
对于急性白血病的治疗而言，流式免疫分型可以评估化疗药物敏感性、预测预后，以及指导骨髓移植的实施，从而提高治疗的效果和疗效。
对化疗失败的慢性淋巴细胞白血病患者进行流式免疫分型，可以确定其恶性程度、预测预后及制定诊断治疗方案，如靶向药物治疗等新的治疗手段。
不过，需要指出的是，流式免疫分型虽然是一种有效的白血病诊断技术，但其存在一定的局限性。
例如，对于某些罕见的白血病类型，目前流式免疫分型无法完成准确的分类，需要结合其他诊断手段进行综合判断。
同时，由于流式免疫分型涉及大量的细胞学和生化实验，其实验成本也比较高，还需要一定的技术开销和专业操作的知识。
综上所述，白血病流式免疫分型作为一种先进的白血病诊断技术，已经逐步成为临床实践中的标准操作。
它可以对白血病患者进行准确的分类和疾病诊断，指导治疗方案的制定，同时也为临床科研提供了有力的手段和工具。
但需要注意的是，流式免疫分型还需要不断探索和深入，结合其他先进技术和诊疗方法，共同提高白血病治疗的水平和效果。
中国成人急性淋巴细胞白血病诊断与治疗专家共识——诊断和预后分组解读
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ
中推荐的免疫学分型）。在此基础上９９％的病例可以确诊； 成人ＡＬＬ中Ｂ．ＡＬＬ占７５％，Ｔ－ＡＬＬ占２５％，２５％～３０％的成人 ＡＬＬ表达髓系相关抗原１。 越来越多的证据表明染色体缺陷和分子异常可以有规 律地出现在ＡＬＬ患者，这些为更好地认识ＡＬＬ、确定不同的
Ｄ如ｅａｓｅ
ｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆＨｅｍａｔｏｌｏｇｙ＆Ｂｌｏｏｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，ＣＡＭＳ＆ＰＵＭＣ，Ｔｉａｎｊｉｉｎ ３０００２４ Ｃｈｉｎａ． Ｅｍａｉｌ：ｍｉｙｉｎｇｃｈ＠ｍｅｄｍａｉｌ．ｃｏｍ．ｃｎ 急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）是一种生物学特征和临床 异质性很大的疾病，以骨髓和淋巴组织中不成熟淋巴细胞的 异常增殖和聚集为特点。２０世纪７０年代之前，细胞形态学、 细胞化学是唯一的诊断Ｔ具，此后逐渐发展为细胞形态学、 细胞化学、细胞遗传学（常规细胞遗传学）、免疫表型［多参数 流式细胞术（ＭＦＣ）］、分子细胞遗传学［荧光原位杂交 （ＦＩＳＨ），比较基因组杂交技术］、分子生物学（大多数以ＰＣＲ 为基础的技术和测序）等相结合的综合诊断模式。可见ＡＬＬ 的诊断分类是一个逐步完善、多步骤的过程，ＡＬＬ的现代检 查、诊断方法应包括精确的免疫学、细胞遗传学和分子生物 学。这些方法的结合有助于精确的诊断、确定预后相关因 素、微小残留白血病的检测标记，设计针对性的治疗策略。 一、ＡＬＬ诊断方法的演进 ＡＬＬ诊断分型主要有ＦＡＢ（Ｆｒｅｎｃｈ—Ａｍｅｒｉｃａｎ—Ｂｒｉｔｉｓｈ）和 ＷＨＯ（Ｗｏｒｌｄ
・９９５
ＴＣＦ３、ＴＥＬ、ＢＣＲＪＡＢＬ）的成人Ｂ—ＡＬＬ，为预后不良因素。在 Ｂ—ＡＬＬ中ＣＲＬＦ２高表达转录调控信号与ＢＣＲ／ＡＢＬ信号部 分重叠，可能与ＢＣＲＪＡＢＬ阴性患者应用酪氨酸激酶抑制剂 有一定疗效有关９。 Ｎｏｔｃｈｌ基因定位于染色体９ｑ３４，编码Ｎｏｔｃｈｌ受体。正 常Ｎｏｔｃｈｌ受体介导的信号转导在造血干细胞向Ｔ细胞分化、 Ｔ细胞受体基因的重排和ＣＤ４＋ＣＤ８＋Ｔ细胞谱系定向发育、以 及外周Ｔ细胞的分化及活化中均发挥重要作用。约５０％的 Ｔ－ＡＬＬ患者可检测到ＮＯＴＣＨｌ活化型突变，但ＮＯＴＣＨｌ对 ＡＬＬ患者预后影响尚不明确，ＧＲＡＡＬＬ研究表明ＮＯＴＣＨｌ 或ＦＢＸＷ７突变成人ＡＬＬ患者预后较好。ＥＣＯＧ Ｅ２９９３研究 结果也提示ＮＯＴＣＨｌ和ＦＢＸＷ７野生型成人Ｔ－ＡＬＬ患者无 事件生存率低于突变型…ｌ。 另外，基因组分析还有助于分析免疫学、遗传学或分子 生物学特点相似的ＡＬＬ患者基因表达的不同，结果有助于 确定系列的起源、细胞转化的不同机制及指导制定个体化的 治疗策略。 ｉ、成人ＡＬＬ的预后判断 儿童和成人ＡＬＬ的治疗效果均受治疗方案、临床特征、 白血病细胞的遗传学、宿主的药代动力学和药物遗传学、全 基因表达谱（基因组研究）、治疗的早期反应等多种因素的影 响。关于成人ＡＬＬ预后分组的标准各家不尽一致，列举部 分有代表性的临床研究的分组情况：
流式细胞基本原理和在白血病中应用
Requirements for assigning more than one
lineage to a single blast population
• Myeloid lineage
– Myeloperoxidase (flow cytometry, immunohistochemistry or cytochemistry) or
三.成熟淋巴细胞增殖 性疾病
循环淋巴细胞增殖性疾病
❖慢性淋巴细胞白血病 ❖幼稚淋巴细胞白血病 ❖毛细胞白血病 ❖脾边缘区淋巴瘤 ❖大颗粒淋巴细胞白血病 ❖皮肤T细胞淋巴瘤相关白血病
…………
这类疾病必须有流式细胞术的辅助诊断！
确定克隆来源！
正常淋巴细胞
淋巴细胞增殖性疾病(克隆扩增)
T or B or NK
白血病诊断依赖于多种检测方法
样本
形态学
基础和金标准
流式细胞术
必需
细胞遗传学/FISH 重要
分子生物学
急性白血病免疫分型的价值
• 区分淋系、髓系白血病 • 区分淋系白血病中的T、B-ALL • 鉴定混合细胞性白血病的类型：
T-M、B-M、T-B、T-B-M
• 治疗过程中监测MRD，评价疗效 • 提示某些遗传学异常：
– Weak CD19 with at least 2 of the following strongly expressed:CD79a,cytoplasmic CD22,CD10
MPAL (mixed phenotype acute leukemia)
WHO 2008
Two Leukemic Populations
B-ALL:多数表达CD34、CD38dim、TDT、 CD19、CD10str、CD20,这些标志的任意组合 CD34/CD22、CD34/CD20、TDT/CD10等，也 可加上某些异常标志如 CD13、CD33、CD15 即可将ALL细胞与正常骨髓和外周血细胞分开 （60～80%）。
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四色流式细胞术用于急性白血病免疫分型的中国专家共识（完整版）白血病免疫分型是利用不同单克隆抗体检测白血病细胞胞膜和胞质抗原，通过流式细胞术(FCM）分析其表型，实现对白血病细胞系列来源及其分化程度的诊断。
白血病免疫分型已成为诊断白血病的必要依据，同时也可为微小残留病（MRD)的检测以及白血病的治疗和预后提供重要信息。
白血病免疫分型是细胞形态学分型的重要补充和进一步深化，以荧光标记技术联合FCM检测并判定白血病免疫表型，具有准确、快速、客观、重复性好、特异性强等特点，提高了白血病诊断的准确性[1, 2]。
采用不同数量及组合的荧光标记免疫抗体处理白血病细胞并进行荧光检测及分型是免疫分型的关键环节。
准确诊断需要选择一定数量的抗体，白血病免疫分型涉及多个造血系列的抗原，但目前国内甚至国际上均无规范化的方案可以借鉴；国内不同的医疗单位所用的抗体数量和种类均有较大的异质性，有些单位由于应用的抗体数量较少或抗体选择不当，影响对疾病的诊断、分期和预后的判断。
鉴于国内的实际情况，中国免疫学会血液免疫分会临床流式细胞术学组经过多次讨论，提出以CD45/侧向散射光（SSC）为基础的中国FCM急性白血病免疫分型四色方案，本方案以2组表面抗原作为筛查抗原，试图利用相对少的抗体，达到对各个类型白血病进行较全面的检测，具有快速、客观、准确的特点。
已在国内的多家医疗单位试用，证明此方案能够满足临床的需要[3, 4]。
目前，虽然国际上有八色甚至十色方案[5, 6, 7]，但对仪器及操作人员的技术要求较高。
鉴于国内的实际情况，我们首先提出中国FCM急性白血病免疫分型四色方案，供从事急性白血病免疫分型的实验室参考，以期促进我国急性白血病免疫分型诊断的规范化及整体水平的提高。
一、四色方案的基本要求理想的急性白血病免疫分型方案应满足以下几点要求：①识别白血病细胞，能将其与正常细胞或反应性细胞相区别；②鉴别白血病细胞的系列来源；③根据细胞的分化程度对疾病进行亚型分型；④鉴别用于检测MRD 的白血病相关免疫表型(LAIP) ;⑤帮助判断某些特异分子改变，即基因型检测；⑥提供预后相关及治疗靶点的免疫标志检测结果。
为了保证免疫分型的准确度，满足不同的临床需要，本共识将抗体应用分为诊断必选抗体和可选择抗体：必选抗体包括诊断必选及MRD检测必选抗体，后者主要是用于筛查治疗后MRD检测的LAIP，如果在治疗前未进行检测，治疗后可能难以弥补，因此均作为必需检测的抗体；可选择抗体包括白血病亚型诊断、基因型检查及治疗靶点等检测所需的抗体。
各单位可根据具体情况进行选择性应用。
常用免疫荧光染料有FITC（异硫氰酸荧光素）、PE（藻红蛋白）、CY5（花青素）、preCP（叶绿素蛋白）、ECD（藻红蛋白-得克萨斯红）、APC（别藻蓝素）等，本共识推荐的荧光染料为perCP、FITC、PE及APC。
二、四色方案相关推荐（一）适应范围1．急性淋巴细胞白血病（ALL）：（1）B系：早期前体B-ALL（Pro-B-ALL）、普通型B-ALL （Common-B-ALL）、前体B-ALL（Pre-BALL）及与Burkitt淋巴瘤进行鉴别。
（2）T系：早期前体T-ALL（Pro-T-ALL）、前体TALL（Pre-T-ALL）、皮质T-ALL和髓质T-ALL。
2．急性髓系白血病（AML）：（1）AML微分化型（AML-M0）；（2）急性早幼粒细胞白血病（APL）；（3）AML伴粒系和单核细胞分化型（AML-M1/2和AML-M4/5）；（4）急性红白血病（AML-M6）；（5）急性巨核细胞白血病（AML-M7）。
3．其他类型的急性白血病：（1）前体树突细胞肿瘤；（2）急性嗜碱粒细胞和肥大细胞白血病；（3）混合表型急性白血病（MPAL）。
4．筛查MRD检测的标志。
（二）抗体选择1．必选抗体：包括诊断及MRD检测必选抗体。
表1、表2为诊断B-ALL、T-ALL 和AML必选的抗体。
在诊断T-ALL和AML时必须进行这些抗体的检测。
在B-ALL中有60％左右患者CD19st+CD10+ CD34+，按照2008版WHO分类标准，可以诊断B- ALL，不必检测cCD79a、CD22、nTdT。
而有30%~40% B-ALL患者CD34阴性，此时nTdT阳性对诊断B-ALL 尤为重要。
如果nTdT阴性（极少患者），应该进一步检测膜免疫球蛋白（Ig）或膜κ、λ轻链，如果膜Ig或κ、λ轻链均阴性，多提示为B-ALL。
由此可见，B-ALL的必选抗体可以根据具体情况有所变化。
表1急性淋巴细胞白血病（ALL）必选抗体表2急性髓系白血病（AML）和混合表型急性白血病(MPAL)必选抗体表1、表2还包括MRD检测必选的抗体。
目前的研究结果证实治疗后MRD水平是判断白血病患者预后的独立因素。
MRD的检测已成为白血病分层及个体化治疗及判断预后的重要指标。
在治疗前应该对检测MRD的标志进行筛查，以便治疗后利用多参数FCM进行MRD监测。
MRD的检测需要掌握正常细胞不同系列、不同分化阶段细胞的抗原表达顺序和表达强度。
因此，首先要了解所使用的抗体组合中，每个抗原的正常分化规律和表达强度，当这些抗原的表达顺序及表达强度发生变化时，即为LAIP。
另外白血病细胞可以表达交叉系列抗原，也是LAIP的一种表型，因此可以适当增加其他系列抗原的检测，尤其是对AML患者，以便于分析判断。
对于B- ALL患者，建议监测CD45、CD10、CD19、CD34、CD38、CD123、CD58抗原表达的强度变化。
B-ALL经常表达髓系抗原如CD13、CD33，可以用于MRD检测，为了减少抗体的应用，在此不作为必选抗体，各单位可选择性应用。
对于T-ALL患者，可以选择CD34、nTdT、cCD3并结合其他的T细胞标志，如CD7、CD3、CD5等，以检测骨髓或外周血中的幼稚T细胞或异常幼稚T细胞，当幼稚T细胞比例高于正常范围，尤其是出现异常幼稚T细胞时，提示存在MRD。
对于AML患者，首先观察髓系标志抗原强度是否异常，及是否出现早期和晚期标志共表达，还应检测是否表达淋系标志，如CD7、CD56、CD19等。
其他标志如CD5、CD2表达比例相对低，可选择性应用。
表1、表2中的抗体为目前诊断主要的急性白血病必选，但随着临床研究的深入，其抗体的数量可能会随之增加。
如2009年国际上提出早期T前体白血病（early T precursor，ETP)是T-ALL的一种形式，临床预后非常差。
基因表达谱和免疫表型特征说明ETP是T细胞在分化过程中阻滞于非常早期的阶段，与造血干细胞及髓系祖细胞相关。
文献报道此类白血病的免疫表型特点为不表达CD1a、CD8，弱表达CD5，至少表达一种或更多的干细胞及髓系标志，如CD117、CD34、HLA-DR、CD13、CD33、CD11b及CD65[8, 9]。
因对ETP的诊断标准和临床意义还在研究中，在此作为参考。
2．可选择的抗体：（1）亚型检测可选择的抗体：急性白血病的亚型分类在一定程度上反映了白血病的分化程度。
根据正常细胞的分化规律，WHO提出了对于B-ALL和T-ALL亚型的分类标准（表3、表4）。
目前国际上对亚型诊断的必要性仍有不同的观点，有学者认为其与预后无明显相关性，且其分型抗原的科学性有待研究。
另外，一些关键性标志，如cCD79a、CD22、CD1a的表达强度可能因使用的抗体不同，而产生不同结果，影响对白血病系列来源的鉴别。
但是，对于T- ALL亚型的分型，有文献报道皮质T-ALL预后相对较好[10]。
另外，一些临床医师希望对亚型进行分型。
因此，亚型的诊断在此不列为必要的检测。
各个医院可根据不同的临床需求进行选择性检测和应用。
表3急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）亚型分类表4急性T淋巴细胞白血病（T-ALL）亚型分类（2）急性白血病基因型检测所需抗体：对于AML和ALL患者，特殊基因型的诊断是非常必要的。
WHO的分类中已将具有特殊预后和临床意义的基因异常的白血病患者进行单独分类。
当然这些基因异常白血病的诊断需要分子生物学和细胞遗传学的方法进行确定。
个别具有特殊基因型的白血病细胞具有较突出的免疫表型表现，往往提示存在相关的遗传学异常，但不能作为确诊的依据。
主要特殊基因型急性白血病的免疫表型见表5。
这些标志抗原不作为必选的检测标志，可选择性应用。
表5急性白血病基因型抗体的选择（3）预后和治疗靶点的检测：CD20、CD33、CD52、CD45、CD123等标志可能与预后或临床针对某些标志的特异性单克隆抗体药物相关，如需对预后进行评估或指导靶向药物的选择，可适当选择。
对于前文中未提及的抗原，均不作为必选标志。
三、急性白血病免疫分型方案相关推荐（一）资料收集临床资料的完整有助于顺利完成临床实验室相关检查。
这些资料包括患者年龄、性别、外周血细胞计数、疾病分期（初诊、复诊、MRD等）、前期治疗详情及疾病复发等信息，此外，还包括细胞形态学分析和细胞化学分析等检查结果。
这些信息均对四色方案具有辅助作用。
（二）临床标本的收集、运送、保存采用肝素或EDTA抗凝，以骨髓为主，如果骨髓干抽，则抽取外周血。
应根据外周血白细胞计数决定标本采集量，一般为4~5 ml。
如外周血WBC >10×109/L可适当减少，<4×109/L应适当增加采集量。
采集后尽快送往实验室，标本接收时应按要求对标本进行状态检查，若发现标本凝血时应尽量进行检测，如果检测后因标本问题不能作出诊断时，应在报告中注明，并记录存档。
标本放置于室温或4℃，应在1~3 d 内完成FCM检测。
（三）仪器和试剂1．仪器：采用可进行FITC、PE、APC及PerCP/PE-CY5四色荧光检测的流式细胞仪即可。
2．试剂：主要是抗体的应用，因生产抗体的公司较多，有不同的克隆，可能造成检测结果差异较大，各单位在选择时，可以根据文献报道，选择质量好且稳定的抗体和克隆，在此不作规定[11]。
但有少数抗体，如TdT等，不同的公司检测结果差异较大，需要慎重选择。
另外在判断LAIP时，要比较抗原表达的差异，即抗体的荧光强度是否存在异常。
在比较荧光强度时，特别要注意必须用同一公司、同一克隆、同一荧光素标记的单抗。
因此，要尽量保持抗体使用的一致性。
如果需要更换抗体，需要做好充分的比对。
（四）两步法进行免疫分型＋MRD抗原筛选的参考抗体组合临床应用中，多数患者在免疫分型检测前，不知属于何种系列急性白血病。
虽然细胞形态学检测联合细胞化学检测能初步判断AML或ALL，但对于ALL患者仍然无法判断是B、T或NK系列。
对于AML患者，为了除外MPAL及MRD的检测，一些淋系标志如CD7、CD56、CD19仍然需要常规筛查。