耳聋易感基因检测试剂盒实验标准操作程序
长沙健路医学检验所有限公司-九项遗传性耳聋基因检测试剂性能验证报告(全血修改)
长沙健路医学检验所有限公司九项遗传性耳聋基因检测试剂性能验证报告目录一、验证目的二、验证内容和方法1.对象2.内容与方法3.设备4.实验要求5.操作程序三、验证结果1.阳性符合率2.阴性符合率3.空白验证4.检测重复性5.检测灵敏度四、结果说明五、验证结论一、验证目的本实验室计划使用北京博奥生物集团有限公司晶芯®九项遗传性耳聋基因检测试剂盒（微阵列芯片法）[国食药监械（准）字 2013 第 3401518 号]开展相关检测项目，根据《ISO15189：医学实验室-质量和能力的专用要求》，为保证实验室按照厂家所提供的试剂盒或检测系统说明书使用时，能复现生产厂家所宣称的检测性能，按照实验室质量管理计划，对生产厂家提供的试剂盒和检测系统进行了性能验证，报告如下。
二、验证内容与方法1.对象1.1晶芯®九项遗传性耳聋基因检测试剂盒（微阵列芯片法）1.2基因组 DNA 提取试剂盒为北京康为世纪有限公司血液基因组非柱式提取试剂盒（CW0544）1.3样本：人全血，适用抗凝剂为 EDTA 或枸橼酸钠等，不得以肝素抗凝。
不分病种、检测目的、性别、年龄。
1.4质控品：该试剂盒中均包含正常野生型质控品，同时实验室提供4个已知突变的阳性质控品，以保证结果的准确可靠。
2.内容与方法根据产品说明书标示的性能指标，验证以下内容：1.1阳性符合率：已经测序确定为特定突变的核酸4（4例，每种类型突变一例）例，由本实验室使用待评价试剂盒进行测试，结果应与已知结果一致，阳性符合率应达到100%。
1.2阴性符合率：已经测序确定为野生型的核酸2（2例，正常人）例，由本实验室使用待评价试剂盒进行测试，结果应与已知结果一致，阳性符合率应达到100%。
1.3空白验证：用实验室常用灭菌纯水代替样本，由本实验室使用待评价基因检测试剂盒进行1次测试，结果应均为未检出。
1.4检测重复性：取已知结果样本2（2例，涵盖已知阳性一例，阴性一例）份，未知结果样本2（2例，正常人标本）份，由本实验室使用待评价基因检测试剂盒分别进行3次测试，3次检测结果应一致。
耳聋基因检测
自愿选择， 知情同意
受检人群
检测医院
初筛 TEOAE/DPOAE
结果不通过
结果通过
复筛(TEOAE/DPOAE )+AABR/ABR 阈值)筛选听力异常
基因检测流程
采取最少3个采血斑
知情同意、自愿选择
5个工作日
临床检验中心 耳聋基因检测
检测医院确诊 出具确诊报告
随访 检测结果正常
出具检测报告
检测结果为杂合突 变或纯合突变
Mohr-Tranebjaerg 综 合 TIMM8A 征
特雷彻-柯林斯综合征 TCOF1 （ Treacher Collins syndrome）
Alport综合征（遗传性 COL4A3,COL4A4,C
肾炎）
OL4A5
Wolfram综合征1型
WFS1
单个耳聋基因全测序
检测基因
GJB2 GJB3 SLC26A4 测序采用sanger法，在以下情况可建议进行单
氨基糖甙类药 物性致聋，无
法逆反
GJB3
538C>T 547G>A
1p33-p35 缝隙连接蛋白 Connexin 31 常染色体显性遗 传。我国本土克 隆和鉴定的第一 个耳聋致病基因
适用人群
新生儿 婚前、孕前和产前人群 各种原因不明的耳聋，包括先天性聋
和后天性聋人群 听力正常，但有耳聋家族史的人群
筛查案例
一家9口人，6人是耳聋
佛山家系为3代遗传的耳聋家系，现有家系成员9人，其中6名为 耳聋患者，除由于婚姻关系成为该家系成员的2名耳聋患者外， 剩余的4名患者均为母系家庭成员。
家系基因
12SrRNA A1555G
GJB2 235delc
基因检测标准化操作流程
基因检测标准化操作流程
基因检测是一种用于检测个体基因组中特定基因或基因组序列的技术，可以帮助人们了解自己的遗传信息，预测疾病风险，指导个性化治疗等。
然而，由于基因检测技术的复杂性和多样性，标准化操作流程对于确保检测结果的准确性和可靠性至关重要。
基因检测标准化操作流程包括以下几个关键步骤：
1. 样本采集：首先，需要采集来自被检测个体的生物样本，通常是唾液、血液或组织样本。
样本采集的质量和准确性对后续的检测结果至关重要。
2. 样本处理：采集到的样本需要进行处理，包括提取DNA或RNA等核酸物质。
样本处理的过程中需要遵循严格的操作规程，以确保提取到的核酸质量和纯度符合检测要求。
3. 实验操作：在进行基因检测实验时，需要按照标准化的实验操作流程进行。
这包括PCR扩增、测序、基因芯片分析等步骤，每一步都需要严格控制实验条件和操作流程，以确保结果的准确性和可重复性。
4. 数据分析：得到实验数据后，需要进行数据分析和解读。
这包括对基因序列、变异位点等信息进行比对和分析，以确定个体的基因型和可能的遗传风险。
5. 结果报告：最后，需要将分析结果整理成报告，向被检测个
体提供详细的基因检测结果和解读。
报告中需要包括检测方法、结
果解读、可能的遗传风险等信息，以帮助个体理解自己的遗传信息。
在整个基因检测标准化操作流程中，严格遵循操作规程、保证
实验条件的稳定性和结果的准确性是至关重要的。
只有通过标准化
操作流程，才能确保基因检测结果的可靠性和可信度，为个体提供
准确的遗传信息和健康指导。
耳聋易感基因检测试剂盒
耳聋易感基因检测试剂盒
规格：30人份/盒采购量：8盒
预算金额：8万元
其他要求：
1、科研试剂，一次性采购。
(具体在合同中约定）。
2、供货期≤3个日历日；具有24小时应急服务，特殊情况下需2小时送达。
3、支付：在产品无质量问题、证照问题、价格问题和其他纠纷的情况下验收合格120天后支付总价款的100%（无息）。
4、投标人具有有效的营业执照、组织机构代码和税务登记证，中华人民共和国医疗器械经营许可证；投标人为非生产厂家需提供生产厂家或具有授权权限的代理商对投标产品的授权；投标产品应为具有有效的“中华人民共和国医疗器械生产许可证”的生产企业生产的产品（仅对国产产品要求）。
5、投标人具有履行合同所需的设备和专业技术能力，具有完善的售后服务和良好的信誉，有依法纳税和社会保障资金的良好记录，2014年1月1日以来在经营活动中没有重大违法记录和被限制投标情形。
6、符合食药局检测相关要求，产品因产品本身质量问题或售后服务不当引起的医疗事故、医疗纠纷或其他原因造成贵院任何损失，本公司全部承担事故处理及责任赔偿等相应的责任。
遗传性耳聋易感基因及新生儿听力联合筛查的结果分析
遗传性耳聋易感基因及新生儿听力联合筛查的结果分析谢文光;关建宏;司徒尤发;梁伟敏【摘要】目的对新生儿听力和遗传性耳聋易感基因联合检测,并对结果进行汇总和分析,为迟发型耳聋早期发现与防治提供依据.方法选取2017年6月～2018年6月在本院出生的3068例新生儿作为研究对象,对其进行听力初筛和常见遗传性耳聋易感基因GJB2、GJB3、SLC26A4和线粒体12S rRNA的检测,并对结果进行统计学分析.结果3068例新生儿中,听力初筛不通过317例,占10.33％,确诊听力受损15例,疾病阳性率为4.89％.通过听力与耳聋易感基因联合筛查,其中听力初筛不通过和基因突变者共445例,总阳性率为14.50％,明显高于单纯听力初筛阳性率,差异有统计学意义(χ2=7.938,P<0.05).3068例新生儿中,耳聋易感基因突变132例,阳性率43.02‰,其中GJB2、GJB3、SLC26A4和线粒体12SrRNA基因突变的阳性率分别为25.75‰、3.91‰、12.39‰、1.10‰.结论新生儿听力与遗传性耳聋易感基因联合筛查可以进一步提高了耳聋疾病的检出率,有助于早期发现与遗传性相关的迟发性耳聋或药物性耳聋.【期刊名称】《中国医药科学》【年(卷),期】2019(009)010【总页数】4页(P180-182,186)【关键词】新生儿;听力筛查;遗传性耳聋易感基因;迟发型耳聋【作者】谢文光;关建宏;司徒尤发;梁伟敏【作者单位】广东省阳江市妇幼保健院,广东阳江 529500;广东省阳江市妇幼保健院,广东阳江 529500;广东省阳江市妇幼保健院,广东阳江 529500;广东省阳江市妇幼保健院,广东阳江 529500【正文语种】中文【中图分类】R764.43耳聋是由环境和遗传因素引起的常见疾病之一[1]，我国新生儿听力损害的发生率较高，其中由遗传因素导致的耳聋患者达到60%以上[2]。
新生儿早期听力的丧失会影响到听觉神经系统的发育，因此早期发现和预警是获得最佳治疗和康复的关键。
新生儿听力和耳聋SLC26A4易感基因联合筛查
新生儿听力和耳聋SLC26A4易感基因联合筛查目的：了解新生儿先天性听力现状和耳聋SLC26A4易感基因的发生率。
方法：在深圳市宝安区出生的新生儿进行新生儿听力和聋病SLC26A4易感基因联合筛查。
采用自动听性脑干反应（AABR）2 阶段筛查方案，即新生儿出后3天进行AABR听力初筛，未通过者出院1 个月后到门诊接受AABR复筛。
采集脐带血进行耳聋易感基因SLC26A4基因筛查。
结果：共2109例新生儿接受了第一轮筛查，其中53例出现左侧听力损失，42例右耳听力损失，31例双侧听力损失。
经过第二轮自动听性脑干反应（AABR）筛查后，这126例听力损失的新生儿中仅有2例存在听力损失。
新生儿耳聋基因检测显示：在SLC26A4基因筛查中，8例出现IVS7-2A>G杂合突变，2例出现1226G>A杂合突变。
结论：听力和耳聋SLC26A4易感基因联合筛查可能是听力损失诊断的有效策略。
Objectives：To explore the current situation of hearing for neonatus born in Shenzhen Bao’an maternal and child hospital and the incidence of SLC26A4gene mutation.Mehtods：Hearing screening and SLC26A4 gene mutation detection were performed in neonatus born in Shenzhen Bao’an maternal and child hospital.AABR （Automated Auditory Brainstem Response）was introduced for neonatus hearing screening.The initial hearing initial screening will be arranged to at 3 days after neonatus birth.Those who passed the initial screening were asked to accept to AABR rescreening one month later.For the detection of deafness mutation gene SLC26A4，umbilical cord blood was collected.Results：Among 2109 neonatuses who underwent initial screening，53 exhibited left-sided hearing loss，42 exhibited right-sided hearing loss and 31 cases had binaural hearing loss.After rescreening one month later，only 2 of the initial 126 cases exhibited hearing loss under AABR testing. In the SLC26A4 gene screening，8 cases exhibited the heterozygous IVS7-2A>G mutation and 2 exhibited the heterozygous 1226G>A mutation.Conclusions：The association of hearing and SLC26A4 gene screening may be the promising screening strategy for the diagnosis of hearing loss.前言聽力损失是常见的人类出生缺陷。
常染色体隐性遗传性耳聋59蛋白ELISA试剂盒说明书
常染色体隐性遗传性耳聋蛋白试剂盒说明书本试剂仅供研究使用标本：体液常染色体隐性遗传性耳聋蛋白试剂盒说明书实验原理：试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（）.已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将和生物素标记的抗体同时温育。
人碱性成纤维细胞生长因子检测试剂盒洗涤后，加入亲和素标记过的。
再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物、，和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。
常染色体隐性遗传性耳聋蛋白试剂盒说明书自备材料．蒸馏水。
．加样器：、、、、、、。
．振荡器及磁力搅拌器等。
安全性．避免直接接触终止液和底物、。
一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
常染色体隐性遗传性耳聋蛋白试剂盒说明书操作注意事项．试剂应按标签储存，使用前恢复到室温。
稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
．不用的其它试剂应包装好或盖好。
不同批号的试剂不要混用。
保质前使用。
．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物、液时，避免使用带金属部分的加样器。
．使用干净的塑料容器配置洗涤液。
使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
．底物应挥发，避免长时间打开盖子。
底物对光敏感，避免长时间暴露于光下。
避免用手接触，有毒。
实验完成后应立即读取值。
．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
．按照中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
常染色体隐性遗传性耳聋蛋白试剂盒说明书样品收集、处理及保存方法、血清操作过程中避免任何细胞刺激。
使用不含热原和内毒素的试管。
收集血液后，×离心分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
、血浆、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。
×离心分钟去除颗粒。
、细胞上清液×离心分钟去除颗粒和聚合物。
耳聋基因突变检测试剂盒
ICS 11.040.40C 40 YY 中华人民共和国医药行业标准YY/T XXXXX—XXXX耳聋基因突变检测试剂盒deafness gene mutations testing kit（征求意见稿）XXXX - XX - XX发布XXXX - XX - XX前言本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。
本标准由国家药品监督管理局提出。
本标准由全国医用临床检验实验室和体外诊断系统标准化技术委员会（SAC/TC136）归口。
本标准起草单位：**本标准主要起草人：**耳聋基因突变检测试剂盒1 范围本标准规定了耳聋基因突变检测试剂盒的分类、要求、试验方法、标签和使用说明书、包装、运输和贮存。
本标准适用于测序法、芯片法、质谱法、PCR法等耳聋基因突变检测试剂盒。
2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T191 包装储运图示标志GB/T 29791.2 体外诊断医疗器械制造商提供的信息（标示）第2部分：专业用体外诊断试剂3 分类试剂盒按测定方法不同可以分为测序法、芯片法、质谱法、PCR法以及基于PCR法等原理的耳聋基因突变检测试剂盒。
4 要求4.1外观制造商应根据自己产品的包装特点规定适当的外观要求。
一般应有试剂盒各组分组成、性状；内外包装、标签清晰等的要求。
4.2 检测限1）对于二代测序法，检测限应不低于25ng；对于芯片法，检测限应不低于15ng；对于质谱法，检测限应不低于30ng；对于荧光PCR法，检测限应不低于2ng，若PCR扩增后采用化学显色或者电泳-凝胶成像等方法对结果进行判读的试剂盒，检测限应不低于15ng；2）国家检测限参考品或企业检测限参考品的结果符合相应基因型别。
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耳聋易感基因检测试剂盒实验标准操作程序1.项目概述耳聋是一种严重影响人类生活质量的常见先天性疾病，它可以由单一基因突变或不同基因的复合突变引起，也可由环境因素（如医疗因素，环境暴露，创伤，药物等）或基因和环境两者共同作用而致。
在世界范围内，每1000名新生儿中就有1名先天性耳聋患儿，50% 患儿的耳聋与遗传因素有关。
70%的遗传性耳聋不伴有其他症状，称为非综合征性耳聋 ( nonsyndromic hearing impairment, NSHI)。
非综合征耳聋是最常见的感音神经性聋，可以分为常染色体显性（DFNA，15％~ 20%）、常染色体隐性（DFNB，80%）、性连锁（DFN X-linked，1%）和线粒体遗传性耳聋（1%）四类。
迄今为止，共有114个耳聋位点见诸报道（54个为常染色体显性位点，60个为常染色体隐性位点）。
40余个感音神经性耳聋基因和更多的综合征耳聋基因被克隆。
据中国残疾人联合会网站统计，中国6000万残疾人口中2100万为听力残疾者。
听力言语残疾者中7岁以下的聋儿达80万人并以每年新增3万聋儿的速度在增长。
研究表明，大量的迟发性听力下降患者中，亦有许多患者也是由自身的基因缺陷致病，或由于基因缺陷和多态性造成对致聋环境因素易感性增加而致病。
因此，需要开展耳聋基因检测，对于由明确检测到的基因缺陷致病的患者及早进行干预治疗与预防措施，提高患者的生活质量，降低患耳聋的风险度。
2.测定原理本试剂盒采用了PCR体外扩增和DNA反向点杂交相结合的DNA芯片技术。
采用生物素标记的引物分别对耳聋易感基因突变区域进行特异性扩增，将扩增产物与标记不同突变类型耳聋易感基因探针的尼龙膜在导流杂交仪上进行导流杂交，然后通过化学显色对结果进行判读。
3.样品采集和制备3.1. 标本采集：①成人男性和女性及患儿：采用无菌抗凝管(添加抗凝剂)，抽取静脉血2ml耳聋易感基因检测试剂盒实验标准操作程序生效日期：混匀，拧紧瓶盖并标上病人编号。
②滤纸血斑采集卡：婴儿采血方法A.6周~4月或小于5kg的婴儿采用脚后跟采血法；B.4~10月或5~10kg的婴儿采用脚大拇指采血；C.大于10月或大于10kg的婴儿采用手指采血。
标本采集时，尽量让采集血液将圆圈浸满，以便试验有足够的标本量。
图1 采血部位图2 采血流程静脉采血后滤纸：用柠檬酸钠或EDTA抗凝管静脉血，采集的抗凝全血用移液器移取75~80ul全血，对准采样圈中心缓慢将血液滴加在滤纸上，避免气泡产生；至少采集3个血圈。
酒精消毒，用无菌纱布垫擦干针刺，无菌纱布垫擦去第一滴血用滤纸蘸取单个血滴，让血滴充分浸润采血圈；至少采集3个采血圈温浴采血部位：不超过41℃，3~5分钟耳聋易感基因检测试剂盒实验标准操作程序生效日期：3.2.滤纸血斑处理血样采集完毕后，将制成的滤纸干血斑采集卡在干燥、清洁、平整、无吸水性的桌面放置3~4小时风干；或将采集卡放置于专业纸质干燥架上自然风干。
不要放在太阳下晾晒或用任何人工方法（如烘干机）加速干燥。
3.3.滤纸干血斑的质量控制及有效性的判断合格血斑的六条标准是①每个血斑直径要达到10mm；②同时取3个以上血斑；③血液必须完全渗透到滤纸背面；④无重叠；⑤无污染；⑥易洗脱。
采集好的血斑标本应按要求保存，避免因保存不当造成标本固化于滤纸上，检测时被测物洗脱不下或部分洗脱，出现假阴性结果。
图3 有效样品图4 无效样品样本量不足样本未干血液粘连过度血斑褪色、污染出现血清环血斑分层3.4. 标本保存3.4.1抗凝全血样本a)短期保存：抗凝血在2-8℃存放7天以内，不影响DNA提取效果。
当需要得到完整全长的基因组DNA时，抗凝血在2-8℃的保存不应超过3天。
当抗凝血在4℃存放至两个月时，虽可提取DNA，但得率会相应下降。
b)长期保存：抗凝血在低温保存时（-20℃或-80℃），其保存时间可至两年以上而不影响纯化出高质量的DNA，但要避免反复冻融。
3.4.2滤纸干血斑样本样品风干后，将每张滤纸片采集卡分装入封口袋中，最好在封口袋中同时放入干燥剂和保湿卡，轻轻将封口袋的空气挤压出去再封口，遵循一袋一卡的原则，以避免交叉污染。
血片采集后，避光、防潮保存；常温干燥最多可保存3周， 2℃~8℃可保存一个月， -20℃可保存三个月。
3.5. 标本的运送1）滤纸干血斑的递送准确填写样本信息卡后，将采集卡和信息卡一同放入大信封，邮寄前再次核对送检单与样品是否相符。
采用常温运输。
2）静脉血递送从无菌抗凝管(添加抗凝剂，混匀）中吸取500ul外周血到EP管中，密封并标上病人编号等信息后，放置到具有匹配尺寸的标本架中，盖好盖子，用透明胶布黏好，同时附上打印好的患者信息（袋子装好），放置在具有冰袋的泡沫箱中，采用低温运输。
3.6拒收样本：不合格的样本3.7不合格样本经审核退单处理的，如果委托方坚持要求检测，需签风险单。
4.仪器高速离心机、PCR基因扩增仪、凯普导流杂交仪HB2012A等。
5.试剂5.1厂家：凯普生物。
5.2稳定性：PCR试剂盒须置-20℃保存，杂交试剂盒须置2-8℃保存，提取试剂盒常温保存。
6.测定参数凯普的耳聋基因检测试剂盒采用凯普独特的专利技术——导流杂交技术，结合低密度芯片技术检测遗传性耳聋患者所涉及的4个相关基因（GJB2, GJB3, SLC26A4和12S rRNA）的主要突变位点，在一张芯片上同时检测13种突变位点，检测类型如下表所示。
7.校准7.1 本试剂无校准品，不适用。
7.2 定期仪器的校准，请参考相关仪器的校准标准操作规程。
8.操作步骤8.1试剂的准备（试剂贮存和准备区）8.1.1进入缓冲区,换上该区的蓝色工作服和工作鞋,带上口罩、帽子和手套。
8.1.2从试剂盒中取出所需试剂盒，放置室温溶解后轻甩将管壁试剂甩到底部。
8.1.3 向AB管PCR混合液中各自加入15ulDNA聚合酶。
振荡混均，再点动离心。
8.1.4 准备60个0.2PCR单管，A管，B管PCR混合液各自按28ul的体系分装30人份。
盖上盖子，做好相应标识。
8.1.5 取出当天要使用的分装好的PCR混合液，如果有当天使用不完的，请放置于 -20冰箱保存，下次可以直接取出使用。
请不要反复融。
8.2样本处理（标本制备区）8.2.1血液样本提取①进入缓冲区，换上该区的黄色工作服和工作鞋，带上口罩、帽子和手套。
②将抗凝血液标本解冻编号，振荡混匀。
③吸取200ul血液样本，若血液样本不足200ul时，用溶液P补足体积至200ul。
④加入20ul蛋白酶K，混匀。
⑤加入200ul溶液L，振荡混匀，56℃温浴15-20min，期间颠倒混匀数次。
⑥加入200ul无水乙醇，充分混匀，将全部液体转入装有2ml收集管的硅胶柱中，10000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将硅胶柱重新放入收集管中。
⑦在硅胶柱中加入500ul溶液W1（使用前先检查是否加入相应体积的无水乙醇），10000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将硅胶柱重新放入收集管中。
⑧在硅胶柱中加入500ul溶液W2（使用前先检查是否加入相应体积的无水乙醇），10000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将硅胶柱重新放入收集管中。
⑨在硅胶柱中加入500ul溶液W2（使用前先检查是否加入相应体积的无水乙醇），10000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液。
⑩将硅胶柱放入收集管中，12000rpm空管离心3min，丢弃收集管。
将硅胶柱放入新的1.5ml离心管中，开盖静置1-2min，往硅胶柱中心加入60-200ul的TE洗脱液（50-60℃预热），静置5min，12000rpm离心2min，丢弃硅胶柱，盖好离心管盖，做好相对应的编号。
（注意：TE洗脱液的体积应不少于50ul，体积过小影响回收率。
为增加基因组DNA的回收率，可将TE洗脱液稍微加热。
获得的DNA应保存在-20℃，以防DNA降解。
）8.2.2血斑样本提取①进入缓冲区，换上该区的黄色工作服和工作鞋，带上口罩、帽子和手套。
②用打孔器将采集卡样本上的两个血斑卡剪下来，置于1.5ml离心管中（注意：使用打孔器处理样本需注意避免交叉污染）③加入300ul的溶液T（若血斑量较多时，相应增加适当量的溶液T，溶液T没过血斑），再加入20ul蛋白酶K，混匀。
④56℃温浴25min，期间颠倒混匀数次。
56℃温浴温浴后，点动离心，往上述EP 管中加入200ul的溶液L，震荡混匀，70℃温浴20min，把裂解后的液体转移到一个新的EP管中。
⑤加入200ul无水乙醇，充分混匀，将全部液体转入装有2ml收集管的硅胶柱中，10000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将硅胶柱重新放入收集管中。
⑥在硅胶柱中加入500ul溶液W1（使用前先检查是否加入相应体积的无水乙醇），10000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将硅胶柱重新放入收集管中。
⑦在硅胶柱中加入500ul溶液W2（使用前先检查是否加入相应体积的无水乙醇），10000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将硅胶柱重新放入收集管中。
⑧在硅胶柱中加入500ul溶液W2（使用前先检查是否加入相应体积的无水乙醇），10000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液。
⑨将硅胶柱放入收集管中，12000rpm空管离心3min，丢弃收集管。
将硅胶柱放入新的1.5ml离心管中，开盖静置1-2min，往硅胶柱中心加入60ul的TE 洗脱液（50-60℃预热），静置5min，12000rpm离心2min，丢弃硅胶柱，盖好离心管盖，做好相对应的编号。
（注意：TE洗脱液的体积应不少于50ul，体积过小影响回收率。
为增加基因组DNA的回收率，可将TE洗脱液稍微加热。
获得的DNA应保存在-20℃，以防DNA降解。
）8.2.3点样取出反应管做好号码标记，AB两组反应管中，每个反应管分别加入样本模板2ul，密封后瞬时离心数秒。
把离心好的反应管放入传递窗内。
做好记录及清洁和消毒工作；换下工作服、工作鞋，口罩，帽子，并处理生物垃圾。
8.3PCR扩增8.3.1进入缓冲区,换上该区的粉红色工作服和工作鞋,带上口罩、帽子和手套。
8.3.2取出PCR反应管，依次放入PCR仪中，选择已经设定好的程序开始扩增。
8.3.3做好记录及清洁和消毒工作；换下工作服、工作鞋，口罩，帽子，并处理生物垃圾。
8.4 杂交8.4.1进入缓冲区,换上该区的紫色工作服和工作鞋,带上口罩、帽子和手套。
8.4.2试验前准备8.4.2.1打开水浴锅，将温度调至45℃。
8.4.2.2从冰箱中取出杂交试剂盒，将所有杂交检测试剂放置在室温下,使其温度平衡到室温。
8.4.2.3 将杂交液、WB1试剂瓶放入45 C水浴锅中预热。
8.4.3 HB2012-A型医用核酸分子快速杂交仪准备8.4.3.1 打开HB2012-A型医用核酸分子杂交仪电源。