乳酸菌保存

1、乳酸菌不产酸？

我于去年下半年分离的乳酸菌，现在却没有产酸了，接入牛奶中培养好几天了但牛奶不凝固？不知道是怎么回？请哪位高手指点一下。这半年我都是把菌种接在MRS培养基上培养的，并且一个月转接一次。

半年了都在MRS培养传代，肯定不行的，容易变异应该在分纯之后冻存；

转接太频繁了，可能出现变异尽力减少传代，并进行复壮；

进行划线分纯，挑取几个菌落染色鉴定一下，然后再接种脱脂牛奶，也许可以重新筛选到一个有活力的；

将菌种接种到双斜面乳酸琼脂平板上，选取离含乳酸厚度最大的生长乳酸菌复壮！

、乳酸菌活化后没长出怎么回事

近期将原来已保存的乳酸菌菌种进行活化，但是平板上没长出来。后来又重新做了一次还是没有。这是怎么回事呢？

可以先用液体培养基富集，如果均悬液混浊后再划线接种；

乳酸菌的生存条件很宽。因为它是原核生物，结构相对简单。可以用50ml饱和脱脂奶粉溶液＋30ml 50％甘油＋20％对数期细菌原液在-85度条件下保存好几年。我做的实验中，pH到达3，乳酸菌还可以生长。不过培养乳酸菌不要培养时间过长，不然会出现自溶现象，菌液里的细菌数反而减少。

细菌生长曲线分潜伏期，对数期/生长期，成熟期，衰退期，一般而言，成熟期的细菌对外界因数的抵抗力最强但乳酸菌容易自溶，成熟期很难控制，一不小心就生产过头，出现自溶。那样的话，解冻后的细菌潜伏期会加长，甚至无法生长。所以保存的时候最好取对数期的细菌，活力大一点；

3、第一次做乳酸菌检测,请高人指点菌落特征

因第一次做乳酸菌检测,分别用了MRS培养基和改良TJA培养基厌氧培养,不同样品长出了不同的菌落形态,请高人指点乳酸菌在这两种培养基上的菌落特征,我才能进一步选定几种菌落做革兰式染色和过氧化氢检测,谢谢!

MRS培养基上生长的是乳杆菌,改良TJA培养基上生长的是乳酸菌

一般的看镜检结果,粉红的是乳球.白的乳杆多.

4、乳酸菌培养

很是郁闷，我做实验分离的菌株，经过微生物菌种中心鉴定是罗伊氏乳酸杆菌，但是有一个很头疼的特点就是长的特慢，别的菌株在24小时就能长出来计数了，可这个菌株到48小时才能长出来，而且我们要做乳酸菌的冻干菌粉，别人冻干出来的能达到12次方，我的最多能达到10次方，各位专家，谁能帮帮我，应该怎么做才能更好一些啊，谢谢

乳酸杆菌不同种之间生物特性差别很大，这是正常的，没有什么办法能够改变。

我的经验是，在平板上长得慢的乳酸菌，在液体培养中生长速度并不慢，你可以试一下液体培养。

至于冻干的能力，牵涉到因素非常多，包括保护剂，菌种，预冻，冻干机性能，冻干方式等等，无法确定，只有自己摸索或者找有经验的人现场指导

5、乳酸菌产酸最大能达到多少

有谁知道乳酸菌产酸最大达到多少啊？有的说至多百分之一点多。但有的文章上却说能达到五点多？哪个对呢？

不同菌种，不同条件下的产酸量是不同的，中国的文献是报道的最大产酸量是在1.3%~2%。

6、有没有能把乳酸菌和细菌鉴别开的培养基或抗生素？

我想从酱中分离乳酸菌，但在MRS培养基上是不是乳酸菌和细菌都长啊？有没有能从外表上把它们区别开的培养基？我听别人说可以往培养基中加入溴甲酚绿，菌落周围变色的就是

乳酸菌，但不知道这种效果好不好。或者有什么能抑制细菌生长但不能抑制乳酸菌生长的抗生素吗？谢谢各位！

MRS本身已经是选择性比较好的培养基了，其他的细菌在MRS上生长的不是很多，个别不典型的菌落通过革兰染色镜检就可以区分开。包括粪便中的那么多细菌，能够在MRS上生长的也基本上都是乳酸菌。但污染霉菌等还是容易生长。

我们是用改良TJA培养基的有时也会看到有芽孢在长的一般做下那个过氧化氢的测试

7、乳酸菌的生长

我们做乳酸菌平板计数的时候，用的MRS培养基，总是在48h才能长出并且数出来，而芽孢杆菌20多小时就长的很好，大家有没有什么好的经验，能让乳酸菌高活力增长的，能缩短周期的啊，谢谢

乳酸菌不同种之间在生长速度和菌落形态上差别很大,这是很正常的

有的乳酸菌菌种反而长得很快,不到20小时就可以长成明显的白色菌落,而有的乳酸菌如嗜酸乳杆菌即使长两天也是很小的灰色菌落

8、培养微生物

我培养细菌，里面有光合菌群，乳酸菌群，酵母菌群，革兰氏阳性放线菌群，发酵系的丝状菌群，请问怎么检测他们的数量，还有更好的培养基吗。我是用味精，玉米，麦，棉子饼，膨润土。

需要用各自的选择性培养基进行检测各自细菌数量，单纯一种培养基上无法进行鉴别检测。乳酸菌用改良TJA，酵母菌可用孟加拉红，放线可用高氏合成I号的吧

9、关于乳酸菌的培养

根据GB/T4789,乳酸菌的检测是放在普通培养箱中做需氧培养.有一次我在检测酸乳中乳酸菌含量时,居然发现改良番茄汁平板上没有任何菌的生长.由于乳酸菌是兼性厌氧菌,我用干燥器设计了一个兼性厌氧装置,结果效果很好.在这儿想请各位讨论一下,国标是否有些不完善?

我在干燥器（不放硅胶）中放一点燃的蜡烛，再放入培养物。利用蜡烛燃烧消耗氧气并产生少量二氧化碳，制造了一种仅存极少量氧气的环境。我想乳酸菌不是严格厌氧，在这样环境下它们应该能够长的好。经过多次试验，确实不错。所以，我想对于兼性厌氧菌，一般的需氧培养是否无法满足其生长需求。经过试验，我发现有个别酸乳中的乳酸菌在需氧条件下不生长，而在我的装置中生长良好。按照兼性厌氧菌的定义，好像无法解释。我不知别人是否遇到过这种情况，是怎么解决的。

烛缸法是微需氧微生物培养的最经典方法之一，楼主看看教科书资料就能了解。正如楼主所说，使用蜡烛消耗干燥器中的氧气而造成的微需氧环境，对于培养兼性厌氧微生物是非常有效的办法。

10、需要提醒大家的是,酸奶或者益生菌粉中乳酸菌的培养结果没有生长的两个主要原因是: 1.国标中的培养基对一大部分乳酸菌确实生长状况不是很好,菌落生长很慢.同时,也会造成一部分乳酸菌在培养基上不生长,特别是有些乳酸菌是偏向于厌氧型的.

2.是酸奶和菌粉中的乳酸菌数量是非常大的,在国标培养基中本来生长菌落就很小,如果稀释度不够,细菌在培养基中生长的菌落就更小了,我们在看结果的时候,不是没有生长，而是生长太多太小,肉眼没有办法辨别.

我在做乳酸菌的时候,在选择可能三个稀释度之外,一般再做一个更低的稀释度,不是用倾注发,而是用涂抹法,以作为乳酸菌是否生长的对照.同时,如果心里不塌实,我经常用MRS做对照.建议大家可以考虑,作两次之后就会得出自己的经验了