食品微生物学检验 霉菌和酵母计数
霉菌和酵母菌计数的注意事项
霉菌和酵母菌计数的注意事项1. 在进行霉菌和酵母菌计数时，确保实验室环境干净整洁，避免外部细菌的污染。
2. 使用适当的培养基进行霉菌和酵母菌计数，以确保得到准确的结果。
3. 对于悬浮在液体中的霉菌和酵母菌，必须充分混合样品以保证样品的均匀性。
4. 采用适当的离心机参数对悬浮在液体中的霉菌和酵母菌进行沉淀，以便于后续的计数和分析。
5. 在进行霉菌和酵母菌计数时，需要对悬液进行适当的稀释以避免高浓度下产生过多的交叉效应。
6. 霉菌和酵母菌计数前要进行质量控制，确保培养基和其他实验条件符合标准。
7. 在进行霉菌和酵母菌计数时，要遵循标准的微生物计数方法和技术，如平板计数法或膜过滤法等。
8. 经常进行实验室设备的维护和保养，确保设备的准确性和可靠性。
9. 实验人员需要接受相关的培训和教育，熟悉霉菌和酵母菌计数的方法和技术，以确保实验的准确性。
10. 实验室中应有标准操作程序（SOP）来规范霉菌和酵母菌计数的步骤，确保每个实验的一致性和准确性。
11. 霉菌和酵母菌计数应该在合适的温度和湿度条件下进行，以模拟真实环境中的生长条件。
12. 在进行霉菌和酵母菌计数前，对样品进行适当的处理和制备，以确保样品的完整性和可测性。
13. 霉菌和酵母菌计数要注意避免阳光直射，避免对微生物产生影响。
14. 在进行霉菌和酵母菌计数时，及时记录实验数据并进行数据分析，以便对结果进行验证和解释。
15. 实验过程中要小心操作，避免对实验人员和环境造成交叉污染。
16. 采用适当的培养基和生长条件来促进霉菌和酵母菌的生长，以便进行可靠的计数。
17. 霉菌和酵母菌计数时，注意样品的来源和保存条件，避免因为样品质量问题造成误差。
18. 在霉菌和酵母菌计数前进行适当的预处理，如破碎细胞壁、杀菌等，以确保样品中微生物的完整性。
19. 实验室中应建立完善的实验记录和档案，便于追溯实验过程和结果。
20. 实验室应遵循相关的卫生和安全标准，确保实验操作对实验人员和环境无害。
食品微生物霉菌及酵母菌计数方法学验证报告
食品微生物学检验霉菌及酵母菌计数方法学验证报告一、验证目的验证GB4789.15-2016《食品微生物学检验霉菌和酵母计数》在本实验室的适用性。
二、验证方法严格按照GB4789.15-2016进行实验，样品采样方案依据GB4789.1-2016 《食品微生物学检验总则》的要求进行，选取三种物质形态不同种类的典型样品进行验证，本实验方法设计如下：样品种类样品名称样品编号实验人员实验方法糕点xxx xxx a、b 双人双平行蜂蜜xxx xxx c、a 双人双平行汽水xxx xxx c、b 双人双平行除上述实验程序外，为保证本次验证的科学性和准确性，本次实验添加阳性对照组，对照组由标准菌株黑曲霉（CICC2487），白假丝酵母（CICC1965）分别或者混合接种培养而成，与样品实验程序同时进行。
三、验证设备和试剂1.冰箱：BCD-212DG/A 海信（北京）电器2.霉菌培养箱：上海一恒科学仪器3.电位pH计：PHS-3C+（精确度0.01）成都世纪方舟科技有限公司4.无菌均质器：SCIENTZ-04 宁波新芝生物科技有限公司5.恒温振荡器：SHA-A 江苏金坛环宇科学仪器厂6.菌落计数仪：Scan-500 北京五洲东方科技发展有限公司7.天平:JE-502 上海浦春计量仪器有限公司8.超净工作台:SW-CJ-2FD 上海博迅实业培养基和试剂：孟加拉红培养基北京陆桥技术股份有限公司四、验证环境1.依据《消毒与灭菌效果的评价方法与标准GB15981-1995》定期对高压蒸汽灭菌锅的灭菌效果进行检测评价并记录；2.依据《无菌室消毒灭菌操作规程》定期对对无菌室、生物安全柜、超净台进行清洁消毒灭菌并记录；3.依据《实验室质量控制规范食品微生物检测GB/T27405-2008》定期对对无菌室、生物安全柜及超净台进行沉降菌检测并记录；4.无菌室检验：详见《XXXX》；五、验证步骤1.样品的稀释1.1 固体和半固体样品：称取25 g 样品放入盛有225 mL 无菌蒸馏水的均质袋中，用拍击式均质器拍打2min，制成1:10 的样品匀液。
霉菌和酵母菌计数
— 1—
• 样品的制备
检
1.固体和半固体样品的制备：
测
称取25 g样品,加人225 mL无菌稀释液(蒸馏水或生理盐水或磷酸盐缓冲液),
方
充分振摇,或用拍击式均质器拍打1 min-2min，制成1 : 10的样品匀液。
法
— 1—
• 样品的制备
检
2.液体样品的制备：
测
以无菌吸管吸取25 mL样品至盛有225 mL无茵稀释液(蒸馏水或生理盐水
方
或磷酸盐缓冲液)的适宜容器内(可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)
法
或无菌均质袋中,充分振摇或用拍击式均质器拍打1 min-2 min,制成1-
10的样品匀液。
— 1—
• 接种及培养
检
1.系列稀释：
测
取1 mL 1: 10样品匀液注人含有9mL无菌稀
25ml
1ml
方
释液的试管中,另换一支1mL无菌吸管反复吹
告
和酵母。霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为菌
落蔓延。
— 1—
• 结果报告
① 计算同一稀释度的两个平板菌落数的平均值,
计
再将平均值乘以相应稀释倍数。
数 报
② 若有两个稀释度平板上菌落数均在10 CFU-
告
150 CFU之间,则按照GB 4789.2的相应规定进行
计算。
③若所有平板上菌落数均大于150 CFU,则对稀释
方 法
倍递增稀释的同时,每个稀释度分别吸取1 mL样品
匀液于2个无菌平皿内。同时分别取1 mL无菌稀释
液加人2个无菌平皿作空白对照。及时将20 mL-25
mL冷却至46 ℃的马铃薯葡萄糖琼脂或孟加拉红琼
脂(可放置于46 ℃±1 ℃恒温水浴箱中保温)倾注
国标食品微生物学检验 霉菌酵母菌计数
1、检验食品中的霉菌、酵母菌有何意义？试举例食品中产毒素的霉菌、酵母菌？酵母菌是人类较早应用于制作面包、酿酒等的一类微生物。
近年来的应用越来越广，酵母菌体可供食用和作饲料，并可提取核酸、辅酶A、细胞色素C、凝血质等贵重药品；利用其代谢产物，制取维生素、有机酸和酶制剂等；同时，也可用于石油发酵和石油脱蜡等；霉菌除用于传统的酿酒、制酱和做其他发酵食品外，近年来在发酵工业中广泛用来生产酒精、柠檬酸、青霉素、灰黄霉素、赤霉素、淀粉酶、发酵饲料等。
腐生型酵母能使食物、纺织品和其他原料腐败变质；少数嗜高渗压酵母菌如鲁氏酵母、蜂蜜酵母可使蜂蜜、果酱败坏；有的是发酵工业的污染菌，它们消耗酒精，降低产量或产生不良气味，影响产品质量。
面包内含有淀粉，容易滋生霉菌，霉菌会分解淀粉，产生有毒黄曲霉素，是强致癌物质。
根霉经常出现在淀粉质食品上，引起食品霉烂变质，有些曲霉菌能产生对人体有害的物质，如黄曲霉毒素。
2、如何在菌落形态上鉴定霉菌、细菌、酵母菌？细菌：小而突起，大而平坦，透明或半透明，易挑取，粘稠，有臭味，质地均匀菌落正反面或边缘与中央部位颜色一致，圆形菌落，颜色有白色、黄色等。
放线菌：正面有白点而且正背面颜色不同，干燥，小而紧密，与培养基结合牢固（难以挑取），不透明，泥香味，菌落背面有同心圆形纹路。
这点可以和细菌菌落区分。
酵母菌：菌落为淡黄色，光滑，半透明，比细菌菌落大。
霉菌：有菌丝，干燥，大而疏松，有霉味而且透明，菌落大型，肉眼可见许多毛状物，如绒毛状或棉絮状，棕色、青色等，可见黑色的分生孢子群。
菌落最初往往是浅色或白色，当菌落上长出各种颜色的孢子后，由于孢子有不同形状、构造和色素，菌落表面常出现肉眼可见的不同的结构和色泽，如黄、绿、青、黑、橙等各色。
有的霉菌由于产生的色素能扩散到培养基内，使培养基正面和反面显示出不同颜色，故菌落特征也是鉴定霉菌的主要依据之一。
3、该实验只进行霉菌总数的测定而如何进行霉菌的分离与鉴定？(在土壤中，将10-2、10-3各1ml稀释液接于马丁氏培养基)一、配制培养基（根据试剂瓶上的配比）每个培养皿装15~20ml，有7个培养皿，每组近似配150ml(20*7=140ml取最大范围)；二、取两个100或150ml的三角瓶，其中一个用于装90ml的蒸馏水，使用硅胶塞（用于配样品），另一个用于装50~60ml蒸馏水（五根试管，5*9=45ml）,用报纸包扎；三、包扎枪头（10个），将培养基放置于一个铁笼子，再将枪头和两瓶水放置于另一个铁笼子，进行湿热灭菌。
霉菌和酵母菌计数的注意事项
霉菌和酵母菌计数的注意事项进行霉菌和酵母菌的计数是在微生物学、食品工业和制药等领域中常见的实验操作。
以下是在进行这类计数时需要注意的事项：1.标本采集：•标本采集的过程需要注意采集的样本的代表性，以确保实验结果具有可靠性。
采样器具和采样手法也应经过消毒，以防止外源微生物的污染。
2.实验室环境控制：•实验室空气和工作台表面应该保持清洁，以防止实验样品受到外源污染。
使用层流罩或生物安全柜可以降低空气中微生物的污染。
3.消毒和灭菌：•所使用的培养基、培养器皿和仪器设备需要经过严格的消毒和灭菌处理，以防止实验中的交叉污染。
4.菌种的选择：•选择适当的霉菌和酵母菌菌种用于实验。
确保所选的菌种与实验目的一致，并且经过适当的质量控制。
5.菌落计数方法：•使用适当的计数方法，如涂布法、滤膜法等，以确保准确可靠的计数结果。
根据实验的需要，可以选择不同的计数方法。
6.培养条件：•控制培养条件，包括温度、湿度、pH等，以促进霉菌和酵母菌的生长。
这可以通过使用恒温箱、培养箱等设备来实现。
7.实验时间：•在培养过程中，确定合适的培养时间以确保菌落充分生长。
同时，注意不要过度培养，以防止菌落过于密集。
8.质量控制：•进行质量控制实验，包括使用标准菌株进行验证实验，以确保实验的可靠性和重复性。
9.记录和分析：•记录实验的详细过程，包括样品信息、培养条件、计数结果等。
进行统计学分析以获取可靠的数据。
通过严格控制这些因素，可以确保霉菌和酵母菌计数实验的可靠性和准确性，从而为相关领域的研究和应用提供可信赖的数据。
GB4789.15-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数》标准解读
品稀 释 液 的混 匀 ，否 则 在小 试 管里 面 很难 充 分混 匀 。增 加 了 微量 移 液 器及 吸头 １．０ ｍＬ（２．１１），这是 为 了兼 容 检验机 构实 际工 作 中
ａｎａｌｙｚｅｄ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｐｒｅｔｅｄ．Ｂｙ ａｎａｌｙｚｉｎｇ ｔｈｅ ｓｃｏｐｅ，ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ ａｎ ｄ ｍａｔｅｒｉａｌ， ｍ ｅｄｉｕｍ ａｎ ｄ ｒｅａｇｅｎｔ，ｔｅｓｔ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ，ｏｐｅｒａｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ，ｒｅｓｕｌｔ ａｎｄ ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ｍ ｅｔｈｏｄ，ｏｐｅｒａｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ，ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ ａｎｄ ｒｅａｇｅｎｔ ｏｆ
版 标 准 ）实 施 日期 为 ２０１７年 ４月 １９日 。这 个 标 准 方 法 在 目前
３ 培 养基 和试 剂
各个 食 品 检验 机 构 和企业 微 生 物实 验 室使 用 频率 比较高 。在 ２０１６
２０１６版 标准 中增 加 了生 理 盐水 和 磷 酸盐 缓 冲液 ，保 留无 菌蒸
ｄｏｉ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１６７４－９３１６ ２０１８．０５．００１
冲洗 ，均 质程 度不 足 。另外 有些 检验 机构 ，使 用旋 转刀 片均质 器 ，
ＩｎｔｅｒＤｒｅｔａｔｉＯｎ ｆ０ｒ Ｇ Ｂ ４７８９．１５—２０ｌ６ Ⅳ ａｔｉｏｎａｌ Ｆｏ０ｄ Ｓａｆｅｔｙ 可能 会 把霉 菌 的菌 丝 切 断 ，导致 检验 结 果偏 高 。所 以，２０１６版标
撼准研兜芍麓墉
国 生耘 准 ￣ ＣＨＳＭ ０５ １
ＧＢ ４７８９．１ ５—２０１ ６《食品安全国家标准 食品微生物学检验 霉菌和酵母计数 标准解读
马群飞
食品微生物检验指标
食品微生物检验指标食品微生物检验指标是指对食品中微生物的数量和种类进行检测的指标，以评估食品的卫生质量和安全性。
微生物是一类微小的生物体，包括细菌、真菌、酵母、病毒等。
食品中的微生物如果超过一定限度，会对人体健康造成威胁，甚至引发食源性疾病。
因此，对食品微生物的检验十分重要。
食品微生物检验的主要指标包括总菌落数、大肠菌群、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、霉菌和酵母菌等。
这些指标可以通过不同的方法进行检测，如平板计数法、膜过滤法、PCR法等。
总菌落数是指食品中所有微生物的数量。
一般来说，食品中的微生物数量越多，说明食品的卫生质量越差。
不同食品的总菌落数标准有所不同，但通常不应超过一定限度。
大肠菌群是指属于肠道细菌科的一类细菌，其存在表明食品可能受到粪便污染，存在较大的食源性疾病风险。
沙门氏菌是一类常见的食源性病原菌，其存在可能导致食物中毒。
金黄色葡萄球菌是一种常见的致病菌，其存在可能导致食物中毒。
霉菌和酵母菌是一类真菌，其存在可能导致食品变质、产生毒素。
食品微生物检验指标的设定是基于食品微生物的生长特性和对人体健康的影响。
食品中的微生物数量和种类受多种因素影响，如食品的原材料、加工条件、储存方式等。
因此，对食品微生物的检验应根据不同食品的特点和使用目的进行设定。
食品微生物检验指标的合格标准通常由国家相关部门制定，并根据科学研究和实践经验进行修订。
食品企业应按照国家标准进行自查和自检，确保产品符合相关要求。
同时，监管部门也会对食品进行抽检，确保市场上的食品质量安全。
通过对食品微生物的检验，可以评估食品的卫生质量和安全性，及时发现并控制潜在的食源性疾病风险，保障人们的身体健康。
食品生产企业应加强对原材料和加工过程的控制，采取适当的卫生措施，确保食品的微生物指标符合相关要求。
此外，消费者在购买食品时也应注意选择有资质的品牌和商家，避免购买质量不合格的食品。
食品微生物检验指标是评估食品卫生质量和安全性的重要依据。
霉菌酵母菌计数实训报告
一、实训目的1. 掌握观察酵母菌和霉菌形态的基本方法；2. 观察酵母菌和霉菌的形态特征；3. 学习使用显微测微尺测量微生物大小；4. 熟悉霉菌酵母菌计数的实验流程和操作方法；5. 提高食品微生物学检验技能。
二、实训原理霉菌和酵母菌是广泛存在于自然界和食品中的微生物，它们对食品品质和人体健康具有重要影响。
霉菌和酵母菌计数是食品微生物学检验的重要指标之一，通过计数可以了解食品中霉菌和酵母菌的数量，为食品卫生质量控制提供依据。
本实训采用直接镜检计数法，利用显微镜观察霉菌和酵母菌的形态特征，并通过显微测微尺测量其大小，从而进行计数。
三、实训材料与仪器1. 实验材料：酵母菌、霉菌纯培养物，食品样品；2. 仪器设备：显微镜、显微测微尺、血球计数板、酒精灯、接种环、无菌培养皿等。
四、实训步骤1. 预备工作：a. 准备好实验所需的材料与仪器；b. 检查显微镜、显微测微尺等仪器的性能；c. 熟悉实验操作流程。
2. 观察酵母菌和霉菌形态：a. 将纯培养物接种于无菌培养皿中，培养至适宜生长状态；b. 取少量培养物，涂布于载玻片上；c. 将载玻片置于显微镜下，观察酵母菌和霉菌的形态特征，如菌丝、分生孢子、菌落等。
3. 使用显微测微尺测量微生物大小：a. 将显微测微尺放置于显微镜载物台上；b. 对准显微镜视野中的微生物，调整测微尺的刻度；c. 记录微生物的长度。
4. 霉菌酵母菌计数：a. 将纯培养物接种于血球计数板中，培养至适宜生长状态；b. 将血球计数板放置于显微镜下，观察菌落；c. 记录每个视野中菌落数量；d. 计算霉菌酵母菌总数。
5. 结果分析：a. 分析实验数据，得出霉菌酵母菌计数结果；b. 对比实验结果与理论值，分析误差原因。
五、实训结果与分析1. 观察酵母菌和霉菌形态：实验中观察到酵母菌为单细胞，呈圆形或椭圆形，细胞壁厚，具有芽生繁殖方式；霉菌为多细胞真菌，菌丝体发达，无较大的子实体，具有分枝、分生孢子等特征。
霉菌和毒素的检测方法
2.2.2 荧光检测法
荧光检测法 FLD 常结合免疫亲和柱使用，是 AOAC 的标准检测方法，我国国标(GB/T 18979-2003)也采 用此法检测黄曲霉毒素的含量，检测样品经甲醇/水提取 后、过滤、稀释。用含有黄曲霉毒素特异抗体的免疫亲和 柱层析净化，超纯水洗去杂质，甲醇洗脱，加入溴溶液衍 生后用荧光光度计测定。赵东豪等 此法也常用来检测 玉米赤霉烯酮等。荧光检测法方便、快捷、花费少、不需 使用霉菌毒素的标准品，减少对人的伤害 也常作为快速 筛选方法使用。
2.1 食品中霉菌和酵母计数 PetrifilmTM测试片法
PetrifilmTM霉菌和酵母测试片： 1）测试片中添加抗生素，可
抑制细菌生长； 2）含有酵母菌指示剂，使酵
母菌更易计数； 3）适用与菌落总数、金黄色
葡萄球菌、大肠杆菌、单增李斯 特氏菌。
菌落数应采用两个平板的平均数。 3)称重取样以 CFU/g 为单位报告，体积取样以 CFU/mL 为单位报告，报告或分别报告霉菌和/或酵母数。 蒋建云 2006 等也用此法检测饲料中黄曲霉毒素 B1 的含量，不但特异性强 提取纯化步骤简单，结果也易判读 回收率在 90%左右。 计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数计算。 1食品微生物学检验霉菌和酵母计数 赵东豪等 此法也常用来检测玉米赤霉烯酮等。 霉菌毒素是霉菌产生的一种有毒的次生代谢产物，毒素污染会导致营养价值降低，引起动物疾病，并直接或间接危害人类健康。 [4] 食品中霉菌和酵母计数 PetrifilmTM测试片法； 以菌落形成单位（colony forming units，CFU）表示。 酶联免疫吸附法 荧光检测法方便、快捷、花费少、不需使用霉菌毒素的标准品，减少对人的伤害 也常作为快速筛选方法使用。 5 气相色谱和气质联用法
霉菌和酵母计数检验原始记录平板计数法
霉菌和酵母计数检验原始记录（平板计数法）
1.菌落数按“四舍五入”原则修约。
菌落数在10以内时，采用一位有效数字报告；菌落数在10T00之间时，采用两位有效数字报告。
2.菌落数大于或等于100时，前第3位数字采用“四舍五人”原则修约后，取前2位数字，后面用。
代替位数来表示结果；也可用10的指数形式来表示，此时也按“四舍五入”原则修约，采用两位有救数字。
3.若空白对照平板上有菌落出现，则此次检测结果无效。
4.称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/m1为单位报告，报告或分别报告霉菌和/或酵母数。
复核日期
报告人报告日期复核人。
食品中微生物霉菌和酵母的检测能力验证
食品中微生物霉菌和酵母的检测能力验证作者：戴健兴宋伟清利文亮郑海源冯燕飞来源：《食品界》2018年第04期能力验证：即利用实验室间比对，按照预先制定的准则评价参加者的能力。
测量审核：实验室对被测物品（材料或制品）进行实际测试，将测试结果与参考值进行比较的活动。
通过能力验证和测量审核能够评定实验室从事特定检测或测量的能力，识别实验室存在的问题并启动改进措施，提高实验室的检测能力等。
因此，参加能力验证活动对实验室质量控制有着非常重要的意义。
江门市量子高科（中国）生物股份有限公司分析检测中心从2015年首次参加中国检验检疫科学研究院测试评价中心测量审核项目，2016年开始参加该组织的检测能力验证计划。
在这三年中发现了检测过程中存在不少问题，现将从中总结的经验与同行分享，请同行多多指教。
材料样品来源：中国检验检疫科学研究院测试评价中心提供的测量审核和检测能力验证计划样品，样品为白色冻干粉末。
样品标示分别为：测量审核项目ACAS- 15- （MA- A854，MA15- A158，MA15- A469）；检测能力验证计划：ACAS- PT201（2016）16- F444、16- G790和ACAS- PT336（2017）17- G889、17- H202。
仪器霉菌培养箱MJ - 250BSH- III：28℃±1℃、生化培养箱SPX- 250BS-Ⅱ：28℃±1℃、电子天平J J 2000：感量0.1g、数显恒温水浴锅HH-8：46℃±1℃、生物显微镜 XSP- 2CA：10×～100×。
试剂孟加拉红培养基（虎红琼脂），生产商：广东环凯微生物科技有限公司检测方法GB4789.15- 2010《食品微生物学检验霉菌和酵母计数》、GB 4789.15- 2016《食品微生物学检验霉菌和酵母计数》、相关的测量审核作业指导书和参试指导书。
操作步骤（1）按照测量审核作业指导书和参试指导书的要求进行样品水化。
食品微生物能力验证霉菌酵母菌计数—检验方法比较
食品微生物能力验证霉菌酵母菌计数—检验方法比较霉菌酵母菌在自然界中分布极广，种类繁多，食品中易受到不同程度的污染。
食品中霉菌酵母菌的增殖一般会导致营养价值下降、酸败变味或外观恶化等，影响货架期及口感，若霉菌、酵母菌含量较高，且日摄入量较多，会影响人体肠胃内的微生物平衡，甚至造成肠胃不适，可能引起疾病发生。
霉菌对干食品的最大风险主要是在适宜的条件下(产毒株、数量、温度、湿度、水分活度等），能产生霉菌的有毒代谢产物—霉菌毒素，引起过敏反应等各种急、慢性中毒及可能的致癌作用。
因此，人们愈来愈重视食品中霉菌及酵母菌污染对人体造成的危害。
在我国国家部分食品产品及卫生标准中，把霉菌和酵母菌作为常见指示菌进行监测和控制，如饮料、坚果制品、米面制品、糕点类等食品。
霉菌和酵母的检测被列入国标4789 系列食品安全微生物常规检测项目之一 , 霉菌酵母菌的检验方法看似简单，但由于食品种类繁多成分复杂，食品中存在的霉菌种类较多，对环境温湿度及营养成分的要求有所不同，要在同等条件下把所有的霉菌培养出来，反映出样品的真实情况，实属不易，且霉菌前期生长速度缓慢，后期菌丝急剧增加，特别是毛霉的蔓延，给霉菌和酵母菌的同时计数带来一定的困难，如何能更准确、快速提离食品中霉菌检测数目是食品卫生部门面临的一个严峻问题。
能力验证是利用实验室间的比对判定实验室的特定校准、检测能力，以考察实验室检验能力的外部质量活动,组织方提供试验的样本，一般会考虑增加检测难度。
为了更准确更全面得出能力验证结果，本实验室综合了多种方法进行同步检测，主要是考虑霉菌、酵母菌总数检测是通过平板中生长的菌落数目直接计数推算，培养基的质量和培养方式直接影响了检测的结果，因此，选择两种常用的霉菌酵母培养基，采用正置和倒置培养法进行试验，比较分析不同培养基、不同培养方式对霉菌酵母菌计算结果的差异，进而得出较为准确的试验结果进行上报。
2 材料与方法2.1 样品能力验证样品：中国检验检疫科学研究院测试评价中心提供，样品编号为15-G068。
食品中霉菌和酵母计数能力验证的质量控制
食品中霉菌和酵母计数能力验证的质量控制曹克任（济南市食品药品检验检测中心，山东济南 250001）摘 要：能力验证作为对实验室质量控制的一种方式，不仅能评定实验室的检验检测能力，还能体现其综合管理水平。
作为微生物领域内的定量类能力验证，食品中霉菌和酵母计数能力验证满意率通常低于定性类微生物能力验证。
本文从能力验证样品、检验人员、仪器设备、培养基、检测方法、检测环境、结果观察、其他等8个方面就食品中霉菌和酵母计数能力验证质量控制进行探讨，为确保获得满意结果，顺利通过能力验证提供参考。
关键词：霉菌；酵母；能力验证；质量控制Quality Control for Proficiency Testing of Mold and YeastEnumeration in FoodsCAO Keren(Jinan Institute for Food and Drug Control, Jinan 250001, China)Abstract: Proficiency testing, as a way to control the quality of laboratories, not only evaluates the laboratory’s testing ability, but also reflects its comprehensive management level. As a quantitative type of proficiency testing in the field of microbiology, the satisfaction rate of proficiency testing for mold and yeast counts in food is usually lower than that of qualitative microbiological proficiency testing. This paper discusses the quality control of proficiency testing of mold and yeast counts in food from eight aspects, including proficiency testing samples, testing personnel, instrumentation, culture media, testing methods, testing environment, observation of results, and other aspects, so as to provide a reference for laboratories to improve their testing ability to ensure that they obtain satisfactory results and pass the proficiency testing successfully.Keywords: mold; yeast; proficiency testing; quality control能力验证是利用实验室间比对，按照预先制定的准则评价参加者的能力，是评价实验室技术能力的有效手段，是实验室通过外部措施对其内部质量控制方法进行补充的一种重要手段，是确保实验室质量管理体系持续改进的有效措施之一[1]。
食品中的微生物检验方法
食品中的微生物检验方法食品安全一直是人们关心的重要问题，各种微生物的存在往往对食品的质量和安全性产生着巨大的影响。
因此，对食品中微生物的检验方法显得尤为重要。
本文将介绍一些常用的食品微生物检验方法，以及它们的原理和应用。
一、总菌落计数法总菌落计数法是评估食品中微生物总数的一种常用方法。
该方法通过将食品样品制备成适当的稀释液，在特定的寒暖培养条件下培养菌落生长，进而通过数目的计数来评估食品样品中的总菌落数。
这种方法适用于各种食品，如肉类、乳制品、水果蔬菜等。
二、大肠杆菌检测法大肠杆菌是一种常见的致病菌，其存在于食品中可能对人体健康构成较大的威胁。
因此，检测食品中的大肠杆菌也是一项重要的微生物检验方法。
该方法通常使用大肠杆菌培养基，将食品样品接种于培养基上，经过一段时间的培养和生长后，观察培养基上是否有大肠杆菌的产生。
三、霉菌和酵母菌检测法霉菌和酵母菌是常见的食品污染源，它们能够在食品中迅速繁殖和生长，不仅会导致食品变质，还可能产生一些毒素，对人体健康造成威胁。
因此，对食品中的霉菌和酵母菌进行检测也是非常重要的。
该方法通常使用含有特定培养基的琼脂糖平板，将食品样品沉积于琼脂糖平板上，经过一段时间的培养和生长后，观察平板上是否有霉菌和酵母菌的产生。
四、PCR法PCR（聚合酶链反应）是一种常用的分子生物学方法，也可以应用于食品微生物检验。
该方法通过选择适当的引物，将食品样品中的微生物DNA扩增，进行定性和定量分析。
PCR法具有快速、灵敏的优势，能够准确检测食品中微生物的存在和种类，进而评估食品的安全性。
以上介绍的是一些常用的食品微生物检验方法，它们可以帮助我们了解食品中微生物的质量和安全状况。
然而，需要注意的是，不同的食品样品可能需要不同的检验方法，因此在实际操作中需要根据具体情况选择合适的检验方法。
此外，检验过程中的卫生条件、培养基的质量等因素也会对结果产生影响，因此在进行微生物检验时，务必严格控制各项操作条件，以保证检验结果的准确性和可靠性。
06-食品中酵母菌、霉菌测定
知识点：果汁中酵母菌、霉菌测定情境：微生物检测技术任务：酵母菌、霉菌测定课程：食品微生物技术酵母菌、霉菌测定原理一、霉菌、酵母菌什么叫霉菌、酵母菌？❞霉菌：为丝状真菌的统称。
凡是在营养基质上能形成绒毛状、网状或絮状菌丝体的真菌（除少数外），统称为霉菌。
❞酵母菌：一些单细胞真菌。
一种肉眼看不见的微小单细胞微生物，能将糖发酵成酒精和二氧化碳，分布于整个自然界，是一种典型的兼性厌氧微生物，在有氧和无氧条件下都能够存活，是一种天然发酵剂。
二、霉菌、酵母菌测定原理❞霉菌和酵母菌菌数的测定是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或1mL检样中所含的霉菌和酵母菌菌落数（粮食样品是指1g粮食表面的霉菌总数）。
❞霉菌和酵母数主要作为判定食品被污染程度的标志，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。
本方法适用于所有食品。
酵母菌、霉菌测定原理与菌落总数测定类似，选用平板菌落计数法。
平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
酵母菌、霉菌测定步骤1.液体样品稀释以无菌吸管吸取25 mL样品至盛有225mL无菌稀释液（蒸馏水或生理盐水或磷酸盐缓冲液）的适宜容器内（可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）或其他无菌均质袋中，充分振摇或用拍击式均质器拍打1 min～2min，制成1:10 的样品匀液。
2.梯度稀释❞取1 mL 1:10 样品匀液注入含有9 mL 无菌稀释液的试管中，另换一支1 mL 无菌吸管反复吹吸，或在漩涡混合器上混匀，此液为1:100 的样品匀液。
❞按上述操作程序，制备10 倍系列稀释样品匀液。
每递增稀释一次，换用1 次1 mL 无菌吸管或吸头。
四、倒平板❞根据对样品污染状况的估计，选择2 个～3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10 倍递增稀释时，吸取1 mL 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。
4789.15-2010霉菌酵母注意事项图文详解
GB 4789.15-2010 食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数Enumeration of moulds and yeasts新标准的修改内容及适用范围•本标准与GB/T 4789.15‐2003 相比，主要修改如下：•——修改了范围；•——修改了检验程序和操作步骤；•——修改了培养基和试剂；•——修改了设备和材料；•——修改了附录。
•本标准的附录A 为规范性附录，附录B 为资料性附录。
适用范围•本标准规定了食品中霉菌和酵母菌（moulds and yeasts）的计数方法。
•本标准适用于各类食品中霉菌和酵母菌的计数。
设备和材料• 2.1 冰箱：2 ℃～5 ℃。
• 2.2 恒温培养箱：28 ℃±1 ℃。
• 2.3 均质器。
• 2.4 恒温振荡器。
• 2.5 显微镜：10×～100×。
• 2.6 电子天平：感量0.1 g。
• 2.7 无菌锥形瓶:容量500 mL、250 mL。
• 2.8 无菌广口瓶：500 mL。
• 2.9 无菌吸管：1 mL(具0.01 mL 刻度)、10 mL(具0.1 mL 刻度)。
• 2.10 无菌平皿：直径90 mm。
• 2.11 无菌试管: 10 mm×75 mm。
• 2.12 无菌牛皮纸袋、塑料袋。
培养基和试剂• 3.1 马铃薯‐葡萄糖‐琼脂培养基：见附录A 中A.1。
• 3.2 孟加拉红培养基：见附录A 中A.2。
检验程序操作步骤‐样品的稀释• 5.1.1 固体和半固体样品：称取25 g 样品至盛有225 mL 灭菌蒸馏水的锥形瓶中，充分振摇，即为1:10稀释液。
或放入盛有225 mL 无菌蒸馏水的均质袋中，用拍击式均质器拍打2min，制成1:10 的样品匀液。
• 5.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品至盛有225 mL 无菌蒸馏水的锥形瓶（可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液。
食品中霉菌和酵母菌测定的标准操作规程
1目的标准食品中霉菌和酵母菌测定的标准操作规程。
2范围本标准规定了食品中霉菌和酵母菌〔moulds and yeasts〕的计数方法。
本标准适用于各类食品中霉菌和酵母菌的计数。
3责任质量部组织制订、化验室负责实施。
4内容4.1 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：4.1.1 冰箱：2 ℃～5 ℃。
4.1.2 恒温培养箱： 28 ℃±1 ℃。
4.1.3 均质器。
4.1.4 恒温振荡器。
4.1.5 显微镜：10×～100×。
4.1.6 电子天平：感量0.1 g。
4.1.7 无菌锥形瓶:容量500 mL、250 mL。
4.1.8 无菌广口瓶：500 mL。
4.1.9 无菌吸管：1 mL(具0.01 mL 刻度)、10 mL(具0.1 mL 刻度)。
4.1.10 无菌平皿：直径90 mm。
4.1.11 无菌试管: 10 mm×75 mm。
4.1.12 无菌牛皮纸袋、塑料袋。
4.2 培养基和试剂4.2.1 马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基：见附录A 中A.1。
4.2.2 孟加拉红培养基：见附录A 中A.2。
4.3检验程序霉菌和酵母计数的检验程序见图1。
图 1 霉菌和酵母计数的检验程序4.4操作步骤4.4.1 样品的稀释4.4.1.1 固体和半固体样品：称取25 g 样品至盛有225 mL 灭菌蒸馏水的锥形瓶中，充分振摇，即为1:10稀释液。
或放入盛有225 mL 无菌蒸馏水的均质袋中，用拍击式均质器拍打2min，制成1:10 的样品匀液。
4.4.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品至盛有225 mL 无菌蒸馏水的锥形瓶〔可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠〕中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液。
4.4.1.3 取1 mL 1:10 稀释液注入含有9 mL 无菌水的试管中, 另换一支1 mL 无菌吸管反复吹吸,此液为1:100 稀释液。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
食品安全国家标准
食品微生物学检验霉菌和酵母计数1 范围
本标准规定了食品中霉菌和酵母（moulds and yeasts）的计数方法。
本标准适用于各类食品中霉菌和酵母的计数。
2 设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：
2.1 培养箱：28 ℃±1 ℃。
2.2拍击式均质器及均质袋。
2.3 电子天平：感量0.1 g。
2.4 无菌锥形瓶：容量500 mL。
2.5 无菌吸管：1 mL(具0.01 mL刻度)、10 mL(具0.1 mL刻度)。
2.6 无菌试管: 18 mm×180 mm。
2.7 旋涡混合仪。
2.8 无菌平皿：直径90 mm。
2.9 恒温水浴箱：46 ℃±1 ℃。
2.10显微镜：10×。
3 培养基和试剂
3.1 生理盐水：见附录A中A.1。
3.2 马铃薯葡萄糖琼脂：见附录A中A.2。
3.3孟加拉红琼脂：见附录A中A.3。
4 检验程序
霉菌和酵母计数的检验程序见图1。
图1 霉菌和酵母计数的检验程序
5 操作步骤
5.1 样品的稀释
5.1.1 固体和半固体样品：称取25 g样品，加入225 mL无菌稀释液（水或生理盐水），充分振摇，或用拍击式均质器拍打2 min，制成1:10的样品匀液。
5.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL样品至盛有225 mL无菌稀释液（水或生理盐水）的锥形瓶（可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）或无菌均质袋中，充分振摇或用拍击式均质器拍打2 min，制成1:10的样品匀液。
5.1.3 取1 mL 1:10样品匀液注入含有9 mL无菌稀释液的试管中，另换一支1 mL无菌吸管反复吹吸，或在旋涡混合仪上混匀，此液为1:100的样品匀液。
5.1.4 按5.1.3操作程序，制备10倍递增系列稀释样品匀液。
每递增稀释一次，换用1支1 mL无菌吸管。
5.1.5 根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释的同时，每个稀释度分别吸取1 mL样品匀液于2个无菌平皿内。
同时分别取1 mL 无菌稀释液加入2个无菌平皿作空白对照。
5.1.6 及时将20 mL～25 mL冷却至46 ℃的马铃薯葡萄糖琼脂或孟加拉红琼脂（可放置于46 ℃±1 ℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。
置水平台面待培养基完全凝固。
5.2 培养
琼脂凝固后，正置平板，置28 ℃±1 ℃培养箱中培养，观察并记录，培养至第5 d的结果。
5.3 菌落计数
用肉眼观察，必要时可用放大镜或低倍镜，记录稀释倍数和相应的霉菌和酵母菌落数。
以菌落形成单位（colony-forming units，CFU）表示。
选取菌落数在10 CFU～150 CFU的平板，根据菌落形态分别计数霉菌和酵母。
霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为菌落蔓延。
6 结果与报告
6.1 结果
6.1.1 计算同一稀释度的两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数。
6.1.2 若有两个稀释度平板上菌落数均在10 CFU～150 CFU之间，则按照GB 4789.2的相应规定进行计算。
6.1.3若所有平板上菌落数均大于150 CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
6.1.4若所有平板上菌落数均小于10 CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
6.1.5若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。
6.2 报告
6.2.1 菌落数按“四舍五入”原则修约。
菌落数在10以内时，采用一位有效数字报告；菌落数在10～100之间时，采用两位有效数字报告。
6.2.2菌落数大于或等于100时，前第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位数来表示结果；也可用10的指数形式来表示，此时也按“四舍五入”原则修约，采用两位有效数字。
6.2.3若空白对照平板上有菌落出现，则此次检测结果无效。
6.2.4 称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告，报告或分别报告霉菌和/或酵母数。