弧菌
弧菌
致病性
O1群致病物质
霍乱肠毒素（A亚单位 + 5个B亚单位） 鞭毛、菌毛及其他毒力因子
O139群致病物质
荚膜多糖 特殊LPS毒性决定簇
霍乱肠毒素（cholera toxin）
–强烈的致泻作用 –为聚合蛋白，由 1个A亚单
位和5个B亚单位以共价键结 合
• A1为毒性部分,A2为连接 部分
– 分离培养 pH8.0-9.0的碱性蛋白胨水增菌, 选择培养基硫柠胆蔗（TCBS），呈黄色菌落
– 血清学反应：玻片凝集实验 – 快速诊断法：荧光菌球法、协同凝集试验
防治原则
加强水源管理；培养良好个人卫生习惯 疫苗预防
O1群霍乱弧菌死菌苗 口服疫苗 治疗 及时补充液体和电解质，预防大量失水导致的低 血容量和酸中毒。 抗生素的使用
• B是结合部分，与小肠粘 膜上皮细胞膜受体（神经 节苷脂GMI）结合
霍乱肠毒素的作用机制
致病过程
霍乱弧菌
小肠粘膜表面
增殖
产生肠毒素
粘膜细胞分泌亢进、Na+、Cl-吸收抑制
剧烈腹泻、呕吐
血容量下降 循环衰竭
电解质紊乱 代谢性酸中毒
肾功能衰竭、休克、死亡
所致疾病----霍乱 烈性传染病,我国定为甲类法定传染病
①食物中毒（胃肠炎） ②浅表创伤感染和败血症
诊断
标本采集：患者粪便、肛拭或剩余食物 分离培养：SS琼脂平板或嗜盐菌选择平板 嗜盐性试验与生化反应 诊断血清进行鉴定
防治
治疗可用抗菌药物 严重病例需输液和补充电解质
掌握 霍乱肠毒素的性质和致病机制
熟悉 霍乱弧菌的微生物学检查
H抗 原
特异性高，分 139个血 清群
弧菌ppt课件
2 鞭毛、菌毛
鞭毛运动 有助于细菌穿过肠粘膜表面粘液层而接近肠壁上皮细胞
普通菌毛 是细菌定居于小肠所必须的因子
所致疾病
霍 乱 烈性肠道传染病，为我国的甲类法定传染病
传染源 患者及无症状感染者
传播途径
主要是通过污染的水源或食物经口摄入
临床表现
上吐下泻：剧烈腹泻和呕吐（米泔水样腹泻物）， 大量水分和电解质丧失 低容量性休克和肾衰竭（死亡率高达60%）
五、防治原则
控制传染源 切断传播途径 提高易感者免疫力
改善社区环境，加强水源管理， 疫苗预防接种
治疗霍乱的关键
及时补充液体和电解质
第二节 副溶血性弧菌 （V. parahemolyticus）
生物学特性
嗜盐（halophilic），3.5%NaCl
不耐热，不耐酸
神奈川现象（KP）鉴别致病菌
致病性
O139比O1严重
三、免疫性
感染霍乱弧菌后，机体可获得牢固免疫力 SIgA起主要作用 O1群的免疫对O139无保护作用
四、微生物学检查法
病人粪便，肛拭
（流行病学调查包括水样）
标本
直接镜检
涂片见G-性弧菌，鱼群状排列 悬滴法观察细菌呈穿梭样运动
分离培养
碱性蛋白胨水增菌 选择培养基为TCBS 玻片凝集反应
根据O抗原不同 现已有155个血清群
其中O1群、O139群引起霍乱
根据表型差异
O1群霍乱弧菌可分为两个生物型
古典生物型
El Tor生物型
抵抗力
El Tor生物型和其它非O1群霍乱弧菌在外环境中的生存力较古典型为强
本菌不耐酸，不耐热
致病物质
1．霍乱肠毒素choleratoxin :
弧菌的鉴定要点
弧菌是一类以弧状细菌形态为特征的微生物，其中最熟知的是弧菌属（Vibrio）和弧菌弯曲菌属（Campylobacter）。
下面是进行弧菌鉴定时的一些要点：形态特征：弧菌通常呈弧状或弯曲的形态，有时也会呈直杆状。
它们是革兰氏阴性菌，通常具有单一的极少鞭毛。
营养需求：弧菌属通常是好氧菌，需要氧气进行生长。
它们多数是嗜盐菌，喜欢在高盐浓度的环境中生长。
生理特征：弧菌通常是好氧发酵菌，能够利用多种碳源进行生长。
它们具有强烈的细胞外酶活性，可以产生一些特殊的酶，如溶血素、黏附素等。
生物化学试验：进行弧菌鉴定时，可以使用一系列生物化学试验，如氧化/发酵碳水化合物试验、氧化酶试验、羟基酸氧化试验等。
分子生物学方法：近年来，分子生物学方法在微生物鉴定中得到广泛应用。
可以使用PCR或基因测序等技术，通过特定基因的序列分析来确定是否为弧菌，并进一步确定其种属。
需要注意的是，弧菌具有多样性和复杂性，在鉴定时可能会遇到一些挑战。
因此，建议在进行弧菌鉴定时结合多种方法与技术，以提高准确性和可靠性。
致病性弧菌
古典生物型（Classical biotype） 埃尔托生物型（EL-Torbio-type）。
一、生物学性状
1、形态与染色
革兰染色阴性；弧性或逗点状；在病人“米泔水” 样便中呈“鱼群”样排列；
有一根单鞭毛，运动非常活泼，呈鱼群穿梭样或流 星状，
有菌毛和性菌毛，0139群有荚膜。
致病性弧菌
弧菌属（Vibrio）
弧菌属，为一大群菌体短小、弯曲成弧形的 革兰阴性菌
主要特点
有单鞭毛，运动活泼 培养要求为碱性环境 自然界广泛分布，以水中最多 只要有霍乱弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌
一、霍乱弧菌
霍乱主要表现为剧烈的呕吐、腹泻、失水，死亡率 甚高。属于国际检疫的烈性传染病。
诊断
标本采集：患者粪便、肛拭或剩余食物 分离培养：SS琼脂平板或嗜盐菌选择平板 嗜盐性试验与生化反应 诊断血清进行鉴定
防治
治疗可用抗菌药物 严重病例需输液和补充电解质
抵抗力
El Tor生物型和其它非01群霍乱弧菌 在外环境中的生存力较古典型为强
不耐酸，在正常胃酸中仅能存活4分钟 水中存活长，河水、井水、海水中1-3周 怕热，100℃1-2分钟死亡
致病物质
ToxR蛋白调控的ctxA、ctxB、tcp、zot、ace等基 因
不受ToxR蛋白调控的毒力因子基因hlyA和hap
生化反应：
过氧化氢酶、氧化酶阳性 发酵多种糖类，产酸不产气 还原亚硝酸盐，吲哚反应阳性 霍乱红反应阳性，不同生物型生化反应不同 （当培养在含硝酸盐及色氨酸的培养基中，产生靛基质与亚硝
酸盐，在浓硫酸存在时，生成红色，称为霍乱红反应）
抗原的构造与分群
有不耐热H抗原和耐热的O抗原。
弧菌
弧菌科种类
弧菌属 气单胞菌属 邻单胞菌属
2013-7-29
3
三个菌属的鉴别
试验
肌醇 粘丝试验 鸟氨酸 精氨酸
150 μgO/129
弧菌属
－ ＋/(－) ＋/－ ＋/－ S ＋ ＋/－
气单胞菌属 邻单胞菌属
－ － － ＋/－ R － － ＋ － ＋ ＋ S － －
4
TCBS生长 耐盐（7％）
16
霍乱流行病学特点（2）
霍乱发病季节在夏秋季，本市主要在5-10月份， 7-9月为发病高峰 人群普遍易感，在同源感染因素下易造成爆发和 流行
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霍乱预后及危害
霍乱能引起机体剧烈吐泻、失水、电介质紊乱以 致死亡
病死率高低与病情轻重以及医疗条件、抢救的时 效性有关。病情重、医疗条件差、抢救不及时病 死率可高达20%-50%
霍乱流行病学特点（1）
霍乱（O139与O1群霍乱），具有传染性强、传播 迅速、易出现暴发和流行特征；世界卫生组织将 其纳入霍乱范畴，我国将它列入法定报告的甲类 烈性传染病 霍乱弧菌主要通过水、食物、日常生活接触和苍 蝇传播，以食物传播为主，常可借助食用被霍乱 弧菌污染的食物而致病
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全国霍乱O139流行情况（1）
1992年在印度、孟加拉首次发现霍乱O139后， 短期内在这两个国家造成流行，发病人数高 达10多万例，并在几年间已传入亚洲、欧洲、 美洲等20多个国家 1993年传入我国后，即在新疆南部柯坪县发 生霍乱O139引起的暴发，报告病例数202例， 死亡4例
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弧菌科及检验
弧菌科共同特征
革兰阴性菌，短小弯曲弧状,无芽胞， 多数有鞭毛、有菌毛。 需氧兼性厌氧 具有一端单一鞭毛、运动迅速 氧化酶＋ 发酵葡萄糖产酸不产气,许多菌株生长 需要2%~3%氯化钠 弧菌科细菌广泛分布于自然界，以水中 最为多见。其中有一些种对人类致病。
微生物学沙门菌弧菌
微生物学沙门菌弧菌弧菌的简介弧菌是一类革兰氏阴性菌，属于海洋菌类，是寄生于鱼类，贝类等海洋生物体表或是海洋底层沉积物中的一种细菌。
弧菌通常具有单枝鞭毛，使其能够在水中活动。
其中，人体中最为常见的一种弧菌便是弧形菌(Vibrio cholerae)，它是霍乱病的病原体。
沙门菌的简介沙门菌是一类革兰氏阴性菌，属于Enterobacteriaceae科，通常寄生于肠道中的动物，引发了许多肠道感染。
沙门氏菌( Salmonella typhimurium) 是沙门菌中最为常见的一种，它常引起人类和动物的食物中毒症状。
沙门菌与弧菌的区别沙门菌与弧菌有很多区别，前者多在动植物肠道中寄生，而后者多生活在海洋中。
沙门菌通常侵入宿主细胞后在其中繁殖，并在细胞内形成小包泡，进而引起炎症反应，而弧菌则以单细胞的形式感染人体。
另外，沙门菌可引起腹泻、腹痛等肠胃症状，而弧菌则引起霍乱等疾病。
沙门菌与弧菌的共性沙门菌和弧菌也有一些共性，两者都是革兰氏阴性菌，具有相同的细胞形态和菌株生长特性，同时也都有一定的耐受性和适应性，能够在极端环境中存活和繁殖。
沙门菌弧菌对人类的影响沙门菌和弧菌对人类的影响非常大，它们不仅可以引起肠胃疾病，甚至还可以导致霍乱等严重疾病。
除此之外，它们还可以引起食物中毒，危害人类健康，对人民的健康造成了威胁。
为了预防和控制沙门菌和弧菌的疾病，我们应该保持个人卫生，并避免食用生的或未煮熟的食物。
在饮水方面，我们应该采用安全的饮用水源，避免通过污染的水或食物传播病原体。
对于已经感染上沙门菌或弧菌的患者，应该及时就诊，进行治疗和隔离，以防止传播给其他人。
沙门菌和弧菌是非常危险的细菌，对人类健康造成了严重的威胁，我们应该采取积极的措施来预防和控制它们的传播。
弧菌
弧菌一、弧菌是菌体短小，弯曲成弧形，尾部带一鞭毛的革兰氏阴性菌主要对虾致菌为：溶藻弧菌、鳗弧菌、副溶血弧菌、哈维氏弧菌、鳗弧菌、霍乱弧菌等弧菌适应温度10-35度，最适25度左右，弧菌在半咸水和海水中很多，但淡水中少。
这也是淡水养殖对虾，弧菌病发病率低，养殖成功率较高的原因。
弧菌的繁殖速度随着盐度的增加和温度的增加而加快。
二、在对虾养殖中，我们经常使用弧菌培养皿来测试弧菌的种类和数量。
这就有我们常说的黄弧菌、绿弧菌。
绿弧菌：副溶血弧菌、河流弧菌黄弧菌：溶藻弧菌、霍乱弧菌、哈维氏弧菌、鳗弧菌三、各种弧菌有什么危害呢？大名鼎鼎的EMS，很多研究表明，副溶血弧菌是凶手。
溶藻弧菌、副溶血弧菌、鳗弧菌会引起红腿红尾等初期症状，继而出现肠炎和肝发红、肿大或萎缩，严重的引起菌血症“红体病“。
感染哈维氏弧菌：频死或死亡的幼体会发荧光。
成体发病先是头胸部、腹部的腹面发荧光，严重时全身发光。
霍乱弧菌会引起瞎眼。
四、弧菌的感染途径主要是经口传播，其次是通过体表创伤和腮进入体内。
五、水中弧菌防控，主要靠三点。
1、消毒，比如说我们的“弧菌杀“泼水可以安全有效杀灭弧菌。
消毒作用快，是处理弧菌超标时使用的一种好方法。
2、蛭弧菌，以菌吃菌，预防用。
3、以菌制菌，研究表明，当环境中的弧菌数量超过理论阀值，但水体中总异养菌的数量达到弧菌数量的30倍以上，对虾仍是安全的。
定期泼”金牌芽孢“、”护肠活水多效菌“等有益菌，有益菌从数量上抑制弧菌发病。
六对虾体内弧菌的控制。
有3种方法。
1、控制水环的弧菌。
对虾的消化道与水体相同，水体的微生物组成直接影响对虾消化道的菌相组成。
所以水环境中弧菌数量少，就可以有效预防消化道弧菌感染。
这就是水体泼“弧菌杀“的主要意义。
2、常伴乳酸菌或”护肠活水多效菌“，使其在肠道形成优势种群，粘附在肠道表皮形成生物屏障，使弧菌不易粘到肠壁上，避免感染。
3、抗生素和中草药。
弧菌
一、生物学特性 (一)形态与染色 G-弧菌,逗点状,一根鞭毛, 有菌毛。病人粪便作悬滴标 本,可见"鱼群样穿梭"。无芽 胞,无荚膜。
(二)培养特性 生长较快,怕酸嗜碱。在pH8.5-9.5的碱 性蛋白胨水中生长良好。 (三)抵抗力 较弱。耐低温,耐碱,不耐酸。 (四)抗原结构 O(菌体)抗原:特异性高,有139个血清群 H(鞭毛)抗原:类属抗原 二、致病性与免疫性 (一)致病物质 1. 鞭毛与菌毛 2. 内毒素 3. 外毒素─霍乱肠毒素(蛋白质)
第10章 弧菌属(Vibriol)
霍乱弧菌(Vibrio cholerae)
真霍乱各次世界性大流行的年份及地区
───────────────────────────── 流行时期 流 行 地 区 大流行次数 (历时年数) 亚洲 非洲 欧洲 南美洲 北美洲 大洋洲 ───────────────────────────── 第1次 1817-23(6) +++ ++ ++ 第2次 1826-37(11) +++ +++ +++ +++ +++ ++ 第3次 1846-62(16) +++ +++ +++ +++ +++ 第4次 1864-75(11) +++ +++ +++ +++ +++ 第5次 1883-87(4) +++ +++ +++ +++ 第6次 1892-1925(33)+++ +++ ++ ++ ─────────────────────────────
弧菌超标标准
弧菌超标标准
弧菌超标标准因不同的环境和应用场景而异。
一般来说，弧菌超标是指弧菌数量超过了正常水平，可能会对环境和人体健康造成负面影响。
以下是弧菌超标标准的详细介绍：
海水养殖虾塘：弧菌数量应该低于103个/ml。
如果弧菌数量超过这个标准，可能会对虾类等水生生物造成病害，导致养殖失败和经济损失。
淡水养殖虾塘：弧菌数量应该低于104个/ml。
如果弧菌数量超过这个标准，可能会对淡水生物造成病害，导致养殖失败和经济损失。
人体健康：弧菌是一种常见的食源性致病菌，如果摄入过量可能会引起食物中毒、腹泻等疾病。
因此，在食品生产和加工过程中，需要控制弧菌的数量，确保食品安全。
环境污染：弧菌可以在水体中存活和繁殖，如果水体中弧菌数量超标，可能会对水生生物和人类健康造成威胁。
因此，在环境保护和水质监测中，需要检测和控制弧菌的数量。
总之，弧菌超标标准是根据不同的环境和应用场景而定的。
在养殖、食品加工、环保等领域中，需要严格控制弧菌的数量，以确保生产安全和人体健康。
弧菌的养殖方法和注意事项
弧菌的养殖方法和注意事项摘要：弧菌是一种广泛存在于自然界中的细菌，具有重要的科研和应用价值，因此越来越多的人开始关注其养殖方法和注意事项。
在文章中，我们将介绍弧菌的基本特点、养殖方法和养殖中需要注意的事项，帮助读者更好地了解和实施弧菌的养殖工作。
正文：1. 弧菌的基本特点弧菌是一类革兰氏阴性杆菌，具有弯曲的形态，是一种非性状易于观察的细菌。
弧菌广泛存在于海洋、淡水和土壤等环境中，对环境适应能力强，可以生存于广泛的温度范围下。
此外，弧菌在细胞周期中具有速度快、更新迅速等特点，也使其成为科研上重要的研究对象。
2. 弧菌的养殖方法（1）菌种选择：根据所需培养和研究目的，可以从自然环境或实验室中获取已知的弧菌种类，并根据需要进行筛选和鉴定。
（2）培养基配制：弧菌的培养基可以选择富含有机物质并提供丰富营养的培养基，如海水培养基、LB培养基等。
根据目的需要，可以添加抗生素等筛选物质。
（3）菌种接种：将选定的弧菌菌种进行接种，可以选择用接种环、接种针等具体操作。
接种时要注意无菌操作和避免交叉污染。
（4）培养条件设置：弧菌的培养一般需要在适宜的温度、酸碱度和氧气条件下进行。
常见的培养温度为25-37摄氏度，pH值为6-8范围内，菌液中需充分供氧。
3. 弧菌养殖的注意事项（1）严格控制实验室卫生：在进行弧菌养殖工作时，保持实验室的清洁和无菌是非常重要的。
定期进行清洁消毒工作，避免培养器具、培养基等受到污染。
（2）细菌筛选和鉴定：在选取和使用弧菌菌种时，要经过筛选和鉴定，确保所使用的菌种纯净以及目的明确。
（3）控制培养条件：弧菌的培养条件包括温度、酸碱度和湿度等多个方面，根据不同的菌种和目的需求，合理控制这些因素可有效提高细菌培养效果。
（4）注意培养液除菌处理：在培养弧菌时，需要将培养液进行除菌处理，以避免杂菌的污染，破坏实验结果的可靠性。
（5）安全操作：在实施弧菌养殖过程中，要遵守实验室、生物安全级别和安全操作手册的规定，保证自身和他人的安全。
弧菌属_精品文档
二、致病性与免疫性
致病物质
鞭毛、菌毛及其他毒力因子：
acf (accessory colonization factor):编码粘附素 tcpA（toxin coregulated pilus A）:编码菌毛蛋白 hlyA (hemolytic-cytolytic A):溶血-细胞毒性蛋白 hap (hemagglutinin/protease): 血凝素/蛋白酶
霍乱肠毒素（cholerae enterotoxin, CET）
已知致泄毒素中最为强烈的毒素
ctxA
ctxB
A单位 B单位
毒性 单位
结合 单位
GM1 神 经节苷脂
所致疾病
甲类法定传染病
霍乱
人是霍乱弧菌唯一易感宿主
传染源 患者和带菌者
感染
传染途径 粪-口途径
剂量
症状：古典型 2-3d 潜伏期 剧烈腹泻、 呕吐，无腹痛。排便次数数十次。严重时 每小时失水1L，米泔水样排泄物，
弧菌属
弧菌属（Vibrio）
细菌是一大群菌体短小，弯曲成弧形的 革兰阴性菌
霍乱弧菌（V.cholerae）
引起烈性传染病霍乱
1817—1923 六次大流行，遍 布亚、非、欧、美、澳，由古典 生物型引起
1961---至今 的第七次世界 大流行，波及五大洲，140多个 多国家，400万人以上，由ElTor生物型引起
O139群更严重
治疗：及时大量补充液体和电解质
带菌者：病愈后病菌存在于胆囊中
霍 乱 病 人 粪“便 米及 泔霍 水乱 样患 ”儿
免疫性
病后获得牢固免疫力
抗肠毒素抗体（B单位：IgM、 IgG）
局部抗菌抗体（O抗原）
sIgA 霍乱保护性免疫的基础
弧菌属
简介
简介
弧菌属（Vibrio）为弧菌科的1属。本属细菌种类多，分布广泛，尤其是水中最为常见。
特征
特征
形状短小，约0.5×(1～5)微米，因弯曲如弧而得名。分散排列，偶尔互相连接成S状或螺旋状。革兰氏染 色阴性，菌体一端有单鞭毛，运动活泼。无芽胞，无荚膜。需氧或兼性厌氧，分解葡萄糖，产酸不产气，氧化酶 阳性，赖氨酸脱羧酶阳性，精氨酸水解酶阴性，嗜碱，耐盐，不耐酸。DNA中的G+C克分子含量为40～50%。
古典生物型和埃尔托型属于O:1血清群,这两型都能引起人类较严重的病害，并易酿成流行。在自然情况下， 人类是霍乱弧菌的唯一易感者。主要通过污染的水源或食物，经口传染。霍乱弧菌到达小肠后，在碱性肠液内迅 速繁殖，并产生大量强烈的霍乱肠毒素，作用于小肠粘膜细胞，引起肠液过度分泌，病人上吐下泻，排出大量米 泔样排泄物、造成严重脱水、肌肉痉挛、周围循环衰竭等症状。病后可获得一定的免疫力。预防方法是做好粪便 和污水的处理以及饮水和食品的卫生工作，加强进出口的检疫，严格隔离患者，对易感人群进行霍乱菌苗预防接 种。预防霍乱的人工自动免疫制剂有待进一步研制提高。治疗时可补充液体和电解质，使用四环素等抗生素。
举例
霍乱弧菌
副溶血性弧菌
霍乱弧菌
霍乱的病原菌。从病人新分离出的病菌形态比较典型，菌体大小为(0.4～0.6)×(1.5～3)微米。人工培养 一段时间可变成杆状。对热和消毒剂耐力不大，对氯敏感，55℃仅能生存15分钟，干燥后易死亡，对酸抵抗力特 低。耐碱,常采用pH8.4碱性蛋白胨水或碱性平板作为选择培养基。DNA中的G+C克分子含量为45～49%。
弧菌属
为弧菌科的1属
01 简介
03 致病性 05 举例
目录
弧菌
1微生物学——弧菌弧菌(Vibrio)⏹ 霍乱弧菌⏹ 副溶血性弧菌霍乱弧菌(Vibrio cholerae)生物学形状⏹ 形态：☐ 弧形或逗点状，呈“鱼群”状排列。
芽孢(-)，菌毛(+)，鞭毛(+，单)。
⏹ 染色性：☐ 革兰氏阴性⏹ 培养特性：☐ 营养要求：低，兼性厌氧，适合在碱性环境下生长。
☐ 菌落： 圆形、透明、无色、扁平菌落，在TCBS 培养基上为黄色。
⏹ 生化反应：发酵葡萄糖、甘露醇、蔗糖、产酸不产气。
⏹ 抗原构造☐ H 抗原：弧菌属共有抗原。
☐ O 抗原：分群依据，分为155个血清群，引起霍乱的是O1型和O139型。
⏹ 古典生物型⏹ El Tor 型⏹ 抵抗力☐ 对热、酸、消毒剂敏感。
☐ El Tor 生物型生存能力较强，水中可存活1~3周。
☐ 对氯敏感，可用漂白粉处理患者排泄物。
致病性⏹ 致病物质：☐ 鞭毛☐ 菌毛 ☐ 多糖假膜☐ LPS 决定因子☐ 肠毒素：⏹ 腹泻毒素中毒性最强的毒素。
⏹ 由1个A 亚单位和5个B 亚单位构成。
所致疾病⏹ 所致疾病：霍乱，人类唯一易感。
⏹ 特征：米泔水样便。
摄入大量细菌→多数细菌被胃酸杀灭，少数到达小肠→利用鞭毛穿过肠壁粘液层，并黏附定植→繁殖并产生肠毒素→机体大量损失水、电解质→循环衰竭、电解质紊乱、代谢性酸中毒、肾功能衰竭、休克、死亡免疫性⏹ 特异性体液免疫为主。
⏹ 感染后可获得牢固免疫力。
⏹ 各群之间无交叉免疫。
黏附、抗吞噬微生物学检查⏹原则：☐烈性传染病、及时准确诊断并上报。
⏹标本：☐及时接种，保存。
⏹直接镜检：☐图片：革兰氏阴性弧菌。
☐悬滴法：细菌呈穿梭样运动。
⏹分离培养鉴定：☐确定血清型。
防治原则⏹及时隔离病人，彻底消除呕吐物和排泄物。
⏹保护水源。
⏹疫苗预防。
⏹大量补充液体、纠正电解质紊乱，应用敏感抗生素。
副溶血性弧菌(V. parahemolyticus)生物学性状⏹形态：☐弧形、杆状、丝状，鞭毛(+)。
⏹染色性：☐革兰氏阴性⏹培养特性：☐嗜盐，无盐不能生长。
弧菌科及检验
最适生长温度为30~37℃ 在碱性胨水中经6~9h增菌可形成菌膜
TCBS琼脂平板: 0.5~2.0mm大小，蔗糖不发酵而呈蓝绿色 菌落
一般血平板: 不溶血或只产生α溶血 从腹泻患者中分离到旳菌株95%以上在我妻琼脂上产生β
2024/9/22
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O139霍乱弧菌病原体起源
EVC流行株O抗原变异 ? 非O1霍乱弧菌获产毒基因 ?
2024/9/22
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全国霍乱O139流行情况（1）
1992年在印度、孟加拉首次发觉霍乱O139后， 短期内在这两个国家造成流行，发病人数高 达10多万例，并在几年间已传入亚洲、欧洲、 美洲等20多种国家
霍乱能引起机体剧烈吐泻、失水、电介质紊乱以 致死亡
病死率高下与病情轻重以及医疗条件、急救旳时 效性有关。病情重、医疗条件差、急救不及时病 死率可高达20%-50%
2024/9/22
18
霍乱预后及危害
霍乱属烈性传染病，一旦暴发和流行，累及 面广，病死率高，对人民身体健康以及国民 生活、生产秩序、社会稳定、投资环境、对 外贸易等造成直接影响
2024/9/22
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检验措施－显微镜检验
涂片染色： -标本直接涂片革兰染色，注意形态、排列
动力观察： -压滴法或暗视野镜检，注意运动方式
制动试验： -诊疗血清与菌体结合，动力消失
2024/9/22
26
形态染色
革兰阴性 弧形或逗点状 单鞭毛，运动呈“穿梭样”或“流星样” 无芽胞，无荚膜（O139有薄旳荚膜） 在新鲜粪便中成“鱼群样”排列
2024/9/22
35
鉴定
弧菌
一、生物学性状
形态和染色
1.大小：0.5～0.8×1.5～3μm。 2.形态：弯曲成弧形或逗点状。 3.结构：有菌毛，特别是菌体一端有单鞭 毛，使细菌运动活泼(病人粪便作悬滴标 本,可见鱼群样穿梭 )，部分菌株(例如 O139群)有荚膜 4.染色：革兰氏阴性菌。 形态学特点为逗点状、运动活泼的革兰 氏阴性菌。
一、生物学性状
抵抗力
1.对理化因素抵抗力弱：以1份漂白粉和4 份水比例处理患者排泄物或呕吐物1小时， 可杀死霍乱弧菌。 2.水环境：存活2周左右，与疾病传播有关。 自来水加0.5ppm氯, 15分钟能杀死霍乱 弧菌。 3.抗生素敏感性：对氯霉素、强力霉素等 敏感，注意耐药性。
二、致病性
致病物质
霍乱肠毒素 、鞭毛、菌毛。
霍乱肠毒素机制
• 霍乱肠毒素
B 亚单位 A2亚单位 亚单位 A1亚单位 亚单位
结合部分
与B亚单位结合 亚单位结合
小肠上皮细胞GM1神经节苷脂 受体：小肠上皮细胞 神经节苷脂
毒性部分
活化的A1 活化的
胞内 腺苷环化酶活化
ATP
cAMP 分泌： 分泌：Na+、K+、H2O 导致：严重腹泻、呕吐、脱水。 导致：严重腹泻、呕吐、脱水。
3.治疗措施： 3.治疗措施： 治疗措施
• 及时补充水份、电解质(对症处理)是抢救霍乱病人的关键 • 敏感抗生素治疗(注意耐药性) • 及时隔离病人。
第二节 副溶血性弧菌
副溶血性弧菌(V.parahemolyticus)的生 物学性状类似霍乱弧菌，但与霍乱弧菌比 较，它的一个显著特点是嗜盐性，在NaCl 浓度较高(3%-4%左右)的环境中才能生长繁 殖 ，致病性副溶血性弧菌多出现β溶血 (神奈川现象)，食入烹饪不当的海产品或 腌制品(污染副溶血性弧菌)，可导致食物 中毒(急性胃肠炎)。
弧菌
霍乱在我国的流行情况
第一次世界大流行期间，霍乱于1820年首次 第一次世界大流行期间， 传入我国。其后历次大流行，我国均遭侵袭。 传入我国。其后历次大流行，我国均遭侵袭。 在1820~1948年的近130年中，大小流行几近百 年中， 次。受染地区除西藏外全国各省区几乎均受波 及。第六次世界大流行后，霍乱又局限在印度 第六次世界大流行后， 次大陆，并经常向邻近国家传播。1924~1948 次大陆，并经常向邻近国家传播。 年期间，我国几乎每年均有霍乱发生，有些年 年期间，我国几乎每年均有霍乱发生， 份报告的病人数达数万至10余万，病死率也常 余万， 高达30％以上。 以上。
霍
乱
弧 菌
(V.cholera)
流行病学 O-139型霍乱弧菌：1992年10月在印度、 型霍乱弧菌： 月在印度、 孟加拉国造成大流行，1993年5月传入我国 孟加拉国造成大流行， 新疆南部柯坪县，引起 400多人发病。 新疆南部柯坪县， 多人发病。
霍乱流行史
自古以来，印度恒河三角洲是霍乱的地方性流 自古以来， 行区。19世纪初，由于交通日益发达，在通商、 行区。 世纪初，由于交通日益发达，在通商、 朝圣和战争等因素的影响下，霍乱开始从印度 朝圣和战争等因素的影响下， 向世界各地传播。在历史上，霍乱在印度和东 向世界各地传播。在历史上， 南亚常有发生。但在1817年，一种特别严重和 南亚常有发生。 致命的霍乱病在印度加尔各答地区突然流行。 致命的霍乱病在印度加尔各答地区突然流行。 在此后的15年中，霍乱向西传到世界其他大多 年中， 数地方。与较早发生的黑死病相似，它是通过 数地方。与较早发生的黑死病相似， 旅行者、商人和水手播出去的。 旅行者、商人和水手播出去的。
弧
共性： 共性：
菌
总结弧菌特点
总结弧菌特点弧菌的概述弧菌（Vibrio）是一类革兰氏阴性的细菌，属于弧形菌科（Vibrionaceae）。
弧菌普遍存在于海水、淡水和土壤中，也可在人和动物的肠道中找到。
弧菌具有多样的物种和亚种，其中一些物种对人类和动物的健康具有重要的影响。
弧菌的形态与分类弧菌细胞呈弯曲的弧形，故得名弧菌。
它们是非芽孢杆菌，具有单极的鞭毛，能够进行主动游动。
根据不同的分类方法，目前已知的弧菌物种约有100个。
根据它们在不同环境中的生长特点，弧菌可以分为两大类：水生弧菌和肠道弧菌。
水生弧菌水生弧菌广泛存在于海洋和淡水中，它们是海洋中最重要的异养无机物分解细菌之一，对海洋生态系统的稳定性起着重要的作用。
水生弧菌主要通过鞭毛的摆动进行游动，同时也能够进行被动漂移。
它们能够利用各种碳源和氮源进行生长，从而在海洋环境中发挥重要的生态功能。
肠道弧菌肠道弧菌是弧菌中的一类重要物种，主要存在于鱼类和其他海洋生物的消化道中。
肠道弧菌可以通过食物链在海洋生态系统中进行传播，对海洋生物的健康具有直接影响。
与水生弧菌相比，肠道弧菌对环境条件更加苛刻，更依赖于寄主生物提供的营养和生存环境。
肠道弧菌的感染常常导致寄主生物的消化系统疾病发生，对养殖业造成严重的经济损失。
弧菌的生物学特性营养要求弧菌为需氧性或微需氧性菌株，大多数物种都要求较高的盐度（0.5%-8% NaCl）和适宜的温度（20-37℃）。
弧菌多数属于异或腐生菌，可以利用有机物、无机物或两者兼用进行营养。
它们能够分泌多种外源酶，降解脂肪、蛋白质、多糖等复杂有机物质。
毒力因子弧菌具有多种毒力因子，使其成为潜在的病原菌。
其中，弧菌外毒素的产生对其致病力起着重要的作用。
弧菌外毒素主要包括肠毒素、溶血毒素和神经毒素等。
肠毒素主要引起弧菌感染相关的腹泻症状，如胃肠炎、急性胃肠炎等。
溶血毒素可以破坏寄主生物的红细胞，导致贫血等严重后果。
神经毒素则影响神经系统的正常功能，导致肌肉麻痹等症状。
第十章 弧菌
五、防治原则
改善社区环境，加强水源管理；培养良好个人卫生习惯，不生食贝壳类海产品等是预防霍乱弧菌感染和流行的重要措施。
疫苗预防长期以来使用O1群霍乱弧菌死菌苗肌肉注射，虽可增强人群的特异性免疫力，但保护力仅为50%左右，且血清抗体持续时间较短，仅为3~6个月。在认识到肠道局部免疫对霍乱预防起主要作用后，目前霍乱疫苗预防的重点已转至研制口服菌苗的方向上，包括B亚单位-全菌灭活口服疫苗、基因工程减毒活菌苗（用基因工程技术去除O1群霍乱弧菌野生株DNA中大部分毒力基因的活疫苗）、带有霍乱弧菌几个主要保护性抗原的基因工程疫苗等。其中前两种疫苗已进行过大规模人群试验，对其有效保护率和保护时间正在进行评估，且在某些国家已获准使用。0139尚无预防性疫苗，候选菌苗正在研制中，思路是制成包括预防O1群和O139群霍乱弧菌感染的二价菌苗。
二、 致病性
致病物质 霍乱弧菌的致病物质涉及到染色体上多个基因，它们主要包括由ToxR蛋白调控的ctxA、ctxB、tcp、zot、ace等基因，另外还有二个不受ToxR蛋白调控的毒力因子基因hlyA和hap。
1．霍乱肠毒素 是目前已知的致泻毒素中最为强烈的毒素，是肠毒素的典型代表。由一个A亚单位（分子量为27.2kDa）和5个相同的B亚单位（每个亚单位分子量为11.7kDa）构成的一个热不稳定性多聚体蛋白，分别由结构基因ctx（cholera toxin）A和ctxB编码。ctxAB操纵子位于染色体上称作核心区的部位，核心区的两端为重复序列（RS1）。霍乱弧菌古典生物型染色体上广泛散布着以2拷贝ctx为一组的CTX单元，。El Tor生物型染色体上CTX则为多拷贝随机分布。B亚单位可与小肠粘膜上皮细胞GM1神经节苷脂受体结合，介导A亚单位进入细胞，A亚单位在发挥毒性作用前需经蛋白酶作用裂解为A1和A2两条多肽。A1作为腺苷二磷酸核糖基转移酶可使NAD（辅酶I）上的腺苷二磷酸核糖转移到G蛋白上，称GS，GS的活化可使细胞内cAMP水平升高，主动分泌Na+、K+、HCO3—和水，导致严重的腹泻与呕吐。
弧菌爆发的几个条件
弧菌爆发的几个条件
弧菌是一种存在于海洋、河流和湖泊中的细菌，它们可以引起人体的感染和食物中毒。
以下是弧菌爆发的几个条件：
1. 温度：弧菌能够在较高温度下繁殖，通常在15-30摄氏度之间繁殖最为迅速。
如果水温过高，弧菌的数量会增加，导致感染的风险增加。
2. 盐度：弧菌是一种嗜盐菌，它们能够在高盐度的环境中存活并繁殖。
因此，海水中弧菌的数量通常比淡水中的要高。
3. 暴雨：弧菌可以通过河流和其他水体进入食物链。
暴雨和洪水可以导致污染物质被冲入水中，从而增加弧菌的数量。
4. 环境：弧菌通常生长在海洋、河流和湖泊等水体中，如果这些水体中含有过多的有机物、营养物质和细菌等污染物，那么弧菌的数量会增加，从而增加感染的风险。
5. 人类活动：人类活动也会增加弧菌感染的风险。
例如，渔民在处理鱼类时可能会将弧菌污染物质释放到海洋中，从而增加了弧菌的数量。
此外，游泳、潜水和其他水上活动也可能导致弧菌感染。
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分 类
WHO腹泻控制中心将该菌属为四类
O-1群霍乱弧菌
不典型O-1群霍乱弧菌
非O-1群霍乱弧菌
其他弧菌
致病性
致病物质
定居因子：菌毛（acf、tcpA基因）、鞭 毛、溶血溶细胞蛋白（hlyA基因）、血 凝素（hap基因）、荚膜等 霍乱肠毒素（c为强烈的致泻毒素。
鉴定
根据霍或乱弧菌在各种选择培养基上的特点， 挑选可疑菌落进行鉴定。鉴定以血清学（玻 片凝集）为主，结合形态学、生化反应作出 判断。
鉴定
1） 玻片凝集试验：从分离培养基上挑取可疑菌落于霍乱弧菌 多价诊断血清作玻片凝集试验。诊断血清应稀释成1:321:64的效价使用，立即出现凝集者为阳性，同时设生理盐水
和阳性细菌株对照。
2） 形态学检查：取纯培养物涂片革兰氏染色，观察菌体形态 及染色性。用悬滴法或半固体穿刺法检测动力。
鉴定
3） 生化反应：霍乱弧菌氧化酶试验、靛基质试验、粘丝试验 和霍乱红试验均阳性。 ①粘丝试验：用于测定霍乱弧菌形成粘丝的特性。将0.5％去氧 胆酸钠水溶液于霍乱弧菌混匀制成浓厚菌液，1min内悬液由 混变清，并变得粘稠，以接种环挑取时可以拉出丝来。霍乱 弧菌古典生物型和El Tor生物型均呈阳性。
鉴定
② 霍乱红试验：出现蔷薇色，为霍乱红试验阳性。由
于霍乱弧菌和其他弧菌均有此种反应，故无特异性。 霍乱弧菌含有色氨酸酶，能分解色氨酸产生吲哚，霍 乱弧菌液能还原硝酸盐为亚硝酸盐，因此当霍乱弧菌 培养在含有硝酸盐成分的蛋白胨水中，所产生的亚硝 酸盐可与吲哚结合成亚硝酸吲哚，滴加浓硫酸即可出 现蔷薇色，称为霍乱红试验阳性）
免 疫 力
病后免疫力不强，可重复感染。
生物学性状
1、形态：弧状、杆状、丝状等多形性，G-，单端单鞭毛
2、培养特性：营养要求不高，嗜盐，在含3.5% Nacl的培养基 中生长良好，超过8%不生长，PH7.0-9.5，最适PH7.7-8.0在 TCBS平板上形成2~3mm的绿色菌落,嗜盐选择平板上，菌落较 大圆形隆起，半透明或不透明的菌落。SS上蜡滴状，有辛辣味。 3.生化反应：氧化酶阳性；发酵葡萄糖、麦芽糖，不发酵乳糖、 蔗糖；吲哚、赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶和硝酸盐还原试验 均阳性；耐高盐培养基；神奈川（+）。
鉴定
⒊
理盐水一滴，取被检菌18-24h培养物少许在盐 水中制成浓厚菌悬液，然后加一滴2.5％鸡红 细胞悬液，充分混匀，
鸡红细胞凝集试验：在玻片上滴加生
1min内出现 凝集者为阳 性，红细胞 呈均匀分散 者为阴性。 El Tor生物 型为阳性， 古典型为阴 性。
鉴定要点：
确诊O1群霍乱弧菌必须具备的条件：
可疑菌落纯培养
KP或毒素测定 KP： 神奈川现象 菌种鉴定（生化、血清学）
微生物检验
2.标本采集：及时接种或用碱性胨水或卡-布培养基运送。 3.分离培养与鉴定： （1）增菌培养： （2）分离培养： （3）鉴定：
诊断与防治
标本：粪便、肛拭、剩余食物或创面材 治疗：庆大霉素、SMZ等
②生物型别的鉴定：目前，两型主要依靠第Ⅳ组霍
乱噬菌体裂解试验进行鉴别，并辅以多粘菌素敏感试 验、鸡红细胞凝集试验、V－P试验和溶血试验。
鉴定
⒈ 第Ⅳ组霍乱噬菌体裂解试验：
第Ⅳ组霍乱噬菌体常规稀释液（106/ml）一般仅裂 解古典型，而不裂解El Tor型。
⒉ 多粘菌素B敏感试验：
取被检菌2-3h肉汤培养物点种到含药营养琼脂平板 上（多粘菌素B50U／ml）,37℃培养24h，El Tor生物 型生长，而古典型敏感。
所致疾病：霍乱（2号病）
传染源：病人和带菌者、 污染的水源或食物 传播途径：粪—口
血容量减少性休克
酸中毒
呕吐 剧烈腹泻：米泔水样便 肌肉痉挛
致病性
免 疫 性
病后产生牢固免疫，肠道分泌型IgA为主要的中和抗体。
生物学性状
形态与染色
形状：弧形或逗点状
排列：“鱼群状”
染色性：G 单端单鞭毛 有些菌株有荚膜 活菌悬滴观察，运动极为活泼， 呈流星穿梭运动。
郭庆合
概述
弧菌科（Vibrionaseae）包括一群氧化酶阳 性、具有端极鞭毛、动力阳性的细菌，有4个 菌属，其中，弧菌属是一群氧化酶阳性，发 酵葡萄糖，对弧菌抑制剂O/129（二氨基二异 丙基喋啶）敏感的细菌。
弧菌属与类似菌属的鉴别要点
试验 弧菌属 O/129敏感 S 肌醇 － 明胶液化 + 甘露醇 + 精氨酸双水解酶 － 赖氨酸脱羧酶 + 气单胞菌属 R － + + + + 邻单胞菌属 S + － － + +
1、涂片为革兰氏阴性弧菌或杆菌； 2、TCBS等选择培养基上典型的菌落特征； 3、动力阳性； 4、O1群霍乱弧菌诊断血清凝集试验阳性。
防 治 原 则
保护水源、做好粪便的管理、食品卫生工作。
接种疫苗：霍乱弧菌死菌苗、类毒素、新疫苗
（减毒重组活疫苗、菌苗加类毒素混合苗、霍乱
-伤寒杂交菌苗等）。
及时和适当的补充液体和电解质，应用抗菌药物 （链霉素、氯霉素、强力霉素、磺胺类药物等）
③ O/129敏感试验：将O/129（2，4二氨基－6，7－二
异丙基喋啶）药敏纸片（10－150μ g）贴在接种有待 测菌的琼脂平板上作纸片扩散试验，凡药物纸片周围 出现抑菌环者为敏感。
鉴定
4） 霍乱弧菌的分型鉴别试验：
①血清分型：用小川型和稻叶型单价诊断血清作玻片
凝集。与小川型血清凝集而与稻叶型血清不凝集者为 小川型，反之为稻叶型。在两个单价血清中均有明显 凝集者为彦岛型。
V.parahemolyticus
嗜盐性细菌 分布于近海岸的海水、海底沉积物和鱼类、 贝类等海产品中 海产品食物中毒
致
致病物质
病
性
耐热性溶血毒素：与动物红细胞膜表面的神经节脂受体 结合而致溶血。 不耐热溶血毒素
所致疾病：食物中毒、创伤感染、败血症
传染源：海产品或盐腌渍品
传播途径：经口
临床症状：腹痛、腹泻、呕吐与发热、水样便
掌握：霍乱弧菌的生物学性状、微生物 学检验 了解：弧菌的种类。
概述
弧菌属(Vibrio)广泛分布于自然界，尤以水中 为多，有100多种。主要致病菌为霍乱弧菌和 副溶血弧菌（致病性嗜盐菌）。前者引起霍 乱；后者引起食物中毒。
是一大群菌体短小、弯曲成弧形的革兰 氏阴性细菌。 分布广泛，以水中为最多。 特点：（1）在碱性培养基中生长良好 （2）单端单鞭毛，运动活泼 （3）氧化酶（+）
生物学性状
神奈川（kanagawa)试验：对人、兔等动物 红细胞溶解，对马红细胞不溶血为（+）。是 鉴定致病性与非致病性菌株的一项重要指标。 4、抵抗力：嗜盐，不耐酸
微生物检验
副溶血弧菌检验程序 标本 直接接种TCBS 嗜盐菌选择性平板 4%NaCl胨水培养基 TCBS 嗜盐菌选择性平板
抗原结构分型、变异性
O抗原：具群特异性，155个血清群 O-1群 稻叶型 小川型
生物学 性状
彦岛型 非O-1群 霍乱弧菌（O2—138）亦称不凝集弧菌 O139群 霍乱弧菌 H抗原：不耐热，无特异性 变异性：形状变异、毒力变异
培养特性与生化反应
生物学 性状
营养要求不高：普通琼脂生长良好，16-44℃均可生长 耐硷不耐酸，在pH8.8～9.0的碱性培养基（硷性蛋白胨水 或平板）中生长良好。 典型菌落：选择培养基TCBS上菌落黄色，4号琼脂平板菌 落中心为褐色，血平板有的菌株可形成溶血环 生化反应：氧化酶（+）蔗糖（+）动力（+），赖氨酸、 鸟氨酸脱羧酶（+）精双（-），无盐生长，高盐不长
霍乱弧菌在TCBS平板上的菌落
抵 抗 力
较强，水中较长的存活时间。 耐硷不耐酸。 对漂白粉敏感，对热敏感。
生物学 性状
检验程序
微生物学检查法
霍乱是烈性传染病，对首例病人的确诊应快速、准 确，并及时作疫情报告。 标本采集：尽早、及时接种用碱性蛋白胨水 或卡-布培养基运送（专人） 直接镜检：有无鱼群样排列的弧菌 分离培养：碱性培养基、TCBS、4号琼脂平板 快速诊断 荧光球试验 PCR