218例急性白血病流式细胞术免疫表型分析
应用流式细胞仪对176例急性白血病进行免疫表型分析
应用流式细胞仪对176例急性白血病进行免疫表型分析急性白血病是一种由于造血干细胞发生异常增殖或分化障碍而引起的血液系统恶性肿瘤疾病。
精准的免疫表型分析可以为临床诊断、疾病分型和治疗选型提供准确的基础数据,流式细胞仪作为一种先进的免疫学检测技术,能够敏锐的分辨各种细胞的表型特征,因此成为研究、诊断急性白血病的重要方法之一。
本文通过分析176例患者的免疫表型,探讨了流式细胞仪在急性白血病诊断中的应用。
在分析过程中,我们首先采用流式细胞仪检测患者血液中的白细胞、粒细胞、单核细胞、淋巴细胞的表型特征,发现不同类型的急性白血病白细胞的表型特征差异显著。
以AML-M1型急性髓系白血病为例,该型白血病细胞通常表现为CD33、CD13、CD14、CD15等多种粒细胞系标记阳性,而CD34、CD41等为幼稚血细胞标志物阳性。
而ALL-T2型急性淋巴系白血病的淋巴母细胞往往表现为CD10、CD19、CD34、CD45、CD123等标记阳性。
通过这些特征的分析,我们可以对不同类型的急性白血病进行准确的诊断、分类。
同时,我们还应用流式细胞仪检测了患者白细胞的CD34+和CD117+细胞数量,发现在急性髓系白血病中,CD34+和CD117+细胞较高,而在急性淋巴系白血病中,这两种细胞的数量明显降低。
基于这些数据,我们可以更精确地评估患者的病情严重程度和预后。
此外,我们还对患者骨髓中的淋巴细胞进行了CD45RA和CD45RO的表型分析,发现在某些淋巴系急性白血病中,CD45RA+淋巴细胞数量降低,而CD45RO+淋巴细胞数量增多。
这一结果提示了CD45RA和CD45RO在急性白血病中具有重要的临床应用价值,可以用于病情的评估和疾病类型的判断。
综上所述,流式细胞仪具有高灵敏度、高分辨率,能够对患者血液中各种细胞的表型特征进行快速、准确的检测,对急性白血病的诊断、分类、评估病情严重程度和预后等方面具有重要的应用价值。
随着流式细胞仪技术的不断发展,相信在未来,它将在临床急性白血病诊断、治疗中发挥着越来越重要的作用。
多参数流式细胞术分析急性白血病免疫表型
多参数流式细胞术分析急性白血病免疫表型高雁群;靳海杰;闫蓓;汪菲菲;李晓红;高春记【期刊名称】《标记免疫分析与临床》【年(卷),期】2005(012)004【摘要】为了探讨急性白血病免疫表型特征,利用流式细胞术三色荧光直接标记技术CD45/SSC多参数散点图设门方法,对162例急性白血病患者幼稚细胞表面及胞浆内分化抗原进行分析.结果提示:急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者主要表达CD117(94.9%)、CD13(88.5%)和CD33(70.5%);急性淋巴细胞白血病(ALL)患者中B-ALL主要表达cCD79a(100%)、CD19(92.1%),T-ALL表达cCD3(100%)、CD2(83.3%);ANLL伴淋系抗原表达(Ly+ANLL),以CD7(56.2%)、CD19(31.2%)多见;ALL伴髓系抗原表达(My+ALL),以CD13(88.9%)、CD33(27.8%)多见.为此用多参数流式细胞术三色荧光直接标记法进行免疫分型,对急性白血病的确诊、治疗和预后有重要的临床意义.【总页数】3页(P229-231)【作者】高雁群;靳海杰;闫蓓;汪菲菲;李晓红;高春记【作者单位】河南省新乡市中心人民医院血液科,河南,新乡,470000;中国人民解放军总医院血液科,北京,100853;中国人民解放军总医院血液科,北京,100853;中国人民解放军总医院血液科,北京,100853;中国人民解放军总医院血液科,北京,100853;中国人民解放军总医院血液科,北京,100853【正文语种】中文【中图分类】R733.7【相关文献】1.多参数流式细胞术在多发性骨髓瘤及其微小残留疾病的免疫表型分析 [J], 许艳丽;王顺清;毛平;杜庆华2.多参数流式细胞术分析难治性贫血伴原始细胞增多患者骨髓细胞的免疫表型特点[J], 黄竞;杜欣3.多参数流式细胞术检测91例急性白血病免疫表型分析 [J], 李珊凤;易汉杰;金明威;陈哲;陈颖;王建华;孙伟亮;裴仁治4.多参数流式细胞术检测儿童急性B淋巴细胞白血病免疫表型与预后分析 [J], 张霞;付笑迎;覃文琪;李济填;周杰;刘新刚5.多参数流式细胞术在多发性骨髓瘤患者细胞免疫表型及其微小残留病灶检测中的应用价值分析 [J], 邓银芬;袁红建;孙善芳;钱小丽因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
白血病免疫表型 方法学比对
白血病免疫表型方法学比对白血病是一种由于骨髓中恶性克隆细胞的快速增殖导致的血液恶性肿瘤。
免疫表型是指通过检测细胞表面的分子标记来确定细胞类型和状态的方法。
在白血病的免疫表型研究中,常用的方法包括流式细胞术和免疫组化染色。
流式细胞术是一种通过检测细胞表面的抗原分布来确定细胞类型和状态的方法。
在白血病的免疫表型研究中,流式细胞术常用于分析白血病细胞表面的免疫分子标记,例如CD标记。
CD标记是一种用于区分不同细胞类型和状态的标记物。
通过流式细胞术可以确定白血病细胞的表面CD标记的表达情况,从而确定其免疫表型。
免疫组化染色是一种通过使用特异性抗体来检测细胞内或细胞表面蛋白的方法。
在白血病的免疫表型研究中,免疫组化染色常用于检测白血病细胞中特定蛋白的表达情况。
通过免疫组化染色可以确定白血病细胞中特定蛋白的表达水平,进而确定其免疫表型。
除了流式细胞术和免疫组化染色,还有其他一些方法可以用于白血病的免疫表型研究。
例如,多色流式细胞术可以同时检测多个免疫分子标记,提高免疫表型的准确性和效率。
此外,还可以利用质谱分析等技术来确定白血病细胞中特定蛋白的表达水平。
研究白血病的免疫表型可以帮助医生确定疾病的类型和进展情况,指导治疗方案的选择。
例如,通过分析白血病细胞中CD标记的表达情况,可以确定其所属的亚型,从而指导相应的治疗。
此外,免疫表型研究还可以用于监测治疗的效果,评估疾病的预后。
然而,白血病的免疫表型研究也存在一些挑战和限制。
首先,由于白血病细胞的异质性,不同患者之间、甚至同一患者的不同时间点之间可能存在免疫表型的变化。
因此,需要对不同样本进行多次检测,以确定免疫表型的稳定性和一致性。
其次,由于免疫表型的分析涉及到复杂的仪器设备和专业知识,需要有经验丰富的技术人员进行操作和解读结果。
此外,还需要建立可靠的标准和参考范围,以便对免疫表型结果进行解释和比对。
白血病的免疫表型研究是一项重要的临床技术,可以用于确定疾病类型和进展情况,指导治疗方案的选择。
流式细胞术在急性白血病细胞免疫表型分析中的价值
维普资讯
主要医学杂志 20 年 i 06 月第2 卷第 1 8 期 Nnx i J . 0.o2.o 1 i iI d .a 2 6Vl8N . g av J n 0 e
文章编号: 0— 9920) — 00 0 1 1 5 ( 60 03— 3 0 4 0 1
Flw y o er nay i fa t e Iuk mi m m u p n t pig o c t m t y a l sso c u e e a i no he o y n
B o一 跏 , a
Z i o g h —h n .
1 2一b .T eA fi e op o N n x d o . Y n h a 5 o 4 C i ) i ( h fl t H s . f i i Me .C l , i u n7 o 0 . h a n i d a ga 1 e n
型。结果 分析 7 5例急性 白血病患者 中, 急性 T淋巴细胞 白血病( J) T一 . 患者 1 , 1 . %; 2例 占 6 0 急性 B淋 巴细胞
白血病( B—A L) l 患者 2 4例, 3 . %; 占 20 急性 髓细胞 白血病 ( ^ 患者 3 A, ) Ⅱ 7例。 4 . %。混合 型急性 H I 占 93 AJ B有 2 例 . 26 占 .%。AJ 患者 除均表 达淋系抗原外. I 同时伴有髓 系统 抗原的表 达 ;MI患者除均表达髓 系抗原外 . A 少部分 同时伴有淋 系抗原 的表达。A I细胞表 面抗 原表 达百分率 成人明显高 于儿童 (3 2 %) M 7 %/7 。结论 流式 细胞技 术 能准确地分析井 鉴别出急性白血病各型别。 白血病 诊断分型的重要手段之一。 是 [ 关键 词] 流式细胞术 ; 白血病 ; 荧光抗体 ; 细胞 免疫表 型 [ 中图分类号 ] R 4 .3 466 [ 文献标识码】 A
142例儿童急性白血病的流式分析
2013年9月瘤,而不是显露脊髓,过多的脊髓显露不仅无助于肿瘤切除,相反可能增加脊髓损伤的机会。
因此,半椎板切除在椎板切除及硬膜切开后,仅显露肿瘤,肿瘤切除过程中不需要任何的脊髓牵拉,尤其适用于位于脊髓侧方及前侧方的肿瘤。
Tredway等的报告让我们得到启发,利用旁正中小切口手术,保留一部分病变侧棘突旁肌肉,深部仅显露肿瘤对应的椎板,达到微创的手术效果的同时在缝合术腔时不留死腔,避免术腔积液,减少感染机会。
骨窗的形成均在显微镜下利用磨钻切除椎板方便可行,高速魔钻磨除骨质过程中亦可达到有效止血作用,缩短了手术时间。
术中经常涉及破坏小关节突的情况,因此在切除椎板时需特别小心保留外侧关节突结构。
小关节的切除是导致椎体不稳的因素。
本组患者手术时均注意椎板切除范围外侧至小关节突,当磨除骨质形成预期的骨窗后,切开硬膜时尤其注意被肿瘤顶起并突向后的神经根。
而对脊髓侧方或侧前方的肿瘤,正常脊髓组织被挤压到对侧,椎板下方即是肿瘤,磨除椎板及剪开硬膜时损伤脊髓的可能性较小。
总之,旁正中小切口半椎板入路结合术中电生理监测(SEP\ MEP)下切除髓外硬膜下肿瘤具有创伤小、手术及麻醉时间短,出血少、脊髓神经骚扰轻,术后创伤性炎症反应轻,患者疼痛轻,对脊柱的稳定性保护良好、可早期下床活动等特点,经济效益好,能降低平均住院日及平均人均费用,值得临床推广应用。
参考文献[1]卞留贯,孙青芳,沈建康,等.经单侧半椎板显微切除椎管内肿瘤[J].中国微侵袭神经外科杂志,2003,8(3):106-109.[2] RATLIFF J K, COOPER P R. Cervical laminoplasty: a criti-cal review [J]. J Neurosurg, 2003, 98(3 Suppl): 230-238.[3]宗少晖,王振宇.单侧半椎板“开窗”显微手术切除颈椎椎管内肿瘤[J].中国微创外科杂志,2005,5(7):565-566.[4]菅凤增,陈赞,凌锋.小切口半椎板技术切除椎管内肿瘤[J].中国微侵袭神经外科杂志(CMINSJ),2007,12(2):85-86.1临床资料患者男,56岁,因四肢麻木、行走不稳1.5月,加重伴言语不清、吞咽困难6天入院。
运用流式细胞术对75例急性白血病免疫分型的表型分析
对 我院 7 5 例 初 诊 AL患 者 进 行 免 疫 表 型 分 型 的 资 料分 析如 下 。
1 资料 与方 法
1 . 1 临床资 料 随机 选 择 7 5例 经 F AB分 型 初 诊
为 AL的我 院 2 0 1 1年 3月 至 2 0 1 4年 6月 住 院 患 者, 男性 3 9例 , 女性 3 6例 ; 年龄 1 3 ~7 7岁 。 按
率≥ 1 0 , 判 定为 阳性 表达 ; 免疫 分 型依据 国际 白血 病 欧 洲协作 组 ( E G I L ) 的积分 标准 L 2 ] 。
2 结 果
F AB分 型标 准_ 1 分为: 急性 髓 系 白血 病 ( AML ) 4 5 例, 其 中 M。 2例 , M 9例 , M 2 O例 , M。 4例 , M 5 例, M 4例 , M。1例 ; 急 性 淋 巴 细 胞 白血 病 ( AL L) 2 5例 , 其中 L 7例 , L 1 3例 , L 。 5例 ; 另有 5例未 能 明确 分 型 。 1 . 2 仪 器 与试 剂 流 式 细 胞 分 析 仪 为 美 国 B e c k — me n C o u l t e r 公 司生 产 , 型号 E p i c s - XL; 试 剂 为美 国 贝克 曼库 尔特 公 司生 产 的单 克 隆 抗 体 , 髓 系 标 志 抗 体有: MP 0、 C D1 3 、C D1 4 、C D 3 3 、C D 4 1 、 C D1 1 7 、 Gl y A; T 淋 巴标 志抗 体 有 : c C D3 、 C D2 、 C D 5 、 C D 7 ; B 淋 巴标 志 抗 体 有 : c C D 7 9 a 、 C DI O 、 C D1 9 、 C D 2 0 ; NK 细胞 抗 体 有 : C D( 1 6 +5 6 ) ; 非 系列抗 体 有 : C D 4 5 、
195例急性白血病免疫表型分析
分型标 准参照文献 , ]抗体组合( C 5 C 2/ D 5② C 3  ̄ D / D 0C 4 ; D / )
CY2 C 4 ; ) D / D 3 CM5 ④ c 1/ I / D 5 ( C 7 C 3/ I ; D 3 瑚 - R C 4 ; 2  ̄ D / D 5 ⑤ CY4 C 3/ D 5 ⑥ CM1 P10 C 4 ; C 1/ I ; I / D 8 C 4 ; I / -7/ D 5 ⑦ D 4 CM5 ⑧ 3
L — R占 9 %( 4例) C 3 占 8 .7 5 0 5 , D4 6 6 %(2例) C 1 , D 9占 前用标准荧光微球校正仪器 , 管获取 100个细胞进行 分 H AD 每 00 析。用 CM5 S C设 门分析每管 内细胞。结果判 断 , I /S 以白血 8.3 (O例 ) C 2 占 8% (8例 ) C 3 33% 5 , D2 0 4 , D 8占 5% (O 0 3 病细胞表面抗原 ≥阴性对照 2 % 以上为 阳性 。A 0 ML的免 疫
例 )C 2 ,D0占4 .3 (6例 ) 33% 2 。按其 免疫 表型 分型 , 中 T 其 急淋 占 8例 , B急淋 占 5 。见表 2 2例 。 2 3 3 3 ( 2 ) ML可伴 C 7 C 1 、 D 2等淋系抗原 . 1 .% 2 例 A D 、D 9C 2 的表达。2 例 L A L中淋系抗原表达率最高为 C 1 2 Y+ M D9占 8.% (6例 ) 其 次 为 C 7 占 2 . % ( 42 1 , D 7 3 6例 ) C 2 占 ,D2
例、 4 பைடு நூலகம்例 、3 L 2例。
表 1 15例急性■系白血病的免疫表型 3
n ∞3 C D5 C ) I 7 CD 0 1 C 3 DI a) 3 3 C 3 D4 C 3 m A. R C 4 D8 D D1 C 5 D1 C 9 D1 皿 2 o C 2 D2 C 4 D1
急性髓系白血病112例流式细胞术检测免疫表型研究
急性髓系白血病112例流式细胞术检测免疫表型研究作者:董进梅张峰罗娇来源:《中外医疗》 2013年第13期董进梅张峰罗娇云南省普洱市人民医院血液科,云南普洱 665000[摘要] 目的探讨流式细胞术检测在急性髓系白血病诊断中的意义。
方法回顾分析在该院就诊初治的急性髓系白血病患者(AML)112例,采用流式细胞术CD/SSC双参数散点图设门的方法对患者骨髓细胞进行12种抗原监测,并结合FAB法则对其进行标准分类,并对不同亚型中抗原表达的差异性进行有效比较。
结果在112例初治的急性髓系白血病患者中,表达指数最高的是CD、CD、CD,分别为100%、94.5%、77.9%。
而在淋系抗原中,CD的表达指数最高为30.5%,其次为的CDl9、、26.9%、CD的16.7%。
而且有些免疫表型与FAB法则分类具有一定的相关性。
结论在急性髓系白血病诊断中运用流式细胞术检测有助于急性髓系白血病患者诊断和分型的准确性,对于急性髓系白血病患者选择治疗方案以及预后的判断具有重要意义。
[关键词] 急性髓系;白血病;流式细胞术;免疫表型[中图分类号] R733[文献标识码] A[文章编号] 1674-0742(2013)05(a)-0174-02急性髓系白血病包括所有非淋巴细胞来源的急性白血病,是一种具有高度异质性特性的疾病群,可由正常的髓系细胞分化发育过程中不同阶段的造血祖细胞恶性变转化而来[1]。
其发病原因及发病机制相对复杂,目前世界临床医学界普遍认为,大多白血病引发因素是由于环境因素与细胞遗传物质相互作用造成的。
由于AML患者本身白细胞质量差,自身抵抗力底下,患者被感染几率高,治疗困难且并发症多。
而且常伴有皮肤黏膜出血最常见为眼底、球结膜的出血现象。
流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)是一种在功能水平上对液流中单列的细胞或者是其它微生物粒子快速逐一的进行筛选以及定量分析的检测手段[2],同传统的荧光镜检查相比,其具有高速、精准、多用途等优点,在基础研究和临床实践被广泛的运用,且在细胞生物学、血液学、免疫学、遗传学及临床检验等各领域各学科中也发挥着重要的作用。
急性白血病流式细胞术免疫分型的特点及临床意义
·1 4 1 ·
·论著·
急性白血病流式细胞术免疫分型的特点及临床意义
王桂芝, 秦文华
( 中平能化集团总医院病理科, 平顶山 4 6 7 0 0 0 )
[ 摘要] 目的 探讨急性白血病流式细胞术免疫分型的特点及临床意义。方法 1 0 0例急性白血病, 采 用流式细胞术进行急性白血病免疫表型检测。结果 ①用特异性抗体将急性淋巴系白血病分为 T细胞系列 急性淋巴细胞白血病( T A L L )和 B细胞系急性淋巴细胞白血病( B A L L ) 。 ② 用特异性抗体使急性髓细胞白 血病( A M L ) 的分型更明确。③ 发现急性淋巴细胞白血病( A L L ) 中伴髓系抗原表达( M y A L L ) 、 A M L中伴淋 系抗原表达( L yA M L ) 和混合型白血病。结论 免疫学分型能反映白血病细胞的特征, 提高了诊断的准确性。 [ 关键词] 白血病; 免疫表型分型; 流式细胞术 中图分类号: R 7 3 3 . 7 1 文献标识码:A D O I : 1 0 . 3 9 6 9 / J . i s s n . 1 6 7 2 6 7 9 0 . 2 0 1 2 . 0 2 . 0 1 1 I n v e s t i g a t i o no f i mmu n o p h e n o t y p ei na c u t e l e u k e mi av i af l o wc y t o me t r y W A N GG u i z h i , Q I NW e n h u a ( P a t h o , P i n g d i n g s h a n , 4 6 7 0 0 0 ) l o g i c a l C e n t e r o f G e n e r a l H o s p i t a l o f P i n g d i n g s h a nC o a l G r o u p [ A b s t r a c t ] O b j e c t i v e T oe x p l o r ei m m u n o p h e n o t y p i n gs p e c i f i c i t i e s i na c u t el e u c o c y t h e m i av i af l o wc y t o m e Me t h o d s F l o wc y t o m e t r yw a s u s e dt o h a v e i m m u n o p h e n o t y p i n g o f a c u t e l e u c o c y t h e m i a t e s t e da n da s s i s t i nm a k t r y . i n gt h ed i a g n o s i s l e u k e m i ad e t e c t i o n . R e s u l t s ( 1 ) A c u t el y m p h o c y t i cl e u k e m i aw a s d i v i d e di n t oTc e l l s i ns e r i e s o f a c u t el e u k e m i a( T A L L )a n dBc e l l l i n e s a c u t e l e u k e m i a ( B A L L )b y u s i n g s p e c i f i c a n t i b o d i e s . ( 2 ) w i t hs p e c i f i c a n t i b o d i e s , a c u t em y e l o g e n o u s l e u k e m i a( A M L )c a nb ed i a g n o s e dm o r ec l e a r . ( 3 ) A c u t el y m p h o c y t i cl e u k e m i a( A L L ) w i t hm y e l o i da n t i g e ne x p r e s s i o n( M y A L L ) , A M La n t i g e ne x p r e s s i o nf r o mL y( A M L )a n dm i x e dl e u k e m i aw e r e C o n c l u s i o n I m m u n o p h e n o t y p e c a nr e f l e c t t h e h e t e r o g e n e i t y o f l e u k e m i a c e l l s m o r e d i s t i n c t l y a n dc o n s e q u e n t f o u n d . l y , e n h a n c et h ee x a c t n e s s o f d i a g n o s i s . [ K e yw o r d s ] L e u k e m i a , I m m u n o p h e n o t y p i n g , f l o wc y t o m e t r y
160例儿童急性白血病免疫表型分析
160例儿童急性白血病免疫表型分析高怡瑾;吴玥;陈笑韵;陆凤娟;吴长根【期刊名称】《中国当代儿科杂志》【年(卷),期】2004()1【摘要】目的免疫表型可以确定细胞的来源和分化阶段 ,是急性白血病的重要生物学特征。
该文了解儿童急性白血病 (AL)抗原表达规律、分布情况并探讨其临床意义。
方法采用流式细胞术直接或间接免疫荧光法检测 1 6 0例儿童AL的免疫表型。
结果 1 6 0例AL中 ,急性淋巴细胞白血病 (ALL) 1 1 2例 ,急性髓细胞白血病(AML) 4 8例。
1 1 2例ALL中 ,T系ALL 1 2例 (1 0 .7% ) ;B系ALL(不包括成熟B ALL) 93例 (83.0 % )。
ALL中 ,1 3.8%有髓系抗原表达 ,以CD33阳性最常见 ;AML中 ,4 0 %有淋系抗原表达 ,以CD7阳性率最高。
儿童AML淋系抗原表达阳性率高于儿童ALL髓系抗原表达 (P <0 .0 1 )。
CD1 4在儿童M 4和M 5的表达频率为 77.8%。
B系ALL中CD34阳性率 5 8.5 %。
AML中 ,CD34的表达频率为 5 5 .3% ,其中M1和M 2的CD34阳性率为 76 .5 % ,高于其它AML病人的CD34阳性率 (4 3.3% ) ,P <0 .0 5。
HLA DR抗原在M 3的表达频率为 1 1 .1 % ,低于其它类型AML病人的HLA DR阳性率 (76 .3% ) ,P <0 .0 1。
B系ALL中 ,CD34表达与FAB分型、起病时白细胞数、髓外侵润情况均无关 (P >0 .05 ) ;CD34-组婴幼白血病发生率 (1 7.6 % )高于CD34+ 组 (4 .2 % ) ,P <0 .0 5。
结论HLA DR阴性对于M3的诊断具有一定参考价值。
【总页数】4页(P30-33)【关键词】儿童;急性白血病;AL;免疫表型;流式细胞术;抗原【作者】高怡瑾;吴玥;陈笑韵;陆凤娟;吴长根【作者单位】复旦大学儿科医院血液科【正文语种】中文【中图分类】R733.71【相关文献】1.儿童急性白血病免疫表型及临床研究 [J], 黄婕;何璐璐;方拥军;芮耀耀;周莉;陆勤;杨引2.儿童急性白血病免疫表型及临床意义 [J], 林珊;陈成璇3.三色流式细胞术对儿童急性白血病免疫表型的分析 [J], 杨芝红;魏军;杨宝珍;白永泽;任新明4.儿童急性白血病免疫表型与临床分析 [J], 吴玥;徐冬娥;高巧娣;刘美华;吴长根5.83例儿童急性白血病免疫表型分析 [J], 李卫;倪麟;王耀莉;殷燕南;杜玲珍因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
急性白血病细胞流式细胞术检测情况分析
关键词:急性白血病;外周血白血病细胞;流式细胞术;预后急性白血病的发生与环境污染、遗传、生活方式等各种因素有关[1],是一种临床发病率较高的非实体肿瘤,严重影响患者生活质量,同时也给家庭造成沉重经济负担。
随着近年来临床对白血病研究的深入,越来越多先进治疗方案得以落实,如果白血病患者能够在发病早期得到有效治疗,仍有相当高缓解率,但同时也伴有较大复发风险。
资料表明[2],急性白血病患者主要复发原因是体内肿瘤细胞没有被完全清除,机体内仍存在微小残留病变(MRD),如果残留的肿瘤细胞持续增殖,就会导致疾病复发。
白血病细胞表型与异常光散射的特点非常突出[3],属于表面抗原,因此临床主张采用FCM识别不同抗原的荧光信号,以提高临床诊断准确率。
本研究采集急性白血病患者外周血样本130例,应用FCM技术检测白血病细胞,现报告如下。
资料与方法2017年1-12月收治急性白血病患者130例,男73例,女57例;年龄21~67岁,平均(37.69±2.46)岁;病理分型:急性髓系白血病80例,急性淋巴白血病50例。
所有患者均符合《血液病诊断及疗效标准》中相关诊断标准[4],所有患者及家属均签署知情同意书。
排除依从性差、无法完成随访、急性早幼粒细胞白血病、精神疾病。
方法:采集患者空腹状态下的外周静脉血3mL,乙二胺四乙酸二钾抗凝处理后,将1×106的有核细胞加入试管中,选择与患者病情特点相符的荧光素标记的单克隆抗体,按照说明书进行规范操作。
应用FACSCalibur流式细胞仪收集具有分析价值的有核细胞10万个以上,并用配套软件分析。
MRD 的判定参考原始细胞抗原有无跨系表达、表达是否同步、表达是否丢失、表达的强弱等因素,MRD阳性的判定标准为≥0.01%,否则可判定为阴性。
对130例患者骨髓细胞进行6~8张骨髓液涂片,经吉姆萨-瑞士染色处理后,在显微镜油镜下对200个细胞进行分类,对参考细胞形态进行分类计数,将《血液病诊断及疗效标准》作为是否复发的判断依据。
126例急性白血病异常免疫表型分析
126例急性白血病异常免疫表型分析作者:贺景娟,李耀华,孙雪静,万岁桂,徐娟,苏力,田丁【摘要】白血病细胞异常免疫表型是区别于正常造血细胞的重要特征之一,也是流式细胞术检测微小残留病的基础。
为了了解急性白血病的异常免疫表型特征,本研究采用四色流式细胞术CD45/SSC双参数散点图设门技术对126例急性白血病患者的异常免疫表型进行分析,并初步探讨其在微小残留病检测中的意义。
结果显示:约76%的患者可以检测到明确的异常抗原表达,白血病异常免疫表型可分为以下四类:抗原跨系列表达、跨阶段表达、过度表达及缺失表达,其阳性率分别为39%、46%、21%和29%。
约11%的患者仅发生了单一的表型异常,其余患者则可以检测到两类或急性白血病Aberrant Immunophenotypes in 126 Patients with Acute LeukemiaAbstract The existence of leukemia aberrant immunophenotypes (LAIP) has been suggested to be a valuable tool for the detection of minimal residual disease (MRD), as they could distinguish leukemic cells from normal hematopoietic progenitors. This study was purposed to analyze the characteristics of LAIP in acute leukemia and further explore the proportion of different types of LAIP in acute leukemia patients. Flow cytometry (FCM) with four color and CD45/SSC gating were used to detect the antigen expression in samples of bone marrow from 126 patients with acute leukemia. The results showed that definite LAIP could be detected in about 76% patients. The LAIP could be divided into fourexpression, asynchronous antigen expression, antigen overexpression andantigen lack expression. The percentages of these LAIPs were 39%, 46%, 21% and 29% respectively. About 11% out of analyzed cases showed the existance of only one aberrant phenotype while two or more of aberrant phenotypes could be detected in majority cases. It is concluded that the LAIP with four subgroups can be detected in the majority of patients with acute leukemia and immunophenotyping based on LAIP is applicable for the detection of MRD. Key words acute leukemia; leukemia aberrant immunophenotype; minimal residual disease急性白血病是一种克隆性恶性增殖的血液系统疾病,恶性细胞抗原的表达具有很大的异质性。
流式细胞术对急性白血病免疫分型的临床价值
流式细胞术对急性白血病免疫分型的临床价值发布时间:2021-09-03T07:47:06.994Z 来源:《医师在线》2021年5月10期作者:刘玉兰[导读] 研究急性白血病实施流式细胞术对免疫分型的临床价值。
刘玉兰(赣州市人民医院;江西赣州341000)【摘要】目的:研究急性白血病实施流式细胞术对免疫分型的临床价值。
方法:选择50份急性白血病患者的细胞标本,在免疫分型中实施流式细胞术。
结果:此次实验结果得出,淋巴细胞白血病、骨髓性白血病、混合型白血病分别是17例、30例、3例;骨髓性白血病纯骨髓性免疫分型比率明显更高。
结论:急性白血病患者免疫分型中实施流式细胞术,可提高患者免疫分型准确性,有助于患者获得对症治疗。
【关键词】流式细胞术;急性白血病;免疫分型;临床价值临床常见白血病,病情严重,患者存在恶性增殖克隆性造血干细胞情况,会对细胞分化造成影响,骨髓内,大量积累其他物质情况下,会对周围器官以及组织造成干扰,人体正常造血功能会发生障碍,导致出血、贫血、感染等情况发生,若情况严重,会导致患者脏器肿大,例如脾脏、肝脏以及淋巴结等肿大[1]。
临床不断进步现代医疗技术,诊治期间,需要先分型后治疗,有助于患者治疗准确性明显提高。
此次选择50份细胞标本,分析流式细胞术对急性白血病免疫分型的临床价值。
1 资料及方法1.1临床数据从我院2020年1月~2020年12月选择50份急性白血病患者的细胞标本,男女分别是36例、14例,年龄范围是18岁至78岁,平均值36.5岁。
此次实验中,使用骨髓抽样,将标本保留。
1.2方法在免疫分型中实施流式细胞术:检查标本,使用高速离心机、单激光三色流式细胞仪等,将藻红蛋白荧光素、异硫氰酸荧光素等作为荧光标记物,使用直接染色办法,取5ml标本,染色前,记录细胞数量,稀释至10%过程中使用磷酸盐缓冲剂,然后再次计数,控制标本内有核细胞密度在1×106个/ml,在制备完成6h之内,将染色标记工作完成,使用流式专用试管,将相应标记抗体在试管内添加,将抗凝处理之后骨髓标本加入,环境避光[2],孵化0.5h左右,将2ml溶血素加入,裂解标本中红细胞10min,离心处理试管,将上清液抛弃,将PBS 溶液加入,用于清洗,添加300ul,染色检测胞浆抗原过程中,将破膜剂加入到标本中,细胞膜裂解10min,将PBS加入,用于洗涤,剩余步骤同单克隆抗体检测。
急性白血病流式细胞术免疫分型的特点及临床意义
·论著·作者简介:王桂芝,主任医师,E-mail :zhanghw1205@163.com 急性白血病流式细胞术免疫分型的特点及临床意义王桂芝,秦文华(中平能化集团总医院病理科,平顶山467000)[摘要]目的探讨急性白血病流式细胞术免疫分型的特点及临床意义。
方法100例急性白血病,采用流式细胞术进行急性白血病免疫表型检测。
结果①用特异性抗体将急性淋巴系白血病分为T 细胞系列急性淋巴细胞白血病(T-ALL )和B 细胞系急性淋巴细胞白血病(B-ALL )。
②用特异性抗体使急性髓细胞白血病(AML )的分型更明确。
③发现急性淋巴细胞白血病(ALL )中伴髓系抗原表达(My-ALL )、AML 中伴淋系抗原表达(Ly AML )和混合型白血病。
结论免疫学分型能反映白血病细胞的特征,提高了诊断的准确性。
[关键词]白血病;免疫表型分型;流式细胞术中图分类号:R733.71文献标识码:ADOI :10.3969/J.issn.1672-6790.2012.02.011Investigation of immunophenotype in acute leukemia via flow cytometryWANG Gui-zhi ,QIN Wen-hua (Patho-logical Center of General Hospital of Pingdingshan Coal Group ,Pingdingshan ,467000)[Abstract ]Objective To explore immunophenotyping specificities in acute leucocythemia via flow cytome-try.MethodsFlow cytometry was used to have immunophenotyping of acute leucocythemia tested and assist in mak-ing the diagnosis leukemia detection.Results(1)Acute lymphocytic leukemia was divided into T cells in series ofacute leukemia (T-ALL )and B cell lines acute leukemia (B-ALL )by using specific antibodies.(2)with specific an-tibodies ,acute myelogenous leukemia (AML )can be diagnosed more clear.(3)Acute lymphocytic leukemia (ALL )with myeloid antigen expression (My-ALL ),AML antigen expression from Ly (AML )and mixed leukemia were found.ConclusionImmunophenotype can reflect the heterogeneity of leukemia cells more distinctly and consequent-ly ,enhance the exactness of diagnosis.[Key words ]Leukemia ,Immunophenotyping ,flow cytometry急性白血病(AL )长期以来主要通过骨髓细胞形态学和细胞组织化学进行诊断,但仍有患者由于细胞形态不典型、细胞发育幼稚等导致难以明确诊断和分型。
应用流式细胞术对123例急性白血病进行免疫表型分析
应用流式细胞术对123例急性白血病进行免疫表型分析林鸿;季迁;姜殿军;李敏【期刊名称】《中国临床医生》【年(卷),期】2015(000)003【摘要】目的:研究急性白血病的免疫表型特点和诊断价值。
方法采用四色荧光抗体直接标记初诊急性白血病患者骨髓,应用流式细胞仪CD45/SSC设门进行免疫表型分析。
结果123例的急性白血病免疫分型中急性髓系白血病82例,B细胞急性淋巴细胞白血病25例,T细胞急性淋巴细胞白血病13例,杂合型髓系/淋系2例,杂合型T系/B系1例。
结论应用流式细胞仪四色荧光直接标记技术, CD45/SSC 组合和设门,利用较少抗体特异性对白血病细胞进行多参数免疫分析,能准确判断细胞的来源和所处的分化阶段。
【总页数】3页(P85-86,87)【作者】林鸿;季迁;姜殿军;李敏【作者单位】沈阳医学院附属卫生学校,辽宁沈阳110034;沈阳医学院附属卫生学校,辽宁沈阳110034;沈阳医学院附属卫生学校,辽宁沈阳110034;沈阳医学院附属卫生学校,辽宁沈阳110034【正文语种】中文【中图分类】R446.11【相关文献】1.运用流式细胞术对75例急性白血病免疫分型的表型分析 [J], 张航;杨梅2.应用流式细胞仪对176例急性白血病进行免疫表型分析 [J], 程小丽;陈葳;杨玉琮;李旭;王翔;赵乐;尤元义;赵明刚3.多参数流式细胞术检测91例急性白血病免疫表型分析 [J], 李珊凤;易汉杰;金明威;陈哲;陈颖;王建华;孙伟亮;裴仁治4.232例急性白血病流式细胞术免疫表型分析 [J], 吴琼;王小中5.218例急性白血病流式细胞术免疫表型分析 [J], 赵皓;余晾;吕合作;郑宏波;项平因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
505例白血病应用流式细胞术免疫分型与FAB分型的结果分析
505例白血病应用流式细胞术免疫分型与FAB分型的结果分析杨峥;莫武宁;李山;秦雪;兰会华;陈正立【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2010(014)008【摘要】目的探讨白血病免疫分型与FAB分型的关系,以指导临床进行分析与治疗.方法对505例白血病患者分别进行细胞形态学检查和流式细胞术(FCM)免疫分型, 并对2种检查结果进行分析.结果①505例白血病患者中FAB初诊急性髓细胞白血病(AML)248例,急性淋巴细胞白血病(ALL)200例,慢性粒细胞白血病(CML)18例,慢性淋巴细胞白血病(CLL)15例,混合型白血病(HAL)14例,少见类型10例;免疫分型初诊单纯型AML163例,变异型AML83例,单纯型ALL108例,变异型ALL106例,双表型32例,未分化型13例.②AML形态学分型与免疫分型完全符合率61.3%、部分符合率30.2%;ALL形态学分型与免疫分型完全符合率53%,部分符合率44.5%;混合型符合率42.9%.结论免疫分型在鉴别 AML 与ALL各亚型和变异型及混合型白血病方面具有重要作用,免疫分型比形态学分型结果更为精细、准确,是形态学分型的补充与修正,但不能取代形态学分型,二者结合可提高诊断准确率.【总页数】4页(P1238-1241)【作者】杨峥;莫武宁;李山;秦雪;兰会华;陈正立【作者单位】广西医科大学第一附属医院,临床医学实验部,广西,南宁,530021;广西医科大学第一附属医院,临床医学实验部,广西,南宁,530021;广西医科大学第一附属医院,临床医学实验部,广西,南宁,530021;广西医科大学第一附属医院,临床医学实验部,广西,南宁,530021;广西医科大学第一附属医院,临床医学实验部,广西,南宁,530021;广西医科大学第一附属医院,临床医学实验部,广西,南宁,530021【正文语种】中文【中图分类】R446.8【相关文献】1.FAB分型、免疫分型和基因分型联合检测急性白血病 [J], 李玲;王蕊;钟笛;温丙昭;王晓敏;许建华;曲建华;陈贩2.急性髓细胞白血病免疫分型和FAB分型的关系 [J], 艾克拜尔·阿布都热衣木;迪丽娜孜·阿布来提;哈力达·亚森3.118例急性白血病五色流式细胞术免疫分型与FAB分型的结果分析 [J], 陈建安;周静;朱学海;丁茜;何永明;李晓婷;梁燕4.江西地区儿童白血病流式细胞术免疫分型结果分析 [J], 梁昌达;刘志强;赖长城5.MDM2mRNA过度表达与儿童急性淋巴细胞白血病免疫分型、FAB分型及高白细胞 [J], 蒋莎义; 陈力军因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
流式细胞术检测成人急性白血病免疫表型特点分析
流式细胞术检测成人急性白血病免疫表型特点分析陈瑢;迪丽娜孜·阿不来提;哈力达·亚森;张雪;尼罗帕尔·吐尔逊;赵芳;郭新红【期刊名称】《新疆医学》【年(卷),期】2008(038)002【摘要】目的:1.探讨免疫分型对成人急性白血病(AL)的诊断价值;2.分析成人急性白血病免疫表型特点及免疫亚型分布情况.方法:采用流式细胞仪结合单克隆抗体双色直接免疫荧光标记方法检测75例急性白血病免疫表型;用瑞氏染色及细胞化学判断骨髓形态学结果.结果:1.75例AL中6例形态学与免疫分型不相符占8%.2.ANLL 主要表达CyMPO和CD33,ALL主要表达CD79a、CD20.3.AML组中CyMPO阳性表达率远高于ALL组,差异显著(P<0.01),CD117在Ly+-AML组中阳性表达率远高于Ly- -AML组(P<0.01).结论:1.白血病免疫分型是对形态学分型的补充和修正,对于B-ALL、T-ALL、Mo及HAL诊断必可少.2.MPO是髓系特异标志,CD117与Ly+ -AML发生密切相关.【总页数】5页(P1-5)【作者】陈瑢;迪丽娜孜·阿不来提;哈力达·亚森;张雪;尼罗帕尔·吐尔逊;赵芳;郭新红【作者单位】新疆医科大学第一附属医院血液科,830054;新疆医科大学第一附属医院血液科,830054;新疆医科大学第一附属医院血液科,830054;新疆医科大学第一附属医院血液科,830054;新疆医科大学第一附属医院血液科,830054;新疆医科大学第一附属医院血液科,830054;新疆医科大学第一附属医院血液科,830054【正文语种】中文【中图分类】R73【相关文献】1.应用流式细胞术对123例急性白血病进行免疫表型分析 [J], 林鸿;季迁;姜殿军;李敏2.试论多色流式细胞术在分析急性白血病患者免疫学表型中的应用价值 [J], 吕浩;黄宣;张智熊;高红梅3.运用流式细胞术对75例急性白血病免疫分型的表型分析 [J], 张航;杨梅4.多参数流式细胞术检测91例急性白血病免疫表型分析 [J], 李珊凤;易汉杰;金明威;陈哲;陈颖;王建华;孙伟亮;裴仁治5.232例急性白血病流式细胞术免疫表型分析 [J], 吴琼;王小中因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
169例急性白血病免疫表型分析
169例急性白血病免疫表型分析李艳明;曹志红;彭敏源【期刊名称】《实用预防医学》【年(卷),期】2008(15)3【摘要】目的探讨急性白血病的免疫表型特征,为急性白血病的诊断提供依据。
方法收集169例初治急性白血病患者骨髓或外周血标本,采用流式细胞仪对其白血病细胞进行免疫表型分析。
结果95例急性髓细胞白血病(acute myeloblastic leukemia,AML)患者中59例为纯髓系抗原表达,34例伴淋系抗原(CD19、CD7)表达。
64例急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia)患者中62例表达淋系抗原,纯T系抗原表达8例,纯B系抗原表达44例,6例伴有髓系抗原(CD33)表达;1例ALL-L2为纯髓系(CD33、CD34)表达,1例ALL-L2八个抗原检测均为阴性。
10例急性混合型白血病(mixedacute leukemia,MAL)同时表达两种以上淋系和髓系抗原标志。
结论免疫分型能助诊一些特殊类型的白血病(如minimally differentiated acute myeloid leukemia,AML-M0;MAL);免疫分型是对白血病细胞形态学诊断的重要补充。
【总页数】4页(P668-671)【关键词】免疫分型;急性白血病;分化簇;流式细胞仪【作者】李艳明;曹志红;彭敏源【作者单位】中南大学湘雅医院【正文语种】中文【中图分类】R557【相关文献】1.试论多色流式细胞术在分析急性白血病患者免疫学表型中的应用价值 [J], 吕浩;黄宣;张智熊;高红梅2.58例急性白血病骨髓细胞免疫表型分析 [J], 李赞;黄海虹;柯振符;梁肖霞;叶月宏;张凤英;潘学滨3.急性白血病患者骨髓细胞形态和免疫表型同步检测的比较分析 [J], 张小芳;孙彩霞;张运刚;李守霞4.232例急性白血病流式细胞术免疫表型分析 [J], 吴琼;王小中5.骨髓细胞免疫表型与形态学检测对急性白血病中患者诊断及监测价值分析 [J], 罗爽;花京剩因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
118例急性白血病五色流式细胞术免疫分型与FAB分型的结果分析
118例急性白血病五色流式细胞术免疫分型与FAB分型的结果分析陈建安;周静;朱学海;丁茜;何永明;李晓婷;梁燕【期刊名称】《海南医学》【年(卷),期】2015(000)001【摘要】目的:探讨急性白血病五色流式细胞术免疫分型与FAB分型的关系和表达规律。
方法通过CD45/SSC设门的五色流式细胞仪检测118例急性白血病患者骨髓细胞的表面抗原,并进行免疫表型分析。
结果在88例AML患者中髓系相关抗原的表达率依次为CD33(93.2%)>CD13(88.6%)>CD117(86.4%),部分AML 患者伴表达淋系相关抗原,主要为CD56(25.2%)、CD7(11.3%)、CD19(2.2%)、CD20(2.2%);M3中高表达CD117(83.7%)、CD13(83.7%)、CD33(83.7%),但均不表达CD34、HLA-DR,且SSC较大;M4、M5中可见CD64、CD4、CD14明显表达高于AML其他亚型(P<0.01)。
19例B-ALL患者中CD19的表达率最高(100%),其次为CD34(90.1%)、HLA-DR (90.1%)、CD10(90.1%);9例T-ALL 患者中CD7的表达率最高(100%),其次为CD4(77.8%)、CD5(77.8%)、CD2(66.7%)、CD3(66.7%)、CD34(55.6%)。
结论通过五色流式细胞术进行白血病免疫分型是形态学分型诊断重要的补充,能够提供更客观的诊断依据,对提高急性白血病的诊断正确率、预后判断和治疗方案的选择有重要的意义。
%Objective To study the relationship between the immunophenotype by five-color flow cytometry and FAB phenotype in Acute leukemia. Methods Immunophenotyping of 118 cases of bone marrow specimens from patients with acute leukemia were analyzed by five-color FCM withCD45/SSC double parameters and scatter spot picture. Results In 88 cases of acute myeloid leukemia (AML), the myeloid-associated antigens were CD33 (93.2%), CD13 (88.6%), and CD117 (11.3%), respectively, and the lymphoid-associated antigens were CD56 (25.2%), CD7 (11.3%), CD19 (2.2%) and CD20 (2.2%), respectively. The antigens mainly expressed in M3 were CD117 (83.7%), CD13 (83.7%), CD33 (83.7%), and bigger SSC, but not CD34 and HLA-DR. The antigens mainly expressed in M4 and M5 wereCD64, CD4 and CD14 (P<0.01). In 19 cases of patients with B-ALL, the expression rate of CD19 was the highest (100%), followed by CD34 (90.1%), HLA-DR (90.1%) and CD10 (90.1%). In 9 cases of patients with T-ALL, the ex-pression rate of CD7 was the highest (100%), followed by CD4 (77.8%), CD5 (77.8%), CD2 (66.7%), CD3 (66.7%) and CD34 (55.6%). Conclusion Based on a more objective diagnostic basis, five-color flow cytometry is extremely impor-tant in improving the diagnostic accuracy, therapy and prognosis in acute leukemia.【总页数】4页(P56-58,59)【作者】陈建安;周静;朱学海;丁茜;何永明;李晓婷;梁燕【作者单位】中山大学附属东华医院检验科,广东东莞 523110;中山大学附属东华医院检验科,广东东莞 523110;中山大学附属东华医院检验科,广东东莞523110;中山大学附属东华医院检验科,广东东莞 523110;中山大学附属东华医院检验科,广东东莞 523110;中山大学附属东华医院检验科,广东东莞 523110;中山大学附属东华医院检验科,广东东莞 523110【正文语种】中文【中图分类】R733.71【相关文献】1.FAB分型、免疫分型和基因分型联合检测急性白血病 [J], 李玲;王蕊;钟笛;温丙昭;王晓敏;许建华;曲建华;陈贩2.505例白血病应用流式细胞术免疫分型与FAB分型的结果分析 [J], 杨峥;莫武宁;李山;秦雪;兰会华;陈正立3.流式细胞术在急性白血病免疫分型中的应用探讨 [J], 陈敬潮;师江龙;张苏伟4.流式细胞术在急性白血病免疫分型中的临床应用 [J], 汪梅花;赵康5.流式细胞术对急性白血病免疫分型的临床意义 [J], 金莹因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
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【全科临床论著】218例急性白血病流式细胞术免疫表型分析赵皓,余晾,吕合作,郑宏波,项平【摘 要】 目的 研究急性白血病(AL)免疫表型特征及诊断价值。
方法 采用流式细胞术(FC M)对218例初诊急性白血病患者进行免疫分型。
结果 急性髓系白血病(AML)患者均表达两种以上髓系抗原,其中部分伴有淋系抗原(C D7)表达。
急性淋系白血病(ALL)患者均表达淋系抗原,部分表达一种或两种髓系抗原。
14例混合型白血病同时表达两种以上淋系和髓系抗原标志。
4例慢粒急淋变既表达髓系抗原又表达淋系抗原。
结论 FC M免疫分型是在细胞形态学和细胞化学染色基础上对急性白血病诊断与分型的重要补充。
【关键词】 急性白血病;免疫表型;流式细胞术【中图分类号】 R733.7 R446.63 【文献标识码】 A 【文章编号】 167424152(2010)1021239202Ana lysis of Imm unophenotype in218Ca ses w ith Acute L eukem i a by Flow Cyto m etry ZHAO Hao,YU L iang,LV He2zuo,et al.Central L aboratory,the First A ffiliated Hospital of B engbu M edical College,B engbu233004,A nhui,China【Abstract】O bjecti ve To exp l ore the acute Leukem ia i m munophenotype and its diagnosis value.M ethods A ssay the i m mune phenotype in218patients with acute leuke m ia by fl ow cyt ometer.Results The patients with acute myel oid leukem ia(AML)ex2p ressed more than t w o kinds of myel oid antigens;part of the m exp ressed ly mphatic antigens(CD7).The patients with acute ly m2 phoblastic leuke m ia(ALL)exp ressed ly mphatic antigens;part of them exp ressed one or t w o kinds of myel oid antigens.Fourteen patients with m ixed acute leuke m ia(MAL)showed t w o kinds or more ly mphoid and myel oid antigens.Four patients with chr onic granular differentiated t o acute ly mphatic leukem ia not only exp ressed myel oid antigens but als o exp ressed ly mphatic antigens. Conclusi on The i m munophenotype by fl ow cyt ometry is the i m portant supp lementary t o acute leuke m ia diagnosis and typ ing inmor phol ogy and cyt oche m ical dyeing foundati on.【Key words】 Acute leuke m ia;I m munophenotype;Fl ow cyt ometry 白血病细胞是一种高度异源性、异质性并具有一定增殖活力的恶性细胞。
传统的F AB(法国、美国和英国形态学标准)分型是在细胞形态学和细胞化学染色基础上进行的,对急性白血病诊断与分型有其局限性。
流式细胞术(Fl ow cyt ometry,M)是根据白血病细胞表面和胞内的特异性抗原,采用单克隆抗体对白血病细胞的来源和分化阶段进行更精细的检测和判断,从而弥补F AB分型的不足,对确定诊断、选择治疗方案和判断预后具有重要意义[1]。
本文采用FC M对218例AL患者进行免疫表型分析,现将结果报告如下。
1 资料与方法111 临床资料 218例患者为我院2008年10月-2010年2月血液科住院患者,年龄10~79岁,男性132例,女性86例。
112 研究方法1.2.1 取材 E DT A2K2抗凝骨髓或血液标本1m l。
1.2.2 仪器与试剂 F ACSCalibur流式细胞仪,购自BD公司。
单克隆抗体:F I T C标记的CD2、C D33、HLA2DR、C D15、CD10,PE 标记的CD7、C D13、C D34、C D11b、C D19,Per CP标记的CD45, APC标记的CD5、CD14、CD20、C D45,同型对照I gG1/I gG2a以及混合抗体CD3/M P O/CD79a,透膜剂F I X&PER M及溶血素,以上试剂均购自BD公司,鞘液为自配的P BS缓冲液。
1.2.3 试验方法 表面标志染色:在各试管中分别加入E D2 T A2K2抗凝骨髓或血液50μl,按表1中的抗体组合分别加入相应的抗体或同型对照(F I TC、PE及PercP标记的抗体为30μl, APC标记的抗体为5μl)室温避光孵育15m in,分别加1000μl 溶血素,室温避光孵育10m in,离心去上清,P BS洗涤细胞一次,去上清,加入0.5m l P BS重悬细胞,上机检测。
胞内标志染色:先用CD452APC同上进行表面染色、溶血、洗涤,然后加200μl作者单位:233004安徽省蚌埠医学院第一附属医院中心实验室通讯作者:赵皓,电子信箱:icecool1980@ 固定液室温固定细胞15m in,P BS洗涤细胞一次,去上清,加200μl透膜液及胞内染色抗体或同型对照30μl,室温避光孵育10m in,离心去上清,P BS洗涤细胞一次,去上清,加入0.5m l P BS重悬细胞,上机检测。
检测结果采用Cell Q uest软件进行分析:首先,在FSC/SSC散点图中,根据细胞大小和颗粒度进行设门选中有核细胞群体;然后,在C D45/SS C散点图中,根据CD45表达强度和颗粒度,对有核细胞进行设门,选中幼稚细胞群体;最后,再对幼稚细胞群体进行分析,确定各种标志的阳性率。
判断阳性的标准为:胞内染色标志CD3/M P O/CD79a>10%,其他表面标志>20%。
表1 AL流式细胞术免疫分型抗体组合抗体A1A2A3A4A5A6B1B2F I TC I gG1CD2CD33DR CD15CD10I gG1CD3PE I gG2a CD7CD13CD34CD11b CD19I gG2a MP O Per Cp CD45CD45CD45CD45CD45CD45-CD79a APC I gG1CD5--CD14CD20CD45CD452 结果 119例经临床确诊的AML各种抗原表达的阳性率依次为M P O(95.80%)、C D13(90.76%)、C D33(81.51%)、HLA2DR (73.95%)、CD34(54.62%)、CD15(30.25%)、C D11b (22.69%)、CD14(10.92%),其中有19例AML患者伴有淋系抗原C D7的表达。
经临床确诊为ALL的83例患者中,经FC M免疫分型,有21例为T系ALL,各种抗原表达的阳性率依次为CD3 (100.00%)、C D7(100.00%)、CD2(90.48%)、CD5(85.71%)、HLA2DR(61.90%)、C D34(42.86%),其中有4例患者伴有CD13等髓系抗原的表达;有62例为B系ALL,各种抗原表达的阳性率依次为CD79a(100.00%)、CD19(93.55%)、CD20 (82.26%)、C D10(69.35%)、HLA2DR(83.87%)、CD34 (69.35%),其中有5例患者伴有CD13等髓系抗原的表达。
AL抗原表达详细结果见表2。
3 讨论 传统的白血病分型主要根据F AB标准,以细胞形态学和细胞化学染色为依据,其诊断符合率仅有60%~80%[2]。
随着单克隆抗体及流式细胞仪的应用,FC M免疫分型已成为诊断AL 的重要辅助手段,FC M技术能多参数、快速的定量分析和分选,具有快速、特异、准确、重复性好等优势,利用荧光标记的单克隆抗体作分子探针,多参数分析白血病细胞膜及细胞浆或细胞核的免疫表型,由此了解白血病细胞所属系列及分化程度,有助于提高白血病诊断的准确率,为临床合理治疗、判断疗效及预后提供重要依据。
本检测方法根据不同分化阶段造血细胞CD45表达与细胞颗粒度的差异,通过CD45/SSC双参数来确定各种细胞群体。
C D45表达在不同细胞各异,成熟粒细胞>单核细胞>淋巴细胞>原/幼细胞,而红细胞不表达;SSC在成熟粒细胞>单核细胞>淋巴细胞与原/幼细胞>红细胞。
根据这些特征,即使原/幼细胞很少,也可以在CD45/SSC散点图中清晰显示[3]。
表2 218例AL流式细胞术免疫分型结果分型n CD2CD5CD7CD13CD33CD34DR CD11b CD14CD15CD10CD19CD20MP O CD3CD79a AML119001910897658827133600011400 ALL8319182190526510043585102162 T2ALL21191821409131000000210B2ALL620005043520004358510062 MAL142351168121376105525慢粒急淋变20002122200222101 M P O为中性粒细胞内嗜苯胺蓝颗粒的主要成分,其蛋白开始合成于早幼粒细胞阶段;C D13除在髓系祖系表达外,也存在于成熟粒细胞上;CD33为髓前体细胞的标记,同时在粒细胞、单核细胞上也有较高表达,在判断白血病细胞是否为髓系来源时具有很高的诊断价值。
本文119例AML中,M P O、C D13、CD33阳性率分别为95.80%、90.76%、81.51%,提示此3类抗原对AML的诊断具有重要意义[4]。
其中有19例表达淋系抗原CD7(15.97%),与文献报道C D7与髓系有10%的交叉反映基本相符[5]。