弧菌科

第一节 弧菌属

共有36个种。有14个种与人类感染有关。其 中以霍乱弧菌和副溶血弧菌最为重要，它们 分别引起霍乱和食物中毒。
（一）临床意义

是烈性肠道传染病霍乱的病原体。有155血清 群；其中 0l 群有古典和 EI-Tor 两种生物型。 巳发生七次世界性霍乱流行，均由 01 群引起， 前六次为古典生物，第七次为 EI-Tor 生物型。 1992 年 10 月 起 分 离 到 非 01 群 霍 乱 弧 菌 ， 与 01 ～ 0138 群霍乱弧菌抗血清不凝集，产生的 肠毒素。经核苷酸序列同源性分析，属于同 一霍乱弧菌，将其命名为新的血清群0139。
(二)细菌特征1
1．形态结构 G-阴性，弧形或逗点状，在病人“米泔 水”样便中呈“鱼群”样排列，细菌一端有鞭毛， 呈“穿棱”样运动，有菌毛和性菌毛， 0139 群有荚 膜。 2．抗原成分 有不耐热H抗原和耐热的 O抗原。前者为 共同抗原，特异性低；后者具群特异性和型特异性， 是分群和分型的基础。根据 O 抗原的不同，现有 155 个血清群，其中 O1 群、 0139 群引起霍乱。出现 36kb 的新基因，替代原有的 01 群抗原基因，遗传学特征 和毒力基因与 O1群相似。其余02群—0138群引起人类 的胃肠炎，不引起霍乱流行，称为非 Ol 群霍乱弧菌。
第二节 气单胞、邻单胞菌属
(一 ) 分 类 有四个种：嗜水气单胞菌、豚鼠气 单胞菌、温和气单胞菌和杀鲑气单胞菌。 分 为 14 个 DNA 杂 交 群 (HGs),HG8 和 HG10 被证实为同一菌种，即维隆气单胞 菌分为两个生物型。

(二)临床意义

为水中的常居菌，引起肠道内的感染,是 夏季慢性腹泻的常见病原菌,其主要的致 病物质为溶血和细胞毒素等。肠道外感 染为皮肤和软组织的感染，菌血症通常 发生在免疫低下的人群,由嗜水气单胞菌 和维隆气单胞菌引起。也可引起眼部感 染，脑膜炎，肺炎，胸膜炎，骨髓炎， 关节炎，腹膜炎，胆囊炎，静脉炎和尿 道感染等。
(三)微生物特性
1.G-直杆菌，有动力，营养要求不高，在普通培 养基上可以生长。分为嗜冷菌群35℃以下生长， 37℃不生长。嗜中温菌群 10℃—42℃之间生长。 2.氧化酶和触酶阳性，发酵葡萄糖产酸或产酸产 气，还原硝酸盐。22℃生化反应比37℃活跃， pH为4．5～9．0。 3.抗原结构复杂，血清学分型有异质性。011、 034和016在人类的感染中特别重要。
二、副溶血性弧菌
(一)临床意义

存在于近海的海水、海底的沉淀物、鱼 虾类和贝壳及盐渍加工的海产品中。通 过菌毛的粘附，产生耐热性溶血素而致 病。该毒素耐受100℃10min不被破坏。 主要引起食物中毒和急性腹泻。病程2— 3天，通常为自限性 。
(二)微生物特性
为革兰阴性杆菌，有鞭毛(极单毛)，无荚膜，无芽胞; 营养要求不高，在培养基中必须加入 1%氯化钠，最适 pH 为 7.7 ～ 8.0 ， 最 适 生 长 温 度 为 30℃ ～ 37℃ ， TCSS琼脂平板上形成 0.5～ 2.0mm大小，蔗糖不发酵 呈蓝绿色的菌落。在普通血平板不溶血或只产生α 溶血。 95 ％病人分离菌株在含高盐 (7 ％ ) 的人 O 型 血及以甘露醇为碳源的我妻琼脂培养基上产生β溶血现象，称为神奈川现象。 抵抗力弱，不耐热，90℃1 min即被杀死。在水中生 存不超过2天：耐碱怕酸，在50％食醋中1min死亡。
(二)细菌特征3
4．变异性 经人工培养，长久保存可失去典别的弧形而 成直杆状，或多形性。 EI-Tor生物型的溶血特性丧失。 有毒株也可成为无毒株，强毒株成为弱毒株。 5．抵抗力 霍乱弧菌可在水中存活20天左右。对热、干 燥敏感；100％ 1～2min即死亡。怕酸而耐碱，在正常 胃酸中仅能生存4min。对常用消毒剂敏感，0．5ppm氯 15min死亡，对庆大霉素耐药。
(二)细菌特征2
3.培养特性 营养要求不高，在普通琼脂上生长良好。 兼性厌氧。 37℃为适宜。具耐碱性，初次分离常选用 pH8 ． 5 的碱性胨水进行选择性增菌培养，经 35℃4h ～ 6h 增菌后可在液体表面形成菌膜、常用的选择性培养 基硫代硫酸盐-枸橼酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平板(TCBS)。 发酵蔗糖产酸，菌落呈黄色。 氧化酶阳性，发酵蔗糖，动力阳性，赖氨酸、鸟氨酸 脱羧酶阳性，精氨酸双水解酶阴性：无盐培养基上生 长，高于6％氯化钠的培养基上不能生长。



本菌的肌醇试验阳性， O/129 敏感 可与气单胞菌鉴别， 在 TCBS 平板和 6 ％ NaCL 胨水中不生 长 , 在不含盐胨水中生长可与弧菌 属鉴别。 氧化酶、动力阳性可与志贺菌属鉴 别。
(3)0／129敏感试验：参照标准药敏试验的方法 进行。将O／129(2，4二氨基-6，7-二异丙基 喋啶 ) 药敏纸片lOμg及 150μg的纸片贴在接 种有待测菌的琼脂平板，35℃18～24h孵育后， 纸片周围任何大小的抑菌环均表现为敏感。 (4)鸡红细胞凝集试验：古典生物型阳性，E1Tor生物型阴性。在洁净的玻片上滴加生理盐 水1滴，取18-24h的细菌斜面培养物与生理盐 水混匀成浓厚菌悬液。加入用生理盐水洗涤 三次的2．5％新鲜鸡红细胞盐水悬液一滴充 分混匀，１ｍin内出现凝集为阳性。
(三)微生物检验
1. 在发病早期，在使用抗生素前采集“米泔水”样粪 便标本，就地接种碱性胨水增菌。 2. 直接荧光抗体染色，抗 O1 群抗体凝集试验，可快 速诊断霍乱弧菌感染。 3．分离、培养与鉴定 将标本直接接种碱性胨水， 35℃ 6～8 h后，接种至TCBS平板或庆大霉素琼脂平 板，35℃ 12h～18h形成黄色菌落形态，均为可疑菌 落：应使用Ｏl群和Ｏ139群多价和单价抗血清进行 凝集，结合菌落特征和菌体形态，作出初步报告。
（三）副溶血性弧菌检验
1. 标本有粪便和食物。应及时接种，或置碱性 胨水中送检。 2. 标本接种于含 1 ％ NaCl 的碱性胨水， 35℃增 菌培养6～8h后接种TCBS平板24h呈绿色或蓝 绿色菌落，为可疑菌落。
（四）副溶血性弧菌鉴定
1)氧化酶阳性，O／129(150μg)敏感，发酵葡萄糖、 麦芽糖、甘露醇产酸,不发酵蔗糖、乳糖。吲哚试验 阳性，脲酶阴性，V-P阴性。 2) NaCI生长试验，该菌在不含NaCl和含10％NaCl的蛋 白胨水中不生长，在含3%NaCl蛋白胨水中生长。 3) 赖氨酸脱羧酶、乌氨酸脱羧酶附旺，精氨酸双水解 酶阴性。 4)神奈川现象阳性。 5)毒素测定：用基因探针和PCR方Biblioteka 直接测定毒素基因 tdh或trh。



(5)多粘菌素Ｂ敏感试验：在 50℃的普通琼脂 中加入50μg／m1多粘菌素Ｂ，混匀后倾注平 板，凝固后备用，取被测菌株的 3h 的肉汤培 养物，接种于平板表面， 35℃ 18 ～ 24h 后双 察有无细菌生长。古典生物型不生长为敏感， EI-Tor生物型生长为不敏感。 (6) 第Ⅳ、 V 组噬菌体裂解试验：第Ⅳ组噬菌 体可裂解古典生物型，不能裂解 E1-Tor 生物 型；第V组噬菌体裂解EI—Tot生物型，不能裂 解古典生物剧。 (7) 耐盐培养试验：霍乱弧菌能在不含氯化 钠和含6％氯化钠培养基中生长。氯化钠浓度 高于6％则不生长。
4.抗生素药敏试验
常规测定氨苄西林、四环素、 氯霉素、SMZ+TMP、呋南唑酮；对 于具有半自限性腹泻而言，体外 药敏试验非必需，对监控弧菌的 耐药性发展趋势有意义。
5.抗体检测

抗体的测定可用于霍乱的回顾性诊断和培养不能确 定的霍乱病例的辅助诊断。血清学试验主要测定杀 菌抗体和抗毒素抗体。在感染发生后的十天内，特 异性杀菌抗体和抗毒素抗体升高，在非流行地区杀 菌抗体的效价将在1-6个月内降至原来的基础水平。 而抗毒素抗体则可维持l-2年后下降，但不会降至原 来的基础水平。
(四)霍乱弧菌的鉴别试验
(1) 霍乱红试验：霍乱弧菌有色氨酸酶和硝酸 盐还原能力。当将霍乱弧菌培养于含硝酸盐 的蛋白胨水中时，分解培养基色氨酸产生吲 哚。同时，还原硝酸盐成为亚硝酸盐，两种 产物结合成亚硝酸吲哚。滴加浓硫酸后呈现 蔷薇色，是为霍乱红试验阳性。 (2)粘丝试验：将0．5％去氧胆酸钠水溶液与 霍乱弧菌混匀成浓悬液。lmin内悬液由混变 清，并变得粘稠。以接种环挑取时有粘丝形 成，弧菌属均有此反应。
(四)微生物检验
1.标本采集 采取粪便或肛门拭子，血液，脓液。 2.分离培养可用碱性胨水 ,含菌量少的标本增菌培养， 粪便和脓液标本直接接种，初次分离用血平板和加 有 10u／ml氨苄西林的血平板。生长为灰白色，光滑 湿润凸起，2mm大小的菌落，有溶血现象 。 3. 生化鉴定：对 O ／ 129 耐药、 TCBS 平板不生长、在无 盐培养基生长。嗜水气单胞菌和豚鼠气单胞菌均能 发酵阿拉伯糖而其它为阴性，嗜水气单胞菌 V-P和赖 氨酸脱羧酶试验阳性，而豚鼠气单胞菌为阴性。维 隆气单胞菌维隆生物型鸟氨酸脱羧酶阳性，精氨酸 双水解酶阴性。
四、其他弧菌
1. 拟态弧菌 与非 01 群相似 , 并和 O 抗原有交叉反应。 引起胃肠炎,偶见伤口感染或菌血症。 2. 创伤弧菌 引起的疾病最为严重，引起的菌血症和 伤口感染的病程进展非常快而致命。 3.溶藻弧菌 常见于外耳，中耳感染的病人，也常见于 伤口感染。本菌是耐盐的致病弧菌。 4. 河弧菌 从腹泻病人中分离到，世界各地均有引起 腹泻的报道。 5.弗尼斯弧菌 致病性尚不明确，从腹泻病人中分离到， 提示有—定的临床意义。