临床检验方法学评价

临床检验方法学评价

目前，临床实验室中所使用的检验方法，多为常规分析方法，一般使用商品试剂，基本上可以满足临床检验的要求。由于作为常规分析方法的商品试剂种类繁多，其检验结果的质量也不相同，因此，临床实验室在建立新的检验方法时，应对该方法的基本性能进行评价，以掌握方法的特征，判断其能否满足使用要求。在选择方法并对其进行评价时，可主要考虑以下几个方面：

检验结果的可溯源性

检验结果的准确性，是临床医生对疾病进行诊断和治疗的重要依据。在临床实验室中如何确保检验结果的准确，是每个检验人员必须关心的问题。通常，在检验过程中使用可溯源性校准品是保证检验结果准确性的前提，而参加室间质评价活动，可以发现实验室结果准确性的偏倚。

检验方法学分类包括：决定性方法（definitive method ）：经详尽研究尚未发现不准确度或不确定性原因的方法；参考方法（reference method ）：经详尽研究证实其不准确度与不精密度可以忽略的方法；常规方法（routine method ）：可满足临床或其他目的需要的日常使用的方法。

标准物质又称参考物质（reference material ），是一类充分均匀，并具有一个（或多个）确定的特性值的材料或物质，用以校准仪器设备、

评价测量方法，或给其它物质赋值。标准物质的定值结果一般表示为：标准值±总不确定度。“标准物质证书“是介绍标准物质的技术文件，是研制单位向用户提出的质量保证书和使用说明。附有证书的标准物质称为有证标准物质（certified reference material, CRM ），其特性值由建立了溯源性的程序确定，使可溯源至准确复现的表示该特性值的计量单位，且每个标准值都附有给定置信水平的不确定度。

一级标准物质（primary reference material ）：稳定、均一，采用高度准确、可靠的若干方法定值，可用于校准决定性方法及为二级标准物质定值。在我国，一级标准物质是测量准确度达到国内最高水平的有证标准物质，由国家技术监督局批准、颁布并授权生产。如：人血清无机成分分析标准物质（GBW09135 ）和血清胆固醇标准物质（GBW 09138 ）。

二级标准物质（secondary reference material ）：用一级标准物质校准，参考方法定值。如：红细胞微粒标准物质—GBW （E ）090001 、胆红素标准物质—GBW （ E ）090002 、氰化高铁血红蛋白溶液标准物质—GBW （E ）090004 和纯化血红蛋白标准物质—GBW （E ）090011 。

校准物（calipator ）：用二级标准物质校准，常规方法定值。用于对常规方法和仪器的校准。

质控物（control material ）：具有与检测过程相适应的特性，其成份与检测样本的基质相同或相似。应使用充分均一和稳定的质控物，其瓶间变异必须小于监测系统预期的变异，其常规检测应有助于确

认报告范围。为了保证质控方法对系统性能提供独立的评价，必须将质控物与校准物区分开来。

分析系统与可溯源性：

分析系统是指检验方法所涉及的仪器、试剂、参数和校准品，其检验结果经一系列合理实验的验证能够满足厂家声明的要求，其量值能够溯源到高级标准物质。在实际工作中，实验室使用分析系统进行检验，其检验结果具有可溯源性。改变分析系统中的任一因素，其检验结果的可溯源性将被打断。如果必须改变分析系统中的某种因素，实验室在应用该方法前，则应对改变后的系统作出适当的性能评价，以确定方法准确性的偏倚和检验结果的可溯源性。

精密度评价

1、精密度的内容：精密度通常用不精密度表示，精密度评价的目的是评价检测设备的总不精密度，是设备在一定时间内的变异性。许多变异源可在不同程度上影响设备的精密度，通常在进行精密度评价时要充分考虑所有影响总不精密度的来源，但不必去评价每个来源的相对大小。用于描述与时间相关的不精密度的内容包括：批内、批间、日内和日间不精密度。其中，批内不精密度和总不精密度的内容最为重要。

2、一般实验要求：为减少对结果的影响因素，全部实验过程中应使用单一批号的试剂和校准物。实验样本可采用稳定化、蛋白基质、可模拟临床样本特性的产品，必要时，可采用稳定化的混合冷冻血清。选择样本浓度时应考虑医学决定水平，推荐使用 2 个或以上浓度的

样本。

3、实验程序：精密度评价实验应在操作者完全熟悉实验过程和评价方案以后（通常需要5 天时间）进行。每天分2 批测定样本，各批实验间至少间隔2 小时。每批测定2 个浓度样本，每个样本重复测定2 次。按表1 记录实验结果。

4、结果计算（略）

测定线性范围评价

线性是分析方法的一个特征，不同于准确度和精密度。线性范围（Linear Range ）是指系统最终的输出值（浓度或活性）与被分析物的浓度或活性成比例的范围。线性范围的测量即测定浓度曲线接近直线的程度，它反映整个系统的输出特性。线性检验系统反应，包括校准、线性化技术、系数和仪器反应。

一般要求：执行分析过程的实验人员必须掌握仪器操作和维护程序、样本准备方法和校准。对较简单的设备需要 5 天或更少的时间，对较复杂的多通道设备需要 5 天或更长的时间。在完成仪器熟悉过程后开始实验并收集数据。

实验样本：线性实验应使用与病人样本相似的样本或注明样本的基质类型，最少使用4 个浓度水平，推荐5 个水平。高值样本应高于线性上限30% ，低值样本应低于线性低限。线性实验可使用的样本包括：混合病人血清（理想的样本基质）、加入待测物的混合人血清（加入品在没有干扰物存在时不需高纯度）、对特殊材料透析过的混合人血清（用于降低分析物浓度，如：透析、热处理、

层析）、对盐水透析过的混合血清（在线性实验中使用此类样本可掩盖不同的基质效应）。商品质控物或校准物（此类样本由于不是正常的生理形式，可掩盖实际的线性结果）、水溶液（一般无基质效应），等。

实验程序：全部实验和数据采集应在同一工作日内完成。分析序列应为随机排列。有显著携带污染时，应用空白隔开样本。每个浓度样本重复测定4 次。记录测定结果。

结果分析：观察结果有无明显的数据错误，若有明显异常时，应判断是否为离群点。对于特定浓度Yi 值的离群点进行检验时，需将其4 个重复值从大到小排列（Yi -1 到Yi -4 ）。计算极差D = Y i-1 - Y i-4 。若Y i-1 可能是离群点，计算：D 1 = （Y i-1 –Y i-2 ）/ D 。若Y i-4 可能是离群点，计算：D 4 = （Y i-3 –Y i-4 ）/

D 。计算结果（ D 1 或 D 4 ）如果大于0.765 (0.05) 或0.889

(0.01) ，则该点判为离群点。全部数据中的离群点如果有2 点或以上，则应保留全部数据或重新进行实验。

以分析物浓度为X 轴，反应值或仪器输出值为Y 轴，绘制X-Y 线性图。目测线性和进行统计学分析，判断是否符合要求。

对于线性结果的分析，应当注意统计学标准和临床可接受限不同；应慎用方法学线性范围从0 开始；有临床意义的浓度应在线性评价中，如最低线性浓度、医学决定水平及最高线性浓度。

方法学比较

临床实验室中使用的检验方法，随着科学技术的发展不断更新，在引