凝血四项检查

凝血四项检查

APTT

【检验原理】

37℃下，在待检血浆中加入APTT试剂，即以脑磷脂作为血小板的替代物加入贫血小板血浆中，在Ca2+的参与下，使纤维蛋白原转变为纤维蛋白凝块，测定凝固所需要的时间，即为待测血浆的APTT。

【样本制备】

1.采血与抗凝：采血后立即与抗凝剂充分混合，血液与抗凝剂（0.109mmol/L枸橼酸钠）比例为9：1。

2.离心：抗凝血以2500xg离心10分钟，用微量移液器吸出待测血浆。

3.保存：血浆样本应立即测试。22～24℃条件下保存，应2小时内测定，2～4℃条件下保存，应3小时内测定。

【检验方法】

1.仪器预热：开机，按照仪器使用说明书预热，达到要求稳定温度，进入正常工作状态。

2.试剂配制：严格按照标示量加入蒸馏水复溶试剂，将试剂瓶直立在18～25℃中静置30分钟，使用前轻轻旋转试剂瓶至完全溶解，勿剧烈振摇。氯化钙用前应放入仪器37℃预温槽。

3.正常质控血浆制备：按照质控血浆试剂盒使用说明书。

4.测定：以半自动高性能血凝仪为例：

①将测试杯置于预温槽中，用加珠器在每个测试杯中放一粒钢珠。

②试剂放相应位置，37℃预温，需混匀放搅拌子。

③将待测血浆100μl（患畜或者质控血浆）加入测试杯，再将APTT试剂100μl加入测试杯，混匀，启动预温时间计时，37℃，5分钟，将测试杯从预温槽移至测试槽。

④使用联动加样器加入氯化钙100μl，仪器自动启动计时器开始计时并自动打印结果。

【正常值参考范围】

犬：10.0～18.0秒，建议各实验室建立自己的正常值参考范围。

【检验结果解释】

APTT延长见于ＦⅧ、ＦⅨ、ＦⅪ血浆水平减低。APTT缩短见于高凝状态、血栓性疾病。口服避孕药会影响检测结果。

PT

【检验原理】

在待检血浆中加入过量的组织凝血活酶和钙离子，使凝血酶原转变为凝血酶，凝血酶使纤维蛋白原转变为纤维蛋白凝块，测定凝固所需要的时间，即为待测血浆的凝血酶原时间（PT）。PT与血浆中的外源性凝血因子含量呈负相关。

【样本制备】

1.采血与抗凝：采血后立即与抗凝剂充分混合，血液与抗凝剂（0.109mmol/L枸橼酸钠）比例为9：1。草酸钠、EDTA、肝素不适于作抗凝剂。

2.离心：抗凝血以2500xg离心10分钟。

3.保存：血浆样本应立即测试。22～24℃条件下保存，应2小时内测定，2～4℃条件下保存，应3小时内测定。如不能立即测试，应采样后60分钟内分离血浆。

【检验方法】

1.仪器预热：开机，按照仪器使用说明书预热，进入正常工作状态。

2.试剂配制：严格按照标示量加入蒸馏水复溶试剂，将试剂瓶直立在室温中静置30分钟，使用前轻轻旋转试剂瓶至完全溶解，勿剧烈振摇。

3.正常质控血浆制备：按照质控血浆试剂盒使用说明书。

4.测定：以半自动高性能血凝仪为例：

①将测试杯置于预温槽中，用加珠器在每个测试杯中放一粒钢珠。

②试剂放相应位置，37︒C预温，混匀需放搅拌子。

③将待测血浆100μl（患畜或者质控血浆）加入测试杯。

④启动预温时间计时，37℃，3分钟，将测试杯从预温槽中移至测试槽中。

⑤使用联动加样器加入试剂100μl，仪器自动启动计时器开始计时进行测试。记录结果。

【正常值参考范围】

犬：5.0～15.0秒，建议各实验室建立自己的正常值参考范围。质量控制程序：实验室应建立质量控制程序，使用质控血浆测定。

FIB

【检验原理】

在待检稀释血浆中加入高浓度的凝血酶，使纤维蛋白原转变为纤维蛋白凝块，测定凝固所需要的时间，在以参比血浆制作的标准曲线上查得待测血浆的纤维蛋白原浓度，即为待测血浆的纤维蛋白原（FIB）含量。

【样本制备】

1.采血与抗凝：采血后立即与抗凝剂充分混合，血液与抗凝剂（0.109mmol/L枸橼酸钠）比例为9：1。

2.离心：抗凝血以2500xg离心10分钟。

3.稀释：用咪唑缓冲液按照1：5比例稀释血浆。

4.保存：血浆样本应立即测试。22～24℃条件下保存，应2小时内测定，2～4℃条件下保存，应3小时内测定。

【检验方法】

1.仪器预热：开机，按照仪器使用说明书预热，进入正常工作状态。

2.试剂配制：严格按照标示量加入蒸馏水复溶试剂，并放室温静置30分钟，使用前轻轻旋转试剂瓶至完全溶解，勿剧烈振摇。

3.定标血浆制备：以蒸馏水复溶血浆，加入量标识在试剂瓶上。

正常质控血浆制备：按照质控血浆试剂盒使用说明书。

4.FIB标准曲线制备：以半自动血凝仪为例：

①按下表稀释标准血浆（假设FIB标定液浓度2.57g/L）：

②每份稀释血浆宜重复测试4次（至少测定2次），求秒数均值。

③进入FIB标定菜单，选录入，将不同稀释度血浆凝固时间均值和FIB浓度输入仪器。

④选计算，按2次确认，标准曲线输入完成并打印。则检测样本时，同时报告秒数和g/L。更换试剂批号时应重做标准曲线。

5.测定：以半自动高性能血凝仪为例：

①将测试杯置于预温槽中，用加珠器在测试杯中放一粒钢珠。

②将5倍稀释血浆100μl（患畜或者质控血浆）加入测试杯，37︒C预温3分钟，将测试杯移至测试槽。

③用联动加样器加入已预温的凝血酶试剂100 l，启动计时器，仪器记录时间并自动打印结果。

【正常值参考范围】

犬：4.0～14.0秒。建议各实验室建立自己的正常值参考范围。

TT

【检验原理】

在待检血浆中加入标定的凝血酶，使纤维蛋白原转变为纤维蛋白凝块，测定凝固所需要的时间，即为待测血浆的凝血酶时间（TT）。

【样本制备】