维生素A
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（三）薄层色谱法
吸附剂：硅胶G 展开剂：环己烷-乙醇（80:20） 分别取供试品与对照品（不同维生素A 脂类）的环己烷溶液(5IU/μ l)各2μ l， 点于薄层板上，立即展开，空气中挥 干，喷以三氯化锑溶液，比较供试品 和对照品所显蓝色斑点位置。
检查
酸值
取乙醇与乙醚各15ml，置锥形瓶中， 加酚酞指示剂5滴，滴加氢氧化钠滴定 液（0.1mol/L）至显粉红色，再加本 品2.0g，振摇使溶解，用氢氧化钠滴 定液（0.1mol/L）滴定，酸值应不大 于2.0（附录VIIH）
换算因数
效价IU / g
1% E1 cm cm
A328 （校正） A328 A328
100%
4）A值的 选择：
含量测定
（皂化法）
2.皂化法：适用于维生素A醇的测定。
1）方法：精密称取一定量供试品，加氢氧化钾乙醇溶 供试品未明纯度时，就会出现含量测定方法的 液后煮沸回流，得到的皂化液再经乙醚提取、洗涤、滤 选择，直接法比皂化法简单易操作，但只要干 过、浓缩等处理，最后用异丙醇溶解残渣并稀释成每 扰过多时，直接法却并不适用。 1ml中含维生素A为9-15单位的溶液，在300、310、 325、334nm波长处测定吸收度，并确定最大吸收波长 （应为325nm）
鉴别试验
（二）紫外光谱法
方法：取约相当于10IU的 维生素A供试品，加无水乙 醇-盐酸（100:1）溶液溶 解，应在326nm的波长处有 单一的吸收峰。将此溶液 水浴加热30秒，迅速冷却， 应在348、367和389nm的波长处有三个尖锐 的吸收峰，且在332nm的波长处有较低的吸 收峰或拐点。
鉴别试验
ക不饱和脂肪醇 ക主要来自鲛类无毒海鱼肝脏中 提取的脂肪油（通称鱼肝油）
包括:VitA1（视黄醇）、 VitA2（去氢 维生素A ）和VitA3 （去水维生素A ） 等。
生物活性：VitA1活性最高，VitA2是 VitA1的30%-40%，VitA3是VitA1的 0.4%。 故通常所说的维生素A是指维生素A1。
三氯化锑比色专属性差， 且易水解产生SbOCl使 溶液浑浊，影响比色 （三）三氯化锑比色法
含量测定
•
原理：维生素A与三氯化锑的无水三氯 甲烷溶液作用，产生不稳定的蓝色，在 618～620nm的波长处有最大吸收，符 合Beer定律
蓝色不稳定，要求操作迅 速，一般在加入三氯化锑 后应在5～10s内测定
维生素A1 视黄醇
维生素A2 3-去氢视黄醇
维生素A3
脱水维生素A
ChP2010收载
维生素A是指人工合成的维生素A
醋酸酯结晶加精制植物油制成的 油溶液。
结构与性质
结构:为具有一个共轭多烯醇侧链的环 己烯。 天然维生素A主要是全反式维生素A。
R的不同则决定了维生素A的醇式或酯式状态。
为了得到准确的测定结果，消除非维生素A物质 的无关吸收所引起的误差，而求得维生素A的真 实含量。因此需要采用“三点校正法”。
含量测定
（三点校正法）
三点校正法：是在三个波长处分别测定吸收度， 根据校正公式计算吸收度A校正后，再计算含量， 故本法称为“三点校正法”。
ക“三点校正法”测定原理 1 、杂质的吸收在 310 ～ 340nm 波长范围内呈一条直线， 且随波长的增大而吸收度变小 。 2、物质对光的吸收具有加和性。即样品各波长的吸收 度是维生素A与杂质吸收度的代数和 。 ക波长的选择： （1）等波长差法：使 3 - 1 1 - 2 （2）等吸收比法：使 A2 A3 6 / 7 A1
含量测定
（一）紫外可见分光光度法 （二）高效液相色谱法 （三）三氯化锑比色法
含量测定
（一）紫外可见分光光度法 （三点校正法）
对维生素A测定有影响的杂质有： （1）维生素A2和维生素A3 （2）维生素A的氧化产物：环氧化物、维生素A醛、维生 素A酸 （3）维生素A在光照条件下产生的无活性的聚合物：鲸醇 （4）维生素A的异构体及其他
填充剂：硅胶 流动相：正己烷－异丙醇（997:3） 检测波长：325nm 目的：将对照品中部分 维生素A醋酸酯转化成 加入碘试液0.2ml
其顺式异构体，进行分 离度考察。
含量测定
（二）高效液相色谱法
测定法：精密称取供试品适量（约相当于15mg 维生素A醋酸酯），置100ml量瓶中，用正己烷 稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶 中，用正己烷稀释至刻度，摇匀，作为供试品 溶液。另精密量取维生素A对照品适量（约相当 于15mg维生素A醋酸酯），同法制成对照品溶 液。精密量取供试品溶液与对照品溶液各10ul， 分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法 以峰面积计算，含量应符合规定。
检查
过氧化值
取本品1.0g，加冰醋酸-三氯甲烷（6:4）30ml，振 摇使溶解，加碘化钾的饱和溶液1ml，振摇1分钟，
加水100ml与淀粉指示液1ml，用硫代硫酸钠滴定液
（0.01mol/L）滴定至紫蓝色消失，并将滴定的结果 用空白试验校正。消耗硫代硫酸钠滴定液 （0.01mol/L）不得过1.5ml。
含量测定
（直接测定法）
测定方法：直接测定法和皂化法 1.直接测定法： 直接测定法适用于纯度高的维生素A醋酸酯的测定。
1）方法：取维生素A醋酸酯适量，精密称定，加环己烷 制成每1ml中含9-15单位的溶液。然后在300、316、328、 340和360nm五个波长处分别测定吸光度，确定最大吸收 波长（应为328nm）。
% % E1 E CL 公式，求得 1 cm=A/(C×L) cm
1% B.求效价： 效价（IU / g） E1 cm 1900 C.求维生素A醋酸酯占标示量的百分含量：
% 2）计算：A.求 E1cm ：由A=
含量测定
（直接测定法）
% E 3）换算因子：每单位 1cm 数值所相当的效价。
2）计算：A.求 E % ：由A= E1cm CL公式，求得E1cm =A/(C×L) 1cm 1% B.求效价： 效价（IU / g） E1 cm 1830 C.求维生素A醋酸酯占标示量的百分含量：
%
%
含量测定
3）A值的选择：
（Biblioteka Baidu化法）
一、当最大吸收波长不在323-327nm之间或A300/A325 的比值大于0.73时，应采用色谱法将未皂化部分纯化后 再进行测定。（供试品杂质含量过高） 二、当最大吸收波长在323-327nm之间，且A300/A325 的比值小于或等于0.73，对A值进行判别后便可代入公 式计算
临床药学 第①组
讲解员：施文玲 胡家勇 PPT制作：郭贤旋 内容来源：武丰瑾 陈燕兰 贺智杰 马天著 陈天威
1.掌握维生素A的化学结构、理化性质以 及与分析方法间的关系，专属鉴别反应、 主要的含量测定方法和原理。
2.熟悉维生素A的有关物质、检查方 法与原理。
维生素A的来源、成分
维生素A的结构与性质 鉴别试验 杂质检查 含量测定
BCE
Thank you
for your listening！
临药 第①组 出品
含量测定
总结： 1.纯度高的就用直接法
（三点校正法）
2.杂质高的就用皂化法 3.未知纯度高低就要判断 （1）先看吸光度比值的差值范围 （2）选择吸光度A328与A328（校正） （3）将选择出的A值带入对应公式 直接法 皂化法
含量测定
（二）高效液相色谱法
适用于维生素A醋酸酯原料及其 制剂中维生素A的含量测定。
结构决定性质
溶解性（脂溶性） 不稳定性（多个不饱和键）
紫外吸收特性（共轭多烯醇的侧链 结构，最大吸收325-328nm ）
与三氯化锑呈色 维生素A在饱和无水三氯化锑的无醇 甲烷溶液中即显蓝色，渐变成红色。
鉴别试验
（一）三氯化锑反应(ChP2010) 机制：维生素A和氯化锑（Ⅲ）中存 在的亲电试剂氯化高锑（Ⅴ）作用 形成不稳定的蓝色碳正离子。 方法：取维生素A油溶液1滴，加三氯 甲烷10ml振摇使溶解；取出两滴，加 三氯甲烷2ml与25%三氯化锑的三氯 甲烷溶液0.5ml，即显蓝色，渐变成 紫红色。
1、三点校正紫外分光光度法测定维
生素A 醋酸酯含量时，采用的溶剂 是
A.甲醇 C 乙醚 E 三氯甲烷 B 丙酮 D 正己烷 D
2、维生素A采用的鉴别方法是
A 硫色素反应 3 B 三氯化锑反应 C 与硝酸银反应 D 水解后重氮化－偶合反应 E 麦芽粉反应
B
3、维生素A的含量测定方法有
A 汞量法 B 三点校正紫外分光光度法 C 高效液相色谱法 D 双相滴定法 E 三氯化锑比色法
吸附剂：硅胶G 展开剂：环己烷-乙醇（80:20） 分别取供试品与对照品（不同维生素A 脂类）的环己烷溶液(5IU/μ l)各2μ l， 点于薄层板上，立即展开，空气中挥 干，喷以三氯化锑溶液，比较供试品 和对照品所显蓝色斑点位置。
检查
酸值
取乙醇与乙醚各15ml，置锥形瓶中， 加酚酞指示剂5滴，滴加氢氧化钠滴定 液（0.1mol/L）至显粉红色，再加本 品2.0g，振摇使溶解，用氢氧化钠滴 定液（0.1mol/L）滴定，酸值应不大 于2.0（附录VIIH）
换算因数
效价IU / g
1% E1 cm cm
A328 （校正） A328 A328
100%
4）A值的 选择：
含量测定
（皂化法）
2.皂化法：适用于维生素A醇的测定。
1）方法：精密称取一定量供试品，加氢氧化钾乙醇溶 供试品未明纯度时，就会出现含量测定方法的 液后煮沸回流，得到的皂化液再经乙醚提取、洗涤、滤 选择，直接法比皂化法简单易操作，但只要干 过、浓缩等处理，最后用异丙醇溶解残渣并稀释成每 扰过多时，直接法却并不适用。 1ml中含维生素A为9-15单位的溶液，在300、310、 325、334nm波长处测定吸收度，并确定最大吸收波长 （应为325nm）
鉴别试验
（二）紫外光谱法
方法：取约相当于10IU的 维生素A供试品，加无水乙 醇-盐酸（100:1）溶液溶 解，应在326nm的波长处有 单一的吸收峰。将此溶液 水浴加热30秒，迅速冷却， 应在348、367和389nm的波长处有三个尖锐 的吸收峰，且在332nm的波长处有较低的吸 收峰或拐点。
鉴别试验
ക不饱和脂肪醇 ക主要来自鲛类无毒海鱼肝脏中 提取的脂肪油（通称鱼肝油）
包括:VitA1（视黄醇）、 VitA2（去氢 维生素A ）和VitA3 （去水维生素A ） 等。
生物活性：VitA1活性最高，VitA2是 VitA1的30%-40%，VitA3是VitA1的 0.4%。 故通常所说的维生素A是指维生素A1。
三氯化锑比色专属性差， 且易水解产生SbOCl使 溶液浑浊，影响比色 （三）三氯化锑比色法
含量测定
•
原理：维生素A与三氯化锑的无水三氯 甲烷溶液作用，产生不稳定的蓝色，在 618～620nm的波长处有最大吸收，符 合Beer定律
蓝色不稳定，要求操作迅 速，一般在加入三氯化锑 后应在5～10s内测定
维生素A1 视黄醇
维生素A2 3-去氢视黄醇
维生素A3
脱水维生素A
ChP2010收载
维生素A是指人工合成的维生素A
醋酸酯结晶加精制植物油制成的 油溶液。
结构与性质
结构:为具有一个共轭多烯醇侧链的环 己烯。 天然维生素A主要是全反式维生素A。
R的不同则决定了维生素A的醇式或酯式状态。
为了得到准确的测定结果，消除非维生素A物质 的无关吸收所引起的误差，而求得维生素A的真 实含量。因此需要采用“三点校正法”。
含量测定
（三点校正法）
三点校正法：是在三个波长处分别测定吸收度， 根据校正公式计算吸收度A校正后，再计算含量， 故本法称为“三点校正法”。
ക“三点校正法”测定原理 1 、杂质的吸收在 310 ～ 340nm 波长范围内呈一条直线， 且随波长的增大而吸收度变小 。 2、物质对光的吸收具有加和性。即样品各波长的吸收 度是维生素A与杂质吸收度的代数和 。 ക波长的选择： （1）等波长差法：使 3 - 1 1 - 2 （2）等吸收比法：使 A2 A3 6 / 7 A1
含量测定
（一）紫外可见分光光度法 （二）高效液相色谱法 （三）三氯化锑比色法
含量测定
（一）紫外可见分光光度法 （三点校正法）
对维生素A测定有影响的杂质有： （1）维生素A2和维生素A3 （2）维生素A的氧化产物：环氧化物、维生素A醛、维生 素A酸 （3）维生素A在光照条件下产生的无活性的聚合物：鲸醇 （4）维生素A的异构体及其他
填充剂：硅胶 流动相：正己烷－异丙醇（997:3） 检测波长：325nm 目的：将对照品中部分 维生素A醋酸酯转化成 加入碘试液0.2ml
其顺式异构体，进行分 离度考察。
含量测定
（二）高效液相色谱法
测定法：精密称取供试品适量（约相当于15mg 维生素A醋酸酯），置100ml量瓶中，用正己烷 稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶 中，用正己烷稀释至刻度，摇匀，作为供试品 溶液。另精密量取维生素A对照品适量（约相当 于15mg维生素A醋酸酯），同法制成对照品溶 液。精密量取供试品溶液与对照品溶液各10ul， 分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法 以峰面积计算，含量应符合规定。
检查
过氧化值
取本品1.0g，加冰醋酸-三氯甲烷（6:4）30ml，振 摇使溶解，加碘化钾的饱和溶液1ml，振摇1分钟，
加水100ml与淀粉指示液1ml，用硫代硫酸钠滴定液
（0.01mol/L）滴定至紫蓝色消失，并将滴定的结果 用空白试验校正。消耗硫代硫酸钠滴定液 （0.01mol/L）不得过1.5ml。
含量测定
（直接测定法）
测定方法：直接测定法和皂化法 1.直接测定法： 直接测定法适用于纯度高的维生素A醋酸酯的测定。
1）方法：取维生素A醋酸酯适量，精密称定，加环己烷 制成每1ml中含9-15单位的溶液。然后在300、316、328、 340和360nm五个波长处分别测定吸光度，确定最大吸收 波长（应为328nm）。
% % E1 E CL 公式，求得 1 cm=A/(C×L) cm
1% B.求效价： 效价（IU / g） E1 cm 1900 C.求维生素A醋酸酯占标示量的百分含量：
% 2）计算：A.求 E1cm ：由A=
含量测定
（直接测定法）
% E 3）换算因子：每单位 1cm 数值所相当的效价。
2）计算：A.求 E % ：由A= E1cm CL公式，求得E1cm =A/(C×L) 1cm 1% B.求效价： 效价（IU / g） E1 cm 1830 C.求维生素A醋酸酯占标示量的百分含量：
%
%
含量测定
3）A值的选择：
（Biblioteka Baidu化法）
一、当最大吸收波长不在323-327nm之间或A300/A325 的比值大于0.73时，应采用色谱法将未皂化部分纯化后 再进行测定。（供试品杂质含量过高） 二、当最大吸收波长在323-327nm之间，且A300/A325 的比值小于或等于0.73，对A值进行判别后便可代入公 式计算
临床药学 第①组
讲解员：施文玲 胡家勇 PPT制作：郭贤旋 内容来源：武丰瑾 陈燕兰 贺智杰 马天著 陈天威
1.掌握维生素A的化学结构、理化性质以 及与分析方法间的关系，专属鉴别反应、 主要的含量测定方法和原理。
2.熟悉维生素A的有关物质、检查方 法与原理。
维生素A的来源、成分
维生素A的结构与性质 鉴别试验 杂质检查 含量测定
BCE
Thank you
for your listening！
临药 第①组 出品
含量测定
总结： 1.纯度高的就用直接法
（三点校正法）
2.杂质高的就用皂化法 3.未知纯度高低就要判断 （1）先看吸光度比值的差值范围 （2）选择吸光度A328与A328（校正） （3）将选择出的A值带入对应公式 直接法 皂化法
含量测定
（二）高效液相色谱法
适用于维生素A醋酸酯原料及其 制剂中维生素A的含量测定。
结构决定性质
溶解性（脂溶性） 不稳定性（多个不饱和键）
紫外吸收特性（共轭多烯醇的侧链 结构，最大吸收325-328nm ）
与三氯化锑呈色 维生素A在饱和无水三氯化锑的无醇 甲烷溶液中即显蓝色，渐变成红色。
鉴别试验
（一）三氯化锑反应(ChP2010) 机制：维生素A和氯化锑（Ⅲ）中存 在的亲电试剂氯化高锑（Ⅴ）作用 形成不稳定的蓝色碳正离子。 方法：取维生素A油溶液1滴，加三氯 甲烷10ml振摇使溶解；取出两滴，加 三氯甲烷2ml与25%三氯化锑的三氯 甲烷溶液0.5ml，即显蓝色，渐变成 紫红色。
1、三点校正紫外分光光度法测定维
生素A 醋酸酯含量时，采用的溶剂 是
A.甲醇 C 乙醚 E 三氯甲烷 B 丙酮 D 正己烷 D
2、维生素A采用的鉴别方法是
A 硫色素反应 3 B 三氯化锑反应 C 与硝酸银反应 D 水解后重氮化－偶合反应 E 麦芽粉反应
B
3、维生素A的含量测定方法有
A 汞量法 B 三点校正紫外分光光度法 C 高效液相色谱法 D 双相滴定法 E 三氯化锑比色法