(整理)小肽检测方法

肽含量检测方法—三氯乙酸沉淀法（TCA-NSI）（可溶解小分子含氮物质定量测定）

一．

二．关于富力肽中小肽含量的确定：

1．1 检测方法：三氯乙酸氮溶指数（TCA—NSI）

1．2 原理：

三氯乙酸是一种蛋白质沉淀剂，它可以沉定蛋白质和较长的肽段。随着酶解反应的进行，蛋白质的肽链逐渐被切成大小不等的片段，三氯乙酸氮溶指数提高。因此，三氯乙酸氮溶指数可以准确地反应蛋白质的酶解情况，溶解指数越高，表明小肽的含量越高。

1．3 方法：

见标准。

1．4 富力肽中小肽含量的确定：

采用上述方法进行检测，可以确定富力肽中的小肽含量。

在富力肽的全部蛋白类物质中小肽的含量为≥65%。

在富力肽的水溶性蛋白类物质中小肽的含量为≥98%。三．关于富力肽中小肽分子量谱的确定：

2．1 检测方法：基质辅助激光解吸附飞行时间质谱

（MALDI—TOF—Mass Spectroscopy）

2．2 原理：

质谱是肽和蛋白质分析的重要工具，这主要归功于一些软电离技术的应用，其中最具代表性的即基质辅助激光解吸附电离（MALDI）。该项技术由于方便、灵敏度高，已成为蛋白质酶解产物中肽段质量谱分析（Peptide Mass Fingerprinting）的最有效的工具。

MALDI—TOF—MS采用有紫外吸收的小分子晶体为基质，将待测物与基质结合。然后用一定波长的激光照射，聚集的能量加热晶体，使基质晶体升华而将非挥发性的待测物释放到气相中。MALDI主要生成待测物的单电荷离子，送入TOF（Time of Flight）分析仪，测得离子从起始谱到探测端的飞行时间，根据飞行时间的长短确定分子量的大小，从而得到一张完整的蛋白质酶解产物的肽段分子量图谱。

2．3 富力肽中小肽分子量的确定：

MALDI—TOF—MS的检测结果表明，在富力肽的水溶性蛋白类物质中，富含2~6个氨基酸的小肽。肽段的分子量区间为：分子量（Dalton）摩尔百分含量

0~160 3%

161~650 87% 651~1000 8% > 1000 2%