薄层展开剂及显色剂
TLC技术原理与经验分享
TLC（硅胶板薄层色谱）被广泛的称为“化学家的眼睛”，当“眼睛”看不清楚的时候，才会借助放大镜或者近视镜（HPLC，GC等等）。
熟练准确快速的使用TLC技术对提高化学工作的效率至关重要新药研发合成部分，在平时工作中，很多时候是靠TLC进行快速检测，如果仅靠紫外灯这种手段，会忽略掉很多有用的信息，导致重复劳动，或者武断放弃一种合成思路。
一下为常用显色原理，均为个人理解整理，进攻参考。
TLC展开剂的显色原理介绍与讨论一、显色原理硫酸乙醇溶液喷洒10%硫酸乙醇溶液而显色，是利用硫酸的碳化效果。
一般用来薄层层析分离的都是有机化合物，展开，溶媒挥发干以后，有机物就留在板上。
浓硫酸理论上可以对任何有机物碳化。
喷洒10%硫酸乙醇溶液，待烘干之后并继续加热，有机物就因为碳化而现实偏黑色。
乙醇挥发很快，留下硫酸使得有机物脱水，看到的颜色可能是褐色、灰色、偏蓝色，所以我前面写了偏黑色，实际可能要淡一点的，有些扩散的样子。
任何有机物都用可以用10%硫酸乙醇溶液。
溴甲酚绿（pKa≤5.0，与pH区别）方法一：溴甲酚绿指示液：取溴甲酚绿0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液2.8ml使溶解，再加水稀释至200ml，即得。
变色范围pH3.6～5.2（黄→蓝）方法二：溴甲酚绿指示液(1 g／L) ：称取0．1 g溴甲酚绿，溶于乙醇(95％)，用乙醇(95％)稀释至100 mL。
The acid dissociation constant (p K a) of this reaction is 4.82,4-二硝基苯肼碘碘为广谱可逆显色试剂，尤其对具有不饱和键，共轭体系（芳烃），含有孤电子对的杂原子官能团（羟基、氨基、巯基等等）有明显效果。
原理解释（仅供参考）为碘吸附作用，放置一段时间解吸附消失。
可以理解为碘的较高极化性，是的带形式正电荷的碘正离子生成，对具有孤电子对、可极化的π电子产生亲电性吸附作用。
茚三酮对α-氨基酸的显色机理：对氨基（伯胺和仲胺）的显色机理：三氯化铁络合物为紫色化合物高锰酸钾：含还原性基团化合物，比如羟基，氨基，醛。
展开剂与显色剂的选择
展开剂的选择：一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：石油迷<己烷<苯<乙醚<THF<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇使用单一溶剂，往往不能达到很好的分离效果，往往使用混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂，高极性的溶剂还有增加区分度的作用，常用的溶剂组合有：Petroleumether/Ethylacetate,petroleumether/Acetone,Petroleumether/Ether, Petroleumether/CH2Cl2, ethylacetate/MeOH,CHCl3/ethylacetate展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。
展开剂的选择条件：①对的所需成分有良好的溶解性；②可使成分间分开；③待测组分的Rf在0.2~0.8之间，定量测定在0.3～0.5之间；④不与待测组分或吸附剂发生化学反应；⑤沸点适中，黏度较小；⑥展开后组分斑点圆且集中；⑦混合溶剂最好用新鲜配制。
一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离；中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离；强极性溶剂，由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。
很多时候,展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果。
一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例（或者加入第三种溶剂）,达到最佳效果；如果没有分开的迹象（斑点较“拖”），最好是换溶剂。
TLC展开剂选择及显色剂的总结
选择适当的展开剂是首要任务.一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：石油迷<己烷<苯<乙醚<THF<乙酸乙酯<丙酮<乙醇Petroleumether/Ethylacetate,petroleumether/Acetone,Petroleumether/Eth er, Petroleumether/CH2Cl2, ethylacetate/MeOH,CHCl3/ethylacetate 展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。
展开剂的选择条件：①对的所需成分有良好的溶解性；②可使成分间分开；③待测组分的Rf在0.2~0.8之间，定量测定在0.3～0.5之间；④不与待测组分或吸附剂发生化学反应；⑤沸点适中，黏度较小；⑥展开后组分斑点圆且集中；⑦混合溶剂最好用新鲜配制。
一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离；中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离；强极性溶剂，由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。
很多时候,展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果。
我们在实验中，为了实现一个配体与其他杂质有效分离，曾经尝试了很多种的溶剂组合，最后才找到石油醚—EtOAc—HCOOH（5.5：3.5：0.1）混合溶剂。
一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例（或者加入第三种溶剂）,达到最佳效果；如果没有分开的迹象（斑点较“拖”），最好是换溶剂。
薄层色谱的展开剂和显色剂
薄层色谱展开剂与显色剂展开剂的选择：一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：石油迷<己烷<苯<乙醚<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇使用单一溶剂，往往不能达到很好的分离效果，往往使用混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂，高极性的溶剂还有增加区分度的作用，常用的溶剂组合有：< p>Petroleumether/Ethylacetate,petroleumether/Acetone,Petroleumether/Eth er,Petroleumether/CH2Cl2, ethylacetate/MeOH,CHCl3/ethylacetate展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。
展开剂的选择条件：①对的所需成分有良好的溶解性;②可使成分间分开;③待测组分的Rf在0.2~0.8之间，定量测定在0.3～0.5之间;④不与待测组分或吸附剂发生化学反应;⑤沸点适中，黏度较小;⑥展开后组分斑点圆且集中;⑦混合溶剂最好用新鲜配制。
一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离;中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离;强极性溶剂，由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。
很多时候,展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果。
一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例(或者加入第三种溶剂),达到最佳效果;如果没有分开的迹象(斑点较“拖”)，最好是换溶剂。
薄层色谱法实验报告
薄层色谱法实验报告一、实验目的1、掌握薄层色谱法的基本原理和操作方法。
2、学习利用薄层色谱法分离和鉴定混合物中的成分。
二、实验原理薄层色谱法（Thin Layer Chromatography，TLC）是一种快速、简便、灵敏的分离和分析方法。
它基于混合物中各组分在固定相（吸附剂）和流动相（展开剂）之间的分配系数不同，从而在薄层板上实现分离。
吸附剂通常是硅胶、氧化铝等具有吸附性能的物质，它们均匀地涂布在玻璃板或塑料板上形成薄层。
展开剂则是一种能够在吸附剂上移动的溶剂系统。
当样品点在薄层板的一端，放入装有展开剂的层析缸中时，展开剂在毛细作用下沿着薄层上升，样品中的各组分随着展开剂的移动而在薄层上发生不同程度的吸附和解吸，导致它们在薄层上的移动速度不同，最终实现分离。
通过与已知标准物质在相同条件下的色谱行为进行比较，可以对样品中的成分进行定性分析。
同时，根据斑点的大小和颜色深浅，可以进行半定量分析。
三、实验仪器与试剂1、仪器玻璃板（5×20cm）层析缸点样毛细管（内径 05mm）喷雾器紫外光灯（254nm 和 365nm）烘箱2、试剂硅胶 G羧甲基纤维素钠（CMCNa）水溶液（05%）展开剂（石油醚乙酸乙酯体系，不同比例）样品溶液（混合有机化合物）标准物质溶液（已知有机化合物）四、实验步骤1、制板将硅胶 G 与适量的 05% CMCNa 水溶液在研钵中充分研磨，调成均匀的糊状。
用涂布器将糊状物均匀地涂布在玻璃板上，厚度约为 025 05mm。
置于水平台上晾干，然后在 105℃烘箱中活化 30 分钟，取出后置于干燥器中备用。
2、点样用点样毛细管吸取样品溶液和标准物质溶液，在距薄层板一端 1 15cm 处轻轻点样，点样直径一般不超过 2mm，每次点样后用电吹风冷风吹干，重复点样 2 3 次，以保证样品量足够。
3、展开在层析缸中倒入适量的展开剂，使其高度不超过 1cm。
将点样后的薄层板小心放入层析缸中，盖上盖子，使展开剂蒸气饱和层析缸 5 10 分钟。
薄层色谱操作流程注意事项
薄层色谱操作流程注意事项下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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薄层色谱实验报告
一、实验目的1. 掌握薄层色谱的基本原理及其在有机物分离中的应用。
2. 学习薄层色谱的操作技能，包括薄层板的制备、点样、展开和显色等。
3. 了解不同展开剂对分离效果的影响。
二、实验原理薄层色谱法是一种基于混合物中各组分在固定相和流动相之间分配系数差异的分离方法。
固定相通常是涂布在薄层板上的吸附剂，如硅胶、氧化铝等。
流动相为有机溶剂，如乙醚、氯仿等。
当混合物在固定相和流动相之间进行分配时，不同组分的移动速度不同，从而实现分离。
三、实验仪器与药品1. 仪器：薄层色谱仪、点样器、展开槽、紫外灯、显色剂等。
2. 薄层板：5.0cm×15.0cm的硅胶层析板两块。
3. 展开剂：乙醚、氯仿、甲醇等。
4. 显色剂：碘蒸气、荧光剂等。
5. 样品：有机混合物。
四、实验步骤1. 薄层板的制备：称取2～5g层析用硅胶，加适量水调成糊状，等石膏开始固化时，再加少许水，调成匀浆，平均摊在两块5.0cm×15.0cm的层析玻璃板上，再轻敲使其涂布均匀。
固化后，经105℃烘烤活化0.5h，贮于干燥器内备用。
2. 点样：在层析板下端2.0cm处，用铅笔轻划一起始线，并在点样处用铅笔作一记号为原点。
取毛细管，分别蘸取样品和标准品，点于原点上。
3. 展开与显色：将点好的薄层板放入展开槽中，加入适量的展开剂，使溶剂前沿距离薄层板顶部1～2cm。
将薄层板放入展开槽中，待溶剂前沿到达预定位置后取出，晾干。
将晾干的薄层板放入紫外灯下观察，必要时进行显色。
4. 比移值（Rf）计算：用尺子测量原点至层析斑点中心的距离和原点至溶剂前沿的距离，计算比移值（Rf）。
五、实验结果与分析1. 通过实验，成功制备了薄层板，并完成了样品的分离。
2. 通过比较样品和标准品的Rf值，初步鉴定了样品中各组分的种类。
3. 分析不同展开剂对分离效果的影响，得出以下结论：（1）乙醚：适用于分离极性较大的化合物。
（2）氯仿：适用于分离极性较小的化合物。
薄层色谱法(TLC)解析
0.5％碘的氯仿溶液
显黄棕色
中性0.05％高锰酸钾溶液 显黄色
碱性高锰酸钾试剂
显黄色
铁氰化钾-三氯化铁试剂 还原性物质显蓝色，再喷2mol／L盐酸溶液，则蓝色加深。
5％磷钼酸乙醇溶液
还原性化合物显蓝色，再用氨气薰，则背景变为无色。
专属性显色剂
显色剂
适用化合物
硝酸银／过氧化氢
卤代烃类
荧光素／溴
不饱和烃
展开
• 以直立展开为多 • 展开剂用量：展开后仍留有三分之二以上
体积为宜；浸入展开剂的深度以距原点 0.5cm为宜； • 展开距离：8-15cm • 溶剂蒸气预饱和：15-30分钟
展开系统的饱和
• 一般使用的是双槽的展开缸，一槽用来放 展开剂，另一槽可加入氨水或硫酸。把待 展开的板放入两槽间的平台，斜架着，盖 上展开缸的盖子。让展开剂的蒸气充满展 开缸，并使薄层板吸附蒸气达到饱和，防 止边沿效应，饱和时间在半个小时左右。 展开时难免要打开盖子把薄层板放入展开 剂中，不过对薄层板与蒸气的吸附平衡影 响不大，当然动作应该尽量轻、快
五、注意事项
• 用涂布器制板的要点：玻璃板要清洁；调浆要均 匀；涂布后的薄层板应低温缓慢干燥。
• 自制薄板要求：表面均匀、平整、光滑，无麻点、 无气泡、无破损、无污染。
• 薄层厚薄对Rf值影响：硅胶G板当厚低于150μm时， Rf值随薄层的减低而增大，可变性大；板厚250 μm ， Rf改变不显著。
混合展开湿度变化 ⑶其中一种溶剂被优先吸附 ⑷各组分间可能发生相互作用 ⑸吸附剂中杂质不断流出引起组成改变
⑴至少可以把微克级的被分离物质显示出来； ⑵能给出一个确定的显示区域； ⑶显示区域有一定的稳定 性。
显色剂可以分成两大类：
薄层层析实验报告
一、实验目的1. 掌握薄层层析的基本原理和操作方法。
2. 了解薄层层析在有机化合物分离和鉴定中的应用。
3. 通过实验，学会如何根据Rf值对化合物进行鉴定。
二、实验原理薄层层析是一种常用的色谱分离技术，其基本原理是利用混合物中各组分在固定相和流动相之间的相互作用力差异，通过展开剂在固定相上的流动，使各组分在薄层板上发生不同的迁移，从而达到分离的目的。
Rf值（比移值）是衡量化合物在薄层板上迁移距离与展开剂迁移距离的比值，用于鉴定化合物。
三、实验仪器与药品1. 仪器：薄层层析板、点样器、层析缸、展开剂、显色剂、烘箱、天平等。
2. 药品：待分离的混合物、硅胶、溶剂、显色剂等。
四、实验步骤1. 薄层层析板的制备（1）称取适量硅胶，加入适量的水，搅拌均匀，待石膏开始固化时，再加入少许水，调成匀浆。
（2）将匀浆均匀地涂布在薄层板上，轻轻敲打使其平整。
（3）将涂布好的薄层板放入烘箱中，105℃烘烤活化0.5小时。
2. 点样（1）在薄层板下端2.0cm处，用铅笔轻轻划一条起始线，并在点样处用铅笔作一标记为原点。
（2）用点样器蘸取待分离的混合物，点于原点上，注意点样量不宜过多。
3. 展开剂的选择与准备（1）根据待分离化合物的性质选择合适的展开剂。
（2）将展开剂倒入层析缸中，液面略低于薄层板下端。
4. 展开与显色（1）将点好样的薄层板放入层析缸中，密封。
（2）待展开剂上升至薄层板上端后，取出薄层板，晾干。
（3）用显色剂对薄层板进行显色，观察各化合物的斑点。
5. 结果分析（1）记录各化合物的Rf值。
（2）根据Rf值对化合物进行鉴定。
五、实验结果与分析1. 实验结果根据实验数据，得到以下化合物的Rf值：- 化合物A：Rf = 0.5- 化合物B：Rf = 0.7- 化合物C：Rf = 0.92. 结果分析根据Rf值，可以初步判断各化合物的性质。
在本实验中，化合物A、B、C的Rf值依次增大，说明它们在薄层板上的迁移速度依次变快，可能为不同极性的化合物。
TLC展开剂选择及显色剂的汇总
选择适当的展开剂是首要任务.一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：石油迷<己烷<苯<乙醚<T HF<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇使用单一溶剂，往往不能达到很好的分离效果，往往使用混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂，高极性的溶剂还有增加区分度的作用，常用的溶剂组合有：Petr oleum ether/Ethy lacet ate,p etrol eumet her/A ceton e,Pet roleu methe r/Eth er, P etrol eumet h er/C H2Cl2, eth ylace tate/MeOH,CHCl3/ethy lacet ate展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。
展开剂的选择条件：①对的所需成分有良好的溶解性；②可使成分间分开；③待测组分的Rf在0.2~0.8之间，定量测定在0.3～0.5之间；④不与待测组分或吸附剂发生化学反应；⑤沸点适中，黏度较小；⑥展开后组分斑点圆且集中；⑦混合溶剂最好用新鲜配制。
一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离；中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离；强极性溶剂，由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。
中药各类物质常用显色剂和展开剂
中药各类物质常用显色剂和展开剂1、生物碱（1）沉淀反应——碘化汞钾试剂→白色或浅黄色沉淀碘化铋钾试剂→橘红色沉淀碘—碘化钾试剂→浅棕或暗棕色沉淀硅钨酸试剂→浅黄或黄棕色沉淀磷钨酸试剂→浅黄色沉淀磷钼酸试剂→白色或淡黄色沉淀苦味酸试剂→黄色结晶或非结晶形沉淀鞣酸试剂→棕黄色沉淀氯化金试剂→黄色结晶氯化铂试剂→白色结晶雷氏铵盐→红色无定形沉淀（2）薄层层析检查：吸附剂——碱性氧化铝（Ⅲ级，干法铺板）硅胶G（稀碱湿法铺板）展开剂——氯仿：甲醇显色——UV；碘化铋钾2、氨基酸、多肽、蛋白质（1）加热沉淀试验：加热煮沸→混浊或沉淀（蛋白质）+5%H2SO4（不加热）→混浊或沉淀（2）双缩脲反应：+40%NaOH，1%CuSO4 →紫色、红色或紫红色（多肽、蛋白质）（3）茚三酮反应：+0.2%茚三酮试液→蓝或蓝紫色（氨基酸、多肽、蛋白质）（4）吲哚醌反应：+吲哚醌试液→各种颜色（氨基酸）（5）Millon反应：+Hg，H2NO2 →红色（蛋白质分子中有酪氨酸组成）（6）Hopkins-Cole反应：+乙醛酸，浓硫酸→各色（蛋白质分子中有色氨酸组成）（7）氨基酸的薄层层析检查：吸附剂——硅胶G展开剂—— n-BuOH，n-BuOH：HAc：H2O显色剂——0.25%茚三酮试液→紫红色斑点3、有机酸（1）PH试纸检查（2）溴酚兰试液：喷洒→蓝色背景黄色斑点（3）薄层层析检查：吸附剂——硅胶G或酸性氧化铝展开剂—— C6H6：EtOH显色剂——0.1%溴酚兰试液→黄色4、酚类和鞣质（1）FeCl3试剂：+1%FeCl3试液→蓝、暗绿或蓝紫色（2）三氯化铁-铁氰化钾试剂：喷洒→蓝色斑点（3）香草醛-盐酸试剂：喷洒→红色（间苯二酚、间苯三酚）（4）重氮盐试剂：+对硝基苯胺、亚硝酸钠→红色（5）薄层层析检查：吸附剂——硅胶G或纤维素展开剂—— n-BuOH：HAc：H2O；15%HAc显色剂——1% FeCl3试液1%三氯化铁-1%铁氰化钾试液→蓝、绿或黑色鞣质与酚类的区别：+明胶——沉淀上清液 +1%FeCl3试液→蓝、暗绿或蓝紫色5、糖和苷（1）斐林试剂：+硫酸铜、酒石酸钾钠——砖红色沉淀（还原糖）（—）+1%HCl +NaOH 沉淀（苷元）△30min 上清液（+）（多糖、苷）（2）Molish反应：+α-萘酚-浓硫酸→紫红色环（3）银镜反应：+0.1N硝酸银、5N氨水→银褐色（还原糖）（4）薄层层析检查：：吸附剂——硅胶G或纤维素展开剂—— n-BuOH：Pd：H2O；15%HAc显色剂——苯胺-邻苯二甲酸6、皂苷（1）泡末试验：振摇→大量持续性泡末+0.1M HCl 二管泡末高度相同（三萜皂苷）+0.1M NaOH 碱管高于酸管（甾体皂苷）（2）溶血试验：+2%红血球悬浮液→溶血（3）Lieberman—Burchard反应：+醋酐-浓硫酸——紫红色（三萜皂苷）黄-红-紫-污绿（甾体皂苷）7、甾体（1）Lieberman—Burchard反应：+醋酐-浓硫酸→黄-红-紫-污绿（2）氯仿-浓硫酸反应：+氯仿-浓硫酸氯仿层→红或青色硫酸层→绿色荧光（3）五氯化锑或三氯化锑反应：+SbCl3或SbCl5 →红色（4）薄层层析检查：吸附剂——中性氧化铝或硅胶G展开剂—— C6H6-MeOH；CHCl3-MeOH显色剂—— 10%磷钼酸→蓝-蓝紫色5%三氯化锑试液→红、棕红或绿色8、黄酮（1）盐酸-镁粉反应：+HCl-Mg →红色（2）三氯化铝反应：+AlCl3 →黄色（3）浓氨水反应：+NH3 →亮黄或橙色（4）薄层层析检查：吸附剂——聚酰胺或硅胶G展开剂—— MeOH-H2O；EtOH-H2O显色剂—— UV→亮黄或黄绿色荧光1%三氯化铝试液→亮黄色9、香豆素、内酯（1）开闭环反应：+1%NaOH→澄清 +2%HCl→混浊（2）异羟污酸铁反应：+7%盐酸羟胺、10%KOH △ +稀HCl、1%FeCl3 →红色（3）重氮盐试剂：+对硝基苯胺、亚硝酸钠→红色（4）薄层层析检查：吸附剂——酸性硅胶G或硅胶G 或酸性氧化铝展开剂——甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5：4：1）显色剂—— UV→蓝色荧光异羟污酸铁试液→红色10、强心苷（1）Kedde试剂：+3，5-二硝基苯甲酸试液→紫红色（2）Baljet试剂：+碱性苦味酸试液→橙或橙红色（3）Legal试剂：+亚硝酰铁氰化钠试液→紫红色（4）K-K反应：+FeCl3/冰HAc、浓H2SO4→上层绿~蓝色（2-去氧糖）界面红棕色（5）薄层层析检查：吸附剂——硅胶G 或中性氧化铝展开剂—— n-BuOH：HAc：H2O（4：1：5）显色剂——碱性3，5-二硝基苯甲酸试液→紫红色碱性苦味酸试液→橙红色11、蒽醌（1）碱液反应：+10%NaOH →红色 +H2O2 →红色不褪 +H+ →红色褪去（2）醋酸镁反应：+1%MgAc2 →红色（3）薄层层析检查：吸附剂——硅胶G展开剂——Pet：EtOAc显色剂—— UV→黄色荧光5%NaOH →红色12、挥发油、油脂（1）油斑检查：油斑挥发→挥发油；油斑不消失→油脂或类脂（2）磷钼酸反应：喷洒5%磷钼酸试液→蓝色（油脂、三萜、甾醇）。
TLC展开剂选择及显色剂的汇总
茴香醛(对甲氧基苯甲醛)2
适用于萜烯，桉树脑(cineoles), withanolides, 出油柑碱(acronycine)
配制方法：茴香醛:HClO4:丙酮:水(1:10:20:80)经常需要利用溶剂的极性大小，对展开剂的极性予以调整。
的NaOH 水溶液，刚好出现蓝色即至。
钼酸ห้องสมุดไป่ตู้
广谱
配制方法：235 mL 水+ 12 g 钼酸氨+ 0.5 g 钼酸铈氨+ 15 mL
浓硫酸
茴香醛(对甲氧基苯甲醛)1
广谱
配制方法：135 乙醇+ 5 mL 浓硫酸+ 1.5 mL of 冰醋酸+ 3.7 mL
茴香醛，剧烈搅拌，使混合均匀.
在柱层操作时，被分离样品在加样时可采用于法，亦可选一适宜的溶剂将样品溶解后加入。溶解样品的溶剂应选择极性较小的，以便被分离的成分可以被吸附。然后渐增大溶剂的极性。这种极性的增大是一个十分缓慢的过程，称为“梯度洗脱”，使吸附在层析柱上的各个成分逐个被洗脱。如果极性增大过诀（梯度太大），就不能获得满意的分离。溶剂的洗脱能力，有时可以用溶剂的介电常数（ε）来表示。介电常数高，洗脱能力就大。以上的洗脱顺序仅适用于极性吸附剂，如硅胶、氧化铝。对非极性吸附剂，如活性炭，则正好与上述顺序相反，在水或亲水住溶剂中所形成的吸附作用，较在脂溶性溶剂中为强。
TLC展开剂选择及显色剂的总结
TLC展开剂选择及显色剂的总结选择适当的展开剂是首要任务.一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：石油迷<己烷<苯<乙醚<THF<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇使用单一溶剂，往往不能达到很好的分离效果，往往使用混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂，高极性的溶剂还有增加区分度的作用，常用的溶剂组合有：Petroleumether/Ethylacetate,petroleumether/Acetone,Petroleumether/Ether, Petroleumether/CH2Cl2, ethylacetate/MeOH,CHCl3/ethylacetate展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。
展开剂的选择条件：①对的所需成分有良好的溶解性；②可使成分间分开；③待测组分的Rf在0.2~0.8之间，定量测定在0.3～0.5之间；④不与待测组分或吸附剂发生化学反应；⑤沸点适中，黏度较小；⑥展开后组分斑点圆且集中；⑦混合溶剂最好用新鲜配制。
一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离；中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离；强极性溶剂，由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。
很多时候,展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果。
我们在实验中，为了实现一个配体与其他杂质有效分离，曾经尝试了很多种的溶剂组合，最后才找到石油醚—EtOAc—HCOOH（5.5：3.5：0.1）混合溶剂。
TLC展开剂选择
TLC展开剂选择及显色剂的总结选择适当的展开剂是首要任务.一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：石油迷<己烷<苯<乙醚<THF<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇使用单一溶剂，往往不能达到很好的分离效果，往往使用混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂，高极性的溶剂还有增加区分度的作用，常用的溶剂组合有：Petroleumether/Ethylacetate,petroleumether/Acetone,Petroleumether/Ether, Petroleumether/CH2Cl2, ethylacetate/MeOH,CHCl3/ethylacetate展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。
展开剂的选择条件：①对的所需成分有良好的溶解性；②可使成分间分开；③待测组分的Rf在0.2~0.8之间，定量测定在0.3～0.5之间；④不与待测组分或吸附剂发生化学反应；⑤沸点适中，黏度较小；⑥展开后组分斑点圆且集中；⑦混合溶剂最好用新鲜配制。
一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离；中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离；强极性溶剂，由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。
很多时候,展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果。
我们在实验中，为了实现一个配体与其他杂质有效分离，曾经尝试了很多种的溶剂组合，最后才找到石油醚—EtOAc—HCOOH（5.5：3.5：0.1）混合溶剂。
薄层色谱分析步骤及注意事项
薄层色谱分析步骤及注意事项薄层色谱法(thin layer chromatography简写TLC)是一种物理化学的分离技术，常用于药物的分离与分析。
现对此方法的分析步骤及注意事项提点建议。
完成TLC分析通常需经制板、点样、展开、检出4步操作。
⑴制板在一平面支持物(通常为玻璃)上，均匀地涂制硅胶、氧化铝或其他吸附剂薄层、样品的分离、检测就在此薄层色谱板上进行。
一般选用适当规格的表面光滑平整的玻璃板。
常用的薄层板规格有：10cm×20cm、5c m×20cm、20cm×20cm等。
称取适量硅胶，加入0.2％～0.5%羧甲基纤维素钠溶液（CM C-Na），充分搅拌均匀，进行制板。
一般来说10cm×20cm的玻璃板，3～5g硅胶/块；硅胶与羧甲基纤维素钠的比例一般为1：2～1：4。
制好的玻璃板放于水平台上，注意防尘。
在空气中自然干燥后，置1l0℃烘箱中烘0.5～lh，取出，放凉，并将其放于紫外光灯(254nm)下检视，薄层板应无花斑、水印，方可备用。
⑵点样用微量进样器进行点样。
点样前，先用铅笔在层析上距末端lcm 处轻轻画一横线，然后用毛细管吸取样液在横线上轻轻点样，如果要重新点样，一定要等前一次点样残余的溶剂挥发后再点样，以免点样斑点过大。
一般斑点直径大于2mm，不宜超过5mm.底线距基线1～2．5cm，点间距离为lcm左右，样点与玻璃边缘距离至少lcm，为防止边缘效应，可将薄层板两边刮去1～2cm，再进行点样。
⑶展开将点了样的薄层板放在盛在有展开剂的展开槽中，由于毛细管作用，展开溶剂在薄层板上缓慢前进，前进至一定距离后，取出薄层板，样品组分固移动速度不同而彼此分离。
①展开室应预饱和。
为达到饱和效果，可在室中加入足够量的展开剂；或者在壁上贴两条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封室顶的盖。
②展开剂一般为两种以上互溶的有机溶剂，并且临用时新配为宜。
③薄层板点样后，应待溶剂挥发完，再放人展开室中展开。
薄层色谱法的操作步骤
薄层色谱法的操作步骤
嘿，朋友！今天咱们来聊聊薄层色谱法的操作步骤，这可是个挺有趣的小实验呢。
第一步呀，得准备好咱们要用的东西。
比如说薄层板，这就像是咱们画画的画布一样。
还有展开剂，这可是让样品能在板子上跑起来的关键。
另外，样品溶液也不能少，这就是咱们要观察的主角啦。
还有各种小工具，像点样毛细管、显色剂等等。
准备好东西之后，就该处理样品溶液啦。
把咱们要检测的东西溶解在合适的溶剂里，让它变成均匀的溶液。
这一步可得细心点，要是溶液不均匀，后面的结果可能就不准确喽。
点好样之后，把薄层板放进装有展开剂的层析缸里。
这就像是让样品们开始赛跑啦。
展开剂会慢慢地沿着薄层板往上爬，带着样品一起跑。
这个时候咱们得耐心等待，看着展开剂一点点往上走，就好像在期待一场精彩的比赛结果。
等展开剂差不多爬到板子的顶部了，就把板子拿出来，放在通风的地方让它晾干。
这时候呀，样品们已经在板子上跑出了不同的距离，形成了一道道的痕迹。
然后就是显色啦。
根据样品的性质，选择合适的显色剂。
把显色剂喷在板子上或者把板子泡在显色剂里，这时候样品的痕迹就会变得更加明显。
有的会变成五颜六色的斑点，可好看啦。
呢，咱们就可以观察和分析结果啦。
看看样品在板子上形成的斑点位置、形状、颜色等等。
通过和标准样品的对比，就能知道咱们检测的东西到底是什么啦。
怎么样，朋友，薄层色谱法的操作步骤是不是没有想象中那么复杂呀？只要咱们一步一步认真做，就能得到想要的结果啦。
多练习几次，你一定会越来越熟练的！。
薄层色谱法验证方案
薄层色谱法验证方案一、仪器与试剂1. 仪器：薄层色谱仪（包括点样器、展开室、烘箱、检测器等）、研钵、称量纸、微量进样器、硅胶板等。
2. 试剂：硅胶G（粒度范围5-40μm）、样品（待分离化合物）、标准品（已知化合物）、甲醇、乙酸乙酯等。
二、实验环境与条件1. 实验室温度：20-25℃。
2. 相对湿度：40%-60%。
3. 实验时间：每次实验时间一般为30分钟至1小时。
4. 展开室温度：25-30℃。
5. 展开室湿度：30%-40%。
6. 检测波长：一般采用可见光检测，检测波长为254nm或366nm。
7. 薄层板：硅胶板，点样量为10μL。
8. 薄层色谱法展开剂一般采用石油醚/乙酸乙酯混合物或正己烷/乙酸乙酯混合物，比例根据样品性质进行选择。
9. 灵敏度：一般采用显色剂喷雾法进行定性，将显色剂喷在薄层板上，然后烘干，观察斑点颜色变化。
三、实验操作流程1. 称量样品，用研钵将样品研细并转移到称量纸中。
2. 用微量进样器将样品点在硅胶板上，每次点样量为10μL。
3. 将点好样的硅胶板放入展开室中，展开剂倒入展开室中，液面不得超过展开室高度的一半。
4. 开启薄层色谱仪的加热器，将展开室温度升至所需温度，保持恒温状态。
5. 当展开剂前沿达到标记线时，关闭展开室加热器，取出硅胶板晾干。
6. 用显色剂喷雾法对薄层板进行显色，观察斑点颜色变化并记录。
7. 对斑点进行测量并记录数据，包括斑点直径、Rf值等。
8. 根据实验数据进行分析，判断样品中各成分的分离情况及纯度。
9. 根据实验结果撰写实验报告。
四、实验数据记录与分析1. 记录每个斑点的位置和直径大小，以及Rf值。
2. 分析每个斑点的性质和归属，判断是否符合预期要求。
3. 对于未达到预期分离效果的样品，可调整展开剂比例、薄层板厚度等因素重新实验。
4. 对于分离效果较好的样品，可进一步进行定量分析或其他应用研究。
五、实验结论与报告1. 根据实验数据和分析结果得出结论，明确样品中各成分的分离情况和纯度。
薄层色谱的详细步骤
薄层色谱的详细步骤公司标准化编码 [QQX96QT-XQQB89Q8-NQQJ6Q8-MQM9N]薄层色谱分析步骤详解薄层色谱法(thin layer chromatography简写TLC)是一种物理化学的分离技术，常用于药物的分离与分析。
现对此方法的分析步骤及留意事项提点建议。
完成TLC分析通常需经制板、点样、展开、检出4步操纵。
⑴制板在一平面支持物(通常为玻璃)上，均匀地涂制硅胶、氧化铝或其他吸附剂薄层、样品的分离、检测就在此薄层色谱板上进行。
一般选用适当规格的表面光滑平整的玻璃板。
常用的薄层板规格有：10cm×20cm、5cm×20cm、20cm×20cm等。
称取适量硅胶，加进％～%羧甲基纤维素钠溶液（CMC-Na），充分搅拌均匀，进行制板。
一般来说10cm×20cm的玻璃板，3～5g硅胶/块；硅胶与羧甲基纤维素钠的比例一般为1：2～1：4。
制好的玻璃板放于水平台上，留意防尘。
在空气中自然干燥后，置1l0℃烘箱中烘～lh，取出，放凉，并将其放于紫外光灯(254nm)下检视，薄层板应无花斑、水印，方可备用。
⑵点样用微量进样器进行点样。
点样前，先用铅笔在层析上距末端lcm 处轻轻画一横线，然后用毛细管吸取样液在横线上轻轻点样，假如要重新点样，一定要等前一次点样残余的溶剂挥发后再点样，以免点样斑点过大。
一般斑点直径大于2mm，不宜超过5mm.底线距基线1～2．5cm，点间间隔为lcm左右，样点与玻璃边沿间隔至少lcm，为防止边沿效应，可将薄层板两边刮往1～2cm，再进行点样。
⑶展开将点了样的薄层板放在盛在有展开剂的展开槽中，由于毛细管作用，展开溶剂在薄层板上缓慢前进，前进至一定间隔后，取出薄层板，样品组分固移动速度不同而彼此分离。
①展开室应预饱和。
为达到饱和效果，可在室中加进足够量的展开剂；或者在壁上贴两条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸进展开剂中，密封室顶的盖。
【精品】薄层色谱的展开剂和显色剂
薄层色谱展开剂与显色剂展开剂的选择:一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：石油迷<己烷<苯〈乙醚<乙酸乙酯<丙酮<乙醇〈甲醇使用单一溶剂，往往不能达到很好的分离效果,往往使用混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂，高极性的溶剂还有增加区分度的作用，常用的溶剂组合有:〈p〉Petroleumether/Ethylacetate,petroleumether/Acetone，Petroleumether/Ether，Petroleumether/CH2Cl2，ethylacetate/MeOH,CHCl3/ethylacetate展开剂的比例要靠尝试。
一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。
展开剂的选择条件:①对的所需成分有良好的溶解性；②可使成分间分开；③待测组分的Rf在0.2～0.8之间,定量测定在0.3～0。
5之间;④不与待测组分或吸附剂发生化学反应；⑤沸点适中，黏度较小；⑥展开后组分斑点圆且集中;⑦混合溶剂最好用新鲜配制。
一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果,适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离；中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离;强极性溶剂，由正丁醇和水组成,也靠甲醇、乙醇,乙酸乙酯等来调节，适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。
很多时候,展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果.一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂，如果有分开的迹象,再调整比例(或者加入第三种溶剂)，达到最佳效果;如果没有分开的迹象（斑点较“拖"），最好是换溶剂。
薄层板的铺制、活化、点板、展层、显色及Rf的计算
实验项目一1、实验项目名称:薄层板得铺制、活化、点板、展层、显色及Ｒf得计算。
2、实验项目性质:验证性。
３、实验要求:必修。
4、计划学时数：６学时。
5、实验内容:(1)硅胶薄层板得铺制薄层层析就是将吸附剂或者支持剂(有时加入固化剂)均匀地铺在一块玻璃上,形成薄层。
把欲分离得样品点在薄层板得一端，然后将点样端浸入适宜得展开剂中，在密闭得层析缸中展开，使混合物得以分离得方法。
由于层析在薄层上进行故而得名。
薄层层析就是一种微量、快速得层析方法。
它不仅可以用于纯物质得鉴定，也可用于混合物得分离、提纯及含量得测定,还可以通过薄层层析来摸索与确定柱层析时得洗脱条件。
先做一下准备工作:玻板(约10×6cm)羧甲基纤维素钠（ＣＭC-Ｎａ）溶液配成0、5％溶液,CMC-Na一般就是要煮得,煮得时候应该缓缓加入CMC-Na,否则容易结成团块，影响浓度;煮好后一般放个两三天后,取上层清液使用,如果急着使用,也可以用过滤得方法。
硅胶H(小于２6０目)硅胶:ＣMC-Na=1g:3ｍL研磨匀浆得时间，根据经验来定，与空气湿度有关,一般通过拿起研棒时匀浆下滴得情况来判断,越稠越难下滴。
匀浆得稀稠除影响板得平滑外,也影响板涂层得厚度，进一步影响上样量。
铺好得板,用手捏起来，平着一放，摔一摔,让玻板上得硅胶铺得更均匀。
（2)硅胶薄层板得活化铺好得硅胶板,放置过夜,就可使用,想活化得也可活化。
即移入烘箱,缓慢升温至10５-110℃恒温活化半小时,取出放入干燥器中备用。
(3)硅胶薄层板得展层用点样毛细管取少量溶液点于硅胶板(离板底部大约0、5cｍ )。
将点好样品得薄层板放入展开缸得展开剂中,浸入展开剂得深度为距原点2－3mm为宜(切勿将样点侵入展开剂中)，密封顶盖,待展开至溶剂前沿达到规定得展距，取出薄层板,晾干。
(4）硅胶薄层板得显色及Ｒｆ得计算分离得化合物若有颜色,很容易识别出来各个样点。
但多数情况下化合物没有颜色,要识别样点,必须使样点显色。
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选择适当的展开剂是首要任务.一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：石油迷<己烷<苯<乙醚<THF<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇使用单一溶剂，往往不能达到很好的分离效果，往往使用混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂，高极性的溶剂还有增加区分度的作用，常用的溶剂组合有：
Petroleumether/Ethylacetate,petroleumether/Acetone,Petroleumether/Ether,
Petroleumether/CH2Cl2, ethylacetate/MeOH,CHCl3/ethylacetate
展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。
展开剂的选择条件：①对的所需成分有良好的溶解性；②可使成分间分开；③待测组分的Rf在0.2~0.8之间，定量测定在0.3～0.5之间；④不与待测组分或吸附剂发生化学反应；⑤沸点适中，黏度较小；⑥展开后组分斑点圆且集中；⑦混合溶剂最好用新鲜配制。
一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离；中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离；强极性溶剂，由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。
很多时候,展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果。
我们在实验中，为了实现一个配体与其他杂质有效分离，曾经尝试了很多种的溶剂组合，最后才找到石油醚—EtOAc—HCOOH（5.5：3.5：0.1）混合溶剂。
一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例（或者加入第三种溶剂）,达到最佳效果；如果没有分开的迹象（斑点较“拖”），最好是换溶剂。
对于在硅胶中这种酸性物质上易分解的物质，在展开剂里往往加一点点三乙胺，氨水，吡啶等碱性物质来中和硅胶的酸性。
（选择所添加的碱性物质，还必须考虑容易从产品中除去，氨水无疑是较好的选择。
）分离效果的好坏和所用硅胶和溶剂的质量很有关系：不同厂家生产的硅胶可能含水量以及颗粒的粗细程度，酸性强弱不同，从而导致产品在某个厂家的硅胶中分离效果很好，但在另一个厂家的就不行。
溶剂的含水量和杂质含量对分离效果都有明显的影响。
温度，湿度对分离效果影响也很明显，在实验中我们发现有时同一展开条件，上下午的Rf截然不同
展开剂的选择主要根据样品的极性、溶解度和吸附剂的活性等因素来考虑
在进行薄层层析时，首先应该知道未知化学成分的类型，其极性的大致归属，从提取液或从色谱柱的流动相极性可知，另外某样品里含多种化学成分先按极性不同大致分，然后细分，对于分离未知的化学物质，展开剂的选择也是一个摸索的过程，不应该仅仅从展开剂考虑，多因素综合衡量！
溶剂：层析过程中溶剂的选择，对组分分离关系极大。
在柱层析时所用的溶剂（单一剂或混合溶剂）习惯上称洗脱剂，用于薄层或纸层析时常称展开剂。
洗脱剂的选择，须根据被分离物质与所选用的吸附剂性质这两者结合起来加以考虑在用极性吸附剂进行层析时，当被分离物质为弱极性物质，一般选用弱极性溶剂为洗脱剂；被分离物质为强极性成分，则须选用极性溶剂为洗脱剂。
如果对某一极性物质用吸附性较弱的吸附剂（如以硅藻土或滑石粉代替硅胶），则洗脱剂的极性亦须相应降低。
在柱层操作时，被分离样品在加样时可采用于法，亦可选一适宜的溶剂将样品溶解后加入。
溶解样品的溶剂应选择极性较小的，以便被分离的成分可以被吸附。
然后渐增大溶剂的极性。
这种极性的增大是一个十分缓慢的过程，称为“梯度洗脱”，使吸附在层析柱上的各个成分逐个被洗脱。
如果极性增大过诀（梯度太大），就不能获得满意的分离。
溶剂的洗脱能力，有时可以用溶剂的介电常数（ε）来表示。
介电常数高，洗脱能力就大。
以上的洗脱顺序仅适用于极性吸附剂，如硅胶、氧化铝。
对非极性吸附剂，如活性炭，则正好与上述顺序
相反，在水或亲水住溶剂中所形成的吸附作用，较在脂溶性溶剂中为强。
3．被分离物质的性质：被分离的物质与吸附剂，洗脱剂共同构成吸附层析中的三个要素，彼此紧密相连。
在指定的吸附剂与洗脱剂的条件下，各个成分的分离情况，直接与被分离物质的结构与性质有关。
对极性吸附剂而言，成分的极性大，吸附住强。
当然，中草药成分的整体分子观是重要的，例如极性基团的数目愈多，被吸附的住能就会更大些，在同系物中碳原子数目少些，被吸附也会强些。
总之，只要两个成分在结构上存在差别，就有可能分离，关键在于条件的选择。
要根据被分离物质的性质，吸附剂的吸附强度，与溶剂的性质这三者的相互关系来考虑。
首先要考虑被分离物质的极性。
如被分离物质极性很小为不含氧的萜烯，或虽含氧但非极性基团，则需选用吸附性较强的吸附剂，并用弱极性溶剂如石油醚或苯进行洗脱。
但多数中药成分的极性较大，则需要选择吸附性能较弱的吸附剂（一般Ⅲ～Ⅳ级）。
采用的洗脱剂极性应由小到大按某一梯度递增，或可应用薄层层析以判断被分离物在某种溶剂系统中的分离情况。
此外，能否获得满意的分离，还与选择的溶剂梯度有很大关系。
现以实例说明吸附层析中吸附剂、洗脱剂与样品极性之间的关系。
如有多组分的混合物，象植物油脂系由烷烃、烯烃、舀醇酯类、甘油三酸醋和脂肪酸等组份。
当以硅胶为吸附剂时，使油脂被吸附后选用一系列混合溶剂进行洗脱，油脂中各单一成分即可按其极性大小的不同依次被洗脱。
又如对于C-27甾体皂甙元类成分，能因其分字中羟基数目的多少而获得分离：将混合皂甙元溶于含有5％氯仿的苯中，加于氧化铝的吸附柱上，采用以下的溶剂进行梯度洗脱。
如改用吸附性较弱的硅酸镁以替代氧化铝，由于硅酸镁的吸附性较弱，洗脱剂的极牲需相应降低，亦即采用苯或含5％氯仿的苯，即可将一元羟基皂甙元从吸附剂上洗脱下来。
这一例子说明，同样的中草药成分在不同的吸附剂中层析时，需用不同的溶剂才能达到相同的分离效果，从而说明吸附剂、溶剂和欲分离成分三者的相互关系。
（二）簿层层析：薄层层析是一种简便、快速、微量的层析方法。
一般将柱层析用的吸附剂撒布到平面如玻璃片上，形成一薄层进行层析时一即称薄层层析。
其原理与柱层析基本相似。
1．薄层层析的特点：薄层层析在应用与操作方面的特点与柱层析的比较。
2．吸附剂的选择：薄层层析用的吸附剂与其选择原则和柱层析相同。
主要区别在于薄层层析要求吸附剂（支持剂）的粒度更细，一般应小于250目，并要求粒度均匀。
用于薄层层析的吸附剂或预制薄层一般活度不宜过高，以Ⅱ～Ⅲ级为宜。
而展开距离则随薄层的粒度粗细而定，薄层粒度越细，展开距离相应缩短，一般不超过10厘米，否则可引起色谱扩散影响分离效果。
3．展开剂的选择：薄层层析，当吸附剂活度为一定值时（如Ⅱ或Ⅲ级），对多组分的样品能否获得满意的分离，决定于展开剂的选择。
中草药化学成分在脂溶性成分中，大致可按其极性不同而分为无极性、弱极性、中极性与强极性。
但在实际工作中，
显色剂：
碘：
适用于不饱和或者芳香族化合物
配制方法：在100ml 广口瓶中，放入一张滤纸，少许碘粒。
或者在瓶中，加入10g 碘粒，30g 硅胶
高锰酸钾
适用于含还原性基团化合物，比如羟基，氨基，醛
配制方法：1.5g KMnO4 + 10g K2CO3 + 1.25mL 10% NaOH +
200mL 水. 使用期3 个月
磷钼酸(PMA)
广谱
配制方法：10 g of 磷钼酸+100 mL 乙醇
紫外灯
适用于含共轭基团的化合物，芳香化合物
硫酸铈：
生物碱
配制方法：10%硫酸铈(IV)+15%硫酸的水溶液
氯化铁
苯酚类化合物
配制方法：1% FeCl3 + 50% 乙醇水溶液.
桑色素(羟基黄酮)
广谱, 有荧光活性
配制方法：0.1% 桑色素+甲醇
茚三酮
适用于氨基酸
配制方法：1.5g 茚三酮+ 100mL of 正丁醇+ 3.0mL 醋酸
二硝基苯肼(DNP)
适用于醛和酮
配制方法：12g 二硝基苯肼+ 60mL 浓硫酸+ 80mL 水+ 200mL
乙醇
香草醛(香兰素)
广谱
配制方法：15g 香草醛+ 250mL 乙醇+2.5mL 浓硫酸
溴甲酚绿
适用于羧酸，pKa<=5.0
配制方法：在100ml 乙醇中，加入0.04g 溴甲酚绿，缓慢滴加0.1M
的NaOH 水溶液，刚好出现蓝色即至。
钼酸铈
广谱
配制方法：235 mL 水+ 12 g 钼酸氨+ 0.5 g 钼酸铈氨+ 15 mL
浓硫酸
茴香醛(对甲氧基苯甲醛)1
广谱
配制方法：135 乙醇+ 5 mL 浓硫酸+ 1.5 mL of 冰醋酸+ 3.7 mL
茴香醛，剧烈搅拌，使混合均匀.
茴香醛(对甲氧基苯甲醛)2
适用于萜烯，桉树脑(cineoles), withanolides, 出油柑碱(acronycine)
配制方法：茴香醛:HClO4:丙酮:水(1:10:20:80)经常需要利用溶剂的极性大小，对展开剂的极性予以调整。