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★化学学说：与细菌细胞质中核糖核酸镁盐有关。 革兰阳性菌细胞质中的核糖核酸镁盐与结晶紫-碘结合形成更大的复
合物，不易被酒精脱出。 ★等电点学说：与细菌所带电荷有关。
革兰阳性菌等电点低（pI）为2-3，在中性或碱性环境中所带负电 荷多；革兰阳性菌pI为4-5，所带负电荷少，影响结合染色的多少。
2.实验材料与方法
实验一 细菌的形态检查（1）
实验目的：
1.掌握显微镜油镜的使用和保养方法； 2.学会观察细菌的基本形态和一些特殊结构； 3.掌握细菌涂片制作、革兰染色操作方法及意义；
实验内容：
（一）显微镜油镜的使用和保养
1.显微镜基本知识
显微镜的构造
（1）光学部分 （2）机械部分
显微镜的放大倍数和分辨率 1.放大倍数=接物镜放大倍数×接目镜放 大倍数 2. 显微镜的分辨力：是表示显微镜辨析 物体（两端）两点之间距离的能力，可 用公式表示为： R=0.61λ/N.A 式中R：物镜分辨出物体两点间的最短距 离。 ：可见光的波长（平均0.55m) N.A =n·sin(α/2 )为镜口率
n: 物镜和被检标本间介质的折射率。 ：镜口角（即入射角）。 目前实用范围内物镜的最大镜口率为1.4,
R=0.61*0.55/1.4=0.25 而人眼的分辨率为0.25mm,所以一个大小
为0.25 m的微粒需经显微镜放大1000倍 便可以观察。
2.油镜的使用和保养
（1）油镜头的识别
（3）油镜的使用方法
1）将显微镜直立于桌上，不要扳动倾斜关节，使载物台保持 水平。 2）对光：用低倍镜对光，检查染色标本时光线宜强。要抬高 集光器，放大光圈。 3）滴加香柏油一小滴于染色标本片上，将标本置于载物台上， 移置待检部分于接物镜下。 4）换用油镜，眼睛从侧面看着物镜，转动粗调节器，使镜筒 下降至油镜头浸入镜油并几乎接触标本片。
6．用过的有菌器材或培养物等，应放于指定的地 点，不得随意抛置。 7．注意节约实验试剂，爱护实验器材。损坏器材 时，应立即报告指导教师，按有关规定处理。 8．易燃物品（酒精、二甲苯等）不准接近火源。 一旦起火，应迅速用沾水的布类和沙土覆盖扑火。 9．实验结束后，将实验台整理好，值日同学打扫 室内卫生，并检查水、电等开关是否关好，防止 发生安全事故。 10．每次实验后均要用肥皂洗手，必要时用消毒 液泡手。
2．实验过程中必须持严肃认真的态度。 3．对实验结果必须进行仔细地观察和认Hale Waihona Puke Baidu地记录，
然后进行科学分析，得出恰当结论。 4．独立认真完成实验报告，书写实验报告格式要规
范、字迹要清楚，语言简练，表格清晰，画图应力 求反映实际标本的原状。 5．切实遵守实验室规则。
三、实 验 室 规 则
1．进实验室时必须穿好工作服，离室时需脱下反 折，工作服要经常清洗消毒。 2．书包、衣物等物品请放在实验室的贮物柜中， 随身只带必要的实验指导、笔记本和文具，进入实 验室后放入实验台的抽屉内。 3．实验室内要保持肃静、守秩序，不得高声谈笑 和随处走动，玩弄手机等。 4．实验室内禁止饮食和吸烟，不得用嘴舔湿铅笔 和标签等。 5．如遇有盛检验材料的器皿破损或污染其它物品 时，应即用3%的来苏儿消毒；皮肤破伤时须向指导 教师报告，采取适当的消毒及防止感染措施。
5）左眼看接目镜，一面观察，一面缓慢转动粗调节器，使 镜筒上升，直到观察到模糊的物像时，再适当转动细调节器， 使物像完全清晰，即可正式观察。
（4）油镜的保养方法
1）标本观察完毕，向上转动粗调节器将镜筒 提起，取下标本，用擦镜纸将镜头上的油擦净。 若油已干，可用擦镜纸沾少许二甲苯擦去油迹， 随即用擦镜纸擦去二甲苯。
（1）材料: 菌种：葡萄球菌、大肠埃希菌培养物 染液：结晶紫染液、卢戈碘液 95%酒清、稀释复红 其他：玻片、接种环、酒精灯 无菌生理盐水、显微镜等
（2） 方法： 细菌涂片的制作：涂片、干燥、固定 革兰染色：初染、媒染、脱色、复染 油镜使用：观察染色结果并记录
观察细菌的形态、大小和排列，还能鉴别细菌。
（三）革兰染色法
该染色法是最常用最重要的染色法。是丹麦细菌 学家革兰于1884年创建的，至今仍广泛应用。 1. 革兰染色法的原理
★渗透学说：与肽聚糖结构有关。 革兰阳性菌细胞壁中肽聚糖含量高，酒精不易渗透，而革兰阳性菌细胞 壁中肽聚糖含量少，脂类含量高，酒精易渗透进入细胞内，将结合的结 晶紫碘复合物脱出。
油镜头的下缘，一般刻有一白色圈，标有油 90、100、 oel、oil等字样。
显微镜的接物镜有低倍镜头，高倍镜头和油镜头，其中油 镜头的放大倍数最大。
（2）油镜的原理：
当光线由反光镜通过玻片 与镜头之间的空气时，由于 空气与玻片的密度不同，使 光线受到曲折，发生散射， 降低了视野的照明度。若中 间的介质是一层油（其折射 率1.515与玻片1.52的相 近），则几乎不发生折射， 增加了视野的进光量，从而 使物象更加清晰。
3．通过综合性、设计性实验项目，树立实事求是的科学态 度和培养独立分析问题与解决问题的能力，为开展有关疾病 的诊断与防治以及从事病原生物学的科学研究工作所必需的 实验方法与技术打下一定的基础。
二、实验要求
1．每次实验前必须做好预习，明确实验目的、原 理、方法及操作中的注意事项等，避免和减少发生 错误。
2）将物镜转成“八’字形，以免损坏油镜。 降低集光器，竖起反光镜，将显微镜放入镜箱。
（二）细菌的基本形态与特殊结构观察
1细菌的基本形态观察
葡萄球菌
细菌的基本形态可分为球菌、 杆菌、螺形菌（包括弧菌）三类。
大肠杆菌
霍乱弧菌
2.细菌特殊结构的观察
变形杆菌（鞭毛）
肺炎链球菌（荚膜）
破伤风杆菌（芽胞）
细菌的形态学检查方法 ——染色标本检查法
病原生物学实验
主讲人:蒋培余
一、实验目的
1．学习、掌握有关病原生物学的基本操作技术，如普通光 学显微镜油镜的使用和保养、涂片染色、分离接种与细菌培 养、病原菌分离鉴定和免疫学诊断等基本操作技术，树立无 菌观念；
2．通过寄生虫标本的观察和基本实验技术操作，掌握常见 人体寄生虫的辨认，掌握具有诊断价值的寄生虫形态特征和 常见寄生虫的病原学检查方法；
合物，不易被酒精脱出。 ★等电点学说：与细菌所带电荷有关。
革兰阳性菌等电点低（pI）为2-3，在中性或碱性环境中所带负电 荷多；革兰阳性菌pI为4-5，所带负电荷少，影响结合染色的多少。
2.实验材料与方法
实验一 细菌的形态检查（1）
实验目的：
1.掌握显微镜油镜的使用和保养方法； 2.学会观察细菌的基本形态和一些特殊结构； 3.掌握细菌涂片制作、革兰染色操作方法及意义；
实验内容：
（一）显微镜油镜的使用和保养
1.显微镜基本知识
显微镜的构造
（1）光学部分 （2）机械部分
显微镜的放大倍数和分辨率 1.放大倍数=接物镜放大倍数×接目镜放 大倍数 2. 显微镜的分辨力：是表示显微镜辨析 物体（两端）两点之间距离的能力，可 用公式表示为： R=0.61λ/N.A 式中R：物镜分辨出物体两点间的最短距 离。 ：可见光的波长（平均0.55m) N.A =n·sin(α/2 )为镜口率
n: 物镜和被检标本间介质的折射率。 ：镜口角（即入射角）。 目前实用范围内物镜的最大镜口率为1.4,
R=0.61*0.55/1.4=0.25 而人眼的分辨率为0.25mm,所以一个大小
为0.25 m的微粒需经显微镜放大1000倍 便可以观察。
2.油镜的使用和保养
（1）油镜头的识别
（3）油镜的使用方法
1）将显微镜直立于桌上，不要扳动倾斜关节，使载物台保持 水平。 2）对光：用低倍镜对光，检查染色标本时光线宜强。要抬高 集光器，放大光圈。 3）滴加香柏油一小滴于染色标本片上，将标本置于载物台上， 移置待检部分于接物镜下。 4）换用油镜，眼睛从侧面看着物镜，转动粗调节器，使镜筒 下降至油镜头浸入镜油并几乎接触标本片。
6．用过的有菌器材或培养物等，应放于指定的地 点，不得随意抛置。 7．注意节约实验试剂，爱护实验器材。损坏器材 时，应立即报告指导教师，按有关规定处理。 8．易燃物品（酒精、二甲苯等）不准接近火源。 一旦起火，应迅速用沾水的布类和沙土覆盖扑火。 9．实验结束后，将实验台整理好，值日同学打扫 室内卫生，并检查水、电等开关是否关好，防止 发生安全事故。 10．每次实验后均要用肥皂洗手，必要时用消毒 液泡手。
2．实验过程中必须持严肃认真的态度。 3．对实验结果必须进行仔细地观察和认Hale Waihona Puke Baidu地记录，
然后进行科学分析，得出恰当结论。 4．独立认真完成实验报告，书写实验报告格式要规
范、字迹要清楚，语言简练，表格清晰，画图应力 求反映实际标本的原状。 5．切实遵守实验室规则。
三、实 验 室 规 则
1．进实验室时必须穿好工作服，离室时需脱下反 折，工作服要经常清洗消毒。 2．书包、衣物等物品请放在实验室的贮物柜中， 随身只带必要的实验指导、笔记本和文具，进入实 验室后放入实验台的抽屉内。 3．实验室内要保持肃静、守秩序，不得高声谈笑 和随处走动，玩弄手机等。 4．实验室内禁止饮食和吸烟，不得用嘴舔湿铅笔 和标签等。 5．如遇有盛检验材料的器皿破损或污染其它物品 时，应即用3%的来苏儿消毒；皮肤破伤时须向指导 教师报告，采取适当的消毒及防止感染措施。
5）左眼看接目镜，一面观察，一面缓慢转动粗调节器，使 镜筒上升，直到观察到模糊的物像时，再适当转动细调节器， 使物像完全清晰，即可正式观察。
（4）油镜的保养方法
1）标本观察完毕，向上转动粗调节器将镜筒 提起，取下标本，用擦镜纸将镜头上的油擦净。 若油已干，可用擦镜纸沾少许二甲苯擦去油迹， 随即用擦镜纸擦去二甲苯。
（1）材料: 菌种：葡萄球菌、大肠埃希菌培养物 染液：结晶紫染液、卢戈碘液 95%酒清、稀释复红 其他：玻片、接种环、酒精灯 无菌生理盐水、显微镜等
（2） 方法： 细菌涂片的制作：涂片、干燥、固定 革兰染色：初染、媒染、脱色、复染 油镜使用：观察染色结果并记录
观察细菌的形态、大小和排列，还能鉴别细菌。
（三）革兰染色法
该染色法是最常用最重要的染色法。是丹麦细菌 学家革兰于1884年创建的，至今仍广泛应用。 1. 革兰染色法的原理
★渗透学说：与肽聚糖结构有关。 革兰阳性菌细胞壁中肽聚糖含量高，酒精不易渗透，而革兰阳性菌细胞 壁中肽聚糖含量少，脂类含量高，酒精易渗透进入细胞内，将结合的结 晶紫碘复合物脱出。
油镜头的下缘，一般刻有一白色圈，标有油 90、100、 oel、oil等字样。
显微镜的接物镜有低倍镜头，高倍镜头和油镜头，其中油 镜头的放大倍数最大。
（2）油镜的原理：
当光线由反光镜通过玻片 与镜头之间的空气时，由于 空气与玻片的密度不同，使 光线受到曲折，发生散射， 降低了视野的照明度。若中 间的介质是一层油（其折射 率1.515与玻片1.52的相 近），则几乎不发生折射， 增加了视野的进光量，从而 使物象更加清晰。
3．通过综合性、设计性实验项目，树立实事求是的科学态 度和培养独立分析问题与解决问题的能力，为开展有关疾病 的诊断与防治以及从事病原生物学的科学研究工作所必需的 实验方法与技术打下一定的基础。
二、实验要求
1．每次实验前必须做好预习，明确实验目的、原 理、方法及操作中的注意事项等，避免和减少发生 错误。
2）将物镜转成“八’字形，以免损坏油镜。 降低集光器，竖起反光镜，将显微镜放入镜箱。
（二）细菌的基本形态与特殊结构观察
1细菌的基本形态观察
葡萄球菌
细菌的基本形态可分为球菌、 杆菌、螺形菌（包括弧菌）三类。
大肠杆菌
霍乱弧菌
2.细菌特殊结构的观察
变形杆菌（鞭毛）
肺炎链球菌（荚膜）
破伤风杆菌（芽胞）
细菌的形态学检查方法 ——染色标本检查法
病原生物学实验
主讲人:蒋培余
一、实验目的
1．学习、掌握有关病原生物学的基本操作技术，如普通光 学显微镜油镜的使用和保养、涂片染色、分离接种与细菌培 养、病原菌分离鉴定和免疫学诊断等基本操作技术，树立无 菌观念；
2．通过寄生虫标本的观察和基本实验技术操作，掌握常见 人体寄生虫的辨认，掌握具有诊断价值的寄生虫形态特征和 常见寄生虫的病原学检查方法；