免疫学检测技术(课堂PPT)

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一、凝聚反应(Agglutination)
二、沉淀反应
1、溶液中的沉淀反应
2、凝胶扩散沉淀
3、免疫电泳
血清免疫电泳
火箭电泳
对流免疫电泳
三、补体参与的反应
四、免疫标记的抗原抗体技术
酶联免疫吸附（ELISA）
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一、凝集反应
凝集反应是指颗粒抗原与相应抗体结合 反应出现的可见性现象。颗粒抗原如完整 的细菌、红细胞等与相应抗体相混合，在 一定条件下出现凝集。凝集反应中抗原称 为凝集原，抗体称为凝集素。
• 人工抗原：人工合成多肽、蛋白等
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抗体（Antibody)
一、概念 是抗原刺激B淋巴细胞, 使之增殖分化成
浆细胞而产生的能与抗原发生特异性反应 的免疫球蛋白(Immunoglobulin, Ig)
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抗体（Antibody)
一、概念
二、免疫球蛋白的基本结构 免疫球蛋白：在人和动物血液、组织液及其
体细胞会因物理、化学和病毒等生物因素的影响，使
细胞发生癌变，形成肿瘤等，机体可识别、清除这些
细胞，这是免疫系统的第三个功能。当这一功能低下
或失调时，会导致肿瘤或癌. 症。
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抗原 （Antigen）
抗原概念 凡能刺激机体产生特异性抗体和致敏淋巴细胞，
并能与相应抗体或致敏淋巴细胞在体内或体外发生 反应的物质。
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多克隆抗体与单克隆抗体
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多克隆抗体与单克隆抗体的制备
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单克隆抗体的制备
骨髓瘤细胞
脾脏淋巴细胞
（ HGPRT-TK- )
（HGPRT+TK+）
在HAT中不能生长
体外培养ຫໍສະໝຸດ Baidu程中死亡
↓←PEG
杂交瘤细胞
(HGPRT+、TK+)
↓
在HAT中大量长期繁殖
↓
克隆化
↓
产生. 单抗
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第一节 免疫学检测技术原理
第十四章 免疫学检测技术
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抗原和抗体可以发生高度专一性的结合
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抗原和抗体可以发生高度专一性的结合
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抗原和抗体可以发生高度专一性的结合
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抗原和抗体可以发生高度专一性的结合
• 抗原或抗体检测原理： 借助抗原和抗体在体外特异结合后出现的
各种现象，对标本中的抗原或抗体进行定 性或定量的检测。
亲缘关系越远，差异越大，抗原性越强。
自身抗原：自身组织发生异常变异、免疫功能紊乱、眼球晶体 蛋白、精子蛋白、甲状腺蛋白
2. 大分子胶体：一般在10 kD以上 。
3. 具有复杂的立体结构或空间构象.
如明胶分子量虽然为100 kD，但结构简单，免疫原性差。
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抗原如何被识别
抗原的特异性
抗原决定簇：抗原分子表面具有免疫活 性的化学基因,是抗原与抗体结合的部位。
体,Ab2 ），所以既是抗体又是抗原。
Ag
Ab1
Ab2
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抗体（Antibody，Ab)
• 免疫球蛋白的双重性 • 免疫球蛋白的功能
1. 与抗原结合 2. 激活补体 3. 组织结合 4. 调理作用 5. 抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(ADCC）
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免疫球蛋白的功能
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抗体（Antibody) 的产生与功能
抗原性（Antigenicity）：包括免疫原性和反应原性
二个方面
• 免疫原性：抗原能刺激机体产生抗体和致敏淋巴细 胞的性能。
• 反应原性：抗原与特异性抗体或致敏淋巴细胞在体 内或体外发生反 应的性能。
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抗原 （Antigen）
构成抗原的条件
1. 异物性：机体免疫细胞能识别自身和异己物质，只
有外源性的物质才具有免疫原性，产生免疫反应。
抗原分子中抗原的特异性由抗原决定簇
决定。
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一种细菌可以刺激多少种抗体产生？
抗原
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一种细菌可以刺激多少种抗体产生？
根据抗原的化学性质分：
• 天然抗原：微生物及其产物抗原如
• 菌体抗原（O 抗原）
• 鞭毛抗原（H 抗原）
• 表面抗原（如大肠杆菌的K 抗原）
• 细菌的毒素抗原
• 病毒抗原（V 抗原）
• 抗原或抗体检测原理：
抗原抗体的结合具有高度专一性
借助抗原和抗体在体外特异结合后出现的各种
现象，对标本中的抗原或抗体进行定性或定量的
检测。
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对抗原或抗体进行定性或定量的检测的原理
Ab excess
Ag excess
Equiv.alence – Lattice formation 32
对抗原或抗体进行定性或定量检测的原理
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抗体产生的主要过程
抗体
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抗体的制备
注射
抗原（如类毒素）
抗体？ 抗原？
血清
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抗体的制备 • 抗血清：指抗原人工免疫实验动物，获得含
特异性抗体的血清。 • 多克隆抗体 (PAb)： 多个抗原决定簇免疫机体
所产生的多种抗体的混合物。 • 单克隆抗体（monoclonal antibody，MAb） ： 只针对某一特定的抗原决定簇，纯度高的抗体。
他分泌液中的一类结构相似的球蛋白。 1. 由4 条肽链组成： 2 条重链， 2 条轻链 2. 一个抗体单分子： 2 个抗原结合位点
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抗体（Antibody)
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抗体（Antibody，Ab)
• 免疫球蛋白的双重性 免疫球蛋白是一种蛋白质，是抗体
( Ab1 )；同时又可引起机体产生抗体（抗抗
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免疫的功能： 1. 抵抗感染（Defense）：机体能抵抗病原微生物 侵袭的能力。又称免疫防御。
抗菌、抗病毒、抗真菌、抗寄生虫免疫
2. 自身稳定（Homeostasis）：机体在新陈代谢过 程中，产生大量的衰老死亡细胞，免疫的第二个功能 就是清除这些细胞，维持机体的生理平衡。
3. 免 疫监视（Immunological surveillance）：机
根据抗原抗体形成的免疫复合物的浓度进 行定量检测。 P 312
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第一节 免疫学检测技术原理
可作为抗原进行检查的物质：
微生物及其大分子产物 人和动物细胞 人和动物体内的各种大分子 各种半抗原
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抗原或抗体检测原理
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较早的抗原抗体反应检测方法
1、凝集反应 （Agglutination) 2、沉淀反应 (Precipitation) 3、补体结合试验 (Complement fixation test ) 4、中和试验 (Neutralization test)
. Equivalence – Lattice formatio6 n
抗原或抗体检测原理
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• 免疫学（Immunology）：
是研究抗原性物质、免疫系统、免疫应 答的规律及免疫应答的调节的一门科学。
• 免疫的定义（Immunity）：免疫是机体识 别自我与非自我的过程。排除异己，维护 自身稳定的生理反应。