血涂片的制备
实验五血涂片的制备和染色血细胞形态观察与血型鉴定
目的要求
学习掌握人血涂片制备和染色方法； 观察各种血细胞的形态。
实验材料
显微镜、载玻片、酒精棉球、采血针、 瑞氏染液
实验步骤
人血涂片的制备
一 次 推 成， 不 可 来 回 推！
实验步骤
血涂片的染色：瑞氏染色法
滴1-2滴甲液在血涂片上，盖满血片； 1min后滴加1.5倍的乙液，立即吹匀两液； 静置10～15min，用清水洗去染液； 干燥。
的血清中，混匀（每边各用一牙签，切勿混用）； 观察：室温下静置10min后，观察凝集现象。
A标准血清（抗B） B标准血清（抗A）
O A
B AB
实验结果
绘制各种血细胞图； 鉴定自己的血型； 讨论血液凝集的机理。
Ag type Ab type
实
B
验
原
理
A
None
ABO血型
A and B
实验原理
实 验 原 理
血液凝集
实验步骤
取一块清洁玻片，用记号笔在左上角写A， 右上角写B。
将A型标准血清（抗B）一滴加入左侧，B型标 准血清（抗A）一滴加入右侧。
A标准血清（抗B） B标准血清（抗A）
实验步骤
采血：用75％酒精棉球消毒指尖，采血针采血； 取血：用两根牙签各取一小滴血分别放入载玻片
实验步骤 血细胞的观察：显微镜下观察各类血细胞
血涂片 红细胞
血小板
未成熟中性粒细胞
嗜酸性粒细胞
大淋巴细倍
（二）、血型鉴定
目的要求
学习ABO血型的鉴定方法； 观察红细胞凝集现象，掌握ABO血型鉴定的
原理。
实验材料
显微镜、载玻片、酒精棉球、采血针、 A型和B型标准血清
实验报告 血涂片的制备
实验报告血涂片的制备实验报告：血涂片的制备引言：血涂片是一种常见的实验技术，用于观察和分析血液细胞的形态和数量。
通过制备血涂片，我们可以了解疾病的诊断和治疗过程中的重要信息。
本实验报告将介绍血涂片的制备过程和相关技术。
一、材料与设备：1. 血液样本：采集自健康人士或实验动物。
2. 血涂片玻片：具有一定的光学透明度和平整度。
3. 血涂片刮板：用于制备血涂片的工具。
4. 血涂片染色剂：如吉姆萨染色剂。
二、实验步骤：1. 准备工作：清洁实验台面，并确保材料和设备的无菌状态。
2. 血液采集：使用无菌针头采集血液样本，将血液缓慢抽入无菌注射器中。
3. 制备血涂片：a. 取一片无菌血涂片玻片，用无菌棉球蘸取适量的酒精擦拭玻片表面，使其干燥。
b. 用无菌血涂片刮板，将血液样本滴于血涂片玻片的一端。
c. 快速而均匀地将刮板从滴液处向另一端刮过，使血液在玻片上均匀分布。
d. 在刮板刮过的血液上方，迅速将另一片无菌玻片平放在上方，使血液与玻片接触。
e. 缓慢而均匀地将上方的玻片向下滑动，使血液在两片玻片之间形成薄膜。
f. 将制备好的血涂片放置在通风干燥的地方，待其完全干燥。
三、血涂片染色：1. 准备工作：将吉姆萨染色剂按照说明书的要求稀释至适当浓度。
2. 染色过程：a. 将制备好的血涂片放入染色盒中，使其与染色剂接触。
b. 根据需要，将血涂片浸泡在染色剂中的时间可调整为几分钟至几十分钟。
c. 取出血涂片，用清水轻轻冲洗，直至水清。
d. 将血涂片放置在通风处晾干。
四、结果与讨论：通过制备和染色的血涂片，我们可以观察到不同类型的血细胞，如红细胞、白细胞和血小板。
通过观察它们的数量、形状和结构，我们可以判断出是否存在异常情况，如贫血、感染或血液疾病等。
血涂片的制备和染色技术在临床诊断和科学研究中具有广泛的应用。
结论：通过本实验报告，我们了解了血涂片的制备过程和相关技术。
制备血涂片的步骤包括血液采集、血涂片制备和血涂片染色。
血涂片制备实验报告
血涂片制备实验报告血涂片制备实验报告引言：血涂片制备是一项重要的实验技术，通常用于临床血液学检查和疾病诊断。
本实验旨在探究血涂片制备的步骤和技巧，以及其在血液学研究中的应用。
一、材料和方法1. 实验材料：- 血液样本：采用新鲜的全血样本。
- 血液薄片：玻片、刮刀、洗净的无菌玻璃片。
- 染色剂：Wright染色液、甲醇、乙醇。
- 实验仪器：显微镜、离心机。
2. 实验步骤：- 步骤一：准备血液样本。
使用无菌针头采集新鲜全血样本，将其转移到干净的离心管中。
- 步骤二：制备血涂片。
取一块洗净的玻璃片，将其倾斜放置于离心管中的血液样本上，使血液与玻璃片接触，形成一条薄而均匀的血涂片。
- 步骤三：干燥血涂片。
将制备好的血涂片放置于通风处，使其自然干燥。
- 步骤四：固定血涂片。
将干燥的血涂片浸入甲醇中，使其固定。
- 步骤五：染色血涂片。
将固定的血涂片浸入Wright染色液中，保持一定时间，使细胞染色。
- 步骤六：洗净血涂片。
将染色后的血涂片放入乙醇中，轻轻摇晃，将多余的染色剂洗净。
- 步骤七：干燥血涂片。
将洗净的血涂片放置于通风处，使其自然干燥。
- 步骤八：观察血涂片。
将干燥的血涂片放置于显微镜下，调节倍率和焦距，观察细胞形态和结构。
二、结果与讨论通过血涂片制备实验，我们成功制备了一张血涂片，并进行了染色和观察。
观察结果显示，血涂片中可见红细胞、白细胞和血小板等细胞成分。
红细胞呈圆形或椭圆形，中间凹陷，具有较大的体积；白细胞则呈现不同的形态和大小，包括淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞等；而血小板则呈现为小而不规则的颗粒状结构。
血涂片制备的关键在于制备过程中的技巧和细节注意。
首先，采集血液样本时应使用无菌针头，以避免污染。
其次，在制备血涂片时，要保持玻璃片与血液的均匀接触，避免形成过厚或过薄的血涂片。
此外，干燥和固定过程中的时间和条件也会对血涂片的质量产生影响。
过长或过短的干燥时间都会导致血涂片的异常，而固定过程中甲醇的使用量和浸泡时间也要控制适当。
血涂片的制备与染色实验报告
血涂片的制备与染色实验报告血涂片的制备与染色实验报告简介本报告旨在介绍血涂片的制备与染色实验方法及步骤，以及相关注意事项和结果分析。
实验步骤1.准备所需材料：–血液样本–血涂片载玻片–血液涂片器–双氧水–细胞染色剂–拖尾液–显微镜片2.制备血涂片：–取一滴血液样本，滴于载玻片中。
–使用血涂片器，将血液涂片器顶端垂直贴附在载玻片上。
–慢慢向后移动血涂片器，使血液样本均匀地涂布于载玻片上。
3.干燥血涂片：–将制备好的血涂片放置于通风处，自然晾干。
4.染色处理：–将已干燥的血涂片浸入双氧水中，浸泡5分钟，用来溶解红细胞。
–用显微镊子夹取血涂片，轻轻晃动10次，使红细胞充分分散。
–轻轻将血涂片冲洗干净，以去除残留的双氧水。
–将血涂片浸入细胞染色剂中，染色1分钟。
–将血涂片冲洗干净，确保没有染色剂残留。
5.拖尾处理：–取适量拖尾液滴在盖玻片上。
–将染色好的血涂片倒置放在盖玻片上，使其与拖尾液接触。
–轻轻拖动血涂片，使细胞核进入拖尾液。
6.结果观察与分析：–将染色好的血涂片放置在显微镜下进行观察。
–分析细胞形态、染色程度等指标，记录结果。
注意事项•实验过程中需戴好实验手套，避免直接接触血液。
•制备血涂片时，务必将血液涂布均匀，以免影响结果。
•双氧水具有漂白作用，使用时需小心避免溅到衣物或皮肤上。
•染色剂使用过程中，应注意避免吸入或误食。
•结果分析时，应根据实验要求和标准参考范围进行判断。
结论通过本实验，我们成功制备了血涂片并进行了染色处理。
观察结果可为后续血液相关研究提供重要数据和参考。
在实验过程中，我们严格遵守实验室操作规程，并注意了安全事项。
希望本报告对今后的血涂片制备与染色实验有所帮助。
参考文献：无。
第三节血涂片制备
合格的血涂片：厚薄适宜，头、体、尾分明，两端和两侧留 有空隙，血膜至少长 30~50mm，两侧空隙 2~3mm。
如果用力不均匀、载片不清洁可造成血涂片分布不均
（2）仪器推片法：目前有多种型号的血细胞分析仪或 血细胞形态分析仪配有血涂片仪和染色仪，可以根据需 要进行自动送片、取血、推片、标记和染色等操作。
2．厚血膜推片法 采血→取 1 小滴血液于载玻片中央→以推片的一角将血 滴由内向外旋转涂布，制成直径约 1.5cm 的圆形厚血 膜，干燥→滴加蒸馏水，溶解红细胞，脱去血红蛋白→ 倾去水，干燥。
（三）质量保证
1．玻片 2．标本 3．制片 载玻片需清洁、干燥、中性、无油腻，勿用手触及玻片表面。 抗凝血需在 4小时内制备血涂片，否则细胞形态会发生改变。
职业教备
（一）主要器材
1．载玻片
2．推片
（二）简要操作
1． 薄血膜推片法 （1）手工推片法：采血→取血于载玻片上→推片→干燥。
取 1 小滴血于载玻片的一端（1.5cm 处或整片 1/3 处）； 推片时使推片与载玻片成 30°～45°角度，让推片接触血滴， 使血液沿推片下缘散开，再向血滴前方向匀速移动推片。
①制备厚薄适宜的血涂片：
厚：血滴大、角度大、速度快—— 大、大、快 薄：血滴小、角度小、速度慢—— 小、小、慢
②制备血膜分布均匀的血片：
血膜分布不均主要是推片边缘不齐、用力不匀和载玻片不清洁所致。
4．制片后处理
实验报告 血涂片的制备
实验报告血涂片的制备实验报告：血涂片的制备引言：血涂片是一种常见的实验技术，用于观察和分析血液中的各种细胞和细胞形态。
本实验旨在探究血涂片的制备方法和技巧，以及观察和分析血涂片的步骤和注意事项。
材料与方法：1. 血液样本：采集新鲜的静脉血，使用无抗凝剂的试管收集。
2. 血涂片材料：玻璃片、洗净的玻璃滴管、无纺布、无纺布夹子、显微镜玻璃片、显微镜盖玻璃片。
3. 实验仪器：显微镜、离心机。
步骤：1. 准备工作：将玻璃片和显微镜玻璃片用去离子水和无纺布擦拭干净，保证表面无杂质。
2. 血液制备：使用无纺布夹子固定玻璃片，用洗净的玻璃滴管将血液滴在玻璃片上。
滴管与玻璃片的接触角度应适中，以保证血液均匀地分布在玻璃片上。
3. 血涂片制备：用另一块玻璃片将血液滴在玻璃片上的血液涂抹均匀，使血细胞分散均匀并形成单层。
4. 干燥处理：将血涂片放置在通风处晾干，或使用离心机低速离心，去除多余的液体。
5. 固定处理：将干燥的血涂片固定在95%乙醇中，浸泡2-3分钟，以保持细胞形态。
6. 染色处理：将固定的血涂片浸泡在Wright染料溶液中，浸泡时间根据染料浓度和需要的染色效果而定。
7. 清洗处理：用去离子水将染色过的血涂片洗净，去除多余的染料。
8. 干燥处理：将血涂片放置在通风处晾干，确保完全干燥。
9. 封片处理：将干燥的血涂片放在显微镜盖玻璃片上，用透明胶带固定。
结果与讨论：制备完毕的血涂片可用于显微镜观察。
通过血涂片，我们可以观察到血液中的各种细胞，如红细胞、白细胞和血小板，并且可以分析它们的数量、形态和结构。
在制备血涂片的过程中，有几个关键的步骤需要特别注意。
首先，血液的滴取和涂抹要均匀、细致，以避免细胞聚集和不均匀分布。
其次，血涂片在制备过程中要保持湿润，避免细胞干燥和变形。
此外，染色过程中的浸泡时间和染料浓度要控制好，以保证染色效果的准确性和清晰度。
血涂片的制备是一项基础实验技术，广泛应用于医学、生物学和病理学等领域。
血涂片制备与染色临床应用
血涂片制备与染色临床应用血涂片制备是临床实验室中常见的实验操作，用于观察和诊断患者的血液情况。
正确的血涂片制备与染色技术将有助于提高血涂片的质量，为临床医生提供准确的诊断信息。
本文将介绍血涂片制备的步骤以及常用的染色方法，并探讨其在临床应用中的意义。
一、血涂片制备步骤1. 准备工作：首先需要准备好检测所需的材料，包括玻璃片、无菌注射器、消毒酒精、无纺布等。
确保工作台面整洁，无尘无菌。
2. 采集血液样本：选择合适的采血部位，用无菌注射器采集血样，并将血样滴在玻璃片上。
3. 制备血涂片：将另一块玻璃片平行放在血样上，以45度角倾斜，缓慢向前移动，使血涂片的宽度均匀。
4. 干燥固定：将制备好的血涂片晾干，或者用火焰烘干，使细胞固定在玻璃片上。
5. 染色处理：根据需要选择合适的染色方法进行处理，使细胞核、胞质等结构清晰可见。
二、血涂片染色1. Giemsa染色：是血涂片最常用的染色方法之一，可用于观察红细胞形态、白细胞分类及寄生虫等。
染色时间和比例需控制好，避免染色过度或不足。
2. Wright染色：适用于白细胞分类和形态分析，特别是嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞的染色效果较好。
3. 厌氧染色：用于观察寄生虫、真菌等微生物，需要较长的染色时间和特殊的操作条件。
三、血涂片在临床应用中的意义1. 诊断疾病：通过观察血涂片中各种细胞的数量、形态、分布等特征，可以帮助医生诊断贫血、感染、白血病等疾病。
2. 指导治疗：血涂片可以反映患者的血液情况，指导医生制定合理的治疗方案，监测治疗效果。
3. 预后评估：血涂片中某些指标的变化可以反映患者病情的进展和预后情况，有助于医生及时调整治疗策略。
综上所述，正确的血涂片制备与染色技术对于临床医学具有重要意义。
通过规范操作和严格控制，可以提高血涂片的质量，为临床诊断提供可靠的依据。
希望本文对于血涂片制备与染色临床应用有所帮助，谢谢！。
血涂片的制备
血涂片的制备
血涂片是一种常见的医学检查方法，它可以通过显微镜观察血液细
胞的形态和数量，从而帮助医生诊断疾病。
下面将从材料准备、制备
步骤和注意事项三个方面介绍血涂片的制备方法。
一、材料准备
制备血涂片需要的材料有：血液样本、玻璃片、无菌棉签、生理盐水、甲醇、乙醇、甲苯、染色剂（如吉姆萨染色液）等。
二、制备步骤
1.取一块干净的玻璃片，用无菌棉签在玻璃片上涂上一层薄薄的血液样本。
2.将玻璃片放在通风处晾干，使血液样本充分干燥。
3.将玻璃片浸泡在生理盐水中，轻轻摇晃，使血液样本充分溶解。
4.将玻璃片取出，用无菌棉签擦拭干净。
5.将玻璃片浸泡在甲醇中，固定细胞形态。
6.将玻璃片取出，用无菌棉签擦拭干净。
7.将玻璃片浸泡在乙醇中，使细胞脱水。
8.将玻璃片取出，用无菌棉签擦拭干净。
9.将玻璃片浸泡在甲苯中，使细胞透明。
10.将玻璃片取出，用无菌棉签擦拭干净。
11.将玻璃片浸泡在染色剂中，染色。
12.将玻璃片取出，用无菌棉签擦拭干净。
13.将玻璃片放在通风处晾干，制备完成。
三、注意事项
1.制备血涂片时要注意无菌操作，避免污染。
2.血液样本要新鲜，避免血液凝固。
3.制备过程中要注意时间控制，避免细胞形态变化。
4.染色剂的选择要根据需要进行，不同染色剂对细胞的染色效果不同。
5.制备完成后要注意保存，避免受潮和污染。
总之，血涂片的制备是一项细致的工作，需要严格按照步骤进行操作，才能得到准确的检查结果。
希望本文能对大家有所帮助。
实验四静脉采血血涂片的制备与染色
取血
待酒精干后，刺破皮肤，使血自然流出， 勿挤。取干净载片，让血滴在离载片一端 中4～5毫米处，注意手指 持握载片的边缘 ，勿触及其表面。不能使载片接触取血部 位的皮肤。
推片 取一块边缘光滑的载片做推片。将其一
端置于血滴前方，向后移动到接触血滴， 使血液均匀分散在推片与载片的接触处。 然后使推片与载片呈30°～40°角，向另 一端平稳地推出。涂片推好后，迅速在空 气中挥干，使之自然干燥。
标记试管
在试管上贴上标签，著名患者姓名、项目名 称、采集日期、门诊或住院号。
消毒双手
采血前，操作人员应用肥皂或消毒液和水洗手。
选择静脉
采血前，要求受检者坐在实验台前。将前臂放在 实验台上，掌心向上，并在肘下放一枕垫。卧床 受检者要求前臂申展，暴露穿刺部位。常用采血 位置是肘前静脉，因其粗大、容易辨认。
检查注射器
静脉采血前要仔细检查针头是否安装牢固， 针筒内是否有空气和水分。所用针头应锐利、光 滑、通气，针筒不漏气。抽血时针栓只能向外抽 ，不能向静脉内推，以免形成空气栓塞，造成严 重后果。
扎压脉带
采静脉血时止血带压迫时间不能过长 、绑扎不能过紧，以避免淤血和血液浓缩 ，最好不超过1min，否则会影响某些试验 结果，如造成血红蛋白和血细胞比容增高 。
醇所固定;
3、 加等量PH6.4的磷酸盐缓冲液(或等量 超纯水)轻轻晃动玻片,均匀静置5-10分钟;
4、 水洗、吸干、镜检。
血涂片染色
涂片干燥后加瑞氏染色Ⅰ液5-8滴 覆盖整个血膜1分钟
勿冲洗再加瑞氏染色Ⅱ液5-8滴后将Ⅰ液和 Ⅱ液充分混匀静置10分钟
直接流水冲洗3-5分钟 （切勿先倒掉染液）
血涂片制作与染色
血涂片制作与染色1.血涂片的制备血涂片的制备需要用到标本采集工具如无菌化的注射器、针头、试管、硅化玻璃片以及一些实验室试剂如无菌生理盐水、巴氏溶液和电解溶液等。
具体步骤如下：（1）将患者指尖的表面清洁卫生。
（2）选择一个适合的静脉穿刺点，通常是患者的中指或无名指。
（3）用酒精棉球清洁穿刺点，使其干燥。
（4）将无菌化的注射器连接到无菌生理盐水的瓶口上，并抽取一定量的生理盐水。
（5）将针头插入穿刺点后，将生理盐水匀速注射入患者的静脉内。
（6）在生理盐水滴入试管的同时，用眼微观检查，如果有血液进入注射器和管道内，即可采集。
宜用自来水洗净试管外表面，先不带盖座放倾空液。
（7）用试管夹夹住注射针，将针头推入试管内，然后轻轻射入试管底部液面下，同时向上抽手，保持抽液缓慢，可避免气泡产生。
（8）将采集到的血液缓缓带走，同时注入试管内，让其与100ml巴氏溶液进行搅拌。
（9）将混合液倾入瓷漏斗中，从中取出干燥了的血细胞。
2.血涂片的染色血涂片染色可使用湿涂片法或干涂片法，其中湿涂片法应用更广泛。
下文将以湿涂片法为例进行介绍。
（1）取一根硅化玻璃片，用纸巾或棉球擦拭干净。
（2）用血涂片染色钳将准备好的血涂片床放在玻璃片上。
（3）将一滴适量的Wright液倒在血涂片的中段。
Wright液包含了染色剂和辅助剂，其中主要成分是吡啶基甲重氮盐和三氧二氮菲盐。
（4）用另一根玻璃片的尾部将液滴均匀地扩开，并迅速在血涂片上来回涂抹，在染液与血涂片上充分接触并混合。
（5）保持血涂片在室温下静置5-10分钟，以促进染色反应的进行。
（6）用蒸馏水冲洗玻璃片上的染料，并将其晾干。
3.血涂片的观察与分析观察血涂片需用光学显微镜，常规放大倍数为1000倍。
观察血涂片时，应注意血细胞的形态、大小、核形态、细胞质染色情况及相关细胞间的比例等。
根据各种细胞的数量和比例，可以初步评估出是否存在异常细胞，及其可能的病理性质，如感染、贫血等。
总结：血涂片制作与染色是血液检查中重要的步骤之一，它能够帮助医生判断病情，制定治疗方案。
血涂片制备方法(一)
血涂片制备方法(一)血涂片制备概述在医学领域中，血涂片制备是一种常见的实验技术，用于观察血液中细胞的形态和结构，以辅助疾病的诊断与治疗。
本文将介绍血涂片制备的各种方法，包括涂片准备、标本采集和染色技术等。
涂片准备1.消毒工具：在制备涂片之前，准备消毒液（如70%乙醇或碘酒）、棉花球和医用手套。
确保操作环境和仪器表面清洁无菌。
2.采集血液：选择合适的采集器具（如针头、注射器）消毒。
采用无菌技术取血，往常采取放血法，但可采用烏斯夫斯基移液管利用负压的方法来采用更少的血液，适应于孩童，有危险性患者的使用。
3.涂片制备：使用无菌涂片刷或平片，用一下方法制备涂片：–手背法：用棉球或纱布擦拭患者手背部位，等待干燥，然后轻轻划开皮肤，等待血液自然出现，迅速在涂片上涂抹一层血液。
–指尖法：用棉球或纱布擦拭患者指尖部位，等待干燥，然后用无菌针头将患者指尖刺破，等待血液自然出现，迅速在涂片上涂抹一层血液。
标本采集1.血液收集器：使用采血盒、染片管、小瓶等器具，确保标本的完整性和安全性。
2.血液标本处理：–静脉全血：将血液收集到采血盒中，以避免凝固，然后轻轻倾倒和摇晃，以保持混合状态。
–静脉血清：将血液收集到染片管中，等待血液凝固，然后使用离心机将血液分离为血清和血细胞。
染色技术1.Wright-Giemsa染色法：这是制备血涂片的常用染色法，可显示出细胞的细节和染色质的颗粒分布。
具体步骤包括：–将涂片浸入Wright染料溶液中，浸泡2-5分钟。
–用蒸馏水冲洗涂片，直到冲洗液变清。
–将涂片浸入Giemsa染料溶液中，浸泡10-20分钟。
–最后用蒸馏水冲洗涂片，直到冲洗液变清。
2.Giemsa染色法：这是另一种常用的染色法，适用于观察红细胞、白细胞和寄生虫等。
–将涂片浸入Giemsa染料溶液中，浸泡10-30分钟。
–用蒸馏水冲洗涂片，直到冲洗液变清。
结果分析通过观察血涂片下显微镜下的细胞形态和结构，可以识别和计数不同类型的血细胞。
血涂片制备的操作方法
血涂片制备的操作方法血涂片制备是一种用于检查血液细胞形态和计数的常见实验方法。
以下是血涂片制备的详细操作方法：1. 实验前准备：- 准备好所需的实验器材和试剂，包括玻璃刮片、镊子、培养皿、荧光显微镜片、血液采集管、无菌生理盐水、硝酸盐涂片、形态涂片、涂片染色试剂（Wright 染色液）等。
- 仔细阅读实验操作方法，并进行必要的安全措施。
2. 血液采集：- 选择一个合适的采集部位，一般为患者的指尖或耳垂侧面。
- 用无菌棉球或无菌纱布清洁采集部位，消毒使用无菌棉球沾取酒精擦拭。
- 使用无菌注射器或针头，通过轻轻按压患者的采集部位，采集足够的血液样品。
3. 血涂片制备：- 先将玻璃刮片清洗干净，并在一侧的一个角落上写上标签，以示采集来源。
- 取一滴血液样品，将其滴在玻璃刮片的一端，并迅速将另一张刮片斜放在接触点上。
- 刮片形成一个小角度，然后将两张刮片迅速向前移动，使血液样品均匀涂开。
- 在制备血涂片的同时，要注意控制制片速度和角度，以保证血液样品的均匀和适当稀释。
4. 干燥与固定：- 制片完成后，应将其垂直放置在一个干净、无尘的地方，以允许刮片的自然干燥。
在炎热的季节或高湿度的环境中，可以使用加温脱水槽，将温度设定在37-40摄氏度，以加速干燥过程。
- 干燥后，将血涂片固定，可使用60-70%乙醇或其他合适的固定液，将刮片浸泡在固定液中1-2分钟，然后取出并晾干。
5. 涂片染色：- 取出固定的血涂片，逐一浸泡在Wright染色液中，浸泡时间一般为3-5分钟，可根据需要调整。
- 取出血涂片，用流动自来水轻轻冲洗，将多余的染色剂冲洗掉，直至冲洗水流变为清澈。
- 将血涂片倒挂在流动自来水下自然干燥，避免用纸巾擦拭，以免造成细胞形态的破坏。
6. 显微镜检查：- 取一滴橄榄油滴于血涂片中心，并将其覆盖与荧光显微镜片。
- 将显微镜调至合适的倍数，放入血涂片下进行观察和分析。
- 观察细胞形态，计算细胞数目，评估红细胞形态、白细胞分类及数量、血小板计数等。
血涂片的制备
血涂片的制备血涂片是一种常见的实验室技术，用于观察和分析血液中的细胞形态和数量。
它是一种简单而有效的方法，广泛应用于临床诊断、疾病监测和科学研究等领域。
下面将详细介绍血涂片的制备过程。
准备好所需的材料和设备，包括血液样本、玻片、洗涤液、染色剂和显微镜。
确保所有设备和材料的清洁和无菌。
接着，取一滴新鲜的全血样本，通常是从患者的指尖或静脉采集。
使用无菌的针头或采血针，在无菌条件下采集血液样本，并将其滴在玻片的一个端面上。
然后，迅速将另一片玻片倾斜放置在滴在玻片上的血液样本上。
保持两片玻片之间的角度，使血液在两片玻片之间均匀分布。
接下来，用轻而均匀的压力将两片玻片滑动开，使血液在玻片上均匀分布。
这个过程需要快速进行，以避免血液凝固。
然后，将制备好的血涂片立即在通风处晾干。
这个过程一般需要几分钟时间，取决于环境的温度和湿度。
血涂片晾干后，可以进行染色。
常用的染色剂有Wright染料和Giemsa染料。
将血涂片浸入染色剂中，按照染色剂的说明进行染色，一般需要数分钟至数十分钟。
染色完成后，用洗涤液轻轻冲洗血涂片，以去除多余的染色剂。
然后，用纸巾轻轻擦干血涂片，并将其放在通风处晾干。
使用显微镜观察血涂片。
将血涂片放在显微镜载物台上，调整倍率和焦距，以获得清晰的图像。
通过观察血涂片中的细胞形态和数量，可以进行疾病诊断、治疗监测或科学研究。
总结起来，血涂片的制备包括采集血液样本、制备涂片、晾干、染色和观察等步骤。
正确的制备过程和技术操作对于获得准确的结果至关重要。
血涂片的制备是一项简单但非常重要的实验室技术，它为疾病的诊断和治疗提供了有力的支持。
血涂片制备
1、血涂片制备将一滴血液滴在干净的载玻片上，用另一张载玻片边缘与其接触，呈30°角拉回与血液接触。
当血液蔓延至接近玻片的宽度时，将玻片平稳快速地向前推出。
将玻片在空中轻轻会动，快速风干。
2、血涂片染色采用瑞氏染色法。
本法的特点是将固定和染色合并在一起进行，手续简便，染色时间短，对白细胞特异性颗粒着色较好，但对核的着色略差。
瑞氏染料是由酸性染料伊红（使细胞的碱性成分染成红色，如血红蛋白和嗜酸性颗粒）和碱性染料亚甲蓝（使细胞的酸性成分染成蓝色，如白细胞）组成的复合染料。
（1）用蜡笔在血膜两头划线，以防染液溢出，然后将血膜平放在染色架上。
(2)用瑞氏染液3～5滴覆盖整个血膜，固定细胞0.5～1分钟。
(3)滴加等量或稍多的缓冲液（pH6.4～6.8的磷酸盐缓冲液，其作用是使染色环境维持在弱酸性，达到最佳的染色效果），用吸球将其与染液吸匀，或者摇动玻片染色5～10分钟。
(4)慢慢摇动玻片，然后用流动水从玻片的一侧冲去染液，待血片自然干燥后(或用滤纸吸干)，即可镜检。
3、染色效果正常情况：血膜外观呈淡粉红色或琥珀色。
显微镜下，成熟红细胞呈粉红色。
白细胞胞质中颗粒清楚，并显示出各种细胞特有的色彩，细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。
附：瑞氏染液配制：瑞氏染料 830gm或1g甲醇（AR） 500ml或600ml1）先称干燥（事先放入温箱干燥过夜）瑞氏染料放置乳钵内，用乳棒轻轻敲碎染料成粉末，再行研磨至听不到研芝麻声即呈细粉末，加少许甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸内显“一面镜”光泽，而无染料粉粒沉着。
2）再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮，静置片刻，将上层液体倒入一清洁储存瓶内（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重复数次，至乳钵内染料及甲醇用完为止，摇匀，密封瓶口。
3）存室温暗处，储存愈久，则染料溶解、分解就越好，一般储存3个月以上为佳。
血涂片制备
血涂片制备步骤：可分5个步骤进行消毒→取血→推片→染色→观察操作步骤：（1）采血静脉采血后，使用玻璃棒、毛细管、注射针头等在距载玻片一端1cm处加1滴抗凝血。
（2）推片左手平执载玻片，或放在类似桌子等平坦地方，右手持推片从前方接近血滴，使血液沿推片边缘展开成适当的宽度，立即将推片与载玻片呈30。
~45。
角，轻压推片边缘将血液推制成厚薄适宜的血涂片，血涂片应呈舌状，头、体、尾清晰可见。
（3）干燥将推好的血涂片在空气中晃动，使其迅速干燥。
天气寒冷或潮湿时，应于37 ℃温箱中保温促干，以免细胞变形缩小。
（4）标记在载玻片的一端用记号笔编号。
（4）染色用特种玻璃铅笔在血膜两侧画两条线，防止染液外溢。
再将瑞氏染液滴在血膜上，至染液淹没全部血膜，染1分钟。
加等量蒸馏水(或缓冲液)与染液混合再染5分钟。
最后用蒸馏水把染液冲掉，用吸水纸吸干，自然干燥后，即可观察。
注意事项：1、要制备良好的血细胞涂片，玻片必须干净。
使用玻片时，只能手持玻片边缘，切勿触及玻片表面，以保持玻片清洁、干燥、中性、无油腻。
2、最好使用非抗凝血制备血涂片，也可用EDTA抗凝血制备。
使用抗凝血标本时，应充分混匀后再涂片。
抗凝血标本应在采集后4h内制备血涂片，时间过长可引起中性粒细胞和单核细胞的形态学改变。
3、涂片的厚度、长度与血滴的大小、推片与载玻片之间的角度、推片时的速度等有关。
一般认为血滴大、血粘度高、推片角度大、速度快则血膜厚，反之则血膜薄。
4、血膜应厚薄均匀适度，头尾及两侧有一定的空隙。
如血膜面积太小，可观察的部分会受到局限，故应以在离开载玻片另一端2cm的地方结束涂抹为宜。
一些体积特大的特殊细胞常在血膜的尾部出现。
5、血涂片必须充分干燥后方可固定染色，否则细胞尚未牢固地吸附在玻片上，在染色过程中容易脱落。
血涂片的制备
血涂片的制备
血涂片是一种常用的医学检查方法，它可以用于诊断各种疾病和病理状态。
制备血涂片是血液学和临床检验中最基本的技术之一。
下面将介绍血涂片的制备步骤和注意事项。
1.采集血液样本：血涂片的制备需要采集一定量的新鲜血液样本。
通常使用静脉采血或割破手指采血的方法。
2.涂片处理：将采集到的血液样本滴在干净无菌玻璃片上，并用另一个无菌玻璃片将血液样本压扁，使其均匀地覆盖整个玻璃片。
3.烘干和固定：将血涂片在通风干燥处晾干，或者使用电热板加热干燥，直到血液完全干燥。
然后在草酸钠溶液或其他固定剂中固定片子。
4.染色：将固定后的血涂片浸泡在适当的染液中，如吉姆萨染液。
一般染色时间为5-10分钟，然后用水洗净。
5.干燥和观察：将染色后的血涂片在通风干燥处晾干，然后使用显微镜观察。
通常可以观察到血细胞、白细胞、红细胞和血小板等。
注意事项：
1.严格遵守无菌操作规范，防止污染。
2.血液样本需新鲜，避免凝块。
3.制备血涂片的过程要快，以避免血液样本干燥和变形。
4.固定血涂片的时间和染色时间要控制好，否则会影响结果。
总之，制备血涂片是一项基本的、重要的技术，需要严格按照操作规范进行操作，以确保检测结果的准确性和可靠性。
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实验二血涂片的制备Preparation of Blood Smear实验原理使用推片将血液在载玻片制成血膜。
试剂器材载玻片（清洁、干燥、无尘、无油脂、25cm×75cm，厚度0.8mm~1.2mm）、推片。
操作步骤（1）采血静脉采血后，使用玻璃棒、毛细管、注射针头等在距载玻片一端1cm处加1滴（约0.05ml）抗凝血，如果使用手指采血则直接用洁净玻片蘸 1 滴血。
（2）推片左手平执载玻片，或放在类似桌子等平坦地方，右手持推片从后方或前方接近血滴，使血液沿推片边缘展开成适当的宽度，立即将推片与载玻片呈30。
~45。
角，轻压推片边缘将血液推制成厚薄适宜的血涂片（图1-6），血涂片应呈舌状，头、体、尾清晰可见。
（3）干燥将推好的血涂片在空气中晃动，使其迅速干燥。
天气寒冷或潮湿时，应于37 ℃温箱中保温促干，以免细胞变形缩小。
图1-6 推片（4）标记在载玻片的一端用记号笔编号。
注意事项1．要制备良好的血细胞涂片，玻片必须干净。
新购置的载玻片常带有游离碱质，必须用约1mol/L HCl浸泡24h后，再用清水彻底冲洗，擦干后备用。
用过的载玻片可放入含适量肥皂或其他洗涤剂的清水中煮沸20min，洗净，再用清水反复冲洗，蒸馏水最后浸洗后擦干备用。
边缘破碎、玻面有划痕的玻片不能再用。
使用玻片时，只能手持玻片边缘，切勿触及玻片表面，以保持玻片清洁、干燥、中性、无油腻。
2．最好使用非抗凝血制备血涂片，也可用EDTA抗凝血制备。
使用抗凝血标本时，应充分混匀后再涂片。
抗凝血标本应在采集后4h内制备血涂片，时间过长可引起中性粒细胞和单核细胞的形态学改变。
制片前标本不宜冷藏。
涂片的厚度、长度与血滴的大小、推片与载玻片之间的角度、推片时的速度及红细胞比容有关。
一般认为血滴大、血粘度高、推片角度大、速度快则血膜厚，反之则血膜薄。
故针对不同病人应有的放矢，对血细胞比容高、血粘度高的病人应采用小血滴、小角度、慢推；而贫血患者则应采用大血滴、大角度、快推。
3．血膜应厚薄均匀适度，头尾及两侧有一定的空隙。
如血膜面积太小，可观察的部分会受到局限，故应以在离开载玻片另一端2cm的地方结束涂抹为宜。
一些体积特大的特殊细胞常在血膜的尾部出现，因此画线应注意保存血涂片尾部细胞。
4．血涂片必须充分干燥后方可固定染色，否则细胞尚未牢固地吸附在玻片上，在染色过程中容易脱落。
实验评价血涂片制备是血液学检查的重要基本技术之一。
一张良好的血片，厚薄要适宜，头体尾要明显，细胞分布要均匀，膜的边缘要整齐，并留有一定的空隙。
血涂片制备时手工推片法用血量少、操作简单，是最广泛应用的方法。
除可获得满意的血涂片外，抗凝的血液病标本离心后取其灰白层涂片，可提高阳性检出率。
此外，还可根据不同需要（如疟原虫、微丝蚴检查等）采用厚血涂片法。
随着当今的自动化的发展，出现了自动血液涂片和染色装置。
自动的血液涂抹装置主要有两类，一类是离心法，可以将少量细胞浓缩涂片；另一类是机械涂片法，其模拟手工涂片，适用于大量血涂片的制备。
一般来说自动血液涂片装置可获得细胞分布均匀、形态完好的血片，但尚未普遍推广。
思考题从外观来判断，一张好的血涂片有哪些特征？血涂片的制备与染色血涂片的制备:【器材】清洁、干燥、无尘、无油脂的载玻片(25㎜×75㎜,厚度为0.8～1.2㎜) .【操作】血涂片制备方法很多,目前临床实验室采用的是手工推片法,在玻片近一端1cm处.加一滴0.05ml充分混匀的血液,握住另一张边缘光滑的推片,以30°～45°角使血滴沿推片迅速散开,快速、平稳地推动推片至载玻片的另一端.【附注】1.血片通常分头、体、尾三部分.2.推好的血涂片应在空气中晃动,使其尽快干燥.天气寒冷或潮湿时,应于37℃恒温箱保温促干,以免细胞变形缩小.3.涂片的厚薄、长度与血滴的大小、推片与载玻片之间的角度、推片时的速度及红细胞的比容有关.一般认为血滴大、角度大、速度快则血膜厚；反之则血膜薄.4.涂片应在1h内染色或在1h 内用无水甲醇固定后染色.5.新购置的载玻片常带有游离碱质,必须用浓度约1mol∕LHCL浸泡24h后,再用清水彻底冲洗.血涂片染色:瑞士染色法【原理】瑞士染色法使细胞既有化学亲和反应,有又物理吸附作用.各种细胞由于其化学成分不同,对酸性及碱性染料的结合力也不同,因此,染色后各种细胞呈现出各自的染色特点.【试剂】瑞士染液Ⅰ液: 瑞士染料0.1g , 甲醇60.0ml瑞士燃料有酸性燃料伊红和碱性染料美蓝的氧化物(天青)组成.将瑞士染料放入清洁干燥研钵里,先加少量的甲醇,充分研磨使燃染料溶解,将已溶解的染料倒入棕色试剂瓶中,未溶解的在加少量甲醇研磨,直至染料完全溶解,甲醇全部用完为止.配好后放入室温下,一周后即可使用.新配染液效果较差,放置时间延长,染色效果越好.久置应密封,以免甲醇挥发或氧化成甲酸.染液中也可加中性甘油2～3ml,除可防止甲醇过早挥发外,也可使细胞着色清晰.Ⅱ液: Ph 6.4～6.8磷酸盐缓冲液磷酸二氢钾(KH2PO4) 0.3g磷酸氢二钠(Na2HPO4) 0.2g加蒸馏水加至1000ml. 配好后用磷酸盐溶液校正PH,塞进瓶口贮存.如无缓冲液可用蒸馏水代替.【附注】1.pH对细胞染色有影响.2.未干透的血膜不能染色.否则染色时血膜易脱落.3.染色时间与染色浓度、染色时温度成反比;而与细胞数量成正比.4.冲洗不能先倒掉染液,应用流水冲去,以防染料沉淀在血膜上.5.如血膜上有染料颗粒沉积,可加少许甲醇溶解.【操作】1.采血后推制厚薄适宜的血涂片.2.用蜡笔在血膜两边划线,然后将血膜放在染色架上.3.瑞士染液数滴,以覆盖整个血膜为宜,定血膜约1min.4.滴加约等量的缓冲液与染液混合,室温下染色5～10min.5.用流水冲去染液待干燥后镜检.步骤：采血，推片，干燥，标记，染色1.采血准备工作：按摩，消毒，针刺，吸血，止血2.推片:一张良好血涂片的要求：厚薄适宜，头体尾明显，细胞分布均匀，边缘整齐，两端和两边留有空隙血涂片制备的注意事项：血滴愈大，角度愈大，推片速度愈快，则血膜愈厚；反之，血涂片愈薄。
针对不同患者应有的放矢，对血细胞比容高、血粘度高的患者宜采用小血滴、小角度、慢推；贫血患者则相反。
引起血涂片分布不均的主要原因：推片边缘不整齐（毛刷状）用力不均匀（阶梯状）载片不清洁（有空泡）3.干燥：将推好的血涂片在空气中晃动，使其迅速干燥。
天气寒冷或潮湿时，应于37℃温箱中保温促干，以免细胞变形缩小4.标记5.染色：瑞氏染色法(Wr ight’s stain)1. 染液成分：①美蓝（亚甲蓝）：M＋碱性染料②伊红（曙红）：E－酸性染料③瑞氏染料：M＋＋E- ME↓（伊－美中性物）④甲醇：溶解染料；固定细胞形态；蛋白质呈颗粒或网状，增加细胞与染料的接触2. 染色原理：①基本原理：物理吸附、化学亲和作用②碱性物质（Hb、嗜酸性颗粒）――嗜酸性物质、染成粉红色（E－）③酸性物质（核蛋白、RNA）――嗜碱性物质、染成蓝或紫蓝色（M＋）④中性颗粒（中性细胞胞浆）――嗜中性物质、染成淡紫红色（M＋E－）pH 的影响：H＋（pH<PI）：蛋白质与碱性染料（M+）亲和力下降，增强伊红着色，出现红染OH－（pH>PI）：蛋白质与酸性染料（E-）亲和力下降，增强美蓝着色，出现蓝染PBS缓冲液：pH : 6.4－6.8 以维持恒定的pH环境3. 染色方法①固定：滴加染液3 ~ 5滴，覆盖整个血膜固定细胞0.5－1 min②染色：加1 ~ 2倍PBS 缓冲液，混匀染5 ~ 10min③冲洗：平衡摇动，于自来水龙头上平置冲洗（从一端开始），或加PBS 缓冲液冲洗4. 染色结果①外观：淡紫红色②镜下：红细胞――粉红色碟状白细胞――胞核、胞浆及颗粒显示特有的染色特征5.红细胞与中性粒细胞红细胞:淡红色圆盘状，中央有生理性淡染区。
中性粒细胞：细胞核染深紫红色，细胞质呈粉红色，含有许多细小的淡粉红色颗粒，淋巴细胞：细胞核染深紫红色，胞质少，仅在核的一侧见到少量淡蓝色胞质注意事项：①血膜要干透后才能染色，否则染色时易脱落；②染色时间与染液浓度、室温及有核细胞多少有关，一般染液淡、室温低，有核细胞多，染色时间长。
③染液不能过少，以防蒸发沉淀；④冲洗时不能先倒掉染液，应以细流水从一边开始冲，防染料沉着，冲洗时间也不能长；⑤染色过淡时可复染，复染时先将染料稀释好；⑥染色过深可用水冲洗或浸泡，还可用甲醇脱色；⑦分类最佳区域为体、尾交界处。
第一节流动的组织──血液──血液一、教学目标1.描述血液的成分和主要功能。
2.使用显微镜观察人血的永久涂片，尝试识别红细胞和白细胞。
二、教学策略血液对于每个学生来说既熟悉又陌生。
说学生熟悉血液，是因为每个学生几乎都有流血、抽血和验血的经历，对血液的颜色等有一些感性的认识，还可以从报刊、杂志、电视和广播中获取到有关血液的信息。
说学生对血液陌生，是因为学生大都不知道血液里到底含有哪些成分，以及每种成分各有什么功能。
总之，学生对血液感到很新鲜，甚至有一些恐惧。
因此，教师可以先让学生自由发言，交流各自对血液的认识，以激发学生的学习兴趣。
然后，教师可以出示一张医院的血液化验单，让学生回忆和讨论血液化验的主要内容。
教师可以将学生的回答记录在黑板上，为后面的教学做铺垫。
当然，学生的回答往往不很全面，不很系统。
这时，教师不要忙着补充，而是要及时评价学生从生活经验和课本外获取信息的能力，鼓励学生继续积极补充，再进行归纳，为下一步的教学打好基础。
教师可以将课前准备好的血液分层演示装置(可以用鸡、鸭或家鸽的血，也可以用猪、牛或羊的血)演示给学生看，并让学生讨论资料分析中的3个问题。
关于血浆，教师只需作简要的介绍。
需要指出的是，水占了整个血浆的绝大部分，这可以为后面介绍无偿献血做铺垫。
关于血细胞，教材的意图是让学生先通过显微镜观察人血的永久涂片，从感性上认识红细胞、白细胞的形态以及数量多少，然后从理性的角度进行学习，这样做可以激发学生自主学习、积极开动脑筋和主动求知的学习热情。
在这一部分内容的教学中，教师介绍红细胞、白细胞和血小板的主要功能时，应该特别注意与生活实际中的一些问题相联系，如贫血、化脓和伤口处血液逐渐凝固等，这有助于调动学生的学习积极性，并加深学生对基础知识的理解和记忆。
三、参考答案资料分析1.血液中含有不同的组成物，它们的质量不一样，所以，含有抗凝剂的血液离心或静置一段时间后，就会逐渐分成上下两层以及中间一薄层白色物质。
2.血液是由上层的淡黄色半透明液体，下层深红色部分以及中间的很薄的一层白色物质组成的。
红细胞和所含的血红蛋白在下层深红色的物质里，白细胞和血小板在中间很薄的一层白色物质中。
3.血液中有大量的血细胞，这些细胞与血浆共同构成血液，完成物质运输等功能，因此，血液是一种组织，属于结缔组织。