2016届植物的克隆与动物克隆概要

如何界定原代培养和传代培养？为什么要传代培养？
细胞悬 浮液
原代培养
传代培养
转入特殊培养液 首次培养
为什么？
换瓶后培养
P30
P28
2、培养过程
从动物胚胎或幼龄动物组织 切片中取小片样品
机械消化或胰酶消化 （胰蛋白酶） 单个细胞悬浮液 转入特殊培养液 原代培养
原代培养物 选择或纯化 细胞株
分装到多个卡氏瓶中 传代培养 细胞系
第二节 植物的克隆
1．简述植物细胞全能性的含义。 2．简述植物组织培养的程序。 3．举例说明植物细胞全能性的体现。 教学要求 4．简述植物细胞培养和器官培养的方法和意义。 5．简述植物原生质体获得的方法及植物细胞工程 的概念、操作过程和应用。 6．简述多途径的植物克隆实践。 1．“植物克隆的发展”不作要求。 说明 2．“小资料：植物体细胞杂交”只作为背景资料 供阅读，不要求记忆或掌握具体的内容。
选择或纯化
CO2培养箱中 保温培养
细胞株
原代培养
细胞系、细胞株
原代培养物
细胞系：可连续传代的细胞
传
原代培养物在首次传代时就
代
成为细胞系。
培
能连续
不能连续
养
培养的
培养的
连续细胞系 有限细胞系
（异倍体核型细胞） （二倍体细胞）
（ （12…） ）…恶 保…性留细接…胞触系抑，制异，体不致致瘤癌性
（遗传物质改变，不死性）
3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ 动物细胞分裂生长到互相接触时，细胞就会停止分裂
增殖，出现接触抑制。
动物细胞培养：体外培养分散后的单个细胞，
使其得以生存，并保持生命活动现象。像体内一 样呈现一定的组织特性。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
组 织 培 养
动物组织培养：体外培养动物组织，使其维持
生活状态或生长特性。可以伴随组织分化，但最 终成为细胞培养。
2、细胞株： 通过一定的选择或纯化方法，从原代培养物或
细胞系中获得的具有特殊性质的细胞系。 细胞株一般具有恒定的染色体组型、同功酶类型、
病毒敏感性和生化特性等。
有限细胞株：传代次数有限的细胞株
连续细胞株：可连续多次传代的细胞株。
细胞系：泛指可传代的细胞。 细胞株: 具有特殊性质的细胞系。
植物组织培养和动物细胞培养的比 较
真正开始 1907美国科学家将一部分蛙胚神经管培养在蛙淋巴液 中，成功看到了神经纤维末端的阿米巴运动，解决了 神经纤维起源问题，并创立了悬浮培养法
1943科学家在致癌物20-甲基胆蒽的诱导下培养小鼠结缔 组织，获得了能在小鼠体内生长肉瘤的L-细胞系
1951通过对黑人妇女的宫颈癌组织的体外连续培养， 获得肿瘤细胞系即不死细胞系-海拉细胞系
生长、分裂乃至接触抑制和有规律的衰老、死亡等 P28
（2）动物细胞的培养过程
取动物胚胎 或幼龄动物器官
和组织
剪碎组织
胰蛋白酶处理
单个细胞
细胞培养
思考
1、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动 物细胞培养材料？ 因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强
2、为什么要用胰蛋白酶对取出的动物组织进行处理？ 动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质 可以使动物组织细胞间的胶原纤维和细胞外的其他成 分酶解，获得单个细胞 P29
5%CO2） 适宜的渗透压等
2、培养过程
2、培养过程
从动物胚胎或幼龄动物组织 切片中取小片样品
机械消化或胰酶消化 （胰蛋白酶） 单个细胞悬浮液 转入特殊培养液 原代培养
原代培养物
分装到多个卡氏瓶中 传代培养
二氧化碳培养箱
通过在培养箱内模拟 形成一个类似细胞或组 织在生物体内的生长环 境，如恒定的pH值 （7.2-7.4）、稳定的温 度（37°C）、较高的相 对CO湿2培度养（箱9中5%）、稳定 的保CO温2培水养平（5%），来 对细胞或组织进行体外 培养的一种装置。
比较项目 原理
培养基性质
植物组织培养 动物细胞培养 细胞的全能性 细胞增殖
固体培养基 液体培养基
培养基特有成分 蔗糖 植物激素 葡萄糖 动物血清
培养结果 培养目的
植物个体 细胞株、细胞系
快速繁殖、
获得细胞或细
培育无病毒植株 胞分泌蛋白
4．简述动物的克隆培养法。
1、定义：
P30
把一个单细胞从群体中分离出来单独培养，使 之繁衍成一个新的细胞群体的技术
组织培养工作进 入了全新阶段
3．描述细胞系及细胞株的含义。
动物细胞培养过程
1、培养条件
（1）含全部营养物质的培养液
成分：无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生素和动物血清等
（2）适宜的环境条件
无菌、无毒环境：加抗生素，定期更换培养液 适宜的温度和pH值：温度：36.5±0.5 ℃
pH值：7.2-7.4 适宜的气体环境：O2和CO2（95%空气和
动物器官培养：体外培养动物器官原基、部分
或整个器官，使之得以保存、生长。保持器官的
结构、功能及分化能力。
P28
2．说出动物组织培养技术的发展历程。
P28—29
1885年鸡神经板在生理盐水中培养成活组织培养一词诞生
萌芽 1903年 皮肤及白细胞培养与腹水和血清中，结果细胞的 成活期达1个月，并且看到细胞分裂
动物克隆的技术基础是？
动物的细胞和组织培养
为什么要进行动物细胞培养？ P27
第三节 动物的克隆
教学要求 说明
1．简述动物细胞、组织培养。 2．说出动物组织培养技术的发展历程。 3．描述细胞系及细胞株的含义。 4．简述动物的克隆培养法。 5．描述动物细胞全能性的表现程度，说出动物难以 克隆的原因。 6．简述动物的细胞融合技术及应用。 7．简述动物细胞核移植的概念和核移植的程序。 8．列举动物细胞培养与动物细胞核移植的应用和发 展前景。
愈伤组织
离体的植物细胞和组织可以通过组织培养技 术克隆成完整的植株，那么动物细胞和组织能 否也进行同样的克隆？
不能 动物细胞有无全能性? 特点？ 随着细胞分化程度的提高而全能性逐渐受到限 制，分化潜能变窄。
细胞核仍具有全能性。
动物细胞的全能性受到限制，到现在为止将离体 的动物细胞直接克隆成个体还很困难，所以动物细 胞和组织不能进行与植物一样的个体克隆。
“小资料：我国科学家在动物组织培养培养方面的贡 献”、“小资料：‘多莉’诞生不容易”只作为背 景材料供学生阅读，不要求学生记忆或掌握具体的 内容。
1．简述动物细胞、组织培养。
1、动物细胞培养 （1）定义
将动物体内的一部分组织取出
机械消化或胰酶消化
分散成单个细胞
放在适宜的培养基培养
细胞得以生存并保持生命活动现象