各类提取分离方法

总述

1)提取前文献查阅综述和药材生药鉴定2)提取方法

①粉碎成粗粉

②有机溶剂法和水提法③水蒸气蒸馏法④升华法

3)分离纯化法

①根据物质溶解度的不同进行分离

a.温度不同,溶解度不同

b.改变溶液的极性去杂

c.酸碱法

d.沉淀法

②根据物质分配比不同极性分离

a.液-液萃取法

b.反流分布法

c.液滴逆流层析法

d.高速逆流层析法

e.GC法

f.LC法:LC分配层析载体主要有---硅胶,硅藻土,纤维素等;有正反相之分;压力有低、中、高之分;载量有分析、制备之分。

③根据物质吸附性不同极性分离

a.※极性吸附剂（如SiO2,Al2O3...)极性强，吸附力大

※非极性吸附剂(如活性炭－对非极性化合物的吸附力强(洗脱时洗脱力随洗脱剂的极性降低而增大)。

b.化合物的极性大小依化合物的官能团的极性大小

而定;

溶剂的极性大小可按其介电常数(e)大小排列

（极性渐大> ）:

己烷苯无水乙醚CHCl3AcOEt乙醇甲醇

水e 1.88 2.29 4.47 5.20 6.1126.0 31.2

81.0

c.氢键力吸附聚酰胺吸附层析--洗脱剂的洗脱力由小到大为:

水> 甲醇> 丙酮> NaOH液> 甲酰胺> 尿素水液

④根据物质分子的大小进行分离

如葡萄糖凝胶(Sephadex G and LH-20...)过泸法等

⑤根据物质解离程度不同的分离法离子交换法：

强酸：-SO3H

强碱：-N+(CH3)3Cl-

弱酸：-CO2H

弱碱：-NH2(NH,N)

一、糖及苷类的提取和分离

1 溶剂处理法

2 铅盐沉淀法

3 大孔树脂处理法

4 柱色谱分离法

二 醌类化合物的提取和分离

一 提取方法:

一般选用甲醇或乙醇为溶剂，可同时将游离态和成苷的蒽醌类化合物从药材中提取出来，浓缩后再依次用有机溶剂提取（多用索氏提取法），可根据极性大小不同进行初步分离（如将苷和苷元分开）。 对于多羟基蒽醌或具有羧基的蒽醌（如大黄酸），在植物体内多以盐的形式存在，难以被有机溶剂溶出，提取前应先酸化使之游 中 药

EtOH

EtOH 提取物

减压回收EtOH

浓缩物

3提取

Et 2O 3

提取

EtOAc 提取液 残留物

（含单糖苷或含糖较少的苷）

n-BuOH 提取 n-BuOH 提取液（含糖较多的苷）

离。

二分离方法：

1 蒽醌苷类和游离蒽醌衍生物的分离：用分步提取法（如前述）

2 游离蒽醌衍生物的分离：可选用分步结晶法、梯度pH萃取法或层析法进行。

梯度pH萃取法是分离游离蒽醌衍生物的经典方法：

1.局限性

2.原理性质相似，酸性差别不大的混合物不适用

3有些蒽酮虽然存在酚羟基，但在稀碱溶液中较相应的蒽醌难溶，如大黄酚蒽酮-9，故蒽醌衍生物的苯提取液用极稀的NaOH液萃取，可除去蒽醌而使蒽酮留在苯液中。

示例

色谱法在蒽醌苷元分离中的应用：

一般先用经典方法（如梯度pH萃取）对其进行初步分离，再结合柱色谱法或制备性TLC法作进一步的分离，多用硅胶吸附色谱，而氧化铝一般不用，也常用聚酰胺作为柱色谱的填料。•三、黄酮类化合物的提取与分离

（一）提取

黄酮甙类以及极性稍大的甙元（如羟基黄酮等），一般可用丙酮、醋酸乙酯、乙醇提取。一些多糖甙类可用沸水提取。在提取花青素类化合物时，可加入少量酸（0.1%盐酸，应当慎用，避免发生水解）。

大多数黄酮甙元宜用用氯仿、乙醚、醋酸乙酯等中极性溶剂提取，而对多甲氧基黄酮类游离甙元，甚至可用苯等低极性溶剂进行提取。对得到的粗提物可进行下列精制处理，常用方法有：（一）溶剂萃取法利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不同，选用不同溶剂进行地萃取可达到精制纯化目的。例如植物叶子的醇浸液，可用石油醚处理，以便除去叶绿素、胡萝卜素等脂溶性色素。而某些药料水溶液则可加入多倍量浓醇，以沉淀除去蛋白质、多糖类等水溶性杂质。

有时溶剂萃取过程也可以用逆流分配法连续进行。常用的溶剂系统有：水-醋酸乙酯，正丁醇-石油醚等。

溶剂萃取过程在除去杂质的同时，往往还可以收到分离甙和甙元或极性甙元与非极性甙元的效果。

（二）碱提取酸沉淀法黄酮甙类虽有一定极性，可溶于水，但却难溶于酸性水，易溶于碱性水，故可用碱性水提取，再于碱水提取液中加入酸，黄酮甙类即可沉淀析出。此法简便易行，如芦丁、橙皮甙、黄芩甙的提取都应用了这个方法。

兹以从槐米中提取芦丁为例说明该法的操作过程。槐米（槐树Sophora japonica L. 花蕾）加约6倍量水，煮沸，在搅拌下缓缓加入石灰乳至pH8~9，在此pH条件下微沸20~30分钟，趁热油滤，残渣同上再加4倍水煎1次，乘热抽滤。合并滤液在60~70℃下，用浓盐酸调至pH为5，搅匀，静置24小时，抽滤。沉淀物水

洗至中性，60℃干燥得芦丁粗品，于水中重结晶，70~80℃干燥得芦丁纯品。

在用碱酸法进行提取纯化时，应当注意所用碱液浓度不宜过高，以免在强碱性下，尤其加热进破坏黄酮母核。在加酸酸化时，酸性也不宜过强，以免生成（金羊）盐，致使析出的黄酮类化合物又重新溶解，降低产品收率。

当药料中含有大量果胶、粘液等不溶性杂质时，如花、果类药材，宜用石灰乳或石灰水代替其它碱性水溶液进行提取，以使上述含羟基的杂质生成钙盐沉淀，不致溶出。这也有利于黄酮类化合物的纯化处理。

（三）碳粉吸附法主要适于甙类的精制工作。通常，在植物的甲醇粗提取物中，分次加入活性炭，搅拌，静置，直至定性检查上清液无黄酮反应时为止。过滤，收集吸甙炭末，依次用沸甲醇、沸水、7%酚/水、15%酚/醇溶液进行洗脱，各部分洗脱液进行定性检查（或用PPC鉴定）。通过对Baptisia lecontei 中黄酮类化合物的研究证明，大部分黄酮甙类可用7%酚/水洗下。洗脱液经减压蒸发浓缩至小体积，再用乙醚振摇除去残留的酚，余下水层减压浓缩即得较纯的黄酮甙类成分。

二、分离

现将较常用的方法介绍如下：

（一）柱层析法

分离黄酮类化合物常用的吸附剂或载体有硅胶、聚酰胺及纤维素