犬骨骼肌成肌细胞体外分离、纯化及培养方法改良探索

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骨骼肌细胞原代培养

骨骼肌细胞原代培养骨骼肌细胞是我们身体中最重要的肌肉组织之一，通过细胞的原代培养可以帮助我们更好地研究肌肉的生理和病理过程。

本文将介绍骨骼肌细胞原代培养的方法和意义。

一、骨骼肌细胞原代培养的方法1. 细胞来源骨骼肌细胞可以从人体或动物体内获得。

人体来源的骨骼肌细胞可以通过手术获取，动物来源的骨骼肌细胞可以通过解剖或抽取组织获得。

2. 细胞分离将获得的骨骼肌组织进行消化，分离出单个的骨骼肌细胞。

常用的消化酶有胰蛋白酶和胶原酶，通过适当的温度和时间来进行消化。

3. 细胞培养将分离出的骨骼肌细胞放入培养皿中，加入适当的培养基，提供细胞所需的营养物质和生长因子。

培养基的配方和组成会因实验目的的不同而有所差异。

4. 细胞传代原代培养的骨骼肌细胞会在培养过程中逐渐增殖，达到一定的细胞数量后，可以进行细胞传代。

传代可以保持细胞的稳定性和生物学特性。

二、骨骼肌细胞原代培养的意义1. 生理研究通过骨骼肌细胞原代培养，可以研究肌肉的生理功能和调控机制。

例如，可以研究肌肉收缩机制、肌肉代谢和能量平衡等方面的问题。

2. 病理研究骨骼肌细胞原代培养还可以用于研究肌肉疾病的发生机制和治疗方法。

例如，可以利用培养的肌肉细胞模拟某些疾病的发生过程，寻找治疗的靶点和药物。

3. 药物筛选骨骼肌细胞原代培养可以用于药物的筛选和评价。

通过在培养的肌肉细胞中加入不同的药物，观察细胞的反应和变化，可以评估药物的疗效和毒副作用。

三、骨骼肌细胞原代培养的注意事项1. 细胞来源的选择在进行骨骼肌细胞原代培养前，需要选择合适的细胞来源。

不同的细胞来源可能会影响培养结果和实验的可行性。

2. 培养条件的优化骨骼肌细胞原代培养需要适宜的培养条件，包括培养基的配方、温度、湿度和CO2浓度等。

这些条件需要根据实验的要求进行优化。

3. 细胞的纯度和活性在骨骼肌细胞原代培养过程中，需要保证细胞的纯度和活性。

细胞的纯度可以通过筛选和分离的方法进行提高，细胞的活性可以通过细胞活力试剂盒进行检测。

狗麻醉解剖实验报告(3篇)

第1篇一、实验目的1. 熟悉狗的解剖结构，了解各器官的形态、位置和功能。

2. 掌握狗的麻醉、解剖和操作技巧。

3. 培养学生严谨、细致的实验态度和团队合作精神。

二、实验材料与设备1. 实验动物：健康成年狗一只（雌性，体重约10kg）。

2. 实验器材：麻醉机、手术刀、剪刀、镊子、针筒、注射器、解剖器械、生理盐水、碘伏、酒精、纱布等。

3. 实验药品：普鲁卡因、利多卡因、肾上腺素、生理盐水等。

三、实验步骤1. 麻醉：（1）首先对狗进行全身麻醉，采用静脉注射普鲁卡因和利多卡因的混合液。

（2）麻醉成功后，将狗置于解剖台上，固定四肢，准备进行解剖。

2. 解剖：（1）皮肤：观察狗的皮肤颜色、厚度和弹性，注意皮肤与肌肉的连接方式。

（2）肌肉：分离皮肤与肌肉，观察肌肉的形态、颜色和纹理，了解肌肉的起止点和作用。

（3）骨骼：分离肌肉，暴露骨骼，观察骨骼的形态、大小和连接方式，了解骨骼的支撑和保护作用。

（4）内脏器官：a. 消化系统：观察胃、小肠、大肠、肝脏、胆囊、胰腺等器官的位置、形态和功能。

b. 呼吸系统：观察气管、支气管、肺等器官的位置、形态和功能。

c. 循环系统：观察心脏、血管、淋巴等器官的位置、形态和功能。

d. 泌尿系统：观察肾脏、输尿管、膀胱等器官的位置、形态和功能。

e. 生殖系统：观察卵巢、输卵管、子宫、睾丸、附睾等器官的位置、形态和功能。

f. 神经系统：观察大脑、脊髓、神经等器官的位置、形态和功能。

g. 感觉器官：观察眼睛、耳朵、鼻子等器官的位置、形态和功能。

（5）神经系统：观察大脑、脊髓、神经等器官的位置、形态和功能。

3. 组织切片：（1）取狗的器官组织，如肝脏、肾脏、心脏等，进行固定、脱水、透明、浸蜡、切片、染色等步骤。

（2）在显微镜下观察组织切片，了解器官组织的微观结构。

4. 总结与讨论：（1）总结实验过程中观察到的狗的解剖结构特点。

（2）分析狗的器官功能与人体器官功能的异同。

（3）讨论实验过程中遇到的问题和解决方法。

MDCK细胞介绍

MDCK细胞介绍（MDCK Cells introduction）MDCK细胞系(MDCK Cell Lines)由Madin和Darby于1958年从美国Cocker Spaniel母曲架犬的肾脏组织分离培育建立，通常是以贴壁方式生长的上皮样细胞。

犬肾上皮连续细胞系MDCK (Madin-Daby canine kidney cells) 细胞株购买信息：ATCC MDCK cell lines。

目前，MDCK细胞系(MDCK Cell Lines)广泛用于多种病毒的扩增和纯化，如：呼肠孤病毒)、腺病毒、犬细小病毒、猫粒细胞缺乏症病毒)及禽流感病毒等。

由于其病毒感染效率高、增殖快，且不易变异，MDCK细胞系(MDCK Cell Lines)被公认为最适于甲、乙型流感病毒疫苗生产的3种细胞系之一。

传统的MDCK细胞培养大多采用有血清贴壁培养方式。

血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种复杂混合物，其含有细胞生长所需的生长因子、激素、载体蛋白、贴壁因子、微量元素以及其他营养物质，可以有效地促进细胞生长和产物表达。

然而，血清的应用也存在许多问题：易受病毒、支原体或其他病原体的污染；批间差异造成产品批次间的质量难以严格控制；大量血清蛋白的存在增加了下游分离纯化的难度，部分蛋白难以通过分离纯化手段彻底去除，影响了产品的最终质量；此外，血清来源困难、价格昂贵，大规模动物细胞培养过程中使用血清将会大大增加生产成本。

犬肾细胞MDCK无血清培养基 UltraMDCK Serum-free Medium 产品介绍MDCK无血清培养基是一种在经过优化的基础培养基中只添加了重组人胰岛素蛋白和牛转铁蛋白的低蛋白含量的成分配制而成的SFM培养基。

与在含有血清生长环境中相比，在MDCK 无血清培养基中生长的MDCK细胞较小并紧密成团。

在不更换培养基的条件下，MDCK细胞可以持续旺盛生长至少2周时间。

经过MDCK细胞的持续生长，从单层细胞形成球形结构，通常我们称这种球形结构为“漂浮物”。

实训报告狗解剖

一、实训背景随着我国宠物行业的快速发展，宠物医学专业逐渐成为热门专业。

为了提高学生的动手实践能力，培养具备专业技能的宠物医学人才，我校特组织开展了狗解剖实训课程。

本次实训旨在让学生了解狗的解剖结构，掌握解剖方法，提高宠物医学专业的实践教学水平。

二、实训目的1. 了解狗的解剖结构，掌握狗的各个器官系统的分布和功能。

2. 熟练掌握狗解剖的基本方法，提高学生的动手实践能力。

3. 培养学生的科学思维和创新能力，为今后从事宠物医学工作打下坚实基础。

三、实训内容1. 狗的全身骨骼解剖2. 狗的肌肉系统解剖3. 狗的皮肤与毛发解剖4. 狗的消化系统解剖5. 狗的呼吸系统解剖6. 狗的循环系统解剖7. 狗的泌尿系统解剖8. 狗的生殖系统解剖9. 狗的神经系统和感觉器官解剖10. 狗的内分泌系统解剖四、实训过程1. 实训前准备在实训前，教师向学生讲解实训的目的、内容、方法和注意事项。

学生提前预习相关理论知识，了解狗的解剖结构。

2. 实训操作（1）全身骨骼解剖：学生按照教师指导，逐步剥离狗的皮肤、肌肉和内脏，观察狗的骨骼结构，了解骨骼系统的分布和功能。

（2）肌肉系统解剖：学生继续剥离狗的肌肉，观察肌肉的起止点、走向和功能，了解肌肉系统的协调作用。

（3）皮肤与毛发解剖：学生观察狗的皮肤结构和毛发分布，了解皮肤的保护、调节体温和感觉功能。

（4）消化系统解剖：学生解剖狗的消化器官，观察胃、肠、肝脏、胆囊等器官的结构和功能。

（5）呼吸系统解剖：学生解剖狗的呼吸道，观察鼻腔、喉、气管、支气管和肺的结构和功能。

（6）循环系统解剖：学生解剖狗的心脏、血管，观察心脏的结构和功能，了解血液循环过程。

（7）泌尿系统解剖：学生解剖狗的肾脏、输尿管和膀胱，了解泌尿系统的结构和功能。

（8）生殖系统解剖：学生解剖狗的生殖器官，观察雌雄生殖器官的结构和功能。

（9）神经系统和感觉器官解剖：学生解剖狗的大脑、脊髓、神经和感觉器官，了解神经系统的结构和功能。

犬体细胞克隆研究

１影响犬体细胞克隆的因素
１９英国罗斯林研究所Ｗｉｔ９７年ｌ等成功获得１超数排卵和卵母细胞质量ｍｕ．１
世界首例体细胞克隆绵羊（ｏｙ，Ｄｌ）打破了长期以来ｌ
犬卵母细胞体外成熟（ｖ效率比其它哺乳动ｉＭ）
认为成年动物体细胞不具备发育全能性的假说。克物和实验动物低【。至目前无利用体外成熟卵母细
的融合和激活、重构胚胎的体外发育以及重构胚胎卵母细胞的细胞质黑而均匀致密，而早期老龄化卵移植人受体动物中并妊娠产仔。在２００６年，世界首母细胞、中等老龄化卵母细胞及严重老龄化卵母细
胞中卯周隙逐渐增大，透明带和卵丘细胞也逐渐老
目前，物体细胞克隆技术的主要环节包括：动供依据形态学标准，即卵周缝（Ｖ）ＰＳ大小及第１极体存可体细胞的培养和准备、受体卵母细胞的体外成熟及在与否，来判断卵母细胞成熟状态。从图１以看
去核、供体细胞核移植入去核卵母细胞中、重构胚胎出，成熟卵母细胞的细胞质黑但不均匀致密，未成熟
物卵母细胞中，构建新的重组胚胎，进而使重构胚胎效率较低，难度大。如犬卵母细胞体外成熟效率低，胚胎细胞核）观察效率低，体外胚发育为与供体核细胞基因型相同后代的技术过程。犬卵母细胞核相（
动物体细胞克隆可以使动物不需要经过有性繁殖，胎培养体系不完善，重构胚胎很难进行体外发育。以即不需要雄性动物的精子和雌性动物的卵母细胞的下详细介绍目前影响犬体细胞克隆的因素。受精过程而产生动物后代。

人成纤维细胞的体外分离、纯化培养及细胞鉴定

·1216·
中国老年学杂志 2012 年 3 月第 32 卷
化学染色，细胞质中有棕色颗粒。成纤维细胞的标志物 Vimen- tin 为阳性，证明提取细胞为成纤维细胞。见细胞培养第 2 天； c：细胞培养第 12 天细胞生长呈鱼群状； d：细胞培养第 14 天，细胞生长呈漩涡状
5 Keisuke T，Jin H，Taranova O，et al. Generation of insulin-secreting isletlike clusters from human skin fibroblasts〔J〕. Science，2008； 283 （ 46 ）： 31601-7.
2结果 2. 1 成纤维细胞分离、纯化及培养通过酶消化法及贴壁筛选法，成功分离出人成纤维细胞。 2. 2 形态学观察倒置显微镜观察细胞形态，接种第 2 天可见细胞散在生长，分布不均的单个贴壁细胞呈梭形，成纤维细胞样。待细胞培养 10 ～ 14 d 时，细胞生长已达 80% ～ 90% ，呈鱼群样或漩涡状排列。见图 1。 2. 3 细胞 HE 染色成纤维细胞的形态呈梭形，也可见大多角形和扁平星形等。核仁明显，核呈椭圆形，可见 1 ～ 2 个核仁，胞体较大，胞质弱嗜碱性，染色质疏松着色浅。当细胞汇流时，呈鱼群样或漩涡状排列，细胞在 15 代内形态保持不变，经 HE 染色可以更清楚地观察到这些表现。见图 2。 2. 4 细胞免疫组化结果对第 6 代成纤维细胞进行免疫细胞
人成纤维细胞的体外分离、纯化培养及细胞鉴定
王玲玲1 马峰2 张玉成杜珍武张桂珍（吉林大学中日联谊医院中心研究室，吉林长春 130033）
〔摘要〕目的对人皮肤成纤维细胞进行分离、纯化、培养及细胞鉴定，探讨一种高效的分离及纯化方法，为细胞移植提供种子细胞。方法使用酶消化法原代提取人成纤维细胞，快速贴壁法纯化细胞，对细胞进行形态学观察、HE 染色，免疫细胞化学鉴定细胞标志物 Vimentin。结果利用倒置显微镜及 HE 染色，可见细胞为散在分布的梭形贴壁细胞，当细胞汇流时，呈鱼群样或漩涡状排列，且细胞在 15 代内形态保持不变。结论成功地发现快速提取成人成纤维细胞的方法，为成人自体细胞移植的研究奠定了基础。

犬疑似大量骨质溶解症的病理组织学观察

操作［］１。在试验中发现若是在插入聚丙烯缝合线之前静脉注射适量的速尿，尿管会因为尿流量大输
增而增粗，尿管口开张，对比较容易将３０聚输相 — 丙烯缝合线插人输尿管。插入后再行其他操作就方便得多了。术后１月左右对施行输尿管膀胱吻合术的猫进行剖检，膀胱外肉眼看不到明显的输尿管从
迫作用，快就可止血。很参考文献：
［］Ｇｒｇｒ１ｅｏｙＣＲ，ＧｏｒｙＩＭ，ＫｃｉＥＪｅ１ｕｌｅｏｈｎ，ｔ．Ｒｅａｒｎ— ａｎｌａｓｔ
ｐａｔｔｎｆｒｔｅｔｅｔｎｆｅｄｌｎａｉｏｈｒａｍｅｔｏｎ — ｓａｅｒｎｌａｌｒｎｃｔｏｔｇｅａｉｕｅｉａｓｆ
ｐｌｅｓｔｒ）为支撑物，后再进行相应的手术ｙｅｕｕｅ作ｎ然
于输尿管动脉非常的细小，手术中未能结扎确实。在其他两种术式，尿管均剪开，且与黏膜缝合，输并输
尿管动脉被包埋在膀胱黏膜下，即使有出血，由于压
１１材料病犬杂交京巴犬，．８岁，性。于２０雄０６年８月份开始，后肢跛行，佛山某宠物医院就左去
道的约有３０。近几年我国也有多个病例报道，０例但在小动物临床尚未见相关报道。Ｊｈｓｎ和Ｍｃｌｒｏｎｏｃｅｕ于１５９８年将本病命名为大量骨质溶解症，现被广泛采用。根据医学临床资料显示，ＭＯＬ可发生于任何年龄，特别好发于５５岁的儿童和青少年，种族～２无及性别差异，明显遗传倾向。一般是慢性进展病无程，长可达２最５年，全身各部位骨均可发病，变骨病

犬的解剖实验报告-精品

【关键字】方法、认识、难点、系统、平稳、保持、统一、发现、掌握、了解、特点、位置、需要、项目、作用、结构、关系、增强、分析、调节、指导、加强、中心犬的解剖实验报告篇一：动物解剖生理实验指导实验内容实验一、显微镜的使用、组织切片的显微观察实验二、犬骨骼的观察、骨骼辨认测试实验三、血液的凝固实验四、红细胞的脆性试验实验五、蛙心活动观察实验六、红细胞计数实验七、反射弧分析及脊髓反射活动观察(原文来自：小草范文网:犬的解剖实验报告) 实验八、胃肠运动观察和小肠吸收观察实验一显微镜的构造、使用和保养[实验目的]了解显微镜的基本构造，掌握显微镜的使用方法和保养方法。

[材料设备]显微镜、组织切片、擦镜纸等。

[方法步骤]（一）机械部分1、镜筒2、物镜转换器3、镜臂4、调焦器5、载物台6、镜柱7、镜座（二）光学系统部分光镜的光学系统主要包括物镜、目镜和照明装置（反光镜、聚光器和光圈等）。

1、目镜：常见的有5×、10×和15×（×表示放大倍数）的目镜，可根据不同的需要选择使用，最常使用的是10×目镜。

2、物镜：常用物镜的放大倍数有10×、40×和100×等几种。

一般将8×或10×的物镜称为低倍镜（而将5×以下的叫做放大镜）；将40×或45×的称为高倍镜；将90×或100×的称为油镜（这种镜头在使用时需浸在镜油中）。

图1-3 物镜的性能参数及工作距离C 线为盖玻片的的上表面，10?物镜的工作距离为7.63mm；40?物镜的工作距离为0.198mm；10/0.25、40/0.65、100/1.25表示镜头的放大倍数和数字孔径。

160/0.17表示镜筒长度为160mm，盖玻片厚度为0.17mm。

3、聚光器：调节光线的强弱，升高聚光器可使光线增强，反之则光线变弱。

光圈能控制进入聚光器的光束大小的可变光阑。

骨骼肌成纤维细胞分离培养

骨骼肌成纤维细胞分离培养
骨骼肌成纤维细胞（skeletal muscle fibroblasts）的分离和
培养是一种常用的实验技术，用于研究骨骼肌相关的生物学过程以及
肌肉疾病等。

以下是骨骼肌成纤维细胞分离培养的一般步骤：
1.准备离体骨骼肌组织。

从小鼠或人的骨骼肌中取出组织，最好是新鲜组织以确保细胞的活力。

2.组织消化。

将骨骼肌组织切成小块，用胶原酶或胰蛋白酶等消化酶进行消化，使细胞从组织中释放出来。

3.细胞筛选。

通过过筛网或离心的方式将消化后的细胞悬浮液筛选，去除大部分的纤维束和其他细胞类型。

4.细胞培养。

将筛选后的细胞悬浮液转移到培养皿中，添加含有合适培养基和补充物的培养液，将培养皿放置在适当的培养箱中。

5.培养条件。

骨骼肌成纤维细胞通常在37°C的孵育箱中，与5% CO2的空气保持湿润的环境中培养。

6.细胞生长和传代。

骨骼肌成纤维细胞会在培养皿中黏附并开始增殖。

当细胞达到一定密度时，可以进行传代，将细胞分离并分散到
新的培养皿中。

需要注意的是，分离和培养骨骼肌成纤维细胞需要一定的实验技巧和设备，以保证细胞的存活和生长。

同时，细胞的培养基选择和培
养条件的控制也对细胞的生长和功能有重要影响。

因此，在进行这项
技术时，需要按照具体实验要求和相关文献中的方法进行操作。

犬的骨骼标本制作心得体会

犬的骨骼标本制作心得体会在各种博物馆或者自然历史类的展览中，经常可以看到各种各样的动物标本。

在这些标本中，骨骼标本更是一种重要的展示方式。

骨骼标本可以让人们更好地认识动物的内部结构和生理特征。

作为一种骨骼标本的制作工作，犬的骨骼标本制作是比较常见的工作之一。

在这篇文章中，我想分享一下我做犬骨骼标本的心得体会。

第一步，准备工作在制作骨骼标本之前，我们需要进行充分的准备工作。

这包括了采集和保存标本。

在采集骨骼样本时，我们需要尽量保证样本完整。

同时，我们还需要做到正确的保存。

对于刚刚死亡的犬，我们需要将犬的身体保存在低温环境中，同时进行防腐处理，尽快将骨骼分离出来。

如果是已经保存在防腐液中的骨骼样本，则需要进行冲洗和处理，确保骨骼表面的防腐液已经被除去。

第二步，犬骨骼标本制作制作犬骨骼标本的器具和工具材料都是充分的。

我们需要使用大型的马刀或者木工锯等器具将犬的身体肉体去除，完成整个骨骼的分离。

这个过程需要非常小心谨慎，以免损坏整个骨骼结构。

分离出来的犬骨骼需要进行去污处理。

我们需要将骨骼样本浸泡在去污液中，清洗干净。

去污液的成份可以使用去污酸、氢氧化钠和双氧水等。

这个步骤是非常重要的，因为只有将骨骼表面的森林和斑点清除干净，我们才能够做到更好的展示效果。

接下来是犬骨骼的漂白处理。

漂白液可以使用次氯酸钠、过硫酸钾等化学药品。

在漂白过程中，我们需要协作测量骨骼的尺寸和长度。

这在标本展示中非常重要。

在完成各种处理后，我们需要将骨骼样本进行烤干处理。

烤干处理是一种消杀技巧，能够消除骨骼样本内的细菌和其它有害的小生物。

必须保证骨骼样本的绝对干燥，以保持样本的完整性。

第三步，保存和维护最后，我们需要对处理完成的犬骨骼标本进行保存和维护。

我们可以选择用木框或铁框的方式将标本妥善地保存在博物馆或展厅中。

在框架中的犬骨骼样本需要进行定期维护和保养。

我们需要清洗标本表面的灰尘和杂物，然后对于骨骼表面部分，我们需要用特殊的油润滑。

犬的全身骨骼标本制作技术探讨

常规剔除肌肉的方法是利用氢氧化钠进行腐蚀虽然这种方法除肉效果好省时省力但往往在制作过程中由于对不同部位骨骼的浸泡时间和药物浓度掌握不当导致腐蚀过度从而造成骨骼的变形损伤散落丢失尤其肋软骨肋骨与脊椎整形等带来非常大的麻烦
宁夏农林科技。ＮｉｎｇｘｉａＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｇＩｉ．ａｎｄＦｏｒｅｓ．Ｓｃｉ．＆Ｔｅｃｈ．２０１４，５５（０３）：６９ — ７０，９９
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犬的全身骨骼标本制作技术探讨
刘占祥，郭兰芳，李志宁２，刘艳玲
１．７夏农业学校，－７夏银川－７５０００４；２．宁夏永宁县畜牧站，宁夏永宁７５０１Ｏ０
摘
要：为探究犬的全身骨骼标本的制作技术，以犬为材料，在传统制作方法的基础上，采用开水适度烫煮剔除骨骼上肌
ＬＩＵＺｈａｎ－ｘｉａｎｘｉａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｈｏｏｌ，Ｙｉｎｃｈｕａｎ，Ｎｉｎｇｘｉａ７５０００４）
ＡｂｓｔｒａｃｔＤｏｇｓｈａｖｅｂｅｅｎｔａｋｅｎａｓｍａｔｅｒｉａｌｓｉｎｏｒｄｅｒｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｔｏｍａｋｅｃａｎｉｎｅｓｙｓｔｅｍｉｃｂｏｎｅｓｐｅｃｉｍｅｎｓ．Ｏｎｔｈｅｂａｓｉｓｏｆｔｈｅｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ，ｎｅｗｍｅｔｈｏｄｆｏｒｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｂｏｎｅｓｐｅｃｉｍｅｎｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇｍｏｄｅｒａｔｅｌｙｒｅｍｏｖｉｎｇｍｕｓｃｌｅｓｏｎｂｏｎｅｓｔｈｒｏｕｇｈｃｏｏｋｉｎｇｂｙｈｏｔｗａｔｅｒｉｎｏｒｄｅｒｔｏｋｅｅｐｃｏｎｎｅｃｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｂｏｎｅｓｂｙｆｕｌｌｕｓｅｏｆｔｈｅｌｉｇａｍｅｎｔ，

狗骨骼实验总结报告范文(3篇)

第1篇一、实验背景随着现代医学的发展，动物实验在生物医学研究领域发挥着越来越重要的作用。

骨骼作为人体的重要组成部分，其生长发育、疾病治疗及康复过程都离不开对骨骼结构的深入研究。

为了更好地了解狗骨骼的生理结构和病理变化，我们进行了本次狗骨骼实验。

二、实验目的1. 了解狗骨骼的解剖结构；2. 探讨狗骨骼的生理和病理变化；3. 为临床治疗提供理论依据。

三、实验材料与方法1. 实验材料：成年狗骨骼、解剖工具、显微镜、切片机等。

2. 实验方法：（1）解剖狗骨骼，观察其整体结构；（2）利用显微镜观察骨骼切片，分析骨骼组织的微观结构；（3）观察狗骨骼在不同病理条件下的变化。

四、实验结果与分析1. 解剖观察：（1）狗骨骼由颅骨、脊柱、骨盆、四肢骨骼组成；（2）骨骼表面有丰富的肌肉、血管和神经分布；（3）骨骼内部有骨髓腔和骨松质。

2. 显微镜观察：（1）骨皮质由外层的骨外膜、中间的骨密质和内层的骨内膜组成；（2）骨松质由骨小梁和骨髓组成，骨小梁呈网状排列；（3）骨细胞分布在骨小梁上，负责骨的生长和修复。

3. 病理观察：（1）在炎症条件下，骨细胞受损，骨小梁排列紊乱；（2）在骨折条件下，骨小梁断裂，骨髓腔内出现血肿；（3）在肿瘤条件下，骨小梁破坏，骨髓腔内出现肿瘤细胞。

五、实验结论1. 成年狗骨骼由颅骨、脊柱、骨盆、四肢骨骼组成，具有丰富的肌肉、血管和神经分布；2. 狗骨骼的生理结构与其功能密切相关，骨细胞负责骨的生长和修复；3. 在炎症、骨折和肿瘤等病理条件下，狗骨骼的结构和功能发生改变，为临床治疗提供了理论依据。

六、实验总结本次狗骨骼实验，我们通过解剖观察、显微镜观察和病理观察，对狗骨骼的生理结构和病理变化有了更深入的了解。

实验过程中，我们严格按照实验步骤进行操作，确保实验结果的准确性。

本次实验为今后进一步研究骨骼疾病的治疗提供了有益的参考。

第2篇实验名称：狗骨骼形态与结构研究实验目的：通过对狗骨骼的形态和结构进行观察和分析，了解哺乳动物骨骼的基本特征，为生物医学研究提供参考。

骨骼肌卫星细胞体外培养及鉴定方法进展

几天后卫星细胞开始从肌纤维上爬出，当数量足够多时再将肌纤维去除，用胰蛋白酶消化后将肌卫星细胞进行传代。１．２．４纯化：当卫星细胞释放下来之后，纯化也是一个关键性的问题，即如何去除肌纤维碎片和非肌源性细胞，这里的非肌源性细胞大多是成纤维细胞。用适当的离心力可以将部分细
骨骼肌卫星细胞是骨骼肌中具有增殖分化潜能的干细胞，耗材少，成本低，培养的细胞较易存活，但是此方法不可避免的混有成纤维细胞样细胞、红细胞、骨骼肌细胞和血管平滑肌细
它是在１９６１年由Ｍｕａｏｒ首次从青蛙骨骼肌纤维中分离出来的。肌组织作为人体的最大组织，同其他组织相比具有来源丰富，取材方便的优势。大量研究证实卫星细胞对骨骼肌受创伤后肌纤维的再生和修复起着重要作用，并且在治疗心血管疾病中有广阔的临床前景。但是骨骼肌细胞中卫星细胞所占的比例较少，为１％一５％，因此在体外如何获得足够数量，并将高
足量的卫星细胞提供了保障。
１．２分离方法包括骨骼肌卫星细胞的释放和纯化。卫星细
胞位于肌纤维和基底膜之间，细胞连接紧密，可抵抗一般消化酶的作用。在实验中以前常规的方法是先用一定浓度的Ｉ、 Ⅱ、 Ⅳ型胶原酶消化，然后再用一定浓度的胰蛋白酶或链蛋白酶消化，称为逐步消化法，如今常用的方法如下。１．２．１肌束分离法或称为联合酶消化法：无菌条件下取肌肉
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小鼠骨骼肌卫星细胞分离与纯化的改良

小鼠骨骼肌卫星细胞分离与纯化的改良作者：李小雷葛新玲来源：《中国保健营养·中旬刊》2013年第03期【摘要】目的：建立一种快速高效的小鼠骨骼肌卫星细胞的提取、纯化的实验方法，为进一步研究肌损伤与修复再生机制建立离体损伤模型奠定基础。

方法：两步酶消化法结合差速贴壁技术并对其改良，分离出骨骼肌卫星细胞，并进行免疫组化鉴定。

结果：改良后提取、纯化所得到的肌卫星细胞纯度可达到90%，明显高于普通方法。

结论：本实验通过改良骨骼肌卫星细胞培养方法，使肌卫星细胞纯度明显增高。

【关键词】肌卫星细胞；分离；纯化Mauro等[1]1961年首次在蛙骨骼肌中发现，肌卫星细胞是一种源于胚胎中胚层的干细胞。

在发育成熟的个体，呈小单核梭形分布于肌纤维浆膜和基底膜之间，在正常情况下处于静息状态。

当肌肉受到损伤等刺激时，则可进入有丝分裂循环，形成肌肉修复所需的细胞[2～4]。

新生细胞可以相互融合形成新肌束，或融入已有肌束，以修复肌组织损伤。

正是由于卫星细胞的这些特性，使其成为肌肉组织工程、基因工程和胚胎发育研究的新热点[5～6]。

但肌卫星细胞的分离与纯化也成了亟待解决的问题，普通方法分离时含有大量的杂质细胞，本实验旨在提高肌卫星细胞的纯度。

1 材料与方法1.1 材料4～6周龄清洁级C57 BL/6小鼠（15～17 bg），雄性，由中国科学院上海实验动物中心提供。

DF培养基、胎牛血清（FBS）、胰蛋白酶（Trypsin）均购自美国Gibico BRL公司。

小牛血清（FCS）购自Hyclone公司。

1.2 方法1.2.1 准备取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒30 min。

开始操作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

5～7日龄C57BL/10小鼠2只，DMEM/F12培养基，10% FCS+5% FBS，PBS缓冲液，0.25%胰蛋白酶，0.1%Ⅰ型胶原酶。

1.2.2 处理组织将小鼠断颈处理，碘伏浸泡后，75%酒精浸泡消毒5 min，用消毒剪刀剪开下肢皮肤，剪断后肢，分离出股四头肌，将其置于培养皿中，PBS缓冲液漂洗2～3次，去除血污（如怀疑组织有污染，可先置于含有青链霉素的混合液中30～60 min）去除筋膜、神经、脂肪和肌腱等，将股四头肌置于青霉素小瓶中用剪刀反复剪碎约1 mm组织3块。

细胞的纯化方法介绍(自然纯化和人工纯化)

细胞的纯化方法介绍（自然纯化和人工纯化）体外培养的细胞源于人或动物或胚胎组织，体内的细胞都是混杂生长，每一种组织都有血管和间叶组织，因此，来源于上述组织的培养材料的原代细胞、传代细胞绝大多数都呈混合生长，既有上皮样细胞又有纤维样细胞，纤维样细胞又包括成纤维细胞、肌细胞、骨细胞、滑膜细胞等，混杂的细胞会直接影响实验结果，而利用体外培养细胞进行实验研究时，为了保证实验结果的可靠性、一致性、稳定性、和可重复性，要求采用单一种类细胞来进行实验，这样才能对某一细胞的功能、形态等变化进行一系列研究，因而培养细胞的纯化就成为实验研究的重要一步，甚至需要从混杂的细胞群中分离出单个细胞来进行培养和开展实验研究。

细胞的纯化：细胞的纯化一般分为两种，即自然纯化和人工纯化。

可根据不同细胞种类、来源、实验要求和目的选择采用。

一、自然纯化：自然纯化是利用某一种类细胞的增殖优势，在长期传代过程中靠自然淘汰法，不断排挤其他生长慢的细胞，靠自然增殖的潜力，最后留下生长优势旺盛的细胞，达到细胞纯化的目的。

但这种方法常无法按照需要和实验要求及研究目的来选择细胞。

此法花费时间长，留下的往往是成纤维细胞。

仅有那些恶变的肿瘤细胞或突变的细胞可以通过此方法而保留下来的，不断纯化而建立细胞系。

二、人工纯化：人工纯化是利用人为手段造成对某一细胞生长有利的环境条件，抑制其他细胞的生长从而达到纯化细胞的目的。

主要有以下5种方法。

1、细胞因子依赖纯化法：是通过加入某些特殊的细胞因子而纯化出只依赖于这种细胞因子生长的细胞系。

人和动物组织中某些细胞需要有特殊的细胞因子存在的环境才能长期存活和生长繁殖，如白细胞介素-2（IL-2）SHI 他细胞生长所必须的细胞因子，B细胞生长因子是B细胞的生长因子，体外培养中淋巴细胞若加入IL-2就可使T细胞生长繁殖，形成IL-2依赖的T细胞，如CTLL-2细胞系，而其他细胞则自然被淘汰，采用此法还建立了IL-6依赖的细胞系，如B9、CTD7细胞系。

骨骼肌卫星细胞的分离、培养及鉴定

骨骼肌卫星细胞的分离、培养及鉴定徐清斌;马萍;贾绍斌;刘晓方;沙勇;戴贵东【期刊名称】《宁夏医学杂志》【年(卷),期】2005(27)11【摘要】目的探讨骨骼肌卫星细胞的分离、培养及鉴定方法.方法从外科手术中获取患者骨骼肌3-5g,采用胶原酶和透明质酸酶消化的方法获取骨骼肌卫星细胞,进行体外培养、扩增,并观察所培养细胞的形态;降低培养液中胎牛血清浓度,观察肌管形成;免疫组化方法检测Desmin的表达;RT-PCR法检测肝细胞生长因子受体c-met 的表达.结果卫星细胞在体外生长、增殖良好,刚分离出的卫星细胞呈球形,折光性强,12小时后开始贴壁,仍为圆形,48小时后贴壁完全,细胞呈梭形,生长缓慢.随时间延长,细胞增殖、迁移,逐渐有规律地平行排列.降低细胞培养液中胎牛血清浓度至2%,卫星细胞可融合成肌管,免疫组化显示培养的细胞Desmin阳性,这些细胞表达c-met.结论酶消化法适用于卫星细胞的培养.【总页数】2页(P737-738)【作者】徐清斌;马萍;贾绍斌;刘晓方;沙勇;戴贵东【作者单位】宁夏医学院附属医院,宁夏,银川,750004;宁夏医学院附属医院,宁夏,银川,750004;宁夏医学院附属医院,宁夏,银川,750004;宁夏医学院附属医院,宁夏,银川,750004;宁夏医学院附属医院,宁夏,银川,750004;宁夏医学院,宁夏,银川,750004【正文语种】中文【中图分类】Q434.6【相关文献】1.小鼠骨骼肌卫星细胞的分离培养和鉴定 [J], 代阳;王轶敏;刘新峰;樊晗璐;李吉霞;郭宏;丁向彬2.鸭骨骼肌卫星细胞的分离培养与鉴定 [J], 单艳菊;束婧婷;宋迟;胡艳;朱春红;李慧芳3.多浪绵羊骨骼肌卫星细胞的分离培养、鉴定及成肌诱导分化 [J], 赵谦;张萍;李向臣;关伟军;浦亚斌;赵倩君;马月辉4.猪骨骼肌卫星细胞分离培养、鉴定及其生物学特性 [J], 秦本源; 高鹏飞; 郭晓红; 李步高; 曹果清; 杨阳; 张燕伟; 刘敏; 张万锋; 王海珍; 吴怡琦; 张雪莲; 蔡春波5.绵羊骨骼肌卫星细胞分离培养、鉴定与成肌诱导分化 [J], 李欣;赵中利;于永生;张立春;马惠海;罗晓彤;魏天;肖成;张琪;曹阳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。