基因工程复习重点

考试题型

一、填空（共10题 10分）

二、单项选择题（共20题 20分）

三、英文名词解释（共8题 32分）

四、简答题（共6题 30分）

五、综合题（共1题 8分）

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第一章

1、名词解释：

Gene Engineering HGP（Human Genome Project）

Gene Therapy 基因诊断

2、简述重组DNA操作一般步骤。

3、了解基因工程发展史上的重大事件。

4、了解基因工程研究内容。

5、简述基因工程的主要操作内容。

6、请举两个基因工程应用的具体例子并加以说明。

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第二章第三章第四章

1、名词解释：

载体（Vector）、质粒（Plasmid）、穿梭载体（shuttle vector）、质粒的不相容性、多克隆位点（multiple cloning sites，MCS）、a-互补、粘性末端、 cos位点、考斯质粒（Cosmid）、穿梭载体（Shuttle vector）、pBR322、pSC101、噬菌粒（phagemid or phasmid）、人造染色体载体、细菌人造染色体（BAC）、酵母人造染色体（YAC）、工具酶、限制修饰系统（R-M System）、同位酶、同尾酶、同裂酶、星星活性(Star activity)、 Klenow酶、T-载体

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2、载体的功能及其应具备的条件。

3、质粒的基本特征是什么？质粒的不相容性的分子机制是什么？

4、在构建质粒载体时，对天然质粒进行修饰改造？

5、正选择标记lacZ′的显色原理（ a-互补的原理）是什么，有何应用？

6、λ噬菌体的包装限制是什么？

7、核酸限制性内切酶类型及主要特性是什么？

8、限制性内切酶如何命名？命名原则是什么?

9、限制性内切酶基本特征是什么？

10、简述影响限制性核酸内切酶酶切的反应条件的因素。

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11、引起星星活性的因素是什么？如何抑制？

12、 DNA连接酶的基本功能是什么？

13、大肠杆菌DNA聚合酶I的基本功能是什么？

14、大肠杆菌DNA聚合酶I 大片段的基本功能是什么？

15、S1核酸酶的基本功能是什么？

16、碱性磷酸酶的的基本功能是什么？根据来源不同可分为几种？它们之间有何区别？

17、质粒提取原理、试剂、过程。

第五章

1、名词解释：

凝胶电泳、探针（probe）、探针标记、杂交、Northern杂交（Northern Hybridization）、Southern杂交（Southern Hybridization） PCR、荧光定量PCR、生物芯片、基因芯片(Gene chip) 、蛋白芯片、基因库（gene pool）、基因文库（Gene library or Gene bank）、基因组文库、cDNA文库（cDNA library）、酵母双杂交系统（Tow-Hybrid System）、

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2、简述琼脂糖凝胶电泳的原理（分离原理和检测原理）。

3、常用的缓冲液有那些？它们有何区别？

4、琼脂糖凝胶电泳参数有那些？影响DNA迁移率的因素有那些?

5、核酸分子杂交的基本原理是什么？主要包括那些类型？有何区别？ Northern杂交、Southern杂交和Western的异同？

6、探针标记的方法有那些？其过程如何？切口平移法标记探针的原理？随机引物法标记探针的原理？

7、 PCR技术的原理和过程是什么？

8、 PCR技术的基本成分有那些？各有何要求？

9、引物设计要遵守的原则有那些？

10、荧光定量PCR的优点是什么？

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11、评价基因文库的质量标准有那些？

12、简述基因组文库的构建过程。

13、简述cDNA文库的构建过程。

14、简述酵母双杂交系统的基本原理及其应用。

15、简述Sanger双脱氧链终止测序法的基本原理及其过程。

16、简述Maxam-Gilbert化学修饰测序法的基本原理及其过程。

17、作为受体细胞应具备的条件有那些？

18、实验室常用的基因工程受体细胞有那些？

19、简述大肠杆菌作为基因工程受体菌的优缺点。

20、简述酵母菌表达外源基因的优缺点。

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第六章

1、名词解释：

重组率感受态原生质体转化转导（Transduction）转化率感受态细胞（Competent Cell）

2、简述基因工程的操作过程。

3、提高重组率的方法有那些？

4、原生质体的转化主要包括那些过程？

5、影响转化率的因素有那些？

6、转化细胞的扩增操作的目的是什么？

7、转化子的筛选和鉴定方法有那些？

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8、如何区别：转化子与非转化子、重组子与非重组子、目的重组子与非目的重组子。

9、什么叫抗药性筛选法、HAT选择法？

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第七章

名词解释：T-Vector T-DNA

1、简述基因克隆的方法有那些？

2、简述鸟枪法克隆目的基因的基本战略。

3、简述鸟枪法克隆目的基因的局限性。

4、简述cDNA法克隆目的基因的基本战略。

5、简述cDNA法克隆目的基因方法之一差异分离程序。

6、简述cDNA法克隆目的基因的局限性。

7、简述PCR克隆目的基因的基本程序。

8、如何设计探针序列？

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9、简述DNA化学合成的用途。

10、简述基因文库的构建程序。

11、如何从基因文库中筛选目的基因？

12、在基因组文库的构建过程中，如何避免外源DNA片段之间的连接？

13、基因组文库重组克隆如何排序？

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第八章

名词解释：包涵体（Inclusion Bodies）

1、什么叫表达载体（Expression vector）？简述作为表达载体应具有的元件有那些？

2、简述一个好的表达系统的标准是什么？

3、简述大肠杆菌作为基因工程受体菌的优缺点。

3、简述作为基因工程宿主必须具备的主要条件

4、简述外源基因在大肠杆菌中进行高效表达应考虑的因素有那些？

5、如何克隆启动子和终止子？

6、核糖体结合位点对外源基因表达有何影响？

7、密码子对外源基因表达有何影响？

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8、简述包涵体（Inclusion Bodies）及其性质，包涵体形成机制。

9、简述以包涵体形式表达目的蛋白的优缺点。

10、如何对包涵体形式表达目的蛋白进行后处理？

11、简述以分泌形式表达目的蛋白的优缺点。

12、简述蛋白质的分泌机制。

13、如何构建分泌型目的蛋白表达系统？

14、简述以融合形式表达目的蛋白的优缺点。

15、融合蛋白表达质粒的构建原则是什么？

16、融合型异源蛋白如何回收？

17、简述以寡聚形式表达目的蛋白的优缺点。

18、如何构建寡聚型目的蛋白表达系统？

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19、简述以整合形式表达目的蛋白的优缺点。