大肠杆菌检测方法步骤
大肠杆菌的检测MPN计数法
大肠杆菌的检测(MPN计数法) 大肠杆菌的检测在环境和食品微生物检测中至关重要，因为这些微生物的存在可能指示污染和潜在的健康风险。
MPN计数法是一种常用的检测大肠杆菌的方法，下面将详细介绍这种方法。
一、MPN计数法简介MPN计数法，全称Most Probable Number，即最可能数，是一种通过统计学方法估算微生物数量的方法。
它的基本原理是在一定的稀释度下，通过系列梯度稀释的样本中存在微生物的概率来推算样本中实际的微生物数量。
二、MPN计数法检测大肠杆菌的步骤1.样品采集：采集被检样品，如水、食品等，并按照无菌操作的要求进行处理，以避免污染和交叉感染。
2.制备稀释液：将样品进行一系列的稀释，如10-1、10-2、10-3等。
每个稀释度的样品需要进行三份平行试验，以增加结果的可靠性。
3.选择合适稀释度的样品：根据实验结果，选择适合的稀释度的样品进行MPN计数。
这个稀释度应该是使样品中大肠杆菌的数量落在10~100之间，以提高估算的准确性。
4.培养：将选择的稀释度的样品分别接种到含有特殊培养基的试管中，培养基是为了促进大肠杆菌的生长。
每个试管中接种的样品量为10ml。
5.结果分析：经过一定时间的培养后，观察每个试管中的菌落数并记录。
根据统计学原理，通过这些数据可以得出样本中大肠杆菌的最可能数。
6.结果报告：根据实验数据，计算并报告每100ml（或者每1g）样品中大肠杆菌的最可能数。
三、MPN计数法的优势和局限性优势：1.MPN计数法是一种广泛应用的方法，可用于估计微生物的数量，不仅适用于大肠杆菌，还适用于其他微生物。
2.该方法不需要昂贵的仪器设备，操作相对简单，可用于基层实验室。
3.MPN计数法可以提供微生物数量的范围，而非单一数值，对于初步估计和趋势分析具有一定的参考价值。
局限性：1.MPN计数法的主观性较强，结果会受到操作人员的影响。
因此，需要操作者接受专业培训并遵循严格的操作规程。
2.MPN计数法的准确性相对较低，尤其是在微生物数量较少的情况下，可能存在较大的误差。
微生物大肠杆菌检测方法
微生物大肠杆菌检测方法微生物大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道细菌，它可以以多种方式进入人体，包括通过摄入受污染的食物或水，以及通过直接接触感染或间接接触感染。
大肠杆菌是一种潜在的致病菌，它可以引起食物中毒，导致腹泻、腹痛、呕吐等症状。
因此，对大肠杆菌进行快速而准确的检测非常重要。
一般来说，对大肠杆菌的检测可以分为两种方法：传统方法和分子生物学方法。
传统方法主要包括培养法和生化检测法。
培养法是将样品在富含营养物的培养基上进行培养，并通过观察菌落形态、生理生化特性等来识别是否存在大肠杆菌。
常用的培养基包括大肠杆菌选择性培养基（如紫胶杆菌平板和免疫球蛋白平板）和大肠杆菌检测培养基（如二甲基绿平板和温和滴定培养基）。
在培养过程中，大肠杆菌通常会表现为革兰氏阴性、产生气体、氧可用的以及发酵甘露糖等特性。
这种方法的优点是简单易行，成本低廉，但需要较长的培养时间，一般需要24-48小时才能得到结果。
生化检测法是通过检测大肠杆菌产生的特定酶或其他代谢产物来快速识别该菌株。
传统的生物化学试剂盒可以用于检测大肠杆菌的存在，如白酒石酸盐绿的发酵和产气检测。
这种方法的优点是快速、简单，但缺点是它无法提供准确的菌株识别，因为其他细菌也可能产生相似的酶和代谢产物。
分子生物学方法是一种基于DNA或RNA的检测方法，可以提供更准确和快速的识别大肠杆菌。
这些方法包括聚合酶链反应（PCR）、实时荧光PCR、核酸杂交和基因测序等。
PCR是最常用的方法之一，它利用特定的引物扩增目标DNA 序列，然后通过凝胶电泳分析扩增产物，从而确定是否存在大肠杆菌。
PCR方法的优点是高度敏感和特异性，可以在几个小时内得到结果，但缺点是需要复杂的实验设备和技术，并且可能受到PCR抑制物质的干扰。
在实际应用中，常常会结合多种方法来进行微生物大肠杆菌的检测。
例如，可以通过培养法获得初步结果，并用PCR方法进行鉴定确认。
此外，还可以采用免疫学方法来检测大肠杆菌，如流式细胞仪和ELISA等。
大肠杆菌检测实验报告
大肠杆菌检测实验报告大肠杆菌检测实验报告引言：大肠杆菌是一种常见的细菌，存在于人体和动物的肠道中。
尽管大肠杆菌在正常情况下对人体无害，但某些菌株可能会引起严重的食物中毒。
因此，对食品和饮用水中的大肠杆菌进行检测至关重要。
本实验旨在通过不同的检测方法，了解大肠杆菌的存在和浓度。
材料与方法：1. 食品和饮用水样本：我们选择了市场上常见的食品和饮用水样本，包括蔬菜、水果、肉类和瓶装水。
2. 大肠杆菌培养基：我们使用了含有大肠杆菌特异性营养物质的培养基。
3. 培养皿和培养试管：用于培养大肠杆菌。
4. 显微镜和染色剂：用于观察和鉴定大肠杆菌。
实验步骤：1. 样本准备：我们将食品和饮用水样本分别取样，并放入培养皿或培养试管中。
2. 培养：将样本放入预先准备好的大肠杆菌培养基中，然后将培养皿或培养试管放入恒温培养箱中，以促进大肠杆菌的生长。
3. 观察：在培养一段时间后，我们使用显微镜观察培养皿或培养试管中的样本。
为了更好地观察大肠杆菌，我们使用染色剂对样本进行染色。
4. 记录：记录观察到的大肠杆菌数量和形态特征。
结果与讨论：通过对不同食品和饮用水样本进行大肠杆菌检测，我们观察到了以下结果：1. 蔬菜和水果样本中的大肠杆菌数量较高。
这可能是因为蔬菜和水果在生长和加工过程中接触到了土壤或污染的水源。
2. 肉类样本中的大肠杆菌数量较低。
这可能是因为肉类在加工过程中经过了高温处理，杀死了大部分的细菌。
3. 瓶装水样本中没有观察到大肠杆菌。
这是因为瓶装水在生产和包装过程中经过了严格的卫生控制。
通过本实验，我们可以得出结论：大肠杆菌在食品和饮用水中的存在是普遍的，但其浓度和数量因样本类型而异。
这提醒我们在选择和处理食品和饮用水时要格外注意卫生和安全。
结论：本实验通过采用大肠杆菌检测方法，对不同食品和饮用水样本进行了分析。
结果表明，大肠杆菌在食品和饮用水中存在普遍，但其浓度和数量因样本类型而异。
这对我们提醒了食品安全和卫生的重要性。
大肠杆菌的鉴定方法
大肠杆菌的鉴定方法大肠杆菌是常见的肠道细菌，广泛存在于自然环境中，包括土壤、水体和动植物体内。
它是引起人类肠道感染和食源性疾病的重要致病菌之一、准确鉴定大肠杆菌的方法对于食品安全和公共卫生至关重要。
下面将介绍常见的大肠杆菌鉴定方法。
1.外观和生理鉴定大肠杆菌形态特征为革兰阴性，为短杆状细菌，常产生单一或双子。
在艾柯培养基上，大肠杆菌形成典型的金黄色、大且圆形的菌落，使用其可以初步鉴定大肠杆菌。
大肠杆菌是革兰阴性细菌，可以通过革兰氏染色进行鉴定。
大肠杆菌的细胞壁含有脂多糖，染色后呈现红色。
2.纯培养和典型菌落的选择将样品接种于含有葡萄糖和肉汤的液体营养培养基中，经过16-24小时的培养后，利用墨汁培养基将菌液分带于增菌板表面，进行分离纯化。
然后选择培养在巴斯德固体琼脂培养基上呈金黄色，并有金属光泽的典型菌落。
3.酶活性测试大肠杆菌具有多种酶活性，常用的酶活性测试有氧化/发酵测试、甲基红松解试验和呈色反应等。
（1）氧化/发酵测试：大肠杆菌通常以无氧产酸为代谢途径进行葡萄糖发酵。
将菌液接种于以葡萄糖为唯一碳源的气泡管中，通过产酸后的颜色变化来鉴定大肠杆菌。
气泡管中产生黄色的酸性底部，说明转化为酸性，即为大肠杆菌。
（2）甲基红松解试验：大肠杆菌代谢糖酸，产生酸性代谢产物，导致菌落周围的甲基红转为黄色。
通过添加甲基红指示剂，观察溶解指示剂颜色的变化，由红色转为黄色可以初步鉴定大肠杆菌。
（3）呈色反应：大肠杆菌产生酶活性，能够将一些酶底物转化为有颜色的产物。
例如，大肠杆菌在聚糖中生成酶胆红素琼脂糖，呈现金黄色。
这种特征可以用于大肠杆菌的鉴定。
4.生化和生理特性鉴定（1）靛酚蓝糖蛋白胱氨酸琼脂糖（Ipv）试验：肠道杆菌能产生硫化氢，将外源底物半胱氨酸转化为硫化氢，使琼脂糖中的靛酚蓝变为铁蓝色，可以通过这个试验鉴定大肠杆菌。
（2）铁蛋白试验：大肠杆菌可以利用铁蛋白作为唯一的铁源进行生长，将铁蛋白分解为铁和胆红素，使培养基呈现深绿色，可通过这个试验鉴定大肠杆菌。
大肠杆菌的测定(精)
水中总大肠杆菌的测定来源:加入时间:2010-3-30 12:15:511 原理总大肠杆菌群可用多管发酵法或滤膜法检测。
多管发酵法的原理是根据大肠菌群细菌能发酵乳糖,产酸产气以及具备革兰氏染色阴性,无芽孢,呈杆状等有关特性,通过三个步骤进行检验,求得水样中的总大肠菌群数,实验结果以最可能数(most probable number,简称 MPN 表示。
2仪器2.1 高压蒸汽灭菌器。
2.2 恒温培养箱,冰箱。
2.3 生物显微镜,载玻片。
2.4 酒精灯,镍铬丝接种棒。
2.5 培养皿 (直径 100mm ,试管(5×150mm,小倒管,吸管 (1, 5, 10ml ,烧杯 (200, 500, 2000ml , 锥形瓶 (500, 1000ml ,采样瓶。
3 培养基及染色剂的制备3.1 乳糖蛋白胨培养液:将 10g 蛋白胨、 3g 牛肉浸膏、 3g 乳糖和 5g 氯化钠加热溶于 1000mL 蒸馏水中,调节 pH 为 7.2-7.4, 再加入 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 1mL ,充分混匀,分装于试管(内有倒管中,于 121℃高压灭菌器中灭菌 15min ,贮存于冷暗处备用。
3.2 三倍浓缩蛋白胨溶液:按上述乳糖蛋白胨培养液的制备方法制备。
除蒸馏水外,各组分用量增加至三倍。
3.3 品红亚硫酸钠培养基3.3.1 贮备培养基的制备于 2000mL 烧杯中,先将 20-30g 琼脂加到 900mL 蒸馏水中,加热溶解,然后加入3.5g 磷酸氢二钾及 10g 蛋白胨,混匀,使其溶解,再用蒸馏水补充到 1000mL 调节溶液pH 至 7.2-7.4。
趁热用脱脂棉或绒布过滤,再加 10g 乳糖,混匀,定量分装于 250或500mL 锥形瓶内,置于高压灭菌器中,在 121℃灭菌 15min , 贮存与冷暗处备用。
3.3.2 平皿培养基的制备将上法制备的贮备培养基加热融化。
根据锥形瓶内培养基的容量,用灭菌吸管按 1:50比例吸取 5%碱性品红乙醇溶液,置于灭菌空试管中;再按 1:200比例称取无水亚硫酸钠,置于另一灭菌空试管内,加灭菌水少许使其溶解,再置于沸水浴中煮沸10min (灭菌。
大肠杆菌检测步骤
餐饮具用大肠菌群测试片
采样:
（1）随机抽取消毒后准备使用的各类食具（碗、盘、杯等），取样量可根据大、中、小不同饮食行业每次采样6件～10件，每件贴纸片两张，每张纸片面积25cm²
（5cmX5cm）。
（2）用无菌生理盐水湿润大肠菌群检测用纸片后，立即贴于食具内侧表面，30s后取下，置于无菌塑料袋内.
（3）筷子以5只为一件样品，用灭菌1mL吸管吸取无菌生理盐水湿润纸片后，立即将筷子进口端（约5cm）抹试纸片，每件样品抹拭两张，放入无菌塑料袋内。
培养：
将已采样的纸片置于37℃恒温培养箱中培养16h～18h，取出观察结果。
结果判断：
若纸片保持紫蓝色不变，或有红色斑点但斑点周围无黄晕者为大肠菌群阴性；在红色斑点周围有黄晕，或纸片变黄并在黄色背景上呈现红色斑点或片状红晕为阳性。
国家标准规定：在50cm的纸片上（即两片纸片上），大肠菌群不得检出。
实验七大肠杆菌检测
目录
CONTENTS
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 结果分析 • 实验总结与注意事项
01 实验目的
了解大肠杆菌的特性
大肠杆菌是一种常见的肠道细菌，通常与人类肠道共生，但在某些情况下也可能引 起食物中毒和肠道感染。
大肠杆菌有多种类型，其中一些类型对人体有害，如肠产毒素大肠杆菌（ETEC）和 肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）。
采集可能含有大肠杆菌的样品， 如食品、水、土壤等。
样品处理
将采集的样品进行稀释、过滤等 处理，以便后续的增菌培养。
增菌培养
01
将处理后的样品接种在含有选择 性培养基的试管中，进行增菌培 养。
02
在适宜的温度下培养一段时间， 使大肠杆菌得以增殖。
分离培养
将增菌培养后的培养基进行划线分离 ，得到单菌落。
大肠杆菌对热敏感，在适宜的温度下容易繁殖，因此是食品卫生检测的重要指标之 一。
学习并掌握大肠杆菌的检测方法
01
02
03
培养法
通过将样品接种到选择性 培养基上培养，观察菌落 形态和生化反应来鉴定大 肠杆菌。
免疫学方法
利用抗体和抗原的特异性 结合，通过免疫学技术检 测样品中的大肠杆菌抗原 或抗体。
分子生物学方法
对于易燃、易爆、有毒 有害的化学品应妥善保 管，避免发生意外事故。
感谢您的观看
THANKS
本实验包括样品采集、增菌培养、分离纯 化、生化鉴定和结果观察等步骤。
实验结果
实验意义
通过本实验，我们成功检测出样品中存在 大肠杆菌污染，并对其进行了分离纯化和 生化鉴定。
本实验对于保障食品安全和水质卫生具有 重要意义，为预防和控制食源性和水源性 疾病提供了科学依据。
环境中大肠杆菌检测标准方法
环境中大肠杆菌检测标准方法
大肠杆菌是一种常见的细菌，通常被用来评估环境卫生和食品安全。
在环境中检测大肠杆菌的标准方法通常包括以下几种：
1. 膜过滤法，这是一种常见的方法，通过将水样或其他环境样品通过特定孔径的滤膜，然后将滤膜培养在含有大肠杆菌生长所需营养物质的琼脂培养基上，来筛选和计数大肠杆菌。
2. 多管法，这是一种用于水样检测的常见方法，通过将水样加入含有发酵引起的气体产生的小管中，然后观察气体产生情况来判断大肠杆菌的存在和数量。
3. 膜过滤-PCR法，这是一种结合了膜过滤和聚合酶链式反应（PCR）的方法，可以更快速和准确地检测大肠杆菌的存在，并且可以对其进行分子水平的鉴定。
4. 生物传感器法，这是一种新兴的方法，利用生物传感器检测大肠杆菌在环境中的存在，通过细胞生物学、生物化学或生物物理学的变化来实现对大肠杆菌的检测。
除了上述方法外，还有一些其他的方法用于检测环境中的大肠杆菌，每种方法都有其优缺点和适用范围。
在实际操作中，需要根据具体情况选择合适的方法进行检测。
同时，为了保证检测结果的准确性，操作人员需要严格按照标准操作程序进行操作，并对仪器设备进行定期维护和校准。
希望这些信息能够对你有所帮助。
大肠杆菌活菌数含量的测定操作规程
大肠杆菌活菌数含量的测定操作规程1. 引言大肠杆菌是一种常见的细菌，在食品、水源和环境中广泛存在。
测定大肠杆菌的活菌数含量对于食品安全、水质检测和环境卫生监测具有重要意义。
本文档旨在规范大肠杆菌活菌数含量的测定操作流程。
2. 设备和试剂准备- 培养基：LB培养基- 培养物：已经培养好的含有大肠杆菌的培养物- 烧杯、移液器、试管、平皿等常用实验室器材- 紫外灯或显微镜3. 测定操作步骤1. 准备样品：将待检样品按照指定方法进行采样，保持样品的完整性和代表性。
2. 样品处理：将样品转移到烧杯中，并进行适当的稀释，以保证菌落计数的准确性。
3. 制备培养基：按照LB培养基的配方准备培养基，在适当的温度下热化并均匀混合。
4. 接种培养基：将适量的样品接种到LB培养基中，通过摇床或培养箱进行培养，时间和培养条件根据需求确定。
5. 培养时间：根据实验需求，在适当的温度下，在摇床或培养箱中进行长时间培养。
6. 菌落计数：将培养的菌液制成适当的稀释液，然后取适量的菌液在平皿中均匀涂布，放置在恒温箱中进行菌落生长。
菌落生长后，使用显微镜或紫外灯统计菌落数量。
7. 结果记录：将统计得到的菌落数量记录下来，并计算大肠杆菌的活菌数含量。
4. 结果处理和数据分析1. 根据菌落计数的结果计算出大肠杆菌的活菌数含量。
2. 将结果与相应的标准进行对比，评估样品的卫生质量。
5. 结论本操作规程能够规范大肠杆菌活菌数含量的测定操作流程，为食品安全、水质检测和环境卫生监测提供准确可靠的数据依据。
6. 参考文献（列出参考文献，如有需要）。
大肠杆菌检测方法
大肠杆菌检测方法一：进入无菌室步骤1、进入无菌室前应打开紫光灯进行灭菌，时间为0。
5—1小时。
2、关灯后0•5小时后放可进入。
3、进入更衣间更换衣服，佩带口罩、帽子、鞋套。
二：实验步骤1、进入无菌室后，先把酒精灯点燃，然后在用酒精棉进行手部消毒。
（酒精棉是用75%的酒精加入脱脂棉中制成）。
2、准备双料管3根，单料管6根，培养皿7个。
3、直接从原液中吸取10ml放入双料管，（3根每根各10ml）。
4、再吸取原液1ml放入单料管中（3根每根各1ml）。
5、再吸取原液1ml放入培养皿中（2个培养皿各1ml）。
6、再吸取原液1ml放入盐水管中制成－1梯度的样液。
7、更换一根吸管，从－1梯度的样液吸取1ml样液放入单料管中（3根每根各1ml）8、再吸取－1梯度样液1ml放入培养皿中（2个培养皿各1ml）9、再把每个培养皿中到入营养琼脂平铺底部摇允（注另作3个培养皿：空气空白，把培养皿打开十分钟倒入营养琼脂平铺底部摇匀。
琼脂空白，把培养皿中倒入营养琼脂平铺底部摇匀。
盐水空白，吸1ml生理盐水放入培养皿中，倒入营养琼脂平铺底部摇匀）。
10、把全部作好的放入培养箱中，温度36C＋－1×C，大肠24H ＋－2H，菌落48H＋－2H，（待培养皿中的琼脂凝固后反转过来放入培养箱中）11、梯度：－1梯度为1ml原液加入9ml生理盐水配成－2梯度为1ml－1梯度样液加入9ml生理盐水配成－3梯度－4梯度配制方法和－1、－2梯度的配制方法一样。
12、如果大肠初发酵产生气泡，用接种笔沾一个产气的液在伊红美兰平板上画之字形然后放入培养箱中36C，24H＋－2H 。
（接种笔在每次使用前必须在酒精灯上消毒。
所画之形不能划破伊红美兰琼脂表面）。
13、取出后在用接种笔在伊红美兰平板之字形上挑菌，放入乳糖复发酵管中，然后再培养36C＋－1C，24H＋＋－2H。
14、再在伊红美兰平板之字形上挑菌，放到载玻片上作镜检。
（方法见标准）。
大肠杆菌的检测(MPN计数法)
食品微生物检验技术课程综述大肠杆菌的检测（MPN计数法）院系：食品科学与药学学院班级：食科114姓名: 张花学号: 114031431组长: 张军玲成员：张花赵晶郁朱娟娟大肠杆菌Petrifilm测试片计数法摘要食品检测是反映食品加工、贮藏、运输、等环节的卫生与安全状况的重要手段,而大肠菌群检测则是食品检测的重要指标均之一.根据定义大肠菌群是在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和碱性厌氧的革兰氏阴性芽胞杆菌.其主要检测意义在于反映食品卫生状况并推测其在肠道致病菌的可能性。
Petrifilm大肠菌群测试片是由美国3M生产的一种预先制备好的VRB平板培养基系统，并添加了TTC作为菌落指示剂便于菌落判读，而上层薄膜可以起到对大肠菌群发酵产生的气体截留的作用。
该方法目前已被多数权威机构认可，并在国内很多实验室开展运用。
关键词大肠杆菌Petrifilm测试法1设备和材料1。
1恒温培养箱:36±1℃。
1.2冰箱2～5℃。
1.3恒温水浴箱 :44。
5±0。
2℃。
1.4天平:感量0。
1g.1.5均质器1.6振荡器。
1.7无菌吸管：lmL（具0.01 mL刻度）、10mL（具0。
1mL刻度）或微量移液器及吸头。
1.8无菌锥形瓶：容量500mL。
1。
9 玻璃珠:直径约5mm。
1.10pH计或pH比色管或精密pH试纸1。
11试管架.2. 培养基和试剂2.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（ LST ）肉汤。
2.2EC肉汤.2。
3蛋白胨水.2。
4缓冲葡萄糖蛋白胨水（MP—VP实验用）。
2。
5磷酸盐缓冲液。
2。
6无菌生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。
2。
71mol/L氢氧化钠（NaOH ）：称取40g 氢氧化钠溶于1000ml蒸馏水中。
2.81mol/L 盐酸（HCI ）：移取浓盐酸90ml,用蒸馏水稀释至1000ml。
3检验程序4.样品稀释4。
1固体和半固体样品：以无菌操作将检样25mL样品，置盛有225mL磷酸盐缓冲液的无菌均质杯内或其他稀释液的灭菌锥形瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。
大肠杆菌检测方法[整理]
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大肠杆菌检测方法[整理]大肠杆菌是一种常见的肠道菌，在人和动物的肠道内常常存在。
然而，一些大肠杆菌菌株也可以引起人类疾病，如腹泻、细菌性肺炎和尿路感染等。
因此，对于食品、环境以及水源中的大肠杆菌的检测是很重要的。
目前常见的大肠杆菌检测方法包括宏域和微域方法。
下面我们分别介绍一下。
宏域方法：1. MPN法：MPN法（Most Probable Number）是微生物数量统计法中一个比较常用的方法，可以用于测定食品和水中大肠杆菌的数量。
它的原理是根据菌落形成的频率计算出样品中该菌的浓度。
这种方法通常需要更长时间，但其准确性较高。
2. 营养平板计数法：这种方法通过将样品表面原液（如，生牛肉）放置在固体培养基上，让其在37℃下培养24小时，经过染色后可以直接数出菌落，并通过菌落形状和生理生化特征鉴定出大肠杆菌。
这种方法简单，实验室易于操作，但需要更多的时间和更高的技能水平。
3. 膜过滤法：该方法将样品过滤到膜上，紫外线灭菌，然后将膜放置到富含营养成分的固体培养基上进行培养。
这个方法比较适合于检查食品或水样品中的低浓度大肠杆菌，但没有选择感染性的菌株的能力。
1. PCR (聚合酶链式反应)：PCR是一种高效的DNA增幅技术，可用于检测大肠杆菌DNA 的存在。
PCR方法的鉴定出现假阳性的可能性较低，但它不能鉴定出大肠杆菌的活性，仅能检测到细胞核酸。
2. ELISA (酶联免疫吸附法)：ELISA方法是用来检测食品和水中大肠杆菌的方法之一。
试剂盒中含有特定的抗体，它们与大肠杆菌的特定抗原结合。
这种方法速度快，准确率高，但可以只检测某一菌株。
3. 生物传感技术：生物传感技术是利用微生物的活性和生化反应来检测分子的技术。
它的优点是快速，准确，且对细胞造成的伤害较少。
大肠菌群测定步骤
食品大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检测步骤一、培养基制备1、生理盐水氯化钠 8.5g蒸馏水 1000.0ml将氯化钠溶于蒸馏水中，搅拌均匀后用量筒量取225ml分装到各个广口瓶中，1210C高压灭菌15min，备用。
2、月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤称取37克放入烧杯，将各成分溶解于1000ml蒸馏水中，放电炉子上加热并搅拌均匀，分装于装有倒立发酵管的试管中，每管10ml，装完盖帽，1210C高压灭菌15min，双料培养基除蒸馏水不变外，其余成分加倍。
3、样品制备（在无菌室中进行）（1）固体或半固体样品无菌操作称取样品25g置于装有225ml生理盐水的广口瓶中，充分振摇、混匀，制成1：10的样品稀释液备用。
（2）液体样品以无菌吸管吸取样品25g置于装有225ml生理盐水的广口瓶中，充分混匀，制成1：10的样品稀释液备用。
4、样品稀释用1ml无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品匀液1ml,沿管壁缓慢注于盛有9ml 生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管混匀，制成1：100的样品匀液。
按照该操作程序，可制备1：1000，1：10000。
等10倍系列稀释样品匀液，每递增稀释一次，换用1次1ml无菌吸管或吸头。
根据对样品污染状况的估计，选择2-3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1ml样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。
同时分别吸取1ml空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。
二、大肠菌群的测定（MPN法）1、选取适宜的三个连续稀释度的样品匀液，每个稀释度均接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1ml。
360C+10C培养24h-48h后，观察倒管内是否有气泡产生，并记录24h和48h内产气的LST肉汤管数。
对未产气的试管，可以轻敲试管壁的方式观察是否有较细小的气泡从管底逸出，如果所有LST肉汤管均未产气，可按。
报告结果；如果LST管有产气，则按下面步骤作证实试验。
大肠菌群能力验证
大肠菌群能力验证一、实验前期准备：1、检测项目：大肠菌群、大肠杆菌2、检测依据标准：GB 4789.3-2016 33、确认实验方案：把所涉及的试剂进行排查，查询是否缺某种试剂；根据检验标准，整理实验流程图，便于记录实验结果。
4、配置所需培养基：无菌生理盐水、结晶紫中性红胆盐琼脂、煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)肉汤等。
二、实验操作：1、收到样品后，确认样品包装是否完好，并将其保存在2~8℃冰箱中。
2、实验步骤2.1、样品接种方法选择和人员比对的探讨。
根据对能力比对的样品的评估，尽量选择稀释度范围较大一些，样品稀释梯度到10-6，选择GB4789.3-2016中第二法《平板计数法》；人员比对为两人。
2.2、进行实验：将样品从冰箱中取出达到室温后开启使用，在无菌室或生物安全柜下先用5mL稀释液（选取的生理盐水）进行水化后吸入无菌瓶或袋中，再用剩余的35mL稀释液进行洗涤并转入无菌瓶或袋中，即为原液。
注：1、按照说明书，水化冻干粉收集共40mL混匀作为原液备用2、开取西林瓶时，注意安全，以及观察能力比对样品状态是否完好。
2.2.1、再取25mL到225mL稀释液中混匀，制成10倍梯度样品匀液，稀释液手动混匀，混匀时注意观察是否有气泡产生。
2.2.2、用1mL无菌吸管取10倍的样液到9ml生理盐水试管中，制成100倍的样液，以此类推。
再将几个稀释度的样液接种1ml到平皿内，注入46±1℃的VRBA琼脂并摇匀。
从样品的制备到接种全程应不超过15分钟，然后在36±1℃中培养18～24h。
2.2.3、在培养24h时后，观察平皿内菌落生长情况，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。
3、大肠菌群证实试验：3.1、用接种环从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，少于10个菌落的挑取全部典型和可疑的菌落，分别接种于煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)管中,36℃±1 ℃培养24～48小时,观察产气情况。
大肠杆菌检验标准
大肠杆菌检验标准通常包括以下步骤：
采集样品：从待检测的食品、水源等中采集样品。
分离培养：将样品进行分离培养，以获得纯培养物。
初步鉴定：通过形态学、生化反应等方法对培养物进行初步鉴定，确认是否为大肠杆菌。
血清学鉴定：采用血清学方法对初步鉴定结果进行进一步确认，以确定大肠杆菌的血清型。
抗菌药物敏感试验：对分离出的大肠杆菌进行抗菌药物敏感试验，以确定哪些抗菌药物对该菌株有效。
报告结果：将检测结果报告给相关部门或客户，以指导临床治疗或采取相应的卫生措施。
需要注意的是，大肠杆菌检验标准可能因不同的国家或地区而有所差异，具体的检验方法和步骤也可能因不同的标准而有所不同。
大肠杆菌快速检测方法
品种名称：大肠杆菌显色培养基
大肠杆菌显色培养基用途：
用于大肠杆菌的快速检测和计数。
大肠杆菌显色培养基原理：
蛋白胨和酵母膏粉提供碳氮源和微量元素；氯化钠可维持均衡的渗透压；琼脂是培养基的凝固剂；十二烷基硫酸钠抑制革兰氏阳性菌；显色底物与大肠杆菌β-葡萄糖醛酸苷酶发生特异性反应，水解底物，释放出显色基团，在淡黄色平板上产生绿色的菌落。
大肠杆菌显色培养基配方（每升）：
蛋白胨
15.0g
酵母膏粉
3.0g
氯化钠
5.0g
十二烷基硫酸钠
0.1g
琼脂
12.0g
显色底物
6.5g
最终pH 7.0±0.2
使用方法：
1、称取大肠杆菌显色培养基41.6g，加入蒸馏水或去离子水1.0 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，115℃高压灭菌10min。
2、以无菌手续取样品 25.0g或25.0mL，加入含225.0mL无菌磷酸盐缓冲液(或生理盐水)的三角瓶内，充分振摇或用均质器均质1min成1：10稀释液，然后以 1：10继续稀释，选
择三个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种两个平皿，倾注加热溶解并冷至45℃左右的培养基。
3、观察结果。
质量控制
大肠杆菌显色培养基倾注平皿后呈淡黄色，下列菌株接种后于36±1℃培养18～24h生长情况如下表
贮存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。
贮存期二年。
规格：可配置1L的培养基干粉。
大肠杆菌检测国标
大肠杆菌检测国标引言大肠杆菌是一种常见的细菌，广泛存在于自然界中的土壤、水体和动物的肠道中。
在人体和其他动物的肠道中，大肠杆菌起到消化食物、合成维生素等重要作用。
然而，一些大肠杆菌株也是人类健康的威胁因素，可以引发食物中毒、肠道感染等疾病。
为了确保食品和水源的安全，许多国家和地区都制定了大肠杆菌检测的国家标准。
这些标准通常包括大肠杆菌的检测方法、限量要求等内容，以保障公众健康。
本文将介绍中国的大肠杆菌检测国标以及相关内容。
国标编号及发布单位中国的大肠杆菌检测国标编号为：GB 4789.3-2016。
该国标由中国国家标准化管理委员会发布。
检测方法GB 4789.3-2016国标规定了大肠杆菌的检测方法，主要包括以下几个步骤：1.样品的准备：根据具体的检测对象（如食品、水源等），选择合适的样品收集方法，并进行样品的处理和制备。
2.培养基的选择：选择适合大肠杆菌生长的培养基，如MacConkey培养基、EC培养基等。
3.细菌的培养：将样品接种到培养基中，并进行适当的培养条件，如温度、pH值等。
4.培养基的取样：在适当的培养时间后，从培养基中取出样品，准备进行下一步的检测操作。
5.检测方法的选择：根据实际情况选择合适的检测方法，如膜过滤法、数平板法等。
6.统计计算：根据检测结果进行统计计算，判断样品中大肠杆菌的数量。
检测限量GB 4789.3-2016国标也规定了大肠杆菌的检测限量要求。
根据不同的食品和水源，对大肠杆菌的数量有不同的要求。
以下是一些常见食品和水源的大肠杆菌检测限量要求：1.食品：根据食品的不同，大肠杆菌的限量要求也不同。
例如，糕点类食品中的大肠杆菌限量要求为每克不大于100个，肉制品中的限量要求为每克不大于10000个。
2.饮用水：根据饮用水的用途和来源，大肠杆菌的限量要求也有所不同。
例如，自来水中的大肠杆菌限量要求为每升不得检出，而井水中的限量要求为每升不大于10个。
结论GB 4789.3-2016国标是中国大肠杆菌检测的国家标准，规定了大肠杆菌的检测方法和限量要求。
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饮用水中大肠杆菌及检测方法
一、乳糖发酵实验（初发酵实验）
溶液与试剂：
乳糖胆盐发酵管
成分：蛋白胨20g，猪胆盐5g，乳糖10g，0.04%溴甲酚紫水溶液25mL，蒸馏水1000mL，pH7.4。
（乳糖胆盐培养基取30g，溶于1000mL纯水中即可）
操作步骤
1：将配制好的培养液，分装于每管10mL，共装9个试管，并各放入一个小倒管，115℃高压灭菌15min。
2：水样稀释
（1）无菌操作取水样1 mL放于含9mL的灭菌生理盐水中，置于容量瓶中，震荡摇匀为1:10的稀释液。
取上述稀释液1mL，注入9mL灭菌生理盐水，震荡摇匀，为1:100的稀释液。
（2）取水样，1:10稀释液，1：100稀释液各1mL接种到乳糖胆盐发酵管中。
（根据检样的污染程度可以适当调整稀释的比例）每一稀释度接种三管。
3：将试管连同试管架放入培养箱中37℃左右培养24h。
产酸溶液会由紫色变为黄色，产气发酵管中会有气泡。
如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则报告大肠杆菌群阴性，如有产气管，就需要进行分离培养，即进行伊红美蓝培养基鉴别实验。
二、伊红美蓝培养基鉴别实验（接种实验）
伊红美蓝琼脂（EMB)
成分：蛋白胨10g，乳糖10g，磷酸氢二钾2g，琼脂17g，2%伊红溶液20mL。
0.65%美蓝溶液10mL，蒸馏水1000L，pH7.1.
制法：将蛋白胨，磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正pH，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌15min，备用。
临用时加入乳糖，并加热融化琼脂，冷至50~55℃，加入伊红美蓝溶液，摇匀，倾注平板。
操作步骤
1称量：准确称取各成分。
2 溶化：加热熔化，定容。
3 调pH：用1mol/L NaOH溶液调节pH至偏碱性。
4 灭菌：将两个500ml的三角瓶中加上棉塞。
将培养皿用报纸包好，放入灭菌锅内，121℃高压灭菌15min。
5 倒平板（均在无菌台中操作）：灭菌后，待固体培养基冷却至60℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。
其过程是：
①将灭过菌的培养皿放在火焰旁，右手拿装有培养基的三角瓶，左手拔出棉塞；
②右手拿三角瓶，使三角瓶的瓶口迅速通过火焰；
③用左手将培养皿打开一条稍大于三角瓶口的缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖；
④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。
倒过来放置的目的是防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面。
向培养皿中转移已灭菌的培养基时，也不要把培养基沾在皿壁上。
否则，空气中杂菌会在这些粘附培养基上繁殖，并污染皿内培养基。
6 接种：
将之前产气的发酵管分别接种在伊红美蓝琼脂平板上
划线分离法：用接种环蘸菌液后在含有固体培养基的培养皿平板上划线，在划线过程中菌液逐渐减少，细菌也逐渐减少。
划线到最后，可使细菌间的距离加大。
7 细菌培养：将接种好的培养皿放入培养箱中37℃、培养20~24小时。
观察菌落形态。
大肠杆菌在伊红美蓝琼脂培养基上呈现深黑紫色，且有金属光泽菌落。
证实实验：
在上述平板上，挑取可疑大肠杆菌1~2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置（36±1）℃恒温培养箱培养（24±2）h，观察产气情况。
凡乳糖管产气，革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌，即可报告大肠杆菌阳性。
三、革兰氏染色镜检实验
1 溶液与试剂
无菌生理盐水，草酸铵结晶紫染液，卢戈氏碘液，95%乙醇，番红复染夜，香柏油，二甲苯（或成品革兰氏染液）
2 仪器
酒精灯，载玻片，显微镜，两个长铁条（做架子用），接种环，滴管、吸水纸等
3 染色
初染：滴加草酸结晶紫染液覆盖涂菌部位，染色2min，水洗至流出水无色。
媒染：用卢戈氏染液冲去残留水迹，再用碘液覆盖1min，倾去碘液，水洗至流出水无色。
脱色：将玻片上的水用吸水纸吸取，用滴管流加95%乙醇脱色（持续20秒），稍后立即洗去乙醇。
复染：将玻片上的水用吸水纸吸去，用番红复染液染色2min，水洗，吸去残水烤干。
4镜检
分别用香柏油覆盖涂菌部位，先用低倍镜找到菌，换用的物镜观察染色情况。
观察结束后，用二甲苯擦洗镜头。
备注：大肠杆菌是一种能发酵乳糖、产酸产气和兼性厌氧的革兰氏阴性菌，革兰氏染色呈红色。
报告
根据证实为大肠杆菌阳性的管数，查MPN检索表，报告每100mL检样的大肠杆菌的最可能数。