冰冻切片HE染色步骤

冰冻切片苏木素伊红染色步骤

1.组织包埋，OCT

1.用铝箔纸盖子造个模出来

2.在里面放入一些OCT

3.将96孔板垫在液氮上，再将放入OCT的模子放在96孔板上，防止铝箔纸模接触液氮

4.待OCT凝固后，取出，将修剪好的组织放在凝固的OCT上，然后再用OCT将组织包埋起来，不要包埋太多

5.继续放回液氮，待OCT全部凝固后，放入-80°冰箱保存

6.需要切片时，取出，放入冰冻切片机中，使之恢复一段时间，大约30min-60min

2.冰冻机上切片

3.固定：1.将切好的片子自然晾干；

2.固定液A 30s—60s

3.水冲洗30s

4.固定液B 60s

固定液A配置方法：80%中性福尔马林+19%--95%乙醇+1%冰醋酸

固定液B配置方法：75%无水乙醇+25%冰醋酸

中性福尔马林：90%PBS+10%--40%甲醛

4.取出已经切好及固定好的冰冻切片（存放方法：短期放入

泡沫盒中，放少许水，制作成湿盒保存切片；长期放入-20度冰箱保存，防止组织变形）

5.苏木素染色10min（成熟苏木素制作方法，加入碘酸钠：

0.2g碘酸钠/L苏木素）

6.水冲洗

7.1%盐酸乙醇5s（方法：放进去，取出来，重复五次，使

得细胞核与细胞质分化）1%hcl+99%无水乙醇

8.放入水中10min

9.放入伊红5min

10.然后80%，95%，100%乙醇依次洗过,每个2s，将伊红洗

净

11.放入二甲苯1-2s

12.第一滴中性树脂在组织上，轻轻放上盖玻片，防止气泡

13.吹干，读片。