封闭抗体教程文件
人封闭抗体BA试剂盒使用方法
人封闭抗体（BA）试剂盒使用方法检测范围：96T4ng/L - 120ng/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中封闭抗体（BA）)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中封闭抗体（BA）水平。
用纯化的人封闭抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入封闭抗体（BA），再与HRP标记的人封闭抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的封闭抗体（BA）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人封闭抗体（BA）浓度。
试剂盒组成1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
封闭抗体科普知识PPT
适用人群
家系调查
遗传因素
核型分析 超 声
反 复 流 产 患 者
解剖因素 内分泌因 素 感染因素 血栓形成 倾向
宫腹腔镜 黄体功能
甲状腺
TORCH 支原体 血小板功 能 D-二Байду номын сангаас体
封 闭 抗 体
什么情况下需要治疗及治疗方法
封闭抗体”阴性”
自身免疫 性疾病 APS SLE
主动免疫治疗
什么是主动免疫治疗
封闭抗体科普知识
什么是封闭抗体
一种抗配偶淋巴细胞的特异性IgG抗体，存在于正常孕妇的
血清中
能够抑制淋巴细胞反应，封闭母体淋巴细胞对胚胎滋养层 的细胞毒作用
防止辅助T细胞识别胎儿抗原的抑制物，并可阻止母亲免疫
系统对胚胎的攻击 封闭同种抗原刺激的淋巴细胞产生巨噬细胞移动抑制因子， 故称其为封闭抗体
主动免疫治疗的注意事项
5. 注射部位:请勿挠、抓注射部位，保持注射部位的相对无菌及干燥
6.治疗时间：1次/2周~4周，4次/1疗程治疗；避开女方月经期，如有
任何一方发热或患病，均不宜进行治疗 7.治疗期间不建议服用中药及中成药
8. 一个疗程结束后（一周内），及时复查封闭抗体
谢 谢
采用丈夫或第三方淋巴细胞对患者进行皮下 注射，主动诱导封闭抗体产生的治疗方法
主动免疫治疗流程
主动免疫治疗的注意事项
1. 抽血时需患者与医务工作人员核对离心管上女方姓名 2.经离心提取男方或供者血中淋巴细胞约0.5~1ml，行女方前臂内侧皮内注 射，第一次治疗的患者留下观察30分钟，如无过敏反应方可离院。 3.为了避免增加分离细胞的死细胞数量，请当日治疗的患者务必在工作人员 通知需要接种的时间到达医院 4.治疗时的不良反应：局部不良反应：局部发红、炎性反应、色素沉着等； 全身不良反应：低热、 过敏反应等
(医学课件)封闭抗体
自身免疫性疾病与不孕不育
某些自身免疫性疾病会影响女性的生殖功能，导致不 孕不育。如系统性红斑狼疮患者可能会出现卵巢功能 减退、排卵障碍等问题，影响受孕。
封闭抗体异常与其他疾病的关系
封闭抗体与内分泌疾病
封闭抗体异常与某些内分泌疾病有关，如甲 状腺功能亢进、多囊卵巢综合症等。这些疾 病会影响女性的生殖功能，导致不孕不育。
封闭抗体与免疫耐受
维持免疫耐受
封闭抗体可以维持母体对胎儿的免疫耐 受，防止母体免疫系统对胎儿的排斥， 保证妊娠过程的正常进行。
VS
诱导免疫耐受
封闭抗体还可以诱导母体免疫细胞对胎儿 抗原的耐受，防止母体免疫系统对胎儿的 攻击，维持妊娠过程的稳定。
03
封闭抗体的检测与评估
封闭抗体的检测方法
01 02
探讨不同个体间封闭抗体的差异性及其原因。
未来研究的方向与挑战
发展更敏感、高效的检测方法
01
提高封闭抗体的检测灵敏度和特异性。
深入理解封闭抗体的作用机制
02
进一步揭示封闭抗体在免疫应答中的作用机制。
寻找封闭抗体的应用价值
03
探讨封闭抗体在疾病治疗、预防和个体化医学中的应用价值。
THANKS
感谢观看
封闭抗体与感染性疾病
某些感染性疾病会影响封闭抗体的产生，如 病毒感染等。病毒感染会导致免疫系统异常 ，从而影响封闭抗体的产生。
05
封闭抗体的治疗策略
免疫治疗概述
要点一
免疫治疗定义
免疫治疗是一种通过调节人体免疫系统功能，以治疗 疾病的方法。封闭抗体免疫治疗是针对反复自然流产 患者的一种免疫治疗方法。
封闭抗体
2023-11-11
contents
封闭抗体
免疫治疗
• 治疗方法 1、配制淋巴细胞浓缩液（T细胞，B细胞），4管，每管 0.25 ml 2、淋巴细胞计数为：5×10 6/ml 3、双侧前臂：皮内（ID），肌肉（IM），皮下（SC）和 静脉（IV）多点注射（注射4针）. 4、每4周一次，最多注射6次至MLR-Bf 滴度＞30 5、封闭抗体上升，或微细胞毒交叉试验阳性即可受孕， 怀孕12, 24 和 36周评估封闭抗体含量。 6、妊娠成功率达75%—85%。
2：抗HLA-D/DR抗体 3：抗Fc受体抗体 4：流式检测文献
1：抗丈夫淋巴细胞抗体（APLA）
2：抗HLA-D/DR抗体
3：抗Fc受体抗体
4：流式检测文献
封闭抗体检测方法学比较文献
1：CDC法与ELISA法检测比较
2：流式检测与ELISA法检测比较
3: 流式不同厂家间抗体检测比较
封闭抗体与免疫治疗的 临床应用
问题思考： 1：我们现有两种检测封闭抗体的方法 （流式，ELISA），哪种检测更为准确？ 2：有些孕妇孕检过程中检测封闭抗体， 意义何在？
目录
1：封闭抗体简介
2：封闭抗体检测类别文献 3：封闭抗体检测方法学文献
3：淋巴细胞免疫治疗
反复性自然流产的定义
流产 妊娠不足28周，胎儿体重不足1000g而终止者 称为流产。
免疫因素—免疫类型
• 一、自身免疫型 • 二、同种免疫型 主要是封闭抗体 1、抗心磷酯抗体（APL）（占1/3） 2、抗核抗体（ANA） 3、抗精子抗体（ASA） 4、抗子宫内膜抗体（AEA）
5、抗卵巢抗体（AOA）
6、抗滋养细胞抗体（ATA） 7、 RH血型抗体
免疫因素—免疫状态
封闭抗体
封闭抗体的概念
一： CDC法与ELISA法检测比较
封闭抗体教程文件
如何确诊复发性流产的病因
❖ 复发性流产的诊断实际上为排除性诊断，因 此，至少要对复发性流产的两大病因进行系 统筛查。
非免疫因素检查：
什么是封闭抗体
❖ 在正常孕妇的血清中，存在一种抗配偶淋巴细胞的特异性IgG抗体 (Antipaternal lymphocyte antibody, APLA)，它可抑制淋巴细胞反应 （MLR），封闭母体淋巴细胞对培养的滋养层的细胞毒作用，防止辅 助T细胞识别胎儿抗原的抑制物，并可阻止母亲免疫系统对胚胎的攻 击。封闭同种抗原刺激的淋巴细胞产生巨噬细胞移动抑制因子 （MIF），故称其为封闭抗体（blocking antibodies,BA）。
疫型和免疫型。
免疫类复发性流产
1. 自身免疫型：患者体内出现各种自身抗体，如抗心磷脂抗体（ACA） 、抗核抗体（ANA）、抗甲状腺抗体（ATA）等。
2. 同种免疫型：由于夫妇之间主要组织相容复合物（MHC），在人类又 称白细胞抗原（HLA）的相容性过大所致，患者与正常生育妇女的免 疫状态不同，表现在体液免疫的异常及血清中缺乏封闭抗体等方面。
❖ 转阳性3个月后未妊娠，可每2～3个月巩固治疗一次，或重新治疗1个疗 程。
❖ 如果复查结果封闭抗体仍为阴性，重复免疫治疗一个疗程，直至封闭抗 体转阳；如果三个疗程仍未能转阳，则需要另觅治疗方法。
❖ 部分患者可能在未完成一个疗程的时候已经怀上，那仍然需要至少完成 一个疗程的治疗。
主动免疫治疗效果预测和评价指标
CDC方法
原理：HLA抗体与 淋巴细胞表面的相 应抗原结合后激活 补体，导致细胞膜 损伤，通透性增强， 染料进入细胞，细 胞死亡。在倒置相 差显微镜下观察， 着色的细胞为死亡 细胞，视野下有较 多细胞死亡为阳性 。
封闭抗体阴性 淋巴细胞提取流程
封闭抗体阴性淋巴细胞提取流程1.在实验室的无菌条件下，取出外周血样本。
In a sterile laboratory environment, take a peripheral blood sample.2.将外周血样本放入离心管中，轻轻旋转离心管混合均匀。
Place the peripheral blood sample in a centrifuge tube and gently mix by rotating the tube.3.将混合后的外周血样本放入离心机中，以3000 rpm离心10分钟。
Centrifuge the mixed peripheral blood sample at 3000 rpm for 10 minutes.4.取出上清液，放入新的离心管中。
Remove the supernatant and place it in a new centrifuge tube.5.向上清液中滴加等体积的PBS缓冲液，轻轻旋转混合。
Add an equal volume of PBS buffer to the supernatant and gently mix by rotating.6.将混合后的上清液＋PBS溶液放入离心机中，以3000 rpm离心10分钟。
Centrifuge the mixed supernatant + PBS solution at 3000 rpm for 10 minutes.7.取出上清液，弃渣，得到淋巴细胞。
Remove the supernatant, discard the sediment, and obtain lymphocytes.8.将淋巴细胞放入新的离心管中，加入PBS缓冲液洗涤。
Place the lymphocytes in a new centrifuge tube, and wash with PBS buffer.9.重复以上洗涤步骤2-3次，以去除残留的血液成分。
流式培训B封闭抗体培训课件
17
1/26/2021
• RSA
自身免疫型：与自身免疫病相关的自身抗体相关，如SLE、RA等 同种免疫型：封闭抗体，如：抗HLA抗体、抗滋养细胞淋巴细胞
交叉反应抗原抗体（TLX）;非特异性BA、特异性非细胞毒抗体、抗 独特型抗体等
主动免疫疗法所产生的BA部分是针对TLX的，因此，当夫妻双方 TLX相似时，不能激发母体产生BA
一、HLA简介
人 类 白 细 胞 抗 原 系 统 （ Human Leucocyte Antigen,HLA），俗称为白细胞血型，是人类的 组织相容性抗原，HLA抗原受控于HLA基因。
HLA基因是由一组高度多态性基因组成的染色体 区域，因其产物代表移植供者与受者相互接受的 程度，故又称其产物为移植抗原或组织相容性抗 原。
II 类基因区：位于着丝点的近端，主要由DR、DQ、 DP三个亚区构成，每个亚区又分若干个位点。在 B细胞和上表达，这两类抗原都与移植有关
III 类基因区： 含有编码补体成分C2、C4、B因 子及TNF、热休克蛋白和21羟化酶的基因，其产物 是一些可溶性蛋白质。
流式培训B封闭抗体
7
1/26/2021
一、HLA-B27
• HLA-B27抗原属于HLA-Ⅰ类抗原，由α和β两条肽链组成 。
• 第6号染色体的HLA-Ⅰ类基因编码α链，15号染色体编码 β链。
• 基本上表达在机体所有有核细胞上，尤其是淋巴细胞表面 含量丰富。
• 目前，在HLA与疾病的关联研究中，较有临床应用价值的 当数HLA-B27与强直性脊柱炎的关联。在诊断和鉴别强直 性脊柱炎中有重要的应用价值。
主要内容
一、流式细胞仪简介 二、人类白细胞抗原（HLA-B27）中的临床
应用
封闭抗体和淋巴细胞亚群样本制备方法
封闭抗体样本制备方法
1.取两支试管，为对照管和测定管；
2.对照管：加入患者配偶（男性）混匀抗凝全血50μl +丈夫血清50μl+CD3/CD 4/CD 8/CD45 单克隆抗体20μl，室温避光孵育20min；
3.测定管：丈夫抗凝全血100μ+患者血清50μl+CD3/CD 4/CD 8/CD45 单克隆抗体20μl，室温避光孵育20min；
4. 每管加入红细胞溶解液0.5ml，充分混匀，室温避光孵育10min；
5.流式分析对照管和测定管CD +3/CD +4 /CD +8 细胞比例；
6.计算公式
封闭效率（%）= 对照管- 测定管CD比例
7.结果判断
①三项中只要有一项出现负值，提示封闭抗体缺乏。
②封闭抗体阳性：三项全部正值，提示正常。
淋巴细胞亚群样本制备方法
1.取两支试管，分别标记为A管和B管；
2.A管加入BD Multitest CD3/CD 4/CD 8/CD45 单克隆抗体20μl到试
管底部；
3.B管加入BD Multitest CD3/CD16+CD56/CD45/CD19 单克隆抗体20
μl到试管底部；
4.分别加入50μl混匀抗凝全血到A、B两管底部，避免让血液污染
管壁；
5.轻轻混匀，室温避光孵育15min；
6.分别加入450μl的1×BD Multitest溶血素，充分混匀，室温避光
孵育15min；
7.涡旋混匀器充分混匀，上机分析。
流式培训封闭抗体
二、 HLA-B27检测方法
1.HLA-B27抗原检测 •CDC: 微量淋巴细胞毒法 •FCM :流式细胞学法 2.HLA-B27基因学检测 •荧光定量PCR
• （一）微量淋巴细胞毒法
1. 原理：待检的淋巴细胞表面的HLA-B27抗原与已知的 HLA-B27抗体结合，在补体的参入下，导致细胞膜溶解 ，能透过染料使细胞着色，在显微镜下判断HLA-B27为 阳性，不着色为阴性。
主要内容
一、流式细胞仪简介 二、人类白细胞抗原（HLA-B27）中的临床
应用
三、封闭抗体检测在临床中的应用
流式细胞术
流动
细胞
测量术
Flow Cytometry (FCM)
Fluorescence-activated cell-sorting (FACS)
流式细胞术
流式细胞术
特特 点点 ：
快速检测流动的单细胞或颗粒，达上万个/每秒
（三）荧光定量PCR
1.实验原理：在PCR反应体系中，加入荧光染料， 特异地掺入DNA双链后发射荧光信号，而不掺入荧 光染料的DNA分子不会发射任何荧光信号，通过检 测荧光信号的强度，达到检测PCR产物扩增的目的 。
2.优点：基因水平的检测，直接对HLA-B27原基因进 行扩增分型，灵敏度高，特异性强。 缺点：需要特定的实验仪器及严格的实验条件和 熟练操作技术，在临床上普遍开展此项检查有一 定的难处。
6.一级亲属HLA-B27出现率25%-100%，预测患者家属成员 发生AS的可能性。治疗性选择胎儿。
7.AS与HLA-B27高度相关，表明AS是一种遗传易感性疾病 。
二、流式在封闭抗体中的应用 概念
怎样做
封闭抗体检测
如何解读
基本概念
封抗操作规程
人外周血淋巴细胞分离操作规程原理：采用密度梯度离心法提取人外周血淋巴细胞用于培养或治疗材料：淋巴细胞分离液、RPMI1640（无血清）/PBS/Hank’s液、RPMI1640完全培养液、刻度离心管、吸管、血球计数板、水平转头离心机等。
步骤：1.将采到的肝素抗凝血取样计数白细胞总数。
2.使用Hank’s液/PBS液/无血清RPMI1640将血样1：1稀释，混匀时要沿管壁吹出，避免产生气泡。
吹匀后于37℃水浴中平衡。
3.从冰箱中取出4℃避光保存的淋巴细胞分离液。
摇匀后在无菌状态下加入刻度离心管中。
操作中尽量避免吸管碰触管壁。
原则上分离液的高度不超过管高的1/4。
4.将盛有分离液的离心管放入37℃水浴中平衡。
5.用吸管将稀释的血液沿离心管壁徐徐加到分离液面上，用力要轻，避免血液冲入分离液中，使得稀释血重叠在分离液面以上，拧紧管盖。
稀释血与分离液的高度比在1：2-2：1之间。
原则上两者的总高度不超过离心管的2/3。
6.将离心管放置于水平离心机中，室温下 2000rpm离心20min。
离心过程中要观察离心速度是否正确，且在停止时选择“no break”，避免因为急剧减速将已经分离的单个核细胞层重新弄混。
注意离心结束时的减速过程，不要太快。
7.离心结束后可见管内分为四层，从上至下分别为：血浆层（含部分血小板）、白膜层（含单个核细胞及少量血小板）、分离液层、粒细胞及红细胞层。
将吸管轻轻穿过血浆层至白膜层，沿离心管周缘吸出血浆层与分离液层界面间的白膜层细胞，置于新离心管中。
尽量少吸取分离液。
8.加吸出体积5倍以上的Hank’s/PBS/无血清RPMI1640液体，用吸管吹打均匀，避免产生气泡，液拄高度不要超过离心管的2/3。
室温1500rpm离心10min，快速倾倒出上清液。
9.用Hank’s/PBS/无血清RPMI1640重悬细胞，注意吹打均匀，不要有细胞团块。
室温下1500rpm离心5min，洗涤两次。
最后一次洗涤时定量加入RPMI1640，吹打均匀后取样计数细胞。
封闭抗体治疗方案及流程
封闭抗体治疗方案及流程LIT治疗：是抽丈夫（或第三个体）血，提取细胞，给女方皮下或皮内注射的一个过程。
注意事项如下：一、治疗前准备化验丈夫（或第三个体）血：乙肝、丙肝、梅毒、HIV（半年内有效，治疗当日出示供血者验单）。
二、抽血前注意事项1. 供血者抽血前3天忌发热、感冒等病理状态。
2. 供血者请抽血前空腹（下午治疗者11点后空腹）。
三、打针后注意事项1. 24小时内针眼少接触水；一周内饮食忌辛辣、少海鲜等易致过敏食物。
2. 打针后针眼处出现红肿、痒、硬结等局部反应为正常反应，若很痒可热/冷敷，忌抓挠；若出现全身发热超过38℃，或过敏，当地医院就诊。
四、抽血间隔及效果1. 每次治疗均需供血者前来抽血。
每2-3周治疗1次，4次为1疗程。
1疗程结束后再过2周复查封闭抗体，结果拿到后复诊医生，按照医生要求，进行封闭抗体巩固治疗。
转阳后，如果医生无特殊要求，孕前每2-3个月巩固治疗1次；孕后每个月治疗1次，至少3次。
2. LIT治疗成功即封闭抗体转阳性（＋）或弱阳（），1疗程转阳率为90%，2疗程转阳率95%。
治疗流程（周一至五）挂号（封闭抗体治疗号）缴费（抗丈夫淋巴细胞免疫治疗）↓凭当天的挂号纸和缴费单排队、登记(上午有55个号，下午有20个号)↓医生按登记顺序叫名抽血（抽血时间：上午的号：8-10点；下午的号：14:30~15:30）↓抽血后等2小时左右（期间双方可以吃东西）↓按登记顺序叫名打针（上午的号：11点左右开始，12点结束；下午的号：4点半左右开始，17点结束）治疗流程（周六上午）由于消毒耗材有限，周六上午只接待提前预约过的患者朋友。
预约方法如下（仅限电话预约）：1. 预约电话：813328302. 预约时间：周一下午5点~5点20分（如周一休息，推至周二预约），只接受当周周六LIT 治疗的预约，约满后该电话无人接听。
3. 抽血时间：上午8点10分~9点（过时不候）4. 打针时间：上午11点~11点30分。
人封闭抗体(BA)酶联免疫分析(ELISA) 试剂盒使用说明书.
人封闭抗体（BA）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中封闭抗体（BA）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人封闭抗体（BA）水平。
用纯化的人封闭抗体包被微孔板，制成固相抗原，往包被抗原的微孔中依次加入封闭抗体（BA），再与HRP标记的封闭抗体结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB 在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的封闭抗体（BA）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人封闭抗体（BA）浓度。
试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：135ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存20倍浓缩洗涤液20ml×1瓶23ml×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
封闭抗体阴性治疗方案
一、引言封闭抗体（blocking antibody）是指能够封闭胎儿同种异型抗原，从而防止母体对胎儿产生免疫反应的抗体。
封闭抗体阴性是指孕妇体内缺乏封闭抗体，导致胎儿宫内感染、流产、早产等不良妊娠结局的风险增加。
针对封闭抗体阴性患者，临床治疗主要包括药物治疗、免疫调节治疗和辅助生殖技术等。
本文将详细介绍封闭抗体阴性的治疗方案。
二、药物治疗1. 免疫球蛋白免疫球蛋白是一种含有多种抗体的蛋白质，具有调节免疫功能和增强机体免疫力的作用。
对于封闭抗体阴性的孕妇，免疫球蛋白可以作为一种有效的治疗方法。
具体用法如下：（1）剂量：一般推荐剂量为400mg/周，持续使用3-6个月。
（2）注意事项：使用免疫球蛋白期间，应注意观察孕妇的过敏反应，如出现过敏反应，应立即停药并给予抗过敏治疗。
2. 免疫抑制剂免疫抑制剂可以抑制孕妇的免疫反应，降低胎儿宫内感染、流产、早产等风险。
常用的免疫抑制剂包括：（1）环孢素：剂量为2.5-5mg/kg/天，分两次口服，持续使用3-6个月。
（2）甲氨蝶呤：剂量为7.5-25mg/周，肌内注射或口服，持续使用3-6个月。
3. 中药治疗中药具有调节免疫、改善微循环等作用，对于封闭抗体阴性的孕妇具有一定的治疗作用。
常用的中药方剂有：（1）补肾固冲汤：适用于肾虚型封闭抗体阴性患者，主要成分有枸杞子、菟丝子、当归等。
（2）益气养血汤：适用于气血两虚型封闭抗体阴性患者，主要成分有党参、黄芪、当归、白芍等。
三、免疫调节治疗1. 针灸治疗针灸可以调节孕妇的免疫功能，改善微循环，降低胎儿宫内感染、流产、早产等风险。
常用的穴位有：（1）关元穴：位于下腹部，具有温经散寒、调和气血的作用。
（2）足三里穴：位于小腿前外侧，具有健脾益气、调和气血的作用。
2. 超声治疗超声治疗可以通过改善局部血液循环，增强机体免疫功能，降低胎儿宫内感染、流产、早产等风险。
治疗频率为每周2次，每次30分钟。
四、辅助生殖技术对于封闭抗体阴性的患者，若药物治疗和免疫调节治疗效果不佳，可以考虑辅助生殖技术。
封闭抗体具体操作
主动免疫治疗流程主动免疫的整个流程并不复杂，对于实验操作人员来讲，就是离心离心再离心，事个过程就是离心等时间的过程，所以敬请各位患者朋友在实验室外等候时不要焦虑，从整个流程下来来看，每个患者一般从采完血到注射完大约需要1.5个小时，请大家一定要进行耐心等待。
（1）免疫原可为丈夫或第三方的淋巴细胞，皮内注射。
供受者双方无血缘关系。
供受者双方均需筛查输血前全套，肝炎系列、HIV、梅毒等均无异常方可进行此项治疗，孕前开始治疗；（2）采集供血者静脉血肝素搞凝静脉血25ml，去掉注射针头，缓慢加入事先准备好的加有10ml生理盐水的无菌培养瓶内，轻轻混匀，将培养瓶放入超净工作台内，室温静置1 5min；（3）用巴斯德管将生理盐水稀释后的35ml肝素化血液分别加入事先准备好的3支各加有4ml淋巴细胞分离液的无菌离心管中，操作时注意将血液沿管壁慢慢加入，使分离液与血液形成整齐的液面；（4）将离心管放入自动平衡离心机内，以2500rpm室温离心2 0min，小心取出离心管，在超净工作台内，将上层血浆吸出，弃掉；（5）小心吸取中间液面上白色雾状的单核细胞，转入2支新的离心管，加入生理盐水，轻轻吹打混匀，以2300 rpm室温离心10min，弃上清，加入适量生理盐水，轻轻吹打混匀，将2支离心管内的细胞并入1支离心管内，以2000rpm室温离心8min，弃上清，加入1.2ml生理盐水，混匀，细胞浓度约为（20-40）×106/ml；（6）将所得的淋巴细胞悬液，于患者前臂分6处作皮内注射，每处200微升（注：由于1ml皮试注射器推注时压力较大，须用手将注射针脱开，造成淋巴细胞液喷出浪费）。
不同实验室疗程次数不同林其德（上海仁济医院妇产科）：每次注射淋巴细胞总数为（20-40）×106/ml，每次疗程免疫次数为2次，疗程间隔3周。
第一疗程结束后，鼓励患者3个月内妊娠，如获妊娠则再进行1疗程。
如3个月后仍未妊娠，则在排除不孕症的情况下重新进行1个疗程。
封闭抗体操作步骤201508
封闭抗体操作步骤201508封闭抗体(BA)一、临床意义1、封闭抗体（BA）是人类白细胞抗原、滋养层及淋巴细胞交叉反应抗原等刺激母体免疫系统，所产生的一类IgG型抗体。
BA可封闭母体淋巴细胞对滋养层的细胞毒作用，阻止母亲免疫系统对胚胎的攻击。
2、若BA产生不足，母体对胎儿产生强烈的排斥现象，发生于孕早期可出现反复自然流产，孕晚期则可出现妊娠高血压疾病、胎儿宫内生长受限、甚至出现胎死宫内等。
二、操作步骤1、鉴定标本是否合格：丈夫抗凝全血（EDTA抗凝）2mL；妻子血清1mL；标本应无凝血无溶血。
2、编管：根据实验号编写管号，以BA+实验号开头，每人编1、2两管（1为对照管，2为测定管）。
eg：BA001-1（对照管）、BA001-2（测定管）….3、加入标准量的抗体试剂至管底，同时加入50ul混匀的丈夫抗凝全血至管底。
避免涂抹在管壁上造成未着色细胞增多的假象。
4、轻柔振荡混匀，避光室温（20-25℃）孵育20分钟。
5、加入250ulBC OptiLyse溶血素溶解红细胞。
振荡后在1管内加50ul正常男性AB型血清，在2管内加50ul女方（妻子）血清。
注：温度较低时溶血10分钟后再加血清。
6、轻柔振荡混匀；避光室温（20-25℃）孵育10分钟。
7、于各管内加入500ul生理盐水(0.9%)。
8、轻柔振荡混匀，避光室温（20-25℃）孵育10分钟后可直接上机检测。
三、计算公式封闭效率（%）= 对照管CD - 测定管CD（CD3+、CD4+、CD8+）比例四、结果判断1、封闭效率（%）三项中只要有一项出现负值，提示封闭抗体缺乏。
2、封闭抗体阳性：封闭效率（%）三项全部正值，提示正常。
封闭抗体如何治疗方案
封闭抗体如何治疗方案封闭抗体治疗方案是一种新型的免疫治疗方法，通过使用特定的抗体来封闭感染或疾病相关的分子，从而减少它们对宿主的损害。
本文将探讨封闭抗体治疗方案的原理、应用范围以及未来的发展前景。
一、封闭抗体的原理封闭抗体的原理基于免疫系统的作用机制。
免疫系统是人体重要的防御机制，通过产生抗体来攻击和消灭入侵的病原体或异常细胞。
封闭抗体的设计灵感源自于这一生物学现象，但其核心思想是“封闭”或“阻断”分子的活性，而非消灭它们。
封闭抗体通常是由单克隆抗体构建而成，其结构和功能具有高度特异性。
通过与靶分子特异性结合，封闭抗体能够阻断其与其他分子的结合，从而调节相关生理过程的正常进行。
这种阻断效应可以用于治疗多种疾病，如恶性肿瘤、自身免疫性疾病等。
二、封闭抗体治疗的应用封闭抗体治疗的应用范围十分广泛。
以下是一些目前已经应用或正在研究中的封闭抗体治疗方案。
1. 抗肿瘤治疗封闭抗体可以通过阻断恶性肿瘤细胞与血供之间的联系，抑制肿瘤细胞的生长和扩散。
例如，一种被称为血管内皮生长因子受体（VEGFR）的抗原在促进肿瘤血管生成中起重要作用。
封闭VEGFR的抗体可以阻断肿瘤细胞对血液供应的依赖，从而有效地抑制肿瘤的生长。
2. 自身免疫性疾病治疗自身免疫性疾病是由机体免疫系统错误地攻击自身组织和细胞而导致的疾病。
封闭抗体治疗可通过阻断异常免疫反应的关键分子，从而减轻疾病症状和进展。
例如，对于类风湿性关节炎患者，通过使用抗肿瘤坏死因子（TNF）的封闭抗体，可以有效减少炎症反应和关节损伤。
3. 心血管疾病治疗封闭抗体还可以用于治疗心血管疾病。
例如，抗炎细胞因子封闭抗体已被用于防治冠心病和心肌梗死。
通过阻断关键炎症因子的活性，可以减轻炎症反应，从而改善患者的心血管功能。
三、封闭抗体治疗方案的前景封闭抗体作为一种新型的免疫治疗方法，在医学领域具有广阔的前景。
封闭抗体的设计和改进在技术上仍然面临一些挑战，但其潜在的应用价值和临床效果已经引起了广泛的关注。
流式培训封闭抗体课件
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பைடு நூலகம்
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（二）流式细胞学法
• 1.原理：利用荧光标记的抗B27的单抗与淋巴细胞表面 B27抗原结合，使细胞带有荧光强度，用流式细胞仪检 测，判断B27抗原阳性或阴性。
• 2.方法学应用评价：优点：无须分离淋巴细胞，操作 简便、快速、标本用量少，自动化程度高，特异性高， 稳定性好，重复性高，结果判断准确，减少了人为因 素的影响，为目前较为理想的方法 。缺点:是仪器昂 贵，目前只在较大医院应用。
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➢ 检测物可以是细胞、细菌或各种微粒，0.5 - 50 mm范围内
➢ 多参数同时分析，FS/SS/FLs (荧光) ➢ 可分析，可分选
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一、HLA简介
人 类 白 细 胞 抗 原 系 统 （ Human Leucocyte Antigen,HLA），俗称为白细胞血型，是人类的 组织相容性抗原，HLA抗原受控于HLA基因。
5.如果症状和体征脊柱关节病变发生的可能性超过50%， 那么，B27阳性显著增加正确诊断的机会。
6.一级亲属HLA-B27出现率25%-100%，预测患者家属成员 发生AS的可能性。治疗性选择胎儿。
7.AS与HLA-B27高度相关，表明AS是一种遗传易感性疾病 。
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(医学课件)封闭抗体
封闭抗体xx年xx月xx日•封闭抗体的定义与作用•封闭抗体的生物学特性•封闭抗体的检测方法•封闭抗体在疾病发生中的作用目•封闭抗体的治疗与临床应用•研究封闭抗体的意义与展望录01封闭抗体的定义与作用封闭抗体是机体在正常妊娠过程中，母体免疫系统针对胎儿抗原产生的一类IgG型抗体。
它能抑制母体免疫系统对胎儿的攻击，从而维持正常妊娠。
封闭抗体的定义封闭抗体的作用阻止免疫细胞对胚胎的杀伤作用阻断母体补体介导的免疫反应减少胚胎组织损伤抑制母体免疫细胞的活性减少母体对胎儿的排斥反应抑制补体活化、阻止炎症反应010203040506封闭抗体的分类针对胎儿男性抗原的封闭抗体正常妊娠过程中，母体可产生多种封闭抗体针对胎儿组织特异性的封闭抗体针对胎儿女性抗原的封闭抗体02封闭抗体的生物学特性1封闭抗体的免疫学特性23封闭抗体是免疫球蛋白的一种，其在免疫应答过程中扮演着重要角色。
免疫球蛋白封闭抗体具有抗原特异性，只能与相应的抗原结合，对其他抗原没有结合能力。
抗原特异性封闭抗体在免疫应答过程中发挥负调节作用，抑制免疫细胞对自身抗原的过度应答。
调节免疫应答抑制炎症反应封闭抗体还能抑制母体免疫系统对胚胎组织的炎症反应，降低胚胎被母体免疫系统攻击的风险。
阻止免疫攻击封闭抗体最重要的功能是阻止免疫系统对胚胎的攻击，从而保证胚胎着床和发育。
调节免疫耐受在某些情况下，封闭抗体可能促进免疫耐受，使母体免疫系统能够接受胚胎抗原的存在。
封闭抗体的生物学功能在妊娠过程中，母体与胎儿之间需要维持一种免疫耐受状态，以保证胎儿的正常发育。
封闭抗体与免疫耐受维持妊娠如果封闭抗体缺乏或不足，可能导致母体免疫系统攻击胚胎，造成免疫失衡，进而导致流产、胎停等不良妊娠结局。
免疫失衡研究发现，适当的封闭抗体可能有助于诱导母体免疫系统对胎儿抗原的耐受，从而促进妊娠的稳定和胎儿的健康发育。
诱导免疫耐受03封闭抗体的检测方法检测孕妇血清中的细胞毒性抗体，观察其对滋养细胞的影响。
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什么是封闭抗体
❖ 在正常孕妇的血清中，存在一种抗配偶淋巴细胞的特异性IgG抗体 (Antipaternal lymphocyte antibody, APLA)，它可抑制淋巴细胞反应 （MLR），封闭母体淋巴细胞对培养的滋养层的细胞毒作用，防止辅 助T细胞识别胎儿抗原的抑制物，并可阻止母亲免疫系统对胚胎的攻 击。封闭同种抗原刺激的淋巴细胞产生巨噬细胞移动抑制因子 （MIF），故称其为封闭抗体（blocking antibodies,BA）。
❖ 免疫性因素造成的流产是复发性流产最重要的原因，过去所谓的不明 原因流产80%与免疫因素有关。免疫型流产中又以封闭抗体（APLA ）缺乏造成的同种免疫型复发性流产发生率最高。
如何确诊复发性流产的病因
❖ 复发性流产的诊断实际上为排除性诊断，因 此，至少要对复发性流产的两大病因进行系 统筛查。
非免疫因素检查：
3. 免疫型不孕：抗精子抗体、抗子宫内膜抗体、抗卵巢抗体、抗HCG抗 体、抗甲状腺抗体、PCT、体外交叉精子宫颈粘液接触试验（SCMCT ）。
4. 母儿血型不合溶血病：夫妻检查ABO血型、Rh血型。
哪些人需要做免疫因素检查
1. 2次或2次以上自然流产； 2. 2次或2次以上试管婴儿（VF-ET）失败； 3. 控制性超排卵周期，卵泡发育不良，＜6个卵泡； 4. 枯萎卵； 5. 内膜生长不良、菲薄、三线征不典型； 6. 原因不明性不孕； 7. 免疫紊乱史，如ANA阳性、风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等； 8. 不明原因胎儿生长受限（FGR）妊娠、羊水过少妊娠史。
封闭抗体缺乏为什么会发生复发性流产
❖ 现代生殖免疫学认为，妊娠是一个极其复杂的生理过程。胚胎所携带的 基因有一半来自母体，另一半来自父体。来自父体的抗原对于母体来说 是外来抗原，母亲体内的免疫系统就会自动去清除它。但是，绝大多数 妇女却能继续正常妊娠至足月，其原因就是因为妊娠以后有免疫耐受机 制的存在，其中封闭抗体的产生起了重要的作用。
疫型和免疫型。
免疫类复发性流产
1. 自身免疫型：患者体内出现各种自身抗体，如抗心磷脂抗体（ACA） 、抗核抗体（ANA）、抗甲状腺抗体（ATA）等。
2. 同种免疫型：由于夫妇之间主要组织相容复合物（MHC），在人类又 称白细胞抗原（HLA）的相容性过大所致，患者与正常生育妇女的免 疫状态不同，表现在体液免疫的异常及血清中缺乏封闭抗体等方面。
哪些人需要做淋巴细胞主动免疫治疗
1. 流产次数达2次或2次以上，封闭抗体检测为阴性； 2. 夫妇双方染色体正常； 3. 妻子无生殖道解剖异常及其他妇科检查正常； 4. 内分泌检查正常，免疫球蛋白和甲状腺功能正常； 5. 无弓形虫、巨细胞病毒等感染； 6. 自身抗体检测阴性； 7. 夫妻双方肝、肾功能正常；
免疫因素检查：
1. 自身免疫型复发性流产： ①抗心磷脂抗体（ACA）：ACA以IgG类最具临床意义，ACA IgM、 IgG检查2次，每次间隔6周。 ②抗核抗体（ANA）、狼疮抗凝因子（LAC）、β2糖蛋白－Ⅰ（ β2GP-Ⅰ）、D-二聚体、凝血4项、补体3、补体4。
2. 同种免疫型复发性流产： ①封闭抗体（APLA）：阴性结果表示女方血清中缺乏此APLA ，易发 生复发性流产。 ②细胞免疫型检查：CD19（B淋巴细胞表面标志）、CD16＋、CD56 ＋（NK细胞表面标志）、CD3、CD4、CD8（T淋巴细胞分群）。
1. 双方染色体检查：所有的RSA患者夫妇双方都要进行外周血染色体 核型检查，排除染色体数量和结构的异常。
2. 生殖道解剖结构检查：B超、输卵管造影、宫腔镜、腹腔镜、磁共振 ；
3. 生殖内分泌检查：性激素6项、子宫内膜活检、甲状腺功能、空腹血 糖、葡萄糖耐量试验（OGTT）、胰岛素拮抗（IR）测定；
封闭抗体缺乏如何治疗
❖ 封闭抗体阴性表示女方体内缺乏封闭抗体，容易发生复发性流产，需要 使用丈夫或第三方血液中的淋巴细胞给患者皮内注射，使之体内产生封 闭抗体，以保护胚胎不被母体当做异物排斥。这种治疗称为淋巴细胞主 动免疫治疗，简称主动免疫治疗(LIT)。
主动免疫疗法的作用机制
1. 诱导封闭抗体产生； 2. 促使Th1/Th2细胞因子平衡向Th2偏移，包括外周血和蜕膜局部； 3. 调节T淋巴细胞亚群比例，包括CD4/CD8比例、αβT/γδT等； 4. 下调NK细胞活性； 5. 纠正共刺激分子CD80、CD86表达异常。
北京爱普益医学检验中心
封闭抗体的检测及意义
郭磊
Байду номын сангаас
复发性流产的定义及分类
❖ 自然流产：是指妊娠过程失败、胚胎死亡和胚胎及附属物排出，排 出物或胚胎及附属物不足1000g，孕周不足28周。
❖ 复发性流产（RSA）：俗称习惯性流产，是指连续发生2次或2次 以上自然流产。
❖ 原发性复发流产：从未有活婴出生的复发性流产。 ❖ 继发性复发流产：曾有正常分娩的复发性流产。 ❖ 复发性流产的分类：根据病因和发病机制，复发性流产可分为非免
❖ 研究认为，孕妇血中的APLA可以表现以下作用： ①APLA中和同种异体 抗原，而不使胎儿受到排斥； ②抗体直接作用于具有免疫能力的细胞如 ：CTL细胞、NK细胞等； ③直接结合到靶细胞的抗原上，从而降低它 们对受体细胞参与的免疫反应的敏感性。
❖ 如果母体缺乏封闭抗体，则导致同种免疫识别保护功能低下，将来自父 体的一半当作异物排斥，就会导致流产。流产次数越多的患者，其体内 封闭抗体缺乏的可能性越大。封闭抗体的产生不足，使得免疫系统容易 对胚胎产生免疫攻击，母体对胎儿产生强烈的排斥现象，妊娠早期可出 现复发性流产，妊娠晚期则可出现妊娠高血压疾病、胎儿宫内生长受限 ，甚至出现胎死宫内，最终导致流产。