20150921第21章 临床生化检验方法与试剂盒评价(2)
临床生化诊断试剂盒的选择与评价
主要内容
试剂盒分类和特 点 试剂盒的制备 试剂盒的选择 试剂盒性能评价
主要内容
➢掌握临床生化诊断试剂盒的性能指标及 质量评价方法，能正确地选择和评价试 剂盒。 ➢熟悉诊断试剂盒的分类和特点。 ➢了解诊断试剂盒的发展史以及与方法学 的关系，诊断试剂盒的制备及其组成成 分的质量要求。
第一节 试剂盒的分类和特点
多项同测组合试剂盒
➢这类型试剂主要是用于三点双项同测终点法、 三点双项同测连续监测法和三点双项同测终点 速率法测定的试剂盒。 ✓在同一比色杯中，先后加入两种试剂与检品中 的两种被检物发生反应，在各反应达到平衡期 时分别测定，整个测定过程进行三次比色，测 定两个项目，称为三点双项同测终点法。
干粉片型试剂
液体单剂型试剂
流动离心式分析议
免疫学法
液体型商品试剂
液体双剂型试剂
任选分立式分析仪
干化学法
干式多层胶片型试剂 单剂型干片式试剂
干片式分析仪
图6-1 临床生化诊断试剂盒分类和发展史
第一节 试剂盒的分类和特点
液体型试剂和粉（片）剂型试剂
➢液体型试剂 ✓ 优点是液体型试剂的试剂组分高度均一， 瓶间差异小，测定重复性好和使用方便；它也 无需加入任何辅助试剂及蒸馏水，避免了外源 性水质对试剂的影响，性能较稳定，测定结果 较为准确。 ✓ 缺点是液体型试剂（尤其是酶试剂）保存 时间较短，不便于运输。
➢液体双试剂 所谓液体双试剂就是将某些生化检测项目所 用到的试剂，按用途科学地分成两类，分别 配成两种试剂，通常第一试剂加入后可起到 全部或部分消除某些内源性干扰的作用，第 二试剂为启动被检测物质反应的试剂，两种 试剂混合后才共同完成被检项目的生化反应。 然后用适当的方法检测结果。
生化全面质量控制及试剂盒的选择与评价
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第一节
主要步骤
全过程质量控制
全面质量控制的内容
▼ 分析前质量控制
▼
▼
分析中质量控
分析后质量控制
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二、全面质量控制的内容
全面质量控制的内容主要包括标本分析前的
质量保证、分析中的质量控制和分析后的质量评
估三个主要过程的质控。它们之间的实验保证体
系见图4-1。
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（一）分析前质量控制
内容主要为： ① 人员的素质和稳定性 ② 实验室的设置和工作环境 ③ 实验仪器的质量保证 ④ 检测方法的选择和评价 ⑤ 试剂盒的选择与评价 ⑥ 病人准备 ⑦ 标本的采集、处理和储存 ⑧ 实验室用水等
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质控品的种类
根据质控品的物理性状不同分为冻干质控品 、液体质控品和混合血清等． 根据有无测定值可分为定值（蓝色标签）质 控品和非定值（红色标签）质控品。 各实验室可根据各自的情况选用以上一种质 控品作为室内质控品．
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质控品应具有的特征是：
①人血清基质，分布均匀。
②无传染性。
③添加剂和调制物的数量少。 ④瓶间CV%酶类应小于2%，其它应小于1% 。 ⑤冻干品复溶后稳定，2～8℃时不少于24小时，－20℃时不 少于20天；某些不稳定成分（如BIL，ALP等）在复溶后4小时 的变异应小于2% ⑥在实验室的有效期应在一年以上。 ⑦合理的成本。
质控品
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1．人 员 培 训
实验室每个工作人员都应对开展质量 控制工作的重要性、基础知识、一般方法 有充分的了解，并在实践过程中不断学习 、提高。每个实验室都应培养一批开展质 控工作的技术骨干。
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2．建立标准化操作规程
标准化操作规程（standard operational procedure，SOP）包括仪器使用及维护的操 作规程，试剂、质控品、标准品等使用的操 作规程和每个检验项目的操作规程等。
临床生化检验质控管理及试剂使用评价研究
临床生化检验质控管理及试剂使用评价研究作者：杨惠雯来源：《延边医学》2015年第11期摘要：目的：分析与探讨临床生化检验质控管理策略，并评价试剂使用效率。
方法：资料选自2014年5月-2014年5月本院收治的112例病人，将其随机划分成实验组与对照组，平均每组56例。
对照组病人予以传统临床生化检验措施，而实验组研究对象则予以临床生化检验质控管理措施，对比与分析两组研究对象的结果，并对试剂使用状况进行客观评价。
结果：实验组研究对象的异常率为3.57%，对照组研究对象的异常率为44.64%，组间比较差异较为显著（P<0.05）。
同时，两组研究对象在样品的误差值、时效性以及重现性等方面的比较也存在差异（P<0.05）。
结论：临床生化检验质控管理是提升检验结果完整性、准确性以及时效性的重要方式，不仅能提升检验程序的操作价值，还能使之成为疾病诊治过程中的重要参考标准，具有较高可行性。
关键词：临床生化检验;质控管理;试剂;使用评价当前，临床生化检验已经成为临床诊断、临床治疗过程中的重要前提与参考指标，检验结果的精准性与实时性直接决定了临床治疗的整体水平，对于挽救病人生命起着十分重要的意义。
临床生化检验通常会受到各种主客观因素的共同影响，导致检验结果出现部分误差，而为了提升其检验效率，必须加强质控管理，强调试剂使用环节的准确性[1]。
笔者将2014年5月-2014年5月本院收治的112例病人视作研究对象，将其随机划分成两个组。
其中，对照组研究对象行传统临床生化检验措施，而实验组研究对象则采取临床生化检验质控管理措施，期望能够找到提升检验结果准确性的主要方案，现作详细报道。
1.资料及方法1.1临床资料选取2014年5月-2014年5月本院收治的112例病人，男女比例：68：44;病人年龄在21-50岁之间，其平均年龄约（32±3.19）岁。
将112例病人随机划分成为两个组，组均56例，且两组研究对象在性别与年龄等资料中的对比不存在显著差异（P>0.05），可进行对比。
临床生化实验方法的选择和评价
酶法 MDH-NADH法 LDH-NADH法 连续监测产物生成法 NAD+偶联法
ID-MS：同位素稀释-质谱分析法
2、标准品的分级
标准品是一种物质，它的一种或几种物理或 化学性质已经充分确定，可被用来校正仪器或证 实某种实验方法。 1）一级标准品：已确定的稳定而均一的物质，可用 于校正决定性方法、评价或校正参考方法，为 “二级标准品”定值。一级标准品都有证书，在 美国由国家标准局（NBS）发给合格证书，并指明 它的性质和有关数据。 2）二级标准品：由参考方法定值有关物质的量，主 要用于常规方法的标化或为质控物定值。
3）常规方法（routine method ） ：
性能指标符合临床或其他目的的需要，有 足够的灵敏度、准确度和特异性，有适当的分 析范围，经济适用。这类方法经有关学术组织 认可后可称为推荐方法（recommended method ）。
项目 钙 氯 镁 磷 钾 钠 白蛋白 总蛋白 肌酐 尿素 尿酸 胆红素 葡萄糖 胆固醇 甘油三酯 AST（GOT ） ALT（GPT） 转肽酶（r-GT） 肌酸激酶
诊断特异度=
实际检查结果为阴性数 全部受检的未患病者总数 X100%
理想试验的诊断特异性为100%。
（二） 参考值与医学决定水平的确定
1．参考值
1）概念 参考范围：以95%的可信性为界，以X±2S表示
是指从某一参考个体或参考人群中获得的测定数值。
在临床检验中，将获得的观察值即某项检验结果与某个 标准的数据进行比较，借以对资料作出合理解释。
加入浓度＝
回收率（%）=
注意事项： 吸量准确； 加入标准液后，其实验样品的被子测浓度最好 达到医学决定水平； 总浓度必须在方法分析范围内； 需加入高中低不同浓度回收试验，计算平均回 收率； 加入标准液的体积一般在10%内； 重复2-3次。
临床生化检验试剂盒性能评价试验—线性范围试验概要
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注意事项
1.葡萄糖标准液的加量必须十分准确,应用计量性 能准确度很高的微量进样器加样. 2.本方法线性可达22.24mm/L,(指生化分析仪)造成 线性变窄的原因试剂配料中组分投料不足;试剂配 制后组分稳定性差;因运输或储存不当等导致试剂 组分的含量发生变化. 3ห้องสมุดไป่ตู้酶法测定时,有时当酶量相对不足时,用标准液所 作的线性范围可以达到指定的高值,但在测定同样 高值样本时,结果却明显偏低,这往往 是样本中介质效应引起的，值得注意.
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线形回归计算法
1.按下【MODE】【2】.进入回归分析状态, 显示“LR”,同样数据前要先按【INV】 【AC】,以清除可能存储的其他数据,输入X 值后既按【X▫.Y▫】键，输入Y值后既按 【DATA】键.若已知变量X的一个观察 值，求估计值Y时，可直接输入X值，随后按 【Y】即可求得；若已知Y值求估计值X，则 输入Y值后按【INV】【X】即可求得X值．
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`
① 操作进入LR状态，清除内存【MODE】【2】 【INV】 【AC】 ②输入原始数据X 【X▫.Y▫】， Y 【DATA】 ③输出结果 回归方程的截距【INV】【A】 回归系数【INV】【B】 相关系数【INV】【r】 【A】
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以吸光度为纵坐标，反应时间为横坐标作图，观察 动态期（包栝延迟期，线性期，混和期）和平衡期 出现，持续和终止的时间，分析有关性能指标。
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临床生化试剂盒性能指标主要有
3.稳定性
是指试剂盒在规定条件下储存仍保持其 性能指标的期限
包栝原包装和工作液在指定条件下稳 定性
试剂盒性能评价
批内标准差（Sw)
S
m
2 i
2 式中Si2为3轮各次测定值的方差，即： Si
(Xi X) n -1
2
(3)
变异系数（
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
CV %)
批内标准差 Sw 100 批内均值
3. 统计学分析表
表 批内重复性试验的数据处理（试验后将此表填好）
【评价标准】
1. OCV标准和试剂盒CV值标准 如试验求得的血清尿素OPA测定法的CV值＜WHO对中等实验室提出的OCV (±3%)标准，即表明实验条件的控制达到最佳条件，试验结果可按OCV%报告。作 为方法探讨实验，其变异系数应该＜OCV标准。见于本实验室条件和检测方法本实 验的CV值应不大于试剂盒说明书的CV值即可。
最低检测下限—灵敏度
S 30 40 50
0 1.5
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3. 线性评价-统计学分析：采用回归分析建立直线回归方程
a
Y b X
n n
2
Y bX
XY ( X )( Y ) / n b X ( X ) / n
2
ˆ a bx Y
4. 直线相关分析——相关系数r
1．检验20次测定数据中的离群值 如存在异常值时应剔除。对小样本测定来讲， Grubbs检验方法概率意义明确，能给出严格的结果，是最合理的检验方法。 2．按照批内精密度的计算公式计算5轮每轮4次测定值的平均数( X)、批内标 准差(Sw)和变异系数(CV%)。 (1) (2)
批内均数 每轮测定值均数之和 ( X ) 测定轮数（ m ）
试验环境要求—不可忽视
进行上述各项性能指标检测时，要求操作正规，使用的容 器均经过校准，自动分析仪或分光光度计的波长、灵敏度、稳 定性均符合要求，温度准确、蒸馏水合格，标准参考物含量或 定值血清的靶值均经验证。因为测定值是否准确可靠，除与试 剂有关外，上述这些条件都是影响因素，如果上述因素控制不 好，试剂盒质量好，测定的结果也会出现较大误差。因此，在 分析试剂盒性能检测结果时，要全面分析，排除了试剂盒以外 的影响因素之后，才能说明是试剂盒本身的影响，切不可简单 从事。
生化全面质量控制及试剂盒的选择与评价
2.Westgard多规则质控法
（1) 方法：
要求在常规条件下，同时测定2份定值质控血清， 并要求质控血清所含测定物浓度最好分别为医学决定水 平的上限（高值）或下限（低值），或者是分析方法测 定范围的上限和下限。将测定结果分别绘成2份不同浓
度的 X －s质控图，当有一份质控血清测定值处于质控
图上2s～3s界限内，发出“警报”信号时，即应采用其 余各条规则对质控图进行全面检查，若符合其中一条， 就应把该批分析测定的结果判为“失控”。
常规变异(routine conditions variance RCV)表示实验室 在常规条件下测定项目所能达到的精密度水平。
RCV<20CV 或 RCV 接 近 OCV 时 ， 可 接 受 ； RCV>20CV时，不可接受．二者是反映实验室工作水平的 基础指标，也是开展室内质控工作的基础工作。
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1953年世界上出现了商品性的控制血清。 1954年发展到国与国之间的质量调查。 1960年代初已发展为全面质量控制。 1974年在日本召开了第一次临床生化检验质量控制国际 专 题讨论会。 随后WHO和国际临床生化学会都设有质控领导机构，向各 国提供标准品和控制物，领导和管理国际性的质量控制工作。
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质控品的正确使用和保存
①严格按质控品说明书操作。 ②冻干质控品的复溶要确保溶剂的质量。 ③冻干质控品复溶的加量要准确一致。 ④冻干质控品复溶应轻轻摇匀切忌剧烈震摇。 ⑤质控品应按规定方法保存不用超期品。 ⑥质控品要与标本同样测定条件下测定。
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二、室内质量控制的主要方法
确定质量目标 设定靶值和控制限 Levey-Jennings质控图 多规则质控技术
分析中质量控制
标本 处理
试剂盒在临床生化检验中的选择和质量控制分析
试剂盒在临床生化检验中的选择和质量控制分析为保证临床生化检验的质量，通过对自动生化试剂盒的外观、稳定性、灵敏性及其它主要的本性能指标质量评估，将它作为常规的生化试剂盒的质量评价标准，选择合适的临床生化检验试剂盒，确保临床检验的结果准确性。
标签：试剂盒；临床生化检验；质量控制检验科临床生化检验的试剂盒质量的好坏，直接关系其检测结果是否准确，同时影响临床诊断是否准确，因此正确的择选生化试剂盒以及试剂盒的质量控制十分重要[1]。
随着自动分析仪的临床推广和应用，各种各样的生化试剂纷纷上市，逐渐的取代了手工操作，大大提高检验的效率，也提高检验的精准率。
本文现结合实际的工作经验，对试剂盒的选择以及试剂盒质量的控制报道如下。
1 试剂盒的选择1.1包装及外观选择试剂盒时首先应检查试剂盒的包装，外包装完好无损，印有完整的试剂名称、生产批号、生产日期、失效日期、储存条件以及产地等。
内包装应清楚的印有产品标签，标签的内容包括试剂的名称、有效期、生产批号等。
仔细的阅读说明书，包括试剂应用的范围、检测原理、检测步骤、适用的仪器、具体操作的方法及需注意的事项等。
然后认真的观察试剂外观，例如试剂的性状及颜色，做出初步的判断。
发现试剂颜色与说明书不符时，说明试剂已经变质。
观察试剂性状，液体类的试剂正常情况下不会有沉淀和混浊，粉末类的试剂通常不会凝结成块，如有上述情况，则说明试剂盒已经变质或受潮。
1.2准确度利用回收实验以及对照实验来检测试剂盒准确度。
回收实验时，回收值要在测定线性范围之内，回收率一般不能超过（100±5）%。
待测物难精确加入时可用对照实验检测，将被检测的试剂盒与公认符合标准的试剂盒同时测定，检测不同浓度样本，然后计算线性回归方程及相关系数（r），如果r<0.9，则表明试剂盒准确度低，不适合采用[2]。
1.3抗干扰性生化检验的标本中除待检测的成分外，还常混有多余的成分，比如乳糜血清或黄疸，这些成分将不同程度的干扰试剂，导致检测的结果受到不同程度的影响。
生化试剂盒选择与评价
临床生化诊断试剂盒的选择与评价
随着自动生化分析仪的研制成功和普遍使用， 推动了体外诊断试剂商品化的进程， 商品试剂与 标准液按检测项目组合成一套放在一个包装盒内叫试剂盒（reagen kit） ，或叫试剂组合（reagen set） 。与自动化分析仪匹配的试剂盒的研制、生产和供应走向产业化的道路，它无疑是临床生化发 展史上一个巨大的技术进步。但是，试剂盒的质量，将严重影响测定结果的正确性。为了增强识别 试剂质量的能力， 提高拒用劣质试剂的自觉性， 掌握有关试剂盒的质量标准和质量评价是十分有益 的。
（一）液体型试剂 无论是单试剂还是双试剂型试剂， 目前乃至今后仍以液体型为主要剂型。 其优点是液体型试剂 的试剂组分高度均一，瓶间差异小，测定重复性好和使用方便；它也无需加入任何辅助试剂及蒸馏 水，避免了外源性水质对试剂的影响，性能较稳定，测定结果较为准确。缺点是液体型试剂（尤其 是酶试剂）保存时间较短，不便于运输。 1．液体单试剂 所谓液体单试剂就是将某种生化检验项目所用到的试剂科学地混合在一起，
二、其它类型试剂
为了适应生化分析仪和测定方法学的进步， 近年来研究了许多新型的试剂盒， 主要有以下几种。 （一）快速反应试剂盒 快速反应试剂盒主要是为了适应生化分析的技术进步，缩短反应时间，提高工作效率。如血液 葡萄糖快速测定试剂盒。其试剂成分及浓度为磷酸盐缓冲液 100mmol/ L，pH7.4±0.1，葡萄糖氧 化酶 > 40u / ml，变旋酶 > 0.2u / ml，过氧化物酶 > 2.5u / ml，4-氨基安替比林 0.5 mmol/ L， 4-羟基苯甲酸 4 mmol/L，亚铁氰化钾 1mg / L，叠氮钠 0.4g / L。同一般葡萄糖氧化酶法试剂相 比是明显增加了葡萄糖氧化酶及过氧化物酶用量，更主要是增加了变旋酶，可使反应加快，3～4 分钟后即生成最终颜色。再如快速胆固醇试剂盒，用的是 pH6.6±0.2，250mmol/ L 磷酸盐缓冲液， 胆固醇酯酶为 250u / L，胆固醇氧化酶 250 u/L，过氧化物酶 4000u / L，4-氨基安替比林 0.3mg / L，DHBS 8mmol/ L。样品与试剂比例是 1:100。37℃反应 2 分钟即可完成反应。可以明显看出是
临床生化检验方法与试剂盒评价 课件
质控品多是成分相对稳定的混合血清，分为定值和非定值、冻 干或液体，添加了防腐剂和保护剂等。定值往往由试剂盒供应 商委托几家实验室在特定测定系统上测得的均值和标准差。
干扰试验的设计同回收试验，即将不同浓度的干扰物代替纯标 准品。一般规定只对胆红素、血红蛋白、脂类做干扰试验。 干扰值＝加入干扰物后的测定值－基础测定值
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第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
（四）线性试验
线性试验用来评价剂量和反应之间的线性关系，并把呈直 线部分确定为线性范围（linear range）。线性范围指检 测信号与被测物浓度呈线性时的被测物浓度范21-1 各级参考物质和校准品的关系及其量值传递过程
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第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
三 量值溯源
溯源性
溯源性(traceability）是指通过一条具有规定不确 定度（uncertainty）的不间断的比较链，使测量 结果或测量标准的值能够与规定的参考标准（通 常是国家或国际测量标准）联系起来的特性，称 为溯源性。其不间断的比较链称为溯源链。
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第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
（六）检测限
检测低限通常是指能与适当的“空白”读数相区别的待测物的最小 量。方法是做空白平行试验（一般20次），以蒸馏水调零，读取各 次吸光度，计算均值（Ab）和标准差(S)。以Ab+3S表示与“空白” 读数相区别的最小吸光度，将其换算成浓度，作为该法的检测低限。
整个检测系统涉及的各个部分完全按照指定厂商要求配 套使用。若该系统已经国家法定部门认证,则使用这样 的检测系统对临床样品进行检验，其结果具溯源性。
临床生物化学检验试剂盒的性能评价
临床生物化学检验试剂盒的性能评价第三节一临床生物化学检验试剂盒的性能评价临床生化检验试剂盒是用化学和生物化学反应的原理二用于完成一个特定体外诊断检验,而包装在一起的一组组分三试剂盒组分可包括抗体二酶二缓冲液二稀释液二校准物二控制物或其他物品和材料,用于体外测定人体体液中的化学和生物化学组分来获取临床诊断信息三它是体外诊断试剂(i nv i t r od i a g n o s i s r e g e n g t s)中的一大类,根据我国国家食品药品监督管理局(S F D A)的‘医疗器械分类目录“,归为临床检验分析仪器类,按医疗器械管理三体外诊断试剂按风险级别进行分类分级管理,Ⅲ二Ⅱ二Ⅰ类产品分别由国家二省级二市级药品监管部门审批,临床生化检验试剂盒多属Ⅱ类产品三一二临床生物化学试剂盒的质量标准2006年制订了‘临床化学体外诊断试剂(盒)通用技术要求“,规定了临床化学体外诊断试剂(盒)质量检验的通用技术要求,包括术语和定义二分类和命名二要求二试验方法二标签和使用说明二包装二运输和贮存三适用于医学实验室进行临床化学项目定量检验所使用的体外诊断试剂(盒)三该标准是目前临床化学体外诊断试剂(盒)注册审批的标准三二二临床生物化学检验试剂盒的分类根据其物理性状,可以分为干试剂和液体(湿)试剂,干试剂根据制备工艺不同分为干粉二冻干二片剂二干试剂条等三干试剂的优点是运输方便二保存期长,其缺点是组分均一性较差,瓶间差较大,分装过程中的称量误差和复溶时加入水量的误差,都导致瓶间的不均一性,水质的优劣对试剂的稳定性和测定结果的可靠性有相当大的影响三除干试剂条应用于干式生化仪外,其他干试剂已经逐渐被淘汰三液体试剂因组分高度均一二瓶间差小二测定重复性好二不需复溶直接使用等优点,是目前使用最广泛的剂型三液体试剂主要分为单液体型和双液体型三(一)单液体型单液体型特别适用于半自动生化分析仪和小型自动生化分析仪三半自动生化分析仪和小型自动生化分析仪因缺试剂瓶位置或试剂瓶位置少,而适用单试剂三从技术角度讲,要保证足够的试剂盒稳定性,在所有剂型中,单液体型试剂盒对稳定技术的要求最高,尤其是酶法分析试剂盒,将酶二辅酶二色原等组合为单一试剂,稳定技术更高三但抗干扰能力无法与双液体试剂比拟三(二)双试剂液体型大多数中二大型生化分析仪有两根试剂针,使用双试剂不会影响分析效率三有时为了稳定性的需要,试剂盒内含有三个试剂,临用前将某两个试剂混合,再按双试剂使用三因具备优点多,是目前主流剂型三1.稳定性能好一与单一液体试剂相比,可以分拆为两个试剂,可采用不同的缓冲体系(离子强度和p H都不同),混合后为最适p H;其稳定技术容易得多,比如,可以将酶和辅酶与色原分开,也可把辅助酶与指示酶分开三2.可消除样品自身空白一可设计成第一试剂与样品不发生化学和生物化学反应,两者混合后读取第一个吸光度,在两点平衡法中可扣除该吸光度,相当于做了一个空白对照三所以,原来传统用单一试剂的方法,如双缩脲法测定总蛋白二溴甲酚绿法测定清蛋白等,都特地分拆成两个试剂,第一试剂的作用等同于蒸馏水,第二试剂经过浓缩,混合后各组分含量同传统的单一试剂,起到消除样品空白的作用三3.提高抗干扰能力一①消除内源性和外源性干扰:首先让试剂Ⅰ与样品中的干扰物质反应,一定时间后再用试剂Ⅱ启动真正的测试反应,最大程度地消除内源性和外源性干扰三如消除甘油对T G二丙酮酸对A L T/A S T二N H4+对尿素的干扰等三②消除杂酶的干扰:如G L D H对待测脱氢酶的干扰三③消除T r i n d e r s反应负干扰,在试剂Ⅰ中的氧化剂与样品中胆红素二维生素C 氧化酶与样品中的维生素C进行预反应三4.预反应一试剂Ⅰ与样品预反应,有足够的时间让辅基或辅酶对酶进行复活,免疫抑制法中使抗体对某一抗原的抑制更彻底三(三)其他剂型多项同测组合试剂是指两个相似的项目在同一反应杯中进行先后测定,其最大的优点可以减少试剂仓位三如直接胆红素和总胆红素二胆固醇和T G的组合试剂等三浓缩试剂则在测定之前,自动生化分析仪先稀释,优点是在工作量繁重时可以减少添加试剂的次数三三、临床生物化学试剂盒的性能指标及评价临床生化试剂盒的性能指标包含了所有方法学的性能指标,并增加了稳定性能的指标三一般来讲,采用化学反应原理的试剂盒稳定性较好,而酶二辅酶二底物二抗体等多不稳定,增加了对试剂盒稳定性的难度三根据‘临床化学体外诊断试剂(盒)通用技术要求“,参考‘临床化学体外诊断试剂(盒)产品技术审评规范“(2011版),试剂盒的性能指标及评价方法如下:(一)试剂空白吸光度用蒸馏水做空白,用指定的空白液加入试剂作为样品测试,是判定试剂质量的一个有效指标三对以N A D H做底物的负反应试剂盒,因N A D H在中性缓冲体系不够稳定,规定其空白吸光度需>1.0,目的是保证足够量的底物N A D H,保证足够的线性范围,避免底物耗尽三以色素原底物的试剂盒,其不稳定因素主要来自于底物三因色素原底物容易自身水解,因此也需要规定其空白吸光度不能超出一定范围,以防止底物不足三对以T r i n d e r s反应原理的试剂盒,防止发色基团的氧化,规定空白吸光度需<0.05;因较高的空白吸光度会导致线性范围变窄,重复性变差三(二)试剂空白吸光度变化速率对于速率法试剂盒,用指定的空白液加入试剂作为样品测试时,测定试剂空白吸光度变化(ΔA/m i n),用来检查试剂在工作状态下的稳定性三但事实上,试剂空白吸光度变化速率无法反映试剂盒的稳定性,因为试剂盒的稳定期一般要求一年以上三若每分钟有明显的吸光度变化,按0.001/m i n计算,37?孵育一天,其总的吸光度变化达到1.44,说明试剂早已失效三试剂空白吸光度变化速率主要反映干扰程度和仪器的稳定性,如反应杯的洁净程度及分析仪的交叉污染严重程度三但若某个试剂中有杂酶,若两个试剂混合后会造成试剂空白吸光度变化速率过高,所以也是评价试剂盒质量性能的指标三(三)分析灵敏度用吸光度差值(ΔA)或吸光度变化(ΔA/m i n)来表示单位浓度的被测物反应所引起的信号变化,其含义类似摩尔吸收系数三分析灵敏度不是越高越好,以适合待测物检测范围为原则三如胆固醇二葡萄糖二尿酸二肌酐的测定方法都用T r i n d e r s反应,血液中这些物质的含量相差数倍甚至几十倍,应使用不同灵敏度的发色剂三对酶法分析试剂盒而言,酶试剂不稳定,可导致灵敏度下降;对免疫比浊法而言,抗体效价下降也会造成灵敏度下降三分析灵敏度一般用于批间比较,较能反映制造商的配方二原料的一致性三(四)线性范围取高浓度样品和低浓度样品按不同比例混合成5个浓度做线性试验三试剂(盒)的线性范围越宽,临床复测几率越小,但与样品/试剂比例成反比三国家对线性范围的要求较低,但要求线性相关系数r应?0.990,同时对线性偏差也作出规定三(五)重复性用质量控制血清3?3(3个批号,每个批号取3瓶)测试批间差,较能反映制造商的配方二原料的一致性三干粉或冻干试剂还需测定批内瓶间差,测定同一批号的试剂20瓶,用变异系数(C V)来表示三(六)准确度1.相对偏差一直接用试剂盒测定参考物质(平行3次),评价测定均值与靶值的偏离程度三如无参考物质,可用由参考方法定值的高二中二低三个浓度的人混合血清,用试剂盒平行测定3次,计算均值与定值的相对偏差三2.回收试验一测定试剂盒若有标准品,也可用回收率衡量比例系统误差三3.比对试验一既无参考物质二参考血清,也无标准品,也可用比对试验来验证准确度三参照E P9A2的方法,用不少于40个在检测浓度范围内不同浓度的人血清样品,以公认的分析系统作为比对方法,用线性回归方法计算两组结果的相关系数三(七)稳定性1.效期稳定性一取已到效期的试剂盒按以上评价方法对试剂盒性能指标进行评价三可作为审批的依据,但对该批次的试剂盒的稳定性意义不大三2.热稳定性试验一对同批次试剂盒稳定性目前没有很好的评价方法三生化试剂盒一般置2~8?保存,为了快速有效地评价试剂盒的稳定性,可以用加速试验来估计三即将试剂盒置于37?孵育箱,每天按以上评价方法对试剂盒性能指标进行评价三根据蛋白质在不同温度下稳定性换算公式估算,37?孵育一天相当于2~8?一个月三但因为试剂盒成分复杂,各种酶的耐热性有很大差别,所以只能对该批次试剂盒的稳定性做大概估计三3.开瓶稳定性一也称在仓稳定性,是指试剂盒置分析仪试剂仓在使用过程中的稳定性三试剂曝露于空气会影响缓冲体系的p H等,仪器的交叉污染也会影响使用中的稳定性三在临床实际工作中,更关注开瓶稳定性三评价方法是每天记录空白二校准和质控品的吸光度,以及绘制质控图,按质控规则判断三(八)临床试验完成以上试剂盒的性能指标评价后,还需按照‘体外诊断试剂注册管理办法“(试行)及‘体外诊断试剂临床研究技术指导原则“进行临床试验三1.临床试验文本一要有临床机构伦理委员会确认的文件;有两家省级医疗卫生单位完成临床研究的研究报告三2.临床样本比较试验一新诊断试剂(盒)应与该诊断疾病的金标准针对临床样本进行盲法同步比较; 已有同种批准上市的试剂(盒)应与已批准上市产品针对临床样本进行比对试验三3.临床样本的要求一综合不同地区人种二流行病学背景二病原微生物的特性等因素选择研究单位,症状典型和非典型的,一般临床研究的总样本数至少为200例,新诊断试剂(盒)1000例三四、临床生物化学试剂盒的发展趋势我国使用临床生化试剂盒的历史只有20多年,分析仪的普及和试剂盒的使用是临床生化实验室的一大革命,基本满足了临床生化检测数量日益增长的需求,更重要的是检验结果的质量得到了大幅度的提升三因生化试剂盒相对于免疫试剂盒技术要求低二研发周期短二研发成本低,已基本实现了国产化,国产试剂盒的质量也与先进国家相媲美三但原材料(酶二抗体)和核心技术都还依赖进口,自主研发能力较为薄弱三有必要对临床生化试剂盒的发展趋势进行简单总结三(一)适应生化分析仪的要求生化分析仪为了追求分析效率,操作步骤简单,分立式分析仪无法完成离心二煮沸步骤,反应时间短(多不超过10m i n)三因此,针对分析仪的这些特点,对常规方法进行了修改三原来采用无蛋白血滤液的测定方法,通过使用表面活性剂二减少样品/试剂比例二提高灵敏度等措施来防止蛋白质的干扰,以达到不需样品预处理的目的三但是,有些简化步骤或改变条件是以牺牲方法学性能为代价,如:①缩短反应时间三如为了缩短反应时间,双缩脲法测定总蛋白不得不修改试剂配方;葡萄糖氧化酶测定血糖的试剂盒添加了变旋酶三②统一测定温度在37?三为此,I F C C修改了酶活性参考方法的温度三③简化步骤三高(低)密度脂蛋白胆固醇的均相法不经离心直接测定,但原理不够严密二特异性不够高;又如对改良J G法作了进一步修改,虽不需要终止反应,但导致直接胆红素的结果不够准确三④样品/试剂比例受限制三B C G法测定清蛋白,原推荐方法中,样品/试剂比=1?500,而多数分析仪最大样品/试剂比例不足1?250,导致线性范围变窄三(二)酶法分析的应用酶的高度特异性使酶法分析可以不需样品预处理而直接测定待测物三正因为酶法分析的操作简便二条件温和二安全,才使生化试剂盒产业蓬勃发展三酶法分析是试剂盒发展的方向,研发者千方百计使用酶法来取代化学法三在不断涌现商品酶的同时,生化检验试剂盒随之日新月异,试剂酶的生产与试剂盒的研发已经形成良性循环的局面三面对越来越多的商品酶,应从纯度二价格二催化效率二稳定性二耐热性等方面综合考虑,遵循实用二可靠的原则,选择使用三(三)免疫比浊法的应用近20年来,医学检验的飞速发展离不开杂交瘤抗体生产技术三吸收光度法受灵敏度的制约,很难检测微量物质三免疫比浊法很好地结合了免疫技术,使很多微量蛋白质等的生化测定成为可能三但浊度法的检测波长不是特异光吸收,受到样品自身空白和其他浊度的干扰,抗体的效价二与抗原(游离或复合物)反应性的差异二校准品的选择二校准曲线的拟合二质量控制二抗原过剩等问题都还需要标准化三(四)高灵敏度试剂盒的应用酶法和免疫比浊法是临床生化试剂盒研发的两大方向三围绕这两种原理,通过提高灵敏度,开发了一系列新的生化项目三1.胶乳凝集免疫比浊一高敏C反应蛋白二肌钙蛋白二肌红蛋白二胱抑素C二糖化血红蛋白二脂蛋白(a)等借助于胶乳凝集免疫比浊技术,提高了灵敏度,应用于自动生化分析仪三可以预见,目前只能用散射比浊或化学发光检测的特定蛋白二激素二肿瘤标志物二病原抗原等,不久也会有胶乳凝集免疫比浊法试剂盒推出和应用三2.酶循环法一像胆汁酸二氨二同型半胱氨酸等在体内含量甚微,甚至只有不足10μm o l/L,传统的生化方法无法测定三利用酶循环法的原理使不可能成为可能,酶循环法的应用将会越来越广泛三3.发色剂的合成一自然界氧化酶种类繁多,但因酚类色原灵敏度和稳定性的限制,T r i n d e r s 反应的应用目前只停留在10-1~102m m o l/L水平,像乙醇目前还无法直接测定三可以预见,随着新色原的发现,将会有更多的试剂盒使用T r i n d e r s反应的原理三4.人工合成底物一人工合成底物是医学检验与化工二生物合成等领域结合的产物,因方法简单,特别适合于水解酶类和转移酶类的测定,人工合成底物不限制在色素原底物,将会有更多的选择空间三(五)提高方法特异性的措施试剂盒的临床应用除了方便,还应有准确度和稳定性保证三试剂盒的准确度主要取决于方法学的特异性,但通过合理的配方二合理的组合可以提高方法的特异性:①液体双试剂能有效的消除干扰三②指示通路的合理选择,如T G的酶法不下5种,除考虑酶的来源和价格因素外,提高方法特异性是首先应考虑的问题;酶活性测定的正二逆反应的选择,测底物还是测产物的选择,都应首先考虑方法的特异性三③抑制剂的使用,试剂中的杂酶二样品中的干扰酶可以采用加入抑制剂(高浓度的杂酶产物),干扰物可以通过引进一个副反应来解决三(六)提高试剂盒稳定性的措施生化检验的推荐方法和参考方法,其主要成分的配方都是公开的三生化试剂盒研发的关键是稳定技术三近几年酶稳定剂的发展使酶法试剂盒的质量得到了很大的提高三试剂盒的稳定性主要取决于酶或辅酶的稳定和底物的稳定三酶的本质是蛋白质,要使酶稳定首先能稳定蛋白质,一个适合的缓冲体系至关重要三再从活性中心出发,设法保护催化基团和结合基团三稳定的措施包括使用防腐剂(抑制细菌生长)二蛋白稳定剂(防止水化二聚合)二蛋白酶抑制剂(防止蛋白酶的水解)二巯基酶保护剂(防止巯基氧化),以及隔绝空气(对氧化酶)等;稳定底物的措施有含水量的控制和缓冲体系的选择等三(沈财成)。
第21章临床生化检验方法与试剂盒评价教案.doc
第二十一章临床生化检验方法与试剂盒评价思考题简述标准品和校正品的区别。
简述双液体试剂盒的优点和抗干扰的措施简述试剂盒的性能指标与方法学性能指标的区别和联系(题干中［A］、［B］、［C］分别代表掌握、熟悉、了解)一、单选题1.用于发展及评价参考方法和一级标准品的方法称为［A］(a)决定性方法(b)参考方法(c)指定参考方法(d)常规方法(e)经典方法2.参考方法可用于［A］(a)评价常规方法和试剂盒，鉴定一级标准品(b)评价常规方法和参考方法，鉴定二级标准品(c)评价常规方法和试剂盒，鉴定二级标准品(d)评价参考方法和试剂盒，鉴定二级标准品(e)测定临床样本和鉴定二级标准品3.一种稳定而均一的物质，它的数值已由决定性方法确定，所含杂质也已经定量，这种物质是［A］（d）厂家校准物（c）次级参考物4.二级标准品的定值源于[B]（a）一级标准品和参考方法（b）一级标准品和决定性方法（c）二级标准品和参考方法（d）—级标准品和候选方法（e）一级标准品和推荐方法5.精密度评价采用以下哪种方法？[A]（a）冋收试验（b）重复性试验（c）干扰试验（d）方法对比试验（e）线性试验6.液体试剂盒的重复性试验，理论上哪个不精度最小？[B]（a） Fl内（b）口间（c）批内（d）批间（e）瓶间7.根据美国临床和实验室标准研究院（CLSI）制定的评价方案EP5-A2，评价方法的精密度时，用2个样品每天测定2批，批间测定间隔不得少于2 h,每批测定均作2份，至少共测定多少天？[B]（a） 2 天（b） 5 天（c） 10 天（d） 20 天（e） 30 天8.方法对比试验，应用的统计方法是[A]（a）配对T检验（b）相关冋归分析（c） ROC分析（d）方差分析（e）卡方检验9.设计回收试验时样品理想的浓度是[A](b) 病理标木的最 (d)医学决定水平的浓度值[A](b)冻干试剂(c)干试液体双试剂[B](b)冇证参考物质(d)经过溯源的参考血清(e)定值质控血清12 •临床使用试剂盒的稳定性应关注[A](a)效期稳定性 (b)空白变化速率性(d)在仓稳定性 (c)分析灵皱度二、多选题 (a)病理标木的最高浓度值 低浓度值(c) 参考范围内的浓度值(e)参考范围的上限浓度值10. 目前试剂盒的主流剂型是(a)干粉试剂纸条 (d) 液体单试剂 11. (a) (c) (e) 临床牛化检验实验室校准品建议使用原级参考物质二级参考物质水溶液(c)加速试验稳定1.方法比较试验测定的是候选方法的[A]误差Q)偶然误差(b)比例误差(C)恒定2. 评价正确度的试验冇[A](a)冋收试验 试验3. 理想的方法学性能评价指标[A](a) 回收率接近100%(b) 干扰值接近0(c) CV 接近0(d) 方法对比试验回归方程：y=a+bx^V 的臼接近0,力接近1(C) 线性范围能覆盖95%的临床检测人群4. 提高灵敏度的实际应用冇[B](a)胶乳凝集免疫比浊 (b)酶循环法 (c)人工合成 底物(d)色素原底物 (e)发色基团5. 空白变化速率的影响因素有[B](d)样甜针的交叉污染 (e)反应杯的交叉污染 三、配伍题(b)干扰试验 (c)线性 (d)方法对比试验 (e) 最低检测限(a)底物的自发水解 (b)朵酶 (c)外源性污染在以下方法学评价指标中用于[A]1.用丁•表示准确度的指标冇2.用于表示精密度的指标有3.对比试验的评价指标有(a)偏倚(b)变异系数CV (c)标准差s (d)冋归方程中的截距a (e)回归方程屮的比例系数b(f)相关系数r四、判断题1.量值传递是量值溯源的逆过程[A]2.量值溯源的核心是校准品量值的溯源，应由试剂盒制造商定值。
临床生化诊断试剂盒的选择与评价
第一节 试剂盒的分类和特点
液体双试剂盒的特点
TG测定原理 甘油三脂 LP甘油 游离脂肪酸 甘油 ATP GK甘油 3 磷酸
甘油 3 磷酸 O2 GPO磷酸二羟丙酮 H2O2
H2O2 4 AAP DHBS POD醌亚胺 H2O
第一节 试剂盒的分类和特点
液体双试剂盒的特点
➢液体双试剂可先让标本与试剂I反应（试剂I中 包括甘油激酶、抗坏血酸氧化酶、甘油—3—磷 酸氧化酶、过氧化物酶），从而彻底消耗标本中 游离甘油，排除抗坏血酸的干扰，然后再用试剂 Ⅱ含有LP和发色团启动反应，使得测得的结果 真正反映标本中甘油三脂的含量。
第一节 试剂盒的分类和特点
多项同测组合试剂盒
➢这类型试剂主要是用于三点双项同测终点法、 三点双项同测连续监测法和三点双项同测终点 速率法测定的试剂盒。 ✓在同一比色杯中，先后加入两种试剂与检品中 的两种被检物发生反应，在各反应达到平衡期 时分别测定，整个测定过程进行三次比色，测 定两个项目，称为三点双项同测终点法。
➢临床生化诊断试剂种类繁多，有液体型、粉 剂型、片剂型，有单一试剂、双试剂、干试剂 、多试剂等。 ➢纵观近20多年来的发展，临床生化体外诊断 试剂盒的分类和发展历史可用下图6-1 表示。
第一节 试剂盒的分类和特点
方法学
化学分析法
物理性状
液体型自配试剂
组合形式
液体多剂型试剂
操作方式
手工法多步操作
酶法分析
第一节 试剂盒的分类和特点
液体双试剂盒的特点
✓例如：尿素氮的酶法测定。此测定通过二步 化学反应来完成。
NH4 酮戊二酸 NADH GLDH谷氨酸 NAD CO2
在340nm下监测吸光度值的变化，与同样处理 的尿素标准液比较，计算出样品尿素含量。
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第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
测量不确定度
测量不确定度是指表征合理地赋予被测之值 的分散性。是与测量结果相联系的参数，可 理解为排除系统误差之外的所有随机误差的 合成方差。
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第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
理想的量值溯 源的理想情况 是可溯源至国 际单位制（SI） 单位
用什么“标准”来校准？ 罗氏公司的C.f.a.s （calibrator for automation system），属于多项校准品，因使用方便，很多实验室都在 使用。但前提是“指定的测定系统”。
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第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
图21-1 各级参考物质和校准品的关系及其量值传递过程
质控品
质控品多是成分相对稳定的混合血清，分为定 值和非定值、冻干或液体，添加了防腐剂和保 护剂等。定值往往由试剂盒供应商委托几家实 验室在特定测定系统上测得的均值和标准差。
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第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
标准品与校准品
大多数定量的方法（分光光度法、电化学、免疫定量） 都需要用标准品校准，即通过标准比较来计算。
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第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
三 方法学评价实验
回收试验 干扰试验 线性试验 对比试验
检测限与检测范围
准重 复
确性 试
度验
批内 批间 日内 日间 总不精密度
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第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
（一）重复性试验
1.试验样品 一般选择2个，一个在参考区间附近， 另一个为异常值 2.初步的批内精密度评价：即一个样品重复测定 20次，计算出均值，标准差和变异系数。 用2个样品每天测定2批，批间测定间隔不得少于 2h，每批平行测定2份，至少共测定20天，80个 数据。 每对结果间的差（共40个）代表批内差；2批均 值之间的差（共20个）代表批间差；每天4个结 果的均值（共20个）代表日间差。每批测定至少 做一个质控。
常规校`准品
常规校准品除少数项目如电解质用纯 物质水溶液外，大多数采用混合血清 基质。
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第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
校准（calibration）是一个测试和调整仪 器、试剂盒或者检测系统，以提供检测反 应和所测物质之间的已知关系的过程 电解质、酶类、其他生化指标应合理选择 校准品
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第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
（二）回收试验
所谓回收即评定方法正确测定加入常规样品中的 纯分析物的能力。
即在未知浓度的常规样品中加入一定量的待测组 分，检测加入前后该组分的增加量，实际增加量与 理论加入量的比值就是回收率。
目的是测定比例系统误差 。
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第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
临床生化检验方法与试剂盒评价
温州医科大学检验医学院
胡云良
温州医科大学第二临床医学院
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
教学目标与要求
掌握` 熟悉`
校准品的分类和正确使用；测定系统的 概念和比对；试剂盒的性能指标和评价 方法。
方法学性能指标和评价；量值溯源和量 值传递的概念；液体双试剂的优点。
了解`
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第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
三 量值溯源
溯源性
溯源性(traceability）是指通过一条具有规定不确 定度（uncertainty）的不间断的比较链，使测量结 果或测量标准的值能够与规定的参考标准（通常是 国家或国际测量标准）联系起来的特性，称为溯源 性。其不间断的比较链称为溯源链
试剂盒的分类和发展趋势。
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第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
主要内容
临床生化检验方法分级和标准品 临床生化检验方法的性能评价 临床生化检验试剂盒的性能评价
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第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
第一节 临床生化检验方法分级和标准品
一 临床生化检验方法分级
二 临床生化检验的参考物质和校准品 三 量值溯源 四 检测系统的比对
表21-1临床生化检验项目的决定性方法、参考方法、常规方法
项目
决定性方法
参考方法
常规方法
尿素 ID-MS
尿素酶法
二乙酰一肟法、酶法
尿酸 ID-MS
尿酸酶法（紫外） 磷钨酸比色法
胆红素 -
重氮反应法
J-G 法、钒酸盐氧化法
葡萄糖 ID-MS
已糖激酶法
葡萄糖氧化酶法
胆固醇 ID-MS
Abell-Kendall 法 酶法
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第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
二 临床生化检验的参考物质和校准品
原级参` 考物质
（primary reference materials）也称一 级标准品，与决定性方法平行，用于验证 决定性方法、评价与校准参考方法，以及 为二级标准品定值。
次级参`考物质
（secondary reference materials）也称 二级标准品 ，二级标准品的定值源于一级 标准品和参考方法，主要用于评价常规方 法，也可为质控物定值。
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第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
一 临床生化检验方法分级
是指准确度最高，系统误差最小，经过 决定性`方法 详细的研究，没有发现产生误差的原因或
在某些方面不够明确的方法。
参考`方法
是指准确度与精密度已经充分证实的分析 方法，干扰因素少，系统误差与重复测定 的随机误差相比可以忽略不计，有适当的 灵敏度、特异性及较宽的分析范围。
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
（一）检测系统的分类
.配套检测系统
整个检测系统涉及的各个部分完全按照指 定厂商要求配套使用。若该系统已经国家 法定部门认证,则使用这样的检测系统对临 床样品进行检验，其结果具溯源性。
自建检测系统
实验室自行建立的检测系统，如A制造 商的试剂盒、B制造商的校准品、C制造 商分析仪的组合。
Y=a+bX
恒定系统误差
a
接近1.0 接近0
随机误差 重复性试验 （批内、批间、 CV
<3%
日间）、总不
精密度
表21-3 临床生化检验方法的误差及评价方法
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第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
三 方法学评价实验
美国国家临床实验室标准委员会（NCCLS）于2005年更 名为临床和实验室标准研究院（CLSI）。制订了一系列评 价方案（evaluation protocols，EP），包括: 临床化学设备精密度评价（EP5-A） 定量分析方法的线性评价（EP6-A） 干扰试验（EP7-A） 方法对比评价及偏差评估（EP9-A2） 定量方法的初步评价（EP10-A2） 定性方法的评价（EP12-A） 基质效应评价（EP14-A）、。 EP不仅可用来评价临床生物化学检验方法性能，也可用以 评价试剂盒和分析仪器的性能。
3. 回收率计算
加入浓度=
标准液浓度
标准液量（ml） 样品量（ml） 标准液量（ml）
回收浓度 = 分析样品测得浓度 – 基础样品测得浓度
回收率（%）=
回收浓度 加入浓度
100％
一般要求回收率95-105%
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第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
第二节 临床生化检验方法的性能评价
一 方法学的性能指标 二 方法学性能评价的内容 三 方法学评价试验 四 临床生物化学方法学性能判断
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第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
一 方法学性能指标
可靠性
准确度 精密度
实用性
方便性 安全性 可测范围
经济性 简单快速
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第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
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第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
标准品 校准品
一级标准品用高纯化学物质（纯度>99.98%）直 接通过称重配制的溶液。一般由国家标准计量 局出具证书。二级标准品某种成分的浓度可用 公认的参考方法测定。由参考实验室或权威学 术组织出具证书，如SRM、BCR、IFCC。 标准品(standard）可用做校准品(calibrater) 考虑血清成分复杂、难以避免基质效应 ，建议用 与新鲜血清相似的介质做校准品，校准品的量值 应有溯源性，不同测定系统赋值不同。
镁
ID-MS
原子吸收分光光 度法
MTB 法
钾
ID-MS、中子活化法 火焰光度法
离子选择电极法、火焰 光度法
钠
中子活化法
火焰光度法
离子选择电极法、火焰 光度法
清蛋白 -
免疫化学法
溴甲酚绿法
总蛋白 -
凯氏定氮法
双缩脲法
肌肝 ID-MS
离子交换层析法 苦味酸法、酶法
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第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
4. 评价检测系统的分析性能 评价内容至少 包括精密度、准确度、可报告范围、分析 灵敏度、分析特异性和参考区间等，应符 合试剂盒制造商规定的要求。 5.比对 同时用两个系统测定同一批临床样 品和质控品，样品数量以40-100例为宜， 每个样品平行测定2次，样品被分析物浓度 应覆盖可报告范围的上限和下限。
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第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
（二）检测系统比对的实施步骤
①制订分析质量目标 ②仪器性能评价
③确定对比检测系统 ④初步评价检测系统
⑤比对
步内 骤容
可接受性判断
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允许不精密度、允许 偏倚和允许总误差
准确度和精密度
参考系统或 公认的测定系统
性能指标
40-100例
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
图21-2 量值溯源和量值传递途径