HE Staining

苏木素-伊红染色（HE）

【染色原理】

苏木素染液中带正电荷的蓝色色精与细胞核中带负电荷的脱氧核糖核苷通过

正、负电荷的极性吸附而守成染色；伊红是带负电荷的酸性染料，通过渗透或

弥散作用而使组织着色。

【组织固定与切片】

4%甲醛固定，石蜡切片厚度4~6μm。

【染色用具】

常规染色用具一套：染色皿或染色缸、刻字笔、标签、树脂胶、盖玻片、鸭嘴

镊、绸布或纱布。滴管数支。

【试剂配制】

1. Harris苏木素液苏木素

2.5g，无水乙醇25ml，钾明矾50g，蒸馏水

500ml，氧化汞1.25g，乙酸20ml。

将苏木素溶于乙醇（加热）后加入预先已加热溶解明矾的蒸馏水中，煮沸

1~2min，改用小火加热，慢慢加入氧化汞（注意防止产生大量气泡和溶液溅

出）再煮沸2min后立即浸于冷水中，冷却后加入乙酸，过滤后使用。

2. 伊红液

（1) 水溶性伊红染液：伊红0.5g，蒸馏水100ml。

（2）醇溶性伊红染液：伊红0.5~1g，80%~95%乙醇100ml。

3. 分化液: 盐酸0.5~1ml，80%乙醇100ml。

4. 返蓝液: 氨水1ml，蒸馏水100ml。

5. 各级乙醇、二甲苯

【注意事项】

1. 石蜡切片在脱蜡前要烘烤使组织与切片粘贴。烘烤温度50℃，时间30min 或30℃，24h。

2. 脱蜡要彻底，应定期更换脱蜡液。

3. 分化的时间要恰当掌握，可镜下观察着色情况。

4. 透明要充分。

【染色步骤】

1. 石蜡切片二甲苯Ⅰ脱蜡10~15min。

2. 二甲苯Ⅱ脱蜡10~15min。

3. 无水乙醇5min。

4. 95%乙醇5min。

5. 80%乙醇5min。

6. 自来水冲洗1min。

7. 蒸馏水洗1min。

8. 苏木素染液5~15min。

9. 自来水冲洗1~5min。

10. 化液分化数秒至数分钟。

11. 自来水冲洗1~3min。

12. 返蓝液返蓝30s~1min。

13. 自来水冲洗。

14. 伊红液5~10min。

15. 自来水冲洗。

16. 80%乙醇脱水30s。

17. 95%乙醇Ⅰ脱水1min。

18. 95%乙醇Ⅱ脱水1~3min。

19. 无水乙醇Ⅰ脱水2~5min。

20. 无水乙醇Ⅱ脱水2~5min。

21. 二甲苯Ⅰ透明2~5min。

22. 二甲苯Ⅱ透明2~5min。

23. 中性树胶封片。

【结果】

细胞核呈蓝色，软骨组织、钙盐呈深蓝色，黏液呈灰蓝色，细胞质呈粉红色，胶原纤维呈淡粉色，弹力纤维呈亮粉红色，红细胞呈桔红色。