植物生理学实验 叶绿体色素的提取、分离

三、实验步骤
1. 叶绿体色素的提取 （1）称取菠菜新鲜叶片2g，洗净，擦干，去掉中脉剪碎， 放入研钵中。 （2）研钵中加2～3ml 95％乙醇，研磨至糊状，再加 10～15ml 95％乙醇，提取35min，上清液过滤于三角 瓶中（试管中）。 （3）在光源下观察荧光现象：在直射光下观察溶液的颜 色，比较透射光及反射光下的颜色有何不同？试述其 原因。
提取液的分离：因吸附剂对不同物质的吸附力不同，当用适 当的溶剂推动时，混合物中各种成分在两相（固定相和流 动相）间具有不同的分配系数，所以移动速度不同，经过 一定时间后，可将各种色素分开。
二、材料、仪器设备及试剂
（一）材料：常春藤叶 （二）仪器设备： 研钵；漏斗；三角瓶或试管；剪刀；滴管；玻棒；圆形滤纸 （直径11cm）：酒精灯 （三）试剂： 95％乙醇；石英砂；盐酸；醋酸铜 推动剂：按石油醚；丙酮：苯（10:2:1）比例配 制（V／V）。
制作绿色标本方法：
用50%醋酸溶液配制的饱 和醋酸铜溶液浸渍植物标 本(处理时可加热)
当溶液变褐 色后，投入 醋酸铜粉末， 微微加热， 形成铜代叶 绿素
0.1g叶+10ml混合液浸提
铜代叶绿素反应
卟啉环中的镁可被H+所 置换。当为H＋所置换后，即 形成褐色的去镁叶绿素。 去镁叶绿素中的H＋再被 Cu2+取代，就形成铜代叶绿 素，颜色比原来的叶绿素更 鲜艳稳定。 根据这一原理可用醋酸 铜处理来保存绿色标本。
向叶绿素溶液 中放入两滴5 ％盐酸摇匀， 溶液颜色的变 为褐色，形成 去镁叶绿素。
实验6 叶绿体色素的提取、分离
Fra Baidu bibliotek 实验目的

了解叶绿体色素提取与分离的原理，掌握叶绿 体色素提取方法，学会纸层析法分离色素。观 察叶绿素的荧光现象，观察铜代反应现象。
一、原理
叶绿体中含有绿色素（包括叶绿素a和叶绿素b）和黄色素 （包括胡萝卜素和叶黄素）两大类。
这两类色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇、丙 酮等有机溶剂提取。
3 铜代反应
取上述色素乙醇提取液少许于试管中，1 滴1滴加入浓盐酸，观察颜色变化。然后加醋 酸铜晶体少许，酒精灯上慢慢加热溶液，观察 色素颜色的变化。
叶绿素的提取
叶绿素是一种酯，因此不 溶于水。通常用含有少量水的 有机溶剂如80％的丙酮，或者 95%乙醇，或丙酮∶乙醇∶水 ＝4.5∶4.5∶1的混合液来提 取叶片中的叶绿素，用于测定 叶绿素含量。 之所以要用含 有水的有机溶剂提取叶绿素， 这是因为叶绿素与蛋白质结合 牢，需要经过水解作用才能被 提取出来。 提取方法 研磨法 浸提法 研磨法提取 光合色素
2. 叶绿体色素的分离 （1）取圆形定性滤纸一张（直径11cm），用毛细滴管 吸取或玻棒蘸取乙醇叶绿体色素提取液点于滤纸中心， 使色素扩散，风干后，再重复操作数次。 （2）用吸管吸取推动剂滴在滤纸中间，当推动剂前沿接 近滤纸边缘时，即可看到分离的各种色素。风干滤纸， 剪取一条分开的色素带，标明各种色素的位置及颜色， 作为结果贴于实验报告上。