微生物的显微镜直接计数法
显微镜直接计数法实验报告
显微镜直接计数法实验报告实验报告：显微镜直接计数法一、实验目的本实验旨在通过显微镜直接计数法，测定微生物样品中细胞的数量，以了解其生长和繁殖情况，为生物工程、生物医学、环境科学等领域的研究提供依据。
二、实验原理显微镜直接计数法是一种通过显微镜直接观察并计数样品中微生物数量的方法。
该方法具有操作简便、快速等优点，适用于测定样品中微生物的数量和生长情况。
通过显微镜直接计数法，可以观察到微生物的形态、大小、分布等情况，从而对其生长环境、生长状况等进行评估。
三、实验步骤1.样品制备：将待测样品进行适当稀释，使微生物细胞分散均匀。
2.显微镜观察：将样品滴加到显微镜载玻片上，用盖玻片固定，调整显微镜焦距，观察并计数微生物的数量。
3.计数方法：采用直接计数法，即直接观察并计数样品中的微生物数量。
对于压在盖玻片下的细胞，可以通过轻轻移动盖玻片进行观察和计数。
4.数据记录：记录每个样品中微生物的数量，并计算平均值。
同时记录观察到的细胞形态、大小、分布等情况。
5.结果分析：根据实验数据，分析微生物的生长情况、繁殖速度等。
四、实验结果及数据分析1.实验数据（见附表1）附表1：显微镜直接计数法实验数据2.数据分析通过附表1的数据，我们可以得出以下结论：（1）样品A中微生物的数量较少，而样品B、C、D中微生物的数量较多。
这表明不同样品中微生物的数量存在差异。
（2）在相同稀释倍数下，观察到的细胞数越多，计数结果越准确。
因此，选择合适的稀释倍数对于准确测定微生物数量至关重要。
在本实验中，选择100倍和1000倍作为稀释倍数，可以较为准确地测定微生物数量。
（3）通过对比不同样品在同一稀释倍数下的计数结果，可以得出不同样品中微生物的生长情况。
例如，样品B和D在1000倍稀释下的计数结果较高，说明这两个样品中微生物的生长情况较好。
而样品A和C在100倍稀释下的计数结果较低，说明这两个样品中微生物的生长情况较差。
（4）根据实验数据，可以进一步分析微生物的生长规律和繁殖速度。
常见微生物计数法汇总!(一)
常见微生物计数法汇总!（一）引言概述：微生物计数是一种常见的实验方法，用于定量估计和检测环境中的微生物数量。
常见微生物计数法有许多种，本文将汇总介绍其中的几种常用计数方法。
一、直接计数法1. 显微镜计数法：使用显微镜观察培养皿中的微生物数量，通过数在视野中出现的微生物来估算总数。
2. 填充网格计数法：使用遗传学细胞计数板或计数室将细胞封装在微小方格中进行计数。
3. 浓度计算法：通过对微生物液体培养物的稀释以及菌落形成数量进行计算，从而估算原始液体中微生物的数量。
4. 流式细胞仪计数法：利用流式细胞仪对细胞进行连续识别和计数，快速且准确。
二、间接计数法1. pH法：通过确定微生物在特定pH值下的生长情况来计算微生物的数量。
2. 活菌数测定法：使用平板法、涂布法和滤膜法等方法，根据菌落形成数量来计算微生物的数量。
3. 光密度测定法：利用光密度计测量微生物培养物中细胞浓度对光的吸光度，从而计算微生物的数量。
4. ATP测定法：通过测量微生物中的ATP含量来估算微生物数量。
5. 核酸测定法：通过分子生物学技术，测定微生物DNA或RNA的含量，计算微生物数量。
三、表面计数法1. 培养基涂布法：将待测样品均匀涂布在培养基表面，按规格标准进行观察和计数。
2. 表面化学计数法：通过使用表面活性剂或化学溶液对微生物进行杀灭，并利用计数技术计算杀灭的微生物数量。
3. 扫描电子显微镜计数法：利用扫描电子显微镜观察样品表面的微生物数量，并进行计数。
4. 膜过滤计数法：将待测液体通过微孔膜过滤，然后在培养基上进行培养和计数。
四、生物传感器计数法1. pH微电极法：利用微电极检测微生物生长过程中产生的H+离子浓度变化。
2. 导电性测定法：利用微生物生理代谢活性所产生的电导率变化进行计数。
3. 生物发光法：利用荧光素酶或细菌荧光素所产生的可见光等特性进行计数。
五、图像处理计数法1. 数字图像处理法：利用图像处理软件进行图像分析，自动或半自动计数微生物数量。
微生物直接计数法及测微技术
微生物直接计数法及测微技术实验类型：基础学时：4(参考)内容：一、实验目的1.了解血球计数板计数原理，并掌握计数方法。
2.掌握用测微尺测定微生物大小的方法。
二、实验原理显微镜直接计数法是将一定稀释的菌体或孢子悬液注入血球计数板的计数室中，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。
因为计数板是一块特别的载玻片。
其上由四条槽构成三个平台；中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为九个大方格，一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格(见图2—3—44)；另一种是一个大方格分成16个中方格，每个中方格又分成25个小方格，无论哪种每个大方格中的小方格都是400个。
每一个大方格边长为0．1mm，所以计数室的容积为0．1mm3。
计数时，通常只用5个中格内的菌体(孢子)数即可。
然后求出每个中方格的平均值，再乘上25或16，得出一个大方格中的总茵数，再换算成lml菌液中的总菌数。
若设5个中方格中总菌数为N，菌液稀释倍数为M，如果是25个中方格计数板，则计算方法为：lml菌液中的总菌数=平均每个中格中菌的个数×25×104×M=50000N·M(个)微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。
微生物大小的测定，需要在显微镜下，借助于特殊的测量工具——测微尺，包括目镜测微尺和镜台测微尺。
镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格，每格长0．01mm(即10pm)。
镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于校正目镜测微尺每格的相对长度。
三、试剂与器材1.材料酿酒酵母、藤黄微球菌和大肠杆菌的染色标本片、酿酒酵母24h马铃薯斜面培养物。
2.实验器材细胞计数板、显微镜、盖玻片、无菌毛细滴管、目镜测微尺、镜台测微尺、载玻片、盖玻片、显微镜等。
四、实验内容1.微生物直接计数法菌悬液制备→镜检计数室→加样品→显微镜计数→清洗血细胞计数板2.微生物测微技术装目镜测微尺→校正→菌体大小测定五、关键步骤及注意事项1.防止加样空气泡产生。
显微镜的直接计数和细菌大小测定-精选文档
四、操作方法
(一)酵母菌大小测定的操作方法 1.测微尺的构造和使用方法 (1)目镜测微尺的构造 目镜测微尺是一块圆形玻片， 其中央刻有精确的刻度，通常是将5mm划分为50 格，实际每格等于100μm。刻度的大小是随使用 的接目镜和接物镜的放大倍数而改变，用前必须用 物镜测微尺来标定，如图。 (2)物镜测微尺的构造 物镜测微尺为一块特制的 载玻片，其中央有一小圆圈。圆圈内刻有分度，将 长1mm的直线等分为100小格，每小格等于10μm， 如图 。
五、实验报告及思考题
1、微生物大小测定实验结果
（1）将目镜测微尺校正结果填入下表：
接物镜 接物镜倍数 目镜测微尺格 镜台测微尺格
数
数
低倍镜
高倍镜
油镜
目镜测微尺每格代表 的长度(μm)
接目镜的放大倍数________
（2） 酵母细胞大小的测量结果：
微生物 名称
目镜测微尺每 格代表的长度
/μm
宽
目镜测微 尺格数
2.目镜测微尺的标定
(1)取下接目镜，旋下目镜上的目透镜，将目镜测微 尺放人接目镜的中隔板上，使有刻度的一面朝下， 再旋上目透镜，并装入镜筒内。 (2)将物镜测微尺置于显微镜的载物台上，使有刻度 的一面朝上，同观察标本一样，使具有刻度的小圆 圈位于视野中央。 (3)先用低倍镜观察，对准焦距，待看清物镜测微尺 的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺的刻度与物镜 测微尺的刻度相平行，并使两尺的左边第一条线相 重合，再向右寻找两尺的另外一条重合线。如图 (4)记录二条重合线间的目镜测微尺的格数和物镜测 微尺的格数。
4.酵母菌大小的测定
(1)取下镜台测微尺，换上酵母菌水浸制片。
(2)测量菌体的长度和宽度各占目镜测微尺 几格，然后换算出菌体的实际长度。
微生物计数原理
微生物计数原理一、引言微生物计数是微生物学研究中的基础工作之一，它可以用于评估微生物的数量和生长状况。
微生物计数原理是指基于一定的方法和技术，通过对微生物样本的处理和观察，确定其中微生物数量的过程。
本文将介绍几种常用的微生物计数原理及其应用。
二、直接计数法直接计数法是最常见的微生物计数原理之一，它通过直接观察和计数微生物的个体来确定其数量。
常用的直接计数方法有显微镜计数法和电子计数法。
1. 显微镜计数法显微镜计数法是一种传统的微生物计数方法，它通过显微镜放大被计数微生物的图像，再用目镜进行计数。
该方法适用于大型微生物，如细菌和酵母菌等。
在显微镜下，通过顶点计数法或方格计数法，将显微镜视野中的微生物个数进行计数，并根据显微镜视野的大小和计数范围来计算总体数量。
2. 电子计数法电子计数法是一种利用电子显微镜进行微生物计数的方法。
它通过将微生物样品制备成薄片，然后在电子显微镜下观察和计数微生物的个体。
电子计数法具有高分辨率和高准确性的特点，适用于微小微生物的计数，如病毒和细菌孢子等。
三、间接计数法间接计数法是一种无需直接观察和计数微生物个体，而是通过测量微生物活性或生物产物来确定微生物数量的方法。
常用的间接计数方法有培养计数法和生物化学计数法。
1. 培养计数法培养计数法是一种通过培养微生物并计数生长的菌落数量来确定微生物数量的方法。
该方法需要将微生物样品接种到含有适宜营养物质的培养基上，经过一定的时间后，观察和计数培养基上形成的菌落数量。
根据菌落的形态和特征，可以初步确定微生物的种类，并通过计算菌落的数量来推断微生物的数量。
2. 生物化学计数法生物化学计数法是一种利用微生物在生长过程中产生的生物化学物质来确定微生物数量的方法。
常用的生物化学计数方法有ATP计数法和蛋白质计数法。
在这些方法中，通过测量微生物产生的ATP或蛋白质的浓度来推断微生物的数量。
四、流式细胞术流式细胞术是一种高通量的微生物计数方法，它通过将微生物样品悬浮液通过流式细胞仪，以高速流动的方式逐个计数微生物个体。
测定微生物总数的方法
测定微生物总数的方法测定微生物总数是微生物学研究中的一项重要任务，它可以帮助我们了解微生物在环境中的分布和数量。
本文将介绍几种常用的测定微生物总数的方法。
一、直接计数法直接计数法是最直接、最常用的测定微生物总数的方法之一。
它通过使用显微镜观察样品中的微生物细胞数目来进行测定。
具体操作步骤如下：1. 取一定量的样品，如水样、土壤样等，制备适当的稀释液。
2. 取适量的稀释液滴于玻璃片上，用显微镜观察。
3. 在显微镜下，使用目镜和物镜进行放大观察，并使用计数室或计数网格进行计数。
4. 统计不同视野中的微生物数量，并计算平均值，从而得到微生物总数。
二、培养法培养法是一种常用的测定微生物总数的方法，它通过将微生物样品在培养基上培养并生长，然后观察和计数生长的菌落数来进行测定。
具体操作步骤如下：1. 取适量的样品，如空气、食品、药品等，制备适当的稀释液。
2. 取一定量的稀释液接种于含有富营养物的培养基上。
3. 将培养基培养在适当的温度和湿度条件下，使微生物生长繁殖。
4. 观察培养基上生长的菌落，并进行计数。
5. 根据计数结果，计算微生物总数。
三、膜过滤法膜过滤法是一种常用的测定微生物总数的方法，它通过将微生物样品过滤到膜上，然后将膜放置在培养基上进行培养和生长，最后观察和计数生长的菌落数来进行测定。
具体操作步骤如下：1. 取一定量的样品，如水样、食品样等，制备适当的稀释液。
2. 将稀释液通过膜过滤装置过滤到膜上。
3. 将膜放置在含有富营养物的培养基上进行培养和生长。
4. 观察培养基上生长的菌落，并进行计数。
5. 根据计数结果，计算微生物总数。
四、荧光显微镜法荧光显微镜法是一种高级的测定微生物总数的方法，它通过将微生物样品染色，并利用荧光显微镜观察和计数荧光染色的微生物细胞来进行测定。
具体操作步骤如下：1. 取一定量的样品，如水样、食品样等，制备适当的稀释液。
2. 取适量的稀释液滴于载玻片上，进行定性或定量染色。
微生物数量的测定方法
微生物数量的测定方法微生物数量的测定方法微生物是一类微小的生物体，包括细菌、真菌、病毒等。
它们广泛存在于自然界中的土壤、水体、空气中，也存在于人体内外。
了解微生物的数量对于环境监测、食品安全、医学诊断等领域具有重要意义。
本文将介绍几种常用的微生物数量测定方法。
1. 直接计数法直接计数法是最直接、最常用的微生物数量测定方法之一。
它通过显微镜观察和计数来确定微生物的数量。
首先，将待测样品制备成适当的悬浮液，然后在显微镜下观察，并使用计数器进行计数。
这种方法适用于细菌和酵母等较大的微生物。
但是，由于显微镜观察需要较高的技术水平和时间，所以无法快速测量大量样品。
2. 培养法培养法是一种常用的微生物数量测定方法，它通过培养微生物并计数生长的菌落来确定数量。
首先，将待测样品制备成适当的培养基，然后在恰当的温度和湿度条件下培养一段时间。
培养基中的微生物会形成可见的菌落，通过计数菌落的数量来确定微生物的数量。
这种方法适用于大部分微生物，但是它需要一定的培养时间，并且某些微生物可能无法在常规培养基上生长。
3. 膜过滤法膜过滤法是一种常用的微生物数量测定方法，它通过将待测样品过滤到膜上，并将膜培养在适当的培养基上来确定数量。
首先，将待测样品通过特定孔径的过滤器过滤，然后将过滤后的膜放置在培养基上培养。
培养基中的微生物会在膜上形成可见的菌落，通过计数菌落的数量来确定微生物的数量。
这种方法适用于水样、空气样等液态和气态样品。
4. 分子生物学方法分子生物学方法是一种新兴且快速发展的微生物数量测定方法。
它通过检测和分析微生物DNA或RNA来确定数量。
常用的分子生物学方法包括聚合酶链反应（PCR）、实时荧光定量PCR（qPCR）等。
这些方法可以快速、准确地测定微生物的数量，并且可以检测到少量微生物。
但是，分子生物学方法需要一定的实验设备和技术，并且对样品预处理要求较高。
总结起来，微生物数量的测定方法有直接计数法、培养法、膜过滤法和分子生物学方法等。
微生物计数方法有哪些
微生物计数方法有哪些微生物计数方法是用来确定样品中微生物数量的技术方法。
根据微生物所在的环境、特征和研究目的的不同，可以选择不同的计数方法。
常用的微生物计数方法包括直接计数法、培养计数法、膜滤法、荧光染色法等。
本文将详细介绍这些常用的微生物计数方法。
一、直接计数法直接计数法是指直接通过显微镜观察计数来确定微生物数量的方法。
常用的直接计数法有：1. 显微镜计数法：通过显微镜观察样品中微生物的数量，通常使用显微镜配合计数室或计数盘进行计数。
2. 相位差显微镜计数法：与常规显微镜计数法类似，但使用相位差显微镜可以获得更清晰的图像，更准确地计数微生物的数量。
3. 流式细胞仪计数法：使用流式细胞仪对微生物进行计数和粒子分析，可以同时获得微生物的数量和其他特征信息，如大小、形状等。
二、培养计数法培养计数法是通过将微生物样品培养在含有适宜营养物质的培养基上，利用微生物的生长繁殖特性来确定微生物数量的方法。
1. 可视化计数法：将培养基和微生物混合后在琼脂培养基上进行平皿计数或浸液计数，通过观察菌落形成单位来计数微生物数量。
2. 过滤膜计数法：将微生物样品过滤到具有适当孔径的膜滤器上，然后将膜滤器移植到含有适宜培养基的琼脂平皿上，通过菌落形成单位进行计数。
3. 表面播菌计数法：将微生物样品均匀涂布在琼脂平板的表面，通过菌落形成单位计数微生物的数量。
三、膜滤法膜滤法是利用膜滤器对微生物样品进行筛选和集落计数的方法。
膜滤法通常用于分析水、空气和食品等中微生物的数量。
1. 电子显微镜计数法：将微生物样品过滤到具有适当孔径的膜滤器上，并使用电子显微镜观察并计数微生物的数量。
2. DNA混合体计数法：将微生物样品过滤到DNA束水中，通过对DNA束的计数来确定微生物数量。
3. 梅勒算法：将微生物的集落过滤到膜滤器上，使用特定的染色剂、显微镜和图像分析软件进行计数。
四、荧光染色法荧光染色法是通过使用特定的荧光染料和荧光显微镜或流式细胞仪来计数微生物数量的方法。
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
(1)先将计数板盖上盖片在显微镜下，从低倍找到计数器位 置，不动。
(2)将稀释好菌悬液摇匀，用滴管吸入由盖玻片边缘滴入让 其自行渗透，使室充满（不宜过多，也不可有气泡）。
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(3)静止3-5分钟，先在低倍镜观察，然后换成高倍 镜进行计数。样品不宜太浓或太稀，最好每小格 控制在5-10个菌体为宜，计数需要重复二次。取 平均值。先后二次误差太大，需再重复计数。
2.微生物大小测定
பைடு நூலகம்
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
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三、器材
显微镜；血球计数板；手揿计数器；盖玻片； 目镜测微尺；镜台测微尺。
酵母菌菌悬液； 枯草杆菌和金黄色葡萄球菌染色标本。
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四、操作步骤
在计数时，通常以五个中方格总菌数（每个中方格中数四 个小方格）即20个小方格总菌数（求平均值）。
比如：设20个小方格中总菌数为A，悬液稀释度B，那么 大格（0.1立方毫米总菌数） A/20×400×B。
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微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
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测量枯草杆菌长和宽及金黄色葡萄球菌直径。
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
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五、试验结果
1、P48题1 2、P92题1
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六、思索题
1、依据你体会，用血球计数板误差主要来自 那些方面？应怎样防止误差，力争准确？
2、当接目镜不变，目镜测微尺也不变，只改 变接物镜，目镜测微尺每格所量镜台上物体 实际长度是否相同？为何？
显微镜直接计数法名词解释
显微镜直接计数法名词解释
显微镜直接计数法是一种常用的微生物计数方法，它通过显微镜直接观察和计数样品中的细胞或微生物数量。
这种方法的具体步骤是，首先将少量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上（血球计数板），然后在显微镜下直接计数每个格子内的细胞或微生物数量，最后根据格子面积和体积推算出单位体积内的细胞或微生物数量。
显微镜直接计数法的优点包括操作简单、结果直观、可以测定所有形态的细胞或微生物、结果准确、误差小等。
然而，这种方法也存在一些缺点，例如不能区分细胞或粒子的死亡或活性、容易产生误差、需要经验丰富的操作者进行操作、需要时间和劳动力成本高等。
在应用显微镜直接计数法时，需要注意以下几点：首先，样品的稀释比例要适当，以避免细胞或微生物聚集在一起而影响计数结果；其次，要选择合适的血球计数板，根据需要选择不同的规格；最后，在计数过程中要遵守规定的计数规则，以确保结果的准确性和可靠性。
总之，显微镜直接计数法是一种简单、快速、直观的微生物计数方法，适用于各种实验室和科研机构的使用。
在使用该方法时，需要注意操作步骤和注意事项，以保证结果的准确性和可靠性。
微生物细胞数量的显微镜直接计数法
南京林业大学实验报告食品科学与工程专业1201091年级120109112姓名：马天柔日期：2014/04/20 实验六微生物细胞数量的显微镜直接计数法一．实验目的：掌握实用血球计数板进行微生物细胞数量的计数办法。
二．实验器材：显微镜，血球计数板，盖玻片，酵母菌悬液，滴管。
三．实验方法：1．将细胞悬液加适量的无菌水充分混匀并稀释至每小格约有5-10个菌体为宜。
2．制片：先将血球计数板和盖玻片用纱布或绸布擦干净后，把盖玻片盖在计数板的刻度上，用滴管取少量稀释的菌体从盖玻片的一端注入，使菌液沿两玻片空隙间渗入，注意不可有气泡产生，用吸水纸吸干沟槽中流出的多余菌液，切勿将盖玻片抬高。
3．镜检计数：静置几分钟后，将血球计数板置于载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后转换成高倍镜进行计数，按对角线方向数5中格即80小格，计数每一小方格细胞的平均数。
由于菌体细胞在血球计数室中处于不同的位置，要在不同焦距下才能看到，因为要求观察时要不断调节微调螺旋，防止遗漏，如菌体细胞位于小格的线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。
4．结果计算：每小格的室容积=（1×1×0.1）/（16×25）=0.1ul/400计数：数5个中方格（80个小格）每小格的平均细胞数=A/（5×16）=A/80每ul细胞数=（A/80）×40005．清洗：血球计数板用完后，一定要用清水冲洗干净，晾干后保存，注意不可用粗糙物品擦中央平板，以免损坏小格刻度。
用血球计数板在显微镜下直接计数微生物细胞的数量是一种比较方便而快速的计数方法，但只能测得微生物细胞的总数，分辨不出活细胞还是死细胞。
四.实验结果：每小格的室容积=（1×1×0.1）/（16×25）=0.1ul/400计数：数5个中方格（80个小格共有406个）每小格的平均细胞数=A/（5×16）=A/80=406/80≈5.075每ul细胞数=（A/80）×4000=20300五.心得体会：1）取待测稀释菌悬液像血球计数板加样前，必须将菌悬液充分摇匀；2）加样过程中，应避免将菌液滴在盖玻片；3）由于菌体在计数室中处于不同空间位置，须在不同焦距下才能观察到，故观察时续不断调节微调，计数菌液中全部菌体，尽量避免遗漏。
微生物细胞大小测定及显微镜直接计数
微生物细胞大小测定及显微镜直接计数一、实验原理微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一，由于菌体微小，只能在显微镜下测量。
用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。
目镜测微尺（图示）是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等分，或把10mm长度刻成100等分。
测量时，将其放在接目镜中的隔板上，此处正好与物镜放大的中间物像重迭，用于测量经显微镜放大后的细胞物象。
由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。
镜台测微尺（图示）是中央部分刻有精确等分线的专用载玻片，一般将1mm等分为100格，每格长10µm即0.01mm，是专门用来校正目镜测微尺的。
校正时，将镜台测微尺放在载物台上，由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成像进入视野，即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的实际长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物细胞大小。
测定微生物细胞数量的方法很多，通常采用的有显微镜直接计数法和稀释平板计数法。
直接计数法适用于各种单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质，则难于直接测定。
菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌则采用彼德罗夫·霍泽（Petrof Hausser）细菌计数板。
两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。
而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌难于区分。
血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载坡片上有4条槽所构成的3个平台。
中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区（图示），计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格，大方格用三线隔开，而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格，大方格之间用双线分开，而每个大方格又分成16个小方格。
《显微镜直接计数法》PPT课件
实验十 显微镜直接计数技术
三、实验材料：
1.实验菌种及培养基：酿酒酵母菌细胞稀释 液； 2. 实验设备及器材：恒温培养箱；恒温干燥 箱；高压蒸汽灭菌锅；显微镜；酒精灯；接 种环；滴瓶；试剂瓶；双层瓶；镊子；载玻 片；φ90mm培养皿；500ml标本缸；15×150 试管；火柴（或打火机）；吸水纸；镜头纸； 棉花；
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实验十 显微镜直接计数技术
计数室是一个边长为1mm的正方形，其面积 为1mm2。每个计数室被辅助线划分为25 （中格）×16（小格）个小格，以方便计数。 图10-2为计数室（红色双线围成的即为由25 个中格组成的计数室。）
＋
加样处
＋
图10-1 计数板俯视图
二、基本原理：
显微镜直接计数技术可以对含菌样品所含的 总菌数做出统计，是常用的、较快捷的一种 统计微生物数量的方法和技术。 显微镜直接计数技术使用一特制的、专用的 计数工具——血球计数板进行计数操作。 血球计数板上有四条槽，把计数板分为三个 平台，两侧的平台用于搭放盖玻片，中间的 平台又被分为两个较小的、每个平台上各有 一个计数室的平台。如图10-1
1.将统计、计数结果填入下表：
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实验十 显微镜直接计数技术
2.影响显微镜直接计数结果的因素有哪些， 如何避免？ 3. 整理实验设备，清理实验台。
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1、快乐总和宽厚的人相伴，财富总与诚信的人相伴，聪明总与高尚的人相伴，魅力总与幽默的人相伴，健康总与阔达的人相伴。 2、人生就有许多这样的奇迹，看似比登天还难的事，有时轻而易举就可以做到，其中的差别就在于非凡的信念。 3、影响我们人生的绝不仅仅是环境，其实是心态在控制个人的行动和思想。同时，心态也决定了一个人的视野和成就，甚至一生。 4、无论你觉得自己多么了不起，也永远有人比更强;无论你觉得自己多么不幸，永远有人比你更不幸。 5、也许有些路好走是条捷径，也许有些路可以让你风光无限，也许有些路安稳又有后路，可是那些路的主角，都不是我。至少我会觉得，那些路不是自己想要的。 6、在别人肆意说你的时候，问问自己，到底怕不怕，输不输的起。不必害怕，不要后退，不须犹豫，难过的时候就一个人去看看这世界。多问问自己，你是不是已经为了梦想而竭尽全力了? 7、人往往有时候为了争夺名利，有时驱车去争，有时驱马去夺，想方设法，不遗余力。压力挑战，这一切消极的东西都是我进取成功的催化剂。 8、真想干总会有办法，不想干总会有理由;面对困难，智者想尽千方百计，愚者说尽千言万语;老实人不一定可靠，但可靠的必定是老实人;时间，抓起来是黄金，抓不起来是流水。 9、成功的道路上，肯定会有失败;对于失败，我们要正确地看待和对待，不怕失败者，则必成功;怕失败者，则一无是处，会更失败。1、快乐总和宽厚的人相伴，财富总与诚信的人相伴，聪明总与高尚的人相伴，魅力总与幽默的人相伴，健康总与阔达的人相伴。 2、人生就有许多这样的奇迹，看似比登天还难的事，有时轻而易举就可以做到，其中的差别就在于非凡的信念。 3、影响我们人生的绝不仅仅是环境，其实是心态在控制个人的行动和思想。同时，心态也决定了一个人的视野和成就，甚至一生。 4、无论你觉得自己多么了不起，也永远有人比更强;无论你觉得自己多么不幸，永远有人比你更不幸。 5、也许有些路好走是条捷径，也许有些路可以让你风光无限，也许有些路安稳又有后路，可是那些路的主角，都不是我。至少我会觉得，那些路不是自己想要的。 6、在别人肆意说你的时候，问问自己，到底怕不怕，输不输的起。不必害怕，不要后退，不须犹豫，难过的时候就一个人去看看这世界。多问问自己，你是不是已经为了梦想而竭尽全力了? 7、人往往有时候为了争夺名利，有时驱车去争，有时驱马去夺，想方设法，不遗余力。压力挑战，这一切消极的东西都是我进取成功的催化剂。 8、真想干总会有办法，不想干总会有理由;面对困难，智者想尽千方百计，愚者说尽千言万语;老实人不一定可靠，但可靠的必定是老实人;时间，抓起来是黄金，抓不起来是流水。14、成长是一场和自己的比赛，不要担心别人会做得比你好，你只需要每天都做得比前一天好就可以了。 15、最终你相信什么就能成为什么。因为世界上最可怕的二个词，一个叫执着，一个叫认真，认真的人改变自己，执着的人改变命运。只要在路上，就没有到不了的地方。 16、你若坚持，定会发光，时间是所向披靡的武器，它能集腋成裘，也能聚沙成塔，将人生的不可能都变成可能。 17、人生，就要活得漂亮，走得铿锵。自己不奋斗，终归是摆设。无论你是谁，宁可做拼搏的失败者 9、成功的道路上，肯定会有失败;对于失败，我们要正确地看待和对待，不怕失败者，则必成功;怕失败者，则一无是处，会更5、别着急要结果，先问自己够不够格，付出要配得上结果，工夫到位了，结果自然就出来了。 6、你没那么多观众，别那么累。做一个简单的人，踏实而务实。不沉溺幻想，更不庸人自扰。 7、别人对你好，你要争气，图日后有能力有所报答，别人对你不好，你更要争气望有朝一日，能够扬眉吐气。 8、奋斗的路上，时间总是过得很快，目前的困难和麻烦是很多，但是只要不忘初心，脚踏实地一步一步的朝着目标前进，最后的结局交给时间来定夺。 9、运气是努力的附属品。没有经过实力的原始积累，给你运气你也抓不住。上天给予每个人的都一样，但每个人的准备却不一样。不要羡慕那些总能撞大运的人，你必须很努力，才能遇上好运气。 10、你的假装努力，欺骗的只有你自己，永远不要用战术上的勤奋，来掩饰战略上的懒惰。 11、时间只是过客，自己才是主人，人生的路无需苛求，只要你迈步，路就在你的脚下延伸，只要你扬帆，便会有八面来风，启程了，人的生命才真正开始。 12、不管做什么都不要急于回报，因为播种和收获不在同一个季节，中间隔着的一段时间，我们叫它为坚持。失败。11、学会学习的人，是非常幸福的人。——米南德 12、你们要学习思考，然后再来写作。——布瓦罗 13、在寻求真理的长河中，唯有学习，不断地学习，勤奋地学习，有创造性地学习，才能越重山跨峻岭。——华罗庚 14、许多年轻人在学习音乐时学会了爱。——莱杰 15、学习是劳动，是充满思想的劳动。——乌申斯基 16、我们一定要给自己提出这样的任务：第一，学习，第二是学习，第三还是学习。——列宁 17、学习的敌人是自己的满足，要认真学习一点东西，必须从不自满开始。对自己，“学而不厌”，对人家，“诲人不倦”，我们应取这种态度。——毛泽东 18、只要愿意学习，就一定能够学会。——列宁 19、如果学生在学校里学习的结果是使自己什么也不会创造，那他的一生永远是模仿和抄袭。——列夫· 托尔斯泰 20、对所学知识内容的兴趣可能成为学习动机。——赞科夫 21、游手好闲地学习，并不比学习游手好闲好。——约翰· 贝勒斯 22、读史使人明智，读诗使人灵秀，数学使人周密，自然哲学使人精邃，伦理学使人庄重，逻辑学使人善辩。——培根 23、我们在我们的劳动过程中学习思考，劳动的结果，我们认识了世界的奥妙，于是我们就真正来改变生活了。——高尔基 24、我们要振作精神，下苦功学习。下苦功，三个字，一个叫下，一个叫苦，一个叫功，一定要振作精神，下苦功。——毛泽东 25、我学习了一生，现在我还在学习，而将来，只要我还有精力，我还要学习下去。——别林斯基、学习外语并不难，学习外语就像交朋友一样，朋友是越交越熟的，天天见面，朋友之间就亲密无间了。——高士其 2、对世界上的一切学问与知识的掌握也并非难事，只要持之以恒地学习，努力掌握规律，达到熟悉的境地，就能融会贯通，运用自如了。——高士其 3、学和行本来是有联系着的，学了必须要想，想通了就要行，要在行的当中才能看出自己是否真正学到了手。否则读书虽多，只是成为一座死书库。——谢觉哉、你的假装努力，欺骗的只有你自己，永远不要用战术上的勤奋，来掩饰战略上的懒惰。 11、时间只是过客，自己才是主人，人生的路无需苛求，只要你迈步，路就在你的脚下延伸，只要你扬帆，便会有八面来风，启程了，人的生命才真正开始。 12、不管做什么都不要急于回报，因为播种和收获不在同一个季节，中间隔着的一段时间，我们叫它为坚持。 13、你想过普通的生活，就会遇到普通的挫折。你想过最好的生活，就一定会遇上最强的伤害。这个世界很公平，想要最好，就一定会给你最，取平均值； 6.计算样品所含总菌数：根据统计、计数结 果，计算样品所含的总菌数； 7.清洗处理计数板：实验完成后，及时按 规定清洁处理技术板。 本实验所用计数板，可用清水清洁处理后， 吸干水分，妥善保存。
实验九微生物的浓度测定-显微直接计数法
样品稀释
将采集的样品进行稀释， 使微生物分散成单细胞或 单个体。
制备涂片
将稀释后的样品滴在载玻 片上，盖上盖玻片，制备 成临时涂片。
显微镜观察与计数
显微镜调试
调整显微镜的焦距和光源，确保 视野清晰。
观察计数
在显微镜下观察涂片，对视野中的 微生物进行计数。
计数原则
遵循计数的原则，如只计数完整的 细胞或个体，不计数碎片或重叠的 细胞。
微生物识别
能够识别不同种类的微生 物，如细菌、霉菌等。
计数技巧
掌握计数的技巧和方法， 提高计数的准确性和效率。
了解微生物浓度与实际应用的关系
微生物浓度与生产过程
了解微生物浓度对生产过程的影响，如发酵、食品加工等。
微生物浓度与产品质量
了解微生物浓度与产品质量的关系，如食品、药品等的质量控制。
微生物浓度与环境监测
显微直接计数法的优缺点
优点 直接观察微生物的形态和大小，有助于了解微生物的种类和特性。
无需培养，可以快速获得结果，适用于测定样品中所有微生物的浓度。
显微直接计数法的优缺点
01
缺点
02
03
04
需要经验丰富的操作人员，对 微生物的形态和染色特性有较
高的识别能力。
计数结果受操作人员的主观影 响较大，重复性较差。
数据记录与处理
数据记录
将观察计数的结果记录在表格中 ，包括样品名称、稀释倍数、计 数结果等。
数据处理
根据记录的数据计算微生物的浓 度，并进行统计分析，得出实验 结论。
04
结果分析
计数结果的准确性分析
准确性分析
通过与已知浓度的标准菌液进行对比 ，评估计数结果的准确性。若误差在 可接受范围内，则认为计数结果准确 可靠。
微生物实验显微镜直接计数法
1.血球计数板法
利用计数板上有固定体积和精确刻度的两个计数室进行
计数，是常用的在显微镜下对细胞数目进行计数的方法。
（1）计数室体积：正方形，边长为1mm，深0.1mm→盖上 盖玻片后，容积为0.1mm3。 （2）计数室刻度的规格
具有直观、快速等优点，但误差较大，不适合细菌计数。
16×25型：16个中方格，每个中方格分25个小格；
25×16型：25个中方格，每个中方格分16个小格。
计数室
（3）计数和计算方法
我们采用的是25×16的，计数时查5个中方格的总
菌数。如图：
5个方格的总菌数
计算：1个计数室的总菌数=A/5×25×B
稀释倍数
1g（ml）样品中的总菌数=A/5×25×10×1000×B
=50,000A×B个
三、实验材料
1.菌种：酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）悬液(已
稀释100倍)
2.器具：显微镜、血球计数板、吸管、盖玻片。
四、实验步骤
1.检查计数板
检查计数板是否有破损。
2.镜检计数室
在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物， 则需清洗后才能进行计数。
3.加样品
在清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用细口滴管 让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室，一般
六、作业
显微直接计数结果
÷Ð · Ö · ½ · ñ Ö Ð ¾ ú Ê ý 1 Ú Ò µ » Ê Ò Байду номын сангаас ¶ µ þ Ê Ò 2 3 4 5
5个中格总数
þ Ê ¶ Ò
A
B
100
ú Ê ¾ ý /ml Æ ½ ¾ ù Ö µ
微生物显微镜直接计数法
执行【display flash:/sup.bin flash:/sup.bin
Next startup system software:
flash:/sup.bin
Startup saved-configuration file:
flash:/vrpcfg.zip
//本次启动配置文件
Next startup saved-configuration file: flash:/vrpcfg.zip
天凌晨3点结束。
设备环境基本配置
用户级别切换
用户从高级别切换到低级别时，不需要使用密码。 如果用户从低级别切换到高级别时，必须输入正 确的级别切换密码。
切换用户级别的环境配置包含两个步骤：
使用高级别用户配置切换用户级别的密码 低级别用户登录系统后，切换用户级别。
设备环境基本配置
用户级别切换示例
1. 酵母菌液 2. 显微镜、血球计数器、目镜测微尺、镜台测微尺 3. 载玻片、盖玻片、接种环、胶头吸管等
图5-1 Thoma血球计数板
A.正面图 B.纵切面图 1.血球计数板 2.盖玻片 3.计数室
16小格 × 25大格计数室
25小格 × 16大格计数室
图5-2 计数室的两种刻度形式
四、实验内容
（一）酵母菌数量的检测
1. 显微镜直接计数法（每人1片） 注意事项: A. 取样时先要摇匀菌液;加样时计数室不可有气
泡产生。 B. 调节显微镜光线的强弱适当。 2. 平板菌落计数法 (实验八)
（二）酵母菌大小的检测
注意事项：观察时光线不宜过强,否则难以找到镜台测微尺的刻 度;换高倍镜和油镜校正时,务必十分小心,防止接物镜压坏镜台测 微尺和损坏镜头。
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实验1微生物细胞大小测定及显微镜直接计数法
• 定位后，仔细寻找两尺第二个完全重合的 刻度，计数两重合刻度之间目镜测微尺的 格数和镜台测微尺的格数。因为镜台测微 尺的刻度每格长l0μm，所以由下列公式可 以算出目镜测微尺每格所代表的长度。
• 例如目镜测微尺5小格正好与镜台测微尺5小 格重叠，已知镜台测微尺每小格为l0μm，则 目镜测微尺上每小格长度为=5×10μm/5＝ 10μm。 • 用同法分别校正在高倍镜下和油镜下目镜测 微尺每小格所代表的长度。
• 计数区由400个小方格组成。
• 每个大方格边长为1mm，其面积为lmm2，盖上盖玻 片后，盖载玻片间的高度为0.1mm，所以每个计 数区的体积为0.1mm3。
• 使用血球计数板计数时，通常测定五个中方格的 微生物数量，求其平均值，再乘以25或16，就得 到一个大方格的总菌数，然后再换算成1毫升菌 液中微生物的数量。 • 因此：每ml菌悬液中含有细胞数= 每个中方格中 细胞平均数（N）×系数（K）×菌液稀释倍数 （d）
• 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上 有4条槽而构成3个平台。中间较宽的平台，被一 短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数 区。 • 计数区的刻度有两种： • 一种是计数区（大方格）分为16个中方格，而每 个中方格又分成25个小方格； • 另一种是一个计数区分成25个中方格，而每个中 方格又分成16个小方格。
• 镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片， 一般将lmm等分为100格，每格长l0μm（即 0.0lmm），是专门用来校正目镜测微尺的。校正时， 将镜台测微尺放在载物台上。 • 由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要 经过物镜和目镜的两次放大成象进入视野，即镜台 测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此 从镜台测微尺葡 萄球菌
大肠杆菌
显微镜直接计数法流程
显微镜直接计数法流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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菌号
1 2 3 4 5 均值
酵母的直径大小测定结果
目镜测微尺格数
实际直径/µm
h
μm。
7
将显微计数结果记录于下表中。T表示五个 中方格中的总菌数；D表示菌液稀释倍数。
各中格中菌数
T D 二室 个
平均 /ml
12345
Hale Waihona Puke 值第一 室第二 室
h
8
问题与讨论
为什么目镜测微尺必须用镜台测微尺来 校正？
在显微镜下直接测定微生物数量有什么 优缺点？
实验三
微生物的显微镜直 接计数法和大小的
测定
h
1
实验目的
学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显 微镜下测定微生物大小的方法。
学习使用血球记数板测定微生物数量的 方法。
h
2
实验材料
显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、 血球记数板、酵母菌悬液、盖玻片、 无菌滴管、吸水纸、擦镜纸。
h
3
实验步骤
测定酵母菌细胞的大小 测定的工具：目镜测微尺 镜台测微尺
目镜测微尺每格实际代表的长度随物镜的放大倍 数而改变，也会因使用不同的显微镜而产生误差， 因此在使用前必须用镜台测微尺进行校正。
目镜测微尺的每格长度(μm)=镜台测微尺×10/目镜测微尺
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4
酵母菌显微直接计数
方法：活菌计数法——平板菌落计数法；总菌计数 法——血球计数板或霍瑟（Peroff Hausser）细菌计 数板（二者原理和部件相同，只是厚薄不同而已）。
细胞数/ml=100小格内细胞总数÷100×400×10×1000×稀释倍数
细胞数/ml=80小格内细胞总数÷80×400×10×1000×稀释倍数
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5
1. 取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加 盖血盖片。
2. 取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴 一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有 气泡。
3. 用4×镜观察并将计数室移至视野中央。
4. 在4×镜下计数：计数4个（或5个）中格的平 均值，然后求得每个中格的平均值。乘上16 （或25）就得出计数区总菌数，最后再换算 到每mL菌液中的含菌数。
5. 注意事项：计上不计下，计左不计右。出芽 计一半
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6
实验结果
目镜测微尺标定结果：
×目镜下 倍物镜目镜测微尺每格长度是
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9
本次实验课结束
请确保血球计数板清洗干净！ 请值日生同学留下值日 下周再见！
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