AOAC 官方方法999.03 食品中总果聚糖的测定中文翻译

AOAC 官方方法999.03 食品中总果糖的测定

酶/分光光度法

1999年第一次执行

（适用于食品中果糖的测定。不适用于高度解聚的果糖，无论是酸的还是酶的。）支持方法验收的实验室间研究结果见表999.03。

A.原理

用热水提取产物以溶解果聚糖。将等份的提取物用特定的蔗糖酶处理以将蔗糖水解成葡萄糖和果糖，并用纯淀粉降解酶的混合物将淀粉水解成葡萄糖。所有还原糖用碱性硼氢化物还原成糖醇。果聚糖用纯化的果聚糖酶（外切-菊粉酶加内切-菊粉酶）水解成果糖和葡萄糖，并且这些糖通过β-羟基苯甲酸酰肼（PAHBAH）方法测量用于还原糖。

B.装置设备

（a）研磨机。

（b）热板。带磁力搅拌器。

（c）水浴.保持40±0.1℃。

（d）沸水浴。

（e）涡旋混合器。

（f）pH计。

（g）停止计时器。

（h）滤纸。

（i）真空烘箱。用于干燥果糖标准品。

（j）分光光度计。在410nm下操作。

（k）移液管。用一次性吸头输送100和200μL。或者，可以使用机动手持式分液器。

（l）正位移移液器。

（m）玻璃试管。

（n）容量瓶。

（0）聚丙烯容器。

C.试剂

所有试剂应具有分析纯度等级。

（a）马来酸钠缓冲液。100mM。pH 6.5。将11.6g马来酸溶于900mL蒸馏水中，用2M NaOH（8.0g NaOH / 100mL）将pH调节至6.5，并用水稀释至体积1L容量瓶中。储存在4℃。

（b）乙酸钠缓冲液。100mM。pH 4.5。将5.8 mL冰醋酸（1.05 g / mL）吸取到900 mL蒸馏水中。使用1M NaOH调节至pH 4.5并用水稀释至1L。储存在4°C。

（c）对羟基苯甲酸酰肼（PAHBAH）还原糖分析试剂.（1）溶液A.-在磁力搅拌器上，在250mL烧杯中加入10g PAHBAH至60mL水中。搅拌浆液并加入10mL浓HCl。用蒸馏水调节至200 mL并在室温（约22°C）下储存。溶液稳定至少2年。（2）溶液B.-将24.9g柠檬酸三钠二水合物加入500mL蒸馏水中并搅拌溶解。加入2.20g CaCl2·2H20并通过静置溶解。然后加入40.0g NaOH并用静止溶解。（溶液可能是乳状液，但会在稀释时澄清。）将体积调节至2 L。在室温（约22°C）下溶液稳定至少2年。（3）PAHBAH工作试剂，现配现用。将20 mL 溶液A加入180 mL溶液B中并充分混合。该溶液应储存在冰上并稳定约4小时。

（d）氢氧化钠。50mM。将2.0g NaOH溶于900mLL蒸馏水中。将体积调

节至1 L。在室温下保存（约22℃）。

（e）碱性硼氢化物.-将50mg硼氢化钠准确称入聚丙烯容器中。记录管上的重量，密封管并存放在干燥器中以供使用。使用前即刻。将硼氢化钠（10mg / mL）溶于50mM NaOH溶液中。该溶液在室温下稳定4-5小时。

（f）乙酸。100mM。将5.8 mL冰醋酸加入蒸馏水中，并将体积调节至1 L。在室温下（约22°C）储存。

（g）蔗糖酶/淀粉酶制剂。2.27单位（U）蔗糖酶/毫升。溶解在1瓶含有蔗糖酶（50 U）和（β-淀粉酶（蜡状芽孢杆菌，500 U），支链淀粉酶（地衣芽孢杆菌，100 U）和麦芽糖酶（酵母.1000 U）（作为冻干粉末）在22mL马来酸钠缓冲液。C（a）将酶溶液分成5 mL每份，并冷冻储存在聚丙烯容器中以防止微生物污染。如果不在缓冲液中稀释，则在-20℃下储存时，该灭菌酶可稳定5年。一个单位蔗糖酶活性是在pH6.5和40℃下从蔗糖释放1微摩尔葡萄糖/分钟所需的酶量。

（h）果聚糖酶溶液。350U / mL外切-菊粉酶和35U/mL内切-胰岛素酶。将含有8000U外切-菊粉酶和800U内-缬氨酸酶溶解在装有22mL乙酸钠缓冲液的瓶子中，C（b）。将酶溶液分成5mL等分试样并冷冻储存在聚丙烯容器中以防止微生物接触。如果不在缓冲液中稀释，则在-20℃下储存时，干燥的酶可稳定5年。一个单位（U）外切-菊粉酶活性是在pH4.5和40℃下从半胱氨酸（10mg / mL）释放1μm的还原糖当量（作为果糖）/ min所需的酶量。

（i）果聚糖对照面粉。含有已知量的在α-纤维素存在下冷冻干燥的dahlia 果聚糖。在室温下干燥储存时稳定。

（j）蔗糖对照面粉。在α-纤维素存在下冷冻干燥的蔗糖。在室温（约22°C）下储存时稳定。

（k）D-果糖标准储备溶液。1.5mg / mL，在0.2％苯甲酸溶液中。在制备溶液之前，将干燥的粉状结晶果糖（纯度> 97％）在60℃下进行16小时真空吸尘。

D.测试材料的制备

所有产品在称重前应在室温（22℃）下进行。

（a）测试样品。对于干燥食品，在研磨机中研磨约50g实验室样品以通过0.5mm筛。将所有材料转移到广口塑料罐中，通过摇动和倒置混合均匀。

对于固体潮湿的产品，如巧克力，温热至室温（约22℃），并用奶酪刨丝器将材料碾碎。

对于软的，非常潮湿的食物，如低脂酱，加热材料直到它变软；然后用抹刀剧烈搅拌，并取一部分代表散样。

对于液体或半液体产品，如果汁或酸奶，在加热前将pH调节至约6.5。可以直接稀释在马来酸盐缓冲液中，C（a）。

（b）果糖标准工作溶液。加入0.2 mL果糖标准储备溶液[1.5 mg/mL，C（k）]至0.9mL乙酸盐缓冲液，C（B）。并彻底混合。将0.2mL等份的该溶液（含有54.5μg果糖）一式四份分配到4个玻璃试管，B（M）。加入0.1 mL乙酸盐缓冲液每管，C（b）。在反应之前立即用沸水浴，加入5.0 mL PAHBAH工作试剂中，C（c）。

（c）试剂空白。转移0.3mL乙酸盐缓冲液，C（b）。进入试管并进行E（c）的标准试验。

（d）蔗糖对照面粉。含有10％蔗糖。按照与含有0-12%果聚糖的试验材料相同的程序分析1.0 g这种粉末。本品不含果聚糖，用于检查蔗糖酶和硼氢化钠