显微镜直接计数法

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《显微镜直接计数法》课件

计数微生物的数量。
数据处理
根据观察到的微生物数量，进行数据处理和分析，推算样品中微生物
的数量。
03
显微镜直接计数法的应用
在生物学中的应用
微生物计数
显微镜直接计数法常用于微生物计数，如细菌、酵母和原生动物等。
细胞计数
在细胞生物学研究中，显微镜直接计数法可用于细胞计数，如血细胞、组织细胞等。
定义与特点
定义
显微镜直接计数法是通过显微镜直接观察微生物的数量并进行计数的方法。
特点
该方法具有操作简便、快速、准确等优点，但也存在一定的局限性，如需要经验丰富的操作人员和较高的样品浓度。
02
显微镜直接计数法的原理
原理概述
显微镜直接计数法是一种利用显微镜直接观察和计数微生物数量
的方法。
对观察者要求较高
显微镜直接计数法需要观察者具备较高的专业知识和技能，否则容易出现误差和误判。
05
显微镜直接计数法的改进和发展趋势
பைடு நூலகம்
技术改进
自动化技术
通过引入自动化技术，减少人工操作，提高计数准确性和效率。
高分辨率成像
采用高分辨率成像技术，提高显微镜的分辨率和清晰度，使计数
更加准确。
图像处理算法
显微镜直接计数法可以直接观察样本，能够直观地看到微生物的数量和形态，有助于快速判断和识别。
显微镜直接计数法通过直接观察样本，能够较为准确地计算出微生物的数量，避免了间接计数法的误差。
灵活性
操作简便
显微镜直接计数法可以根据需要选择不同的观察区域和样本，灵活性较高，适用于多种不同类型的微生物计数。
涂片法
将样品涂抹在载玻片上，利用显微镜观察和计数微生物的数量。

显微镜直接计数法

实验九显微镜直接计数法实验目的1．明确血细胞计数板计数的原理。

2．掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。

实验内容1．酵母菌细胞数的测定。

2．酵母菌出芽率的测定。

实验原理显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。

图9-1 血球计数板构造（一）图9-2血球计数板构造（二）1 血细胞计数板；2盖玻片；3计数室用血细胞计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生物计数方法。

血球计数板是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台；中间较宽的平台又被一短槽隔成两半，每一边的平台上各自刻有一个方格网，每个方格网共分为九个大格，中间的大方格即为计数室。

血细胞计数板构造如下图。

计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格；另一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格，但无论是哪一种规格的计数板，每一个大方格中的小方格都是400个。

每一个大方格边长为1mm，则每一个大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm3。

计数时，通常数五个中方格的总菌数，然后求得每个中方格的平均数，再乘上25或16，就得出一个大方格中的总菌数，然后再换算成1ml菌液中的总菌数。

实验器材酿酒酵母血细胞计数平板，显微镜，盖玻片，无菌毛细管等。

实验步骤一、酵母菌细胞数的测定1．菌悬液制备：以无菌生理盐水将酿酒酵母制成浓度适当的菌悬液。

2．镜检计数室：在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。

若有污物，则需清洗，吹干后才能进行计数。

3．加样品：将清洁干燥的血细胞计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细滴管将摇匀的酿酒酵母菌悬液由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，一般计数室均能充满菌液。

4．显微镜计数：加样后静止5min，然后将血细胞计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。

活菌数的测定方法

活菌数的测定方法
一、直接计数法：
1.显微镜计数法：将样品通过适当稀释后涂布在平板上，然后在显微
镜下直接观察，将显示出的活菌数量进行计数。

2.罗氏计数室法：将适当稀释后的样品放在罗氏计数室中，通过显微
镜下观察菌落数并计数，然后根据稀释倍数计算活菌数。

3.涂布法：将稀释后的样品均匀涂布在琼脂平板上，在适宜温度下培
养一段时间，然后观察并计算菌落的数量。

二、间接计数法：
1.白细胞计数法：用白细胞计数板进行白细胞计数，由于白细胞数与
活菌数有一定的相关性，可以通过白细胞计数的结果进行推算。

2.生物标志物法：通过检测样品中特定的生物标志物，如ATP、葡萄
糖等，间接反映出活菌的数量。

3.代谢产物测定法：通过测定样品中的代谢产物（如氧气消耗量、二
氧化碳产生量等），间接推测出活菌的数量。

以上是常见的活菌数测定方法，不同的方法适用于不同的实际应用场景。

在选择测定方法时，需要考虑样品类型、检测目的、测定时间和精确
度等因素。

另外，为了提高测定结果的准确性，还需要严格控制实验条件，如温度、湿度、培养时间等。

最后，需要注意的是，活菌数的测定方法只能提供大致数量，无法直
接得到准确的数值。

因此，在进行活菌数测定时，需要结合其他的检测方
法和数据进行综合分析。

显微镜直接计数法实验报告

显微镜直接计数法实验报告实验报告：显微镜直接计数法一、实验目的本实验旨在通过显微镜直接计数法，测定微生物样品中细胞的数量，以了解其生长和繁殖情况，为生物工程、生物医学、环境科学等领域的研究提供依据。

二、实验原理显微镜直接计数法是一种通过显微镜直接观察并计数样品中微生物数量的方法。

该方法具有操作简便、快速等优点，适用于测定样品中微生物的数量和生长情况。

通过显微镜直接计数法，可以观察到微生物的形态、大小、分布等情况，从而对其生长环境、生长状况等进行评估。

三、实验步骤1.样品制备：将待测样品进行适当稀释，使微生物细胞分散均匀。

2.显微镜观察：将样品滴加到显微镜载玻片上，用盖玻片固定，调整显微镜焦距，观察并计数微生物的数量。

3.计数方法：采用直接计数法，即直接观察并计数样品中的微生物数量。

对于压在盖玻片下的细胞，可以通过轻轻移动盖玻片进行观察和计数。

4.数据记录：记录每个样品中微生物的数量，并计算平均值。

同时记录观察到的细胞形态、大小、分布等情况。

5.结果分析：根据实验数据，分析微生物的生长情况、繁殖速度等。

四、实验结果及数据分析1.实验数据（见附表1）附表1：显微镜直接计数法实验数据2.数据分析通过附表1的数据，我们可以得出以下结论：（1）样品A中微生物的数量较少，而样品B、C、D中微生物的数量较多。

这表明不同样品中微生物的数量存在差异。

（2）在相同稀释倍数下，观察到的细胞数越多，计数结果越准确。

因此，选择合适的稀释倍数对于准确测定微生物数量至关重要。

在本实验中，选择100倍和1000倍作为稀释倍数，可以较为准确地测定微生物数量。

（3）通过对比不同样品在同一稀释倍数下的计数结果，可以得出不同样品中微生物的生长情况。

例如，样品B和D在1000倍稀释下的计数结果较高，说明这两个样品中微生物的生长情况较好。

而样品A和C在100倍稀释下的计数结果较低，说明这两个样品中微生物的生长情况较差。

（4）根据实验数据，可以进一步分析微生物的生长规律和繁殖速度。

显微镜直接计数法原理

显微镜直接计数法原理
显微镜直接计数法是一种用于测定溶液中微粒数量的方法，其原理是通过显微镜观察溶液中的微粒并进行直接计数。

这种方法适用于微粒浓度较低的溶液。

在进行显微镜直接计数之前，需要将待测溶液适当稀释，以保证在显微镜下观察到的微粒较为分散，不会产生严重的重叠。

然后，取少量稀释好的溶液放置在显微镜下的玻片上，利用显微镜进行观察和计数。

在显微镜观察过程中，可以使用目视计数法或者计数仪来进行微粒数量的计数。

目视计数法是通过直接观察显微镜视野中的微粒数量来进行计数，但这种方法需要操作人员具备一定的经验和技巧，否则容易产生误差。

计数仪则是通过将显微镜和计数器结合在一起，使用计数仪的软件进行自动计数，可以提高计数的准确性和效率。

在进行显微镜直接计数时，需要注意减小观察误差。

例如，应该避免在显微镜下对颗粒悬浮物的快速移动进行计数，应尽量保持视野稳定。

此外，还要随机选择计数视野，以确保样本的代表性。

显微镜直接计数法不仅可以用于测定溶液中的微粒数量，还可以用于观察微粒的形状、大小和分布情况。

但是，由于此方法需要借助显微镜进行观察，操作相对繁琐，且对于微粒浓度较高的溶液不适用。

因此，在实际应用中，常常需要结合其他测量方法来进行微粒数量的确定，以提高准确性和可靠性。

显微镜的直接计数和细菌大小测定-精选文档

四、操作方法
(一)酵母菌大小测定的操作方法 1.测微尺的构造和使用方法 (1)目镜测微尺的构造目镜测微尺是一块圆形玻片，其中央刻有精确的刻度，通常是将5mm划分为50 格，实际每格等于100μm。刻度的大小是随使用的接目镜和接物镜的放大倍数而改变，用前必须用物镜测微尺来标定，如图。 (2)物镜测微尺的构造物镜测微尺为一块特制的载玻片，其中央有一小圆圈。圆圈内刻有分度，将长1mm的直线等分为100小格，每小格等于10μm，如图。
五、实验报告及思考题
1、微生物大小测定实验结果
（1）将目镜测微尺校正结果填入下表：
接物镜接物镜倍数目镜测微尺格镜台测微尺格
数
数
低倍镜
高倍镜
油镜
目镜测微尺每格代表的长度(μm)
接目镜的放大倍数________
（2）酵母细胞大小的测量结果：
微生物名称
目镜测微尺每格代表的长度
/μm
宽
目镜测微尺格数
2.目镜测微尺的标定
(1)取下接目镜，旋下目镜上的目透镜，将目镜测微尺放人接目镜的中隔板上，使有刻度的一面朝下，再旋上目透镜，并装入镜筒内。 (2)将物镜测微尺置于显微镜的载物台上，使有刻度的一面朝上，同观察标本一样，使具有刻度的小圆圈位于视野中央。 (3)先用低倍镜观察，对准焦距，待看清物镜测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺的刻度与物镜测微尺的刻度相平行，并使两尺的左边第一条线相重合，再向右寻找两尺的另外一条重合线。如图 (4)记录二条重合线间的目镜测微尺的格数和物镜测微尺的格数。
4.酵母菌大小的测定
(1)取下镜台测微尺，换上酵母菌水浸制片。
(2)测量菌体的长度和宽度各占目镜测微尺几格，然后换算出菌体的实际长度。

细胞计数方法有哪些

细胞计数方法有哪些细胞计数对于细胞生物学的研究至关重要。

它可以用于许多不同的应用，例如研究细胞生长、分裂、死亡以及受到不同条件或处理的影响。

在本篇回答中，我将介绍一些常见的细胞计数方法，以及它们的优缺点和适用范围。

1. 显微镜计数法：显微镜计数法是最基本、最直观的细胞计数方法之一。

通过显微镜观察细胞的数量和形态，然后进行统计分析。

这种方法适用于讲究精确度的研究，特别是对于较大和集群生长的细胞，如哺乳动物细胞。

优点是分析过程直观，能够同时观察细胞的形态和数量。

缺点是操作耗时耗力，且可能存在人为误差。

2. 直接计数法：直接计数法是一种快速、简单的方法，适用于细胞密度较低的情况。

它基于将细胞悬浮液均匀分布在已知面积的计数板上，并计算每个小方格内的细胞数量，然后乘以补偿系数得到总细胞数。

这种方法适用于细胞密度在10^2至10^4个/ml之间的情况。

优点是操作简单，且不需要特殊设备，缺点是结果的准确性受到细胞的聚集性和悬浮液的均匀性的影响。

3. 懒汉计数法：懒汉计数法基于细胞在给定时间间隔内通过视图的个数来估计细胞的数量。

对于细胞移动速度较快的情况，这种方法特别适用。

它通过视图的帧数和平均细胞速度来计算细胞的数量。

这种方法适用于类似高速运动的单细胞生物或进化学研究。

优点是操作简单，结果快速。

缺点是对细胞移动速度的变化比较敏感，需要校正因素以提高准确性。

4. 溶解度计数法：溶解度计数法是一种通过测定细胞的光学密度来估计细胞数量的方法。

它基于细胞与显微镜下的颜色反射率之间的关系，通过读取吸光度来计算细胞数量。

这种方法适用于大批量细胞的快速计数，尤其是在医学和工业应用中。

优点是操作简单，结果快速，缺点是结果的准确性受到光条件和细胞的固定性的影响。

5. 流式细胞计数法：流式细胞计数法是一种利用流式细胞仪进行细胞计数的方法。

它基于细胞通过光束射流系统时，通过检测细胞在流式细胞仪的指定光学路径中所散射和/或发射的光信号来计数细胞。

显微镜直接计数法实验报告

显微镜直接计数法实验报告一、实验目的1、了解显微镜直接计数法的原理和应用。

2、掌握血细胞计数板的使用方法。

3、学会对细胞进行计数，并计算细胞浓度。

二、实验原理显微镜直接计数法是利用血细胞计数板在显微镜下直接计数细胞的一种方法。

血细胞计数板是一块特制的厚玻璃片，板上有四个槽构成三个平台。

中间的平台又被一短横槽隔成两半，每半边上面刻有一个方格网。

方格网上刻有 9 个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室。

计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成 16 个中方格，而每个中方格又分成 25 个小方格；另一种是一个大方格分成 25 个中方格，而每个中方格又分成 16 个小方格。

但无论哪种规格，每个大方格的边长均为 1 毫米，盖上盖玻片后，计数室的容积是固定的。

因此，在计数时，只要测定一定体积的样品在计数室中所占的方格数，就能计算出样品中的细胞数量。

三、实验材料与设备1、材料酵母菌悬液2、设备显微镜血细胞计数板盖玻片吸管擦镜纸四、实验步骤1、准备血细胞计数板用酒精棉球擦拭计数板和盖玻片，然后用擦镜纸擦干。

将盖玻片盖在计数板上。

2、制备酵母菌悬液用无菌吸管吸取适量的酵母菌培养液，加入一定量的无菌生理盐水，充分混匀，制成适宜浓度的酵母菌悬液。

3、加样用吸管吸取酵母菌悬液，从盖玻片边缘滴一小滴（不宜过多），使菌液自行渗入计数室，注意不可有气泡产生。

4、计数静置片刻，待酵母菌细胞全部沉降到计数室底部后，将血细胞计数板置于显微镜载物台上。

先用低倍镜找到计数室，再换高倍镜进行计数。

计数时，对于压在方格线上的细胞，只计上线和左线的细胞。

5、计算统计五个中方格中的细胞总数，然后按下式计算：每毫升菌液中的细胞数＝五个中方格中的细胞总数 × 5 × 10000 ×稀释倍数五、实验结果与分析1、实验结果经过计数，五个中方格中的细胞总数为_____个。

本次实验所使用的酵母菌悬液稀释倍数为_____倍。

实验技术十显微镜直接计数法

实验技术十显微镜直接计数法
一、目的要求：
1. 理解血球计数板的计数原理 2. 学会并掌握使用血球计数板进行准确计数 3. 了解其在生产实践中的应用
生产实践中测定微生物生长繁殖的方法
测生长
间接法：平板菌落计数法直接法：显微镜直接计数
二、基本原理
利用血球计数器在显微镜下直接计数，这是生产实践中常用的一种微生物计数方法。
1000mm3（1mL）相当于多少个计数室的体积？
设菌悬液稀释倍数为B
则：原菌液含菌数个/毫升=每小格平均菌数 ×4×106×B
若数中方格则：
原菌液含菌数个/毫升=每中方格平均菌数 ×25（16）× 104×B
优点：方便、迅速、直接缺点：不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细胞浓度；个体较小的细菌在显微镜下难以观察；
计繁殖数
利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中Βιβλιοθήκη 生物的数量。血球计数板的构造
25中格× 16小格计数室 16中格×25小格计数室
计数室边长为1mm，则计数室的面积为l mm2高度为0.1mm，所以每个计数室的体积为0.1mm3，
1mL=1cm3=1000mm3
1mL原菌液含菌数？

显微镜直接计数法实验报告

显微镜直接计数法实验报告显微镜直接计数法实验报告引言：显微镜直接计数法是一种常用的实验方法，用于测量微生物的数量和浓度。

通过直接观察显微镜下的视野，并进行计数，可以得出微生物的数量。

本实验旨在通过显微镜直接计数法，研究不同样本中微生物的数量和浓度变化。

实验材料和方法：1. 高倍显微镜2. 干净的载玻片和盖玻片3. 滴管和移液器4. 无菌培养基5. 不同样本（例如水样、土壤样本等）实验步骤：1. 准备工作：将载玻片和盖玻片用酒精擦拭干净，确保无菌状态。

2. 取一滴待测样本，滴在载玻片上。

3. 将盖玻片轻轻压在载玻片上，使样本均匀分布。

4. 将载玻片放在显微镜下，使用高倍镜观察。

5. 随机选择一个视野，计数视野中的微生物数量。

6. 移动显微镜的平台，选择下一个视野，继续计数。

7. 重复步骤6，直到计数足够多的视野。

8. 计算平均值，并根据视野的大小和显微镜的倍数，计算出微生物的数量和浓度。

实验结果：经过实验，我们得到了不同样本中微生物的数量和浓度数据。

例如，在水样中，我们观察到每个视野中的微生物数量平均为50个，视野的面积为0.01 mm²，显微镜的倍数为400倍。

因此，水样中微生物的数量为50个/0.01 mm² * 400 = 200,000个/mm²。

通过类似的计算，我们可以得出其他样本中微生物的数量和浓度。

讨论与分析：通过显微镜直接计数法，我们可以快速获得微生物的数量和浓度数据。

然而，这种方法也存在一些限制。

首先，由于显微镜的视野有限，我们只能观察到局部区域的微生物数量，可能无法代表整个样本的情况。

其次，显微镜直接计数法对于微生物形态和大小的要求较高，较小或较大的微生物可能无法准确计数。

此外，样本的准备和操作也可能影响到实验结果的准确性。

结论：显微镜直接计数法是一种常用的实验方法，用于测量微生物的数量和浓度。

通过观察显微镜下的视野，并进行计数，可以得出微生物的数量。

显微镜直接计数法实验报告

显微镜直接计数法实验报告今天咱们聊聊显微镜直接计数法实验，听上去就有点高大上的感觉，其实就是用显微镜来观察微小的东西，像细胞、微生物啥的。

大伙知道，显微镜是我们科学家最喜欢的小工具，简直是“放大镜”的终极进化版，能把那些肉眼看不到的世界展现在我们眼前。

说到这个，我就忍不住想起第一次用显微镜的情景，真是兴奋得像个孩子一样，心里想着：“哇，这下可以看看那些平时只能在书本上看到的小家伙们了！”实验开始前，咱得准备一些材料。

比如说，样品啦、载玻片啦，还有那不可或缺的显微镜。

这些东西就像是做菜的食材，缺一不可。

然后，先把样品放到载玻片上，轻轻一盖盖玻片，搞定！这时候，心里已经开始有点小激动，想看看底下究竟有什么“惊喜”。

放进显微镜，调试焦距，调试光线，哎呀，这过程就像给显微镜做美容，最后终于调好了，心里那种期待，真是无与伦比。

当显微镜的视野清晰了，哇哦，瞬间就被眼前的景象惊呆了！细胞的形状、微生物的运动，简直就是一场奇妙的“微型派对”。

那些小家伙们在显微镜下活灵活现，左摇右晃，真有点像在舞台上表演。

细胞的形态各异，有的像小球，有的像星星，真是五花八门，让人目不暇接。

咱得进行计数，这可是一项技术活。

每数到一个细胞，就像是在和它们打招呼：“嘿，朋友！”但你可别小看这数数的过程，得认真对待。

要不然一不小心就可能漏掉一大堆，最后搞得数据一团糟。

数着数着，感觉就像是在捡金币，心里乐开了花，越数越觉得过瘾。

这时候突然冒出一个细胞，像个调皮的小孩儿，搞得我笑得合不拢嘴。

计数完成后，咱就得整理数据，写报告。

这一环节有点儿麻烦，像是把零散的拼图拼在一起。

不过，看着这些数据，一点一点填上去，那种成就感可真是棒极了。

就好比是拼好了一个复杂的模型，哎呀，满满的自豪感！这时候心里还会想：“我真是个小小科学家，哈哈！”回顾这次实验，虽然有点辛苦，但收获满满。

显微镜下的世界，真是让人感到惊奇。

那些平常看不到的细微之处，通过直接计数法展现在眼前，真是太有意思了。

微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定

1.酵母菌细胞总数测定
(1)先将计数板盖上盖片在显微镜下，从低倍找到计数器位置，不动。
(2)将稀释好菌悬液摇匀，用滴管吸入由盖玻片边缘滴入让其自行渗透，使室充满（不宜过多，也不可有气泡）。
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
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(3)静止3-5分钟，先在低倍镜观察，然后换成高倍镜进行计数。样品不宜太浓或太稀，最好每小格控制在5-10个菌体为宜，计数需要重复二次。取平均值。先后二次误差太大，需再重复计数。
2.微生物大小测定
பைடு நூலகம்
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
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微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
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三、器材
显微镜；血球计数板；手揿计数器；盖玻片；目镜测微尺；镜台测微尺。
酵母菌菌悬液；枯草杆菌和金黄色葡萄球菌染色标本。
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
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四、操作步骤
在计数时，通常以五个中方格总菌数（每个中方格中数四个小方格）即20个小方格总菌数（求平均值）。
比如：设20个小方格中总菌数为A，悬液稀释度B，那么大格（0.1立方毫米总菌数） A/20×400×B。
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微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
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测量枯草杆菌长和宽及金黄色葡萄球菌直径。
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五、试验结果
1、P48题1 2、P92题1
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六、思索题
1、依据你体会，用血球计数板误差主要来自那些方面？应怎样防止误差，力争准确？
2、当接目镜不变，目镜测微尺也不变，只改变接物镜，目镜测微尺每格所量镜台上物体实际长度是否相同？为何？

显微镜直接计数法名词解释

显微镜直接计数法名词解释
显微镜直接计数法是一种常用的微生物计数方法，它通过显微镜直接观察和计数样品中的细胞或微生物数量。

这种方法的具体步骤是，首先将少量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上（血球计数板），然后在显微镜下直接计数每个格子内的细胞或微生物数量，最后根据格子面积和体积推算出单位体积内的细胞或微生物数量。

显微镜直接计数法的优点包括操作简单、结果直观、可以测定所有形态的细胞或微生物、结果准确、误差小等。

然而，这种方法也存在一些缺点，例如不能区分细胞或粒子的死亡或活性、容易产生误差、需要经验丰富的操作者进行操作、需要时间和劳动力成本高等。

在应用显微镜直接计数法时，需要注意以下几点：首先，样品的稀释比例要适当，以避免细胞或微生物聚集在一起而影响计数结果；其次，要选择合适的血球计数板，根据需要选择不同的规格；最后，在计数过程中要遵守规定的计数规则，以确保结果的准确性和可靠性。

总之，显微镜直接计数法是一种简单、快速、直观的微生物计数方法，适用于各种实验室和科研机构的使用。

在使用该方法时，需要注意操作步骤和注意事项，以保证结果的准确性和可靠性。

《显微镜直接计数法》PPT课件

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实验十显微镜直接计数技术

三、实验材料：
1.实验菌种及培养基：酿酒酵母菌细胞稀释液； 2. 实验设备及器材：恒温培养箱；恒温干燥箱；高压蒸汽灭菌锅；显微镜；酒精灯；接种环；滴瓶；试剂瓶；双层瓶；镊子；载玻片；φ90mm培养皿；500ml标本缸；15×150 试管；火柴（或打火机）；吸水纸；镜头纸；棉花；
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实验十显微镜直接计数技术

计数室是一个边长为1mm的正方形，其面积为1mm2。每个计数室被辅助线划分为25 （中格）×16（小格）个小格，以方便计数。图10-2为计数室（红色双线围成的即为由25 个中格组成的计数室。）
＋
加样处
＋
图10-1 计数板俯视图
二、基本原理：
显微镜直接计数技术可以对含菌样品所含的总菌数做出统计，是常用的、较快捷的一种统计微生物数量的方法和技术。显微镜直接计数技术使用一特制的、专用的计数工具——血球计数板进行计数操作。血球计数板上有四条槽，把计数板分为三个平台，两侧的平台用于搭放盖玻片，中间的平台又被分为两个较小的、每个平台上各有一个计数室的平台。如图10-1
1.将统计、计数结果填入下表：
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实验十显微镜直接计数技术

2.影响显微镜直接计数结果的因素有哪些，如何避免？ 3. 整理实验设备，清理实验台。
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1、快乐总和宽厚的人相伴，财富总与诚信的人相伴，聪明总与高尚的人相伴，魅力总与幽默的人相伴，健康总与阔达的人相伴。 2、人生就有许多这样的奇迹，看似比登天还难的事，有时轻而易举就可以做到，其中的差别就在于非凡的信念。 3、影响我们人生的绝不仅仅是环境，其实是心态在控制个人的行动和思想。同时，心态也决定了一个人的视野和成就，甚至一生。 4、无论你觉得自己多么了不起，也永远有人比更强;无论你觉得自己多么不幸，永远有人比你更不幸。 5、也许有些路好走是条捷径，也许有些路可以让你风光无限，也许有些路安稳又有后路，可是那些路的主角，都不是我。至少我会觉得，那些路不是自己想要的。 6、在别人肆意说你的时候，问问自己，到底怕不怕，输不输的起。不必害怕，不要后退，不须犹豫，难过的时候就一个人去看看这世界。多问问自己，你是不是已经为了梦想而竭尽全力了? 7、人往往有时候为了争夺名利，有时驱车去争，有时驱马去夺，想方设法，不遗余力。压力挑战，这一切消极的东西都是我进取成功的催化剂。 8、真想干总会有办法，不想干总会有理由;面对困难，智者想尽千方百计，愚者说尽千言万语;老实人不一定可靠，但可靠的必定是老实人;时间，抓起来是黄金，抓不起来是流水。 9、成功的道路上，肯定会有失败;对于失败，我们要正确地看待和对待，不怕失败者，则必成功;怕失败者，则一无是处，会更失败。1、快乐总和宽厚的人相伴，财富总与诚信的人相伴，聪明总与高尚的人相伴，魅力总与幽默的人相伴，健康总与阔达的人相伴。 2、人生就有许多这样的奇迹，看似比登天还难的事，有时轻而易举就可以做到，其中的差别就在于非凡的信念。 3、影响我们人生的绝不仅仅是环境，其实是心态在控制个人的行动和思想。同时，心态也决定了一个人的视野和成就，甚至一生。 4、无论你觉得自己多么了不起，也永远有人比更强;无论你觉得自己多么不幸，永远有人比你更不幸。 5、也许有些路好走是条捷径，也许有些路可以让你风光无限，也许有些路安稳又有后路，可是那些路的主角，都不是我。至少我会觉得，那些路不是自己想要的。 6、在别人肆意说你的时候，问问自己，到底怕不怕，输不输的起。不必害怕，不要后退，不须犹豫，难过的时候就一个人去看看这世界。多问问自己，你是不是已经为了梦想而竭尽全力了? 7、人往往有时候为了争夺名利，有时驱车去争，有时驱马去夺，想方设法，不遗余力。压力挑战，这一切消极的东西都是我进取成功的催化剂。 8、真想干总会有办法，不想干总会有理由;面对困难，智者想尽千方百计，愚者说尽千言万语;老实人不一定可靠，但可靠的必定是老实人;时间，抓起来是黄金，抓不起来是流水。14、成长是一场和自己的比赛，不要担心别人会做得比你好，你只需要每天都做得比前一天好就可以了。 15、最终你相信什么就能成为什么。因为世界上最可怕的二个词，一个叫执着，一个叫认真，认真的人改变自己，执着的人改变命运。只要在路上，就没有到不了的地方。 16、你若坚持，定会发光，时间是所向披靡的武器，它能集腋成裘，也能聚沙成塔，将人生的不可能都变成可能。 17、人生，就要活得漂亮，走得铿锵。自己不奋斗，终归是摆设。无论你是谁，宁可做拼搏的失败者 9、成功的道路上，肯定会有失败;对于失败，我们要正确地看待和对待，不怕失败者，则必成功;怕失败者，则一无是处，会更5、别着急要结果，先问自己够不够格，付出要配得上结果，工夫到位了，结果自然就出来了。 6、你没那么多观众，别那么累。做一个简单的人，踏实而务实。不沉溺幻想，更不庸人自扰。 7、别人对你好，你要争气，图日后有能力有所报答，别人对你不好，你更要争气望有朝一日，能够扬眉吐气。 8、奋斗的路上，时间总是过得很快，目前的困难和麻烦是很多，但是只要不忘初心，脚踏实地一步一步的朝着目标前进，最后的结局交给时间来定夺。 9、运气是努力的附属品。没有经过实力的原始积累，给你运气你也抓不住。上天给予每个人的都一样，但每个人的准备却不一样。不要羡慕那些总能撞大运的人，你必须很努力，才能遇上好运气。 10、你的假装努力，欺骗的只有你自己，永远不要用战术上的勤奋，来掩饰战略上的懒惰。 11、时间只是过客，自己才是主人，人生的路无需苛求，只要你迈步，路就在你的脚下延伸，只要你扬帆，便会有八面来风，启程了，人的生命才真正开始。 12、不管做什么都不要急于回报，因为播种和收获不在同一个季节，中间隔着的一段时间，我们叫它为坚持。失败。11、学会学习的人，是非常幸福的人。——米南德 12、你们要学习思考，然后再来写作。——布瓦罗 13、在寻求真理的长河中，唯有学习，不断地学习，勤奋地学习，有创造性地学习，才能越重山跨峻岭。——华罗庚 14、许多年轻人在学习音乐时学会了爱。——莱杰 15、学习是劳动，是充满思想的劳动。——乌申斯基 16、我们一定要给自己提出这样的任务：第一，学习，第二是学习，第三还是学习。——列宁 17、学习的敌人是自己的满足，要认真学习一点东西，必须从不自满开始。对自己，“学而不厌”，对人家，“诲人不倦”，我们应取这种态度。——毛泽东 18、只要愿意学习，就一定能够学会。——列宁 19、如果学生在学校里学习的结果是使自己什么也不会创造，那他的一生永远是模仿和抄袭。——列夫· 托尔斯泰 20、对所学知识内容的兴趣可能成为学习动机。——赞科夫 21、游手好闲地学习，并不比学习游手好闲好。——约翰· 贝勒斯 22、读史使人明智，读诗使人灵秀，数学使人周密，自然哲学使人精邃，伦理学使人庄重，逻辑学使人善辩。——培根 23、我们在我们的劳动过程中学习思考，劳动的结果，我们认识了世界的奥妙，于是我们就真正来改变生活了。——高尔基 24、我们要振作精神，下苦功学习。下苦功，三个字，一个叫下，一个叫苦，一个叫功，一定要振作精神，下苦功。——毛泽东 25、我学习了一生，现在我还在学习，而将来，只要我还有精力，我还要学习下去。——别林斯基、学习外语并不难，学习外语就像交朋友一样，朋友是越交越熟的，天天见面，朋友之间就亲密无间了。——高士其 2、对世界上的一切学问与知识的掌握也并非难事，只要持之以恒地学习，努力掌握规律，达到熟悉的境地，就能融会贯通，运用自如了。——高士其 3、学和行本来是有联系着的，学了必须要想，想通了就要行，要在行的当中才能看出自己是否真正学到了手。否则读书虽多，只是成为一座死书库。——谢觉哉、你的假装努力，欺骗的只有你自己，永远不要用战术上的勤奋，来掩饰战略上的懒惰。 11、时间只是过客，自己才是主人，人生的路无需苛求，只要你迈步，路就在你的脚下延伸，只要你扬帆，便会有八面来风，启程了，人的生命才真正开始。 12、不管做什么都不要急于回报，因为播种和收获不在同一个季节，中间隔着的一段时间，我们叫它为坚持。 13、你想过普通的生活，就会遇到普通的挫折。你想过最好的生活，就一定会遇上最强的伤害。这个世界很公平，想要最好，就一定会给你最，取平均值； 6.计算样品所含总菌数：根据统计、计数结果，计算样品所含的总菌数； 7.清洗处理计数板：实验完成后，及时按规定清洁处理技术板。本实验所用计数板，可用清水清洁处理后，吸干水分，妥善保存。

酵母菌数量的测定—显微镜直接计数法

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五、数据处理
各中格中的菌数（个）
二室平均
菌数
A
B
值（个/
1
2
3
4
5
（个 mL）
）第一
室第二
室
15
六、思考题能否利用显微镜直接计数的方法测定
酵⺟菌菌液中的死细菌与活细菌？如果可以，如何进行？如果不可以，请说明原因。
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式1：总菌数（个/mL）=A/5×16×10000×B 式2：总菌数（个/mL）=A/5×25×10000×B
三、实验器材血球计数板、显微镜、盖玻片、滴管、酿酒酵⺟菌液
8
四、实验步骤
1、加样品
•取净洁干燥的血球计数板盖上盖玻片。 •将菌悬液适当稀释（稀释1倍），摇匀。
•用滴管吸取菌悬液，加1～2滴于盖玻片边缘，让菌液靠毛细渗透作用进入计数室。 •放置5 min左右让计数室充满菌液。
• 如遇酵⺟出芽，芽体大小达到⺟细胞一般时，即作为两个菌体计算。
• 计算一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算样品的含菌量。
• 菌体在血球计数板处于不同空间，要在不同焦距下才能看全，所以，观察时必须不断调节细螺用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷； •镜检观察是否清洗干净； •洗后干燥（晾干、吹干，或乙醇、丙酮等有机溶剂脱水干燥）。
4
5
血球计数板规格
计数室高度：0.1mm 大方格边⻓：1mm。每个大方格分成400个小方格。
规格一：每个大方格分成16个中方格，每个中方格又分成25个小方格。规格二：每个大方格分成25个中方格，每个中方格又分成16个小方格。
设五个中方格的总菌数为A，菌液的稀释倍数为B，规格一、规格二计数板，分别采用式 1、式2计算。

实验10-细菌计数

实验10 细菌计数返回目录一、显微镜直接计数法【原理】显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上(又称计菌板)，于显微镜下直接计数细菌的一种简便、快速、直观的方法。

该法适用于各种单细胞菌体的纯培养悬浮液，目前国内外常用的计菌板有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌板以及Hawksley计菌板等，血球计数板适用于菌体较大的酵母菌或霉菌孢子的计数，后两种计菌板适用于一般细菌的计数。

这几种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，盖玻片和载玻片之间的距离只有0.02mm，可以使用油镜观察。

而血球计数板较厚，不能使用油镜。

这里介绍血球计数板方法计数酵母菌数量。

血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽所构成的3个平台。

中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区，计数区的刻度有两种：一种是一个大方格分为16个中方格(四角的四个大方格)，每个中方格又分25个小方格；另一种是一个大方格分成25个中方格(中央的一个大方格)，而每个中方格又分成16个小方格，即计数区都由400个小方格组成(图1-3-12)。

图1-3-12 血细胞计数板构造计数区（一个大方格）边长为1mm，则计数区的面积为l mm2，每个小方格的面积为1/400mm2。

盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为l/4000mm3。

使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每mL菌液(或每g样品)中微生物细胞的数量。

已知：1ml体积＝10mm×10mm×10mm＝1000mm3所以：1ml体积应含有小方格数为1000mm3／(1／4000mm3)＝4×106个小方格。

因此：每ml菌悬液中含有细胞数＝4×106×每个小格中细胞平均数×菌液稀释倍数。

微生物实验显微镜直接计数法

二、实验原理
1.血球计数板法
利用计数板上有固定体积和精确刻度的两个计数室进行
计数，是常用的在显微镜下对细胞数目进行计数的方法。
（1）计数室体积：正方形，边长为1mm，深0.1mm→盖上盖玻片后，容积为0.1mm3。（2）计数室刻度的规格
具有直观、快速等优点，但误差较大，不适合细菌计数。
16×25型：16个中方格，每个中方格分25个小格；
25×16型：25个中方格，每个中方格分16个小格。
计数室
（3）计数和计算方法
我们采用的是25×16的，计数时查5个中方格的总
菌数。如图：
5个方格的总菌数
计算：1个计数室的总菌数=A/5×25×B
稀释倍数
1g（ml）样品中的总菌数=A/5×25×10×1000×B
=50,000A×B个
三、实验材料
1.菌种：酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）悬液(已
稀释100倍)
2.器具：显微镜、血球计数板、吸管、盖玻片。
四、实验步骤
1.检查计数板
检查计数板是否有破损。
2.镜检计数室
在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗后才能进行计数。
3.加样品
在清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用细口滴管让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室，一般
六、作业
显微直接计数结果
÷Ð · Ö · ½ · ñ Ö Ð ¾ ú Ê ý 1 Ú Ò µ » Ê Ò Байду номын сангаас ¶ µ þ Ê Ò 2 3 4 5
5个中格总数
þ Ê ¶ Ò
A
B
100
ú Ê ¾ ý /ml Æ ½ ¾ ù Ö µ

微生物显微镜直接计数法

执行【display flash:/sup.bin flash:/sup.bin
Next startup system software:
flash:/sup.bin
Startup saved-configuration file:
flash:/vrpcfg.zip
//本次启动配置文件
Next startup saved-configuration file: flash:/vrpcfg.zip
天凌晨3点结束。
设备环境基本配置
用户级别切换
用户从高级别切换到低级别时，不需要使用密码。如果用户从低级别切换到高级别时，必须输入正确的级别切换密码。
切换用户级别的环境配置包含两个步骤：
使用高级别用户配置切换用户级别的密码低级别用户登录系统后，切换用户级别。
设备环境基本配置
用户级别切换示例
1. 酵母菌液 2. 显微镜、血球计数器、目镜测微尺、镜台测微尺 3. 载玻片、盖玻片、接种环、胶头吸管等
图5-1 Thoma血球计数板
A.正面图 B.纵切面图 1.血球计数板 2.盖玻片 3.计数室
16小格 × 25大格计数室
25小格 × 16大格计数室
图5-2 计数室的两种刻度形式
四、实验内容
（一）酵母菌数量的检测
1. 显微镜直接计数法（每人1片）注意事项: A. 取样时先要摇匀菌液;加样时计数室不可有气
泡产生。 B. 调节显微镜光线的强弱适当。 2. 平板菌落计数法 (实验八)
（二）酵母菌大小的检测
注意事项：观察时光线不宜过强,否则难以找到镜台测微尺的刻度;换高倍镜和油镜校正时,务必十分小心,防止接物镜压坏镜台测微尺和损坏镜头。
Password: Now user privilege is level 3, and only those commands whose level is equal to or less than this level can be used. Privilege note: 0-VISIT, 1-MONITOR, 2-SYSTEM, 3-MANAGE <Huawei>system-view Enter system view, return user view with Ctrl+Z. [Huawei]