小肠结肠炎耶尔森氏菌显色培养基使用说明书

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小肠结肠炎耶尔森氏菌检验(食品微生物学检验)

A.6.3 试验方法
从琼脂斜面上挑取培养物接种,于26 ℃±1 ℃ 培养 18h~24h,观察结果。鸟氨酸脱羧酶阳性者由于产碱 ,培养基呈紫色。阴性者无碱性产物 ,但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色。对照管为黄色。
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GB 4789.8—2016
A.3 改良 Y 培养基
A.3.1 成分
蛋白胨氯化钠乳糖草酸钠去氧胆酸钠三号胆盐丙酮酸钠孟加拉红水解酪蛋白琼脂蒸馏水
15.0g 5.0g 10.0g 2.0g 6.0g 5.0g 2.0g 40.0 mg 5.0g 17.0g 1000 mL
A.3.2 制法
1
4 检验程序小肠结肠炎耶尔森氏菌检验程序见图 1。
GB 4789.8—2016
图1 小肠结肠炎耶尔森氏菌检验程序
5 操作步骤
5.1 增菌以无菌操作取25g(或25 mL)样品放入含有225 mL 改良磷酸盐缓冲液增菌液的无菌均质杯或均
质袋内,以8000r/min均质1 min或拍击式均质器均质1 min。液体样品或粉末状样品,应振荡混匀。均质后于26 ℃±1 ℃增菌48h~72h。增菌时间长短可根据对样品污染程度的估计来确定。 5.2 碱处理
2.0g
甘露醇
20.0g
氯化钠
1.0g
去氧胆酸钠
2.0g
硫酸镁
0.01g
琼脂
12.0g
蒸馏水
950 mL
校正 pH 至7.5±0.1,将基础培养基于121 ℃高压灭菌15 min,备用。
A.2.2 Irgasan(二氯苯氧氯酚 ):可用 95% 的乙醇作溶剂,溶解二苯醚,配成 0.4% 的溶液来替代

小肠结肠炎耶尔森氏菌检验(食品微生物学检验)

5.4 改良克氏双糖试验
分别挑取 5.3 中的可疑菌落 3 个 ~5 个 ,分别接种于改良克氏双糖铁琼脂 ,接种时先在斜面划线 ,再于底层穿刺,26 ℃±1 ℃培养24h,将斜面和底部皆变黄且不产气的培养物做进一步的生化鉴定。
5.5 尿素酶试验和动力观察
用接种环挑取一满环 5.4 得到的可疑培养物 ,接种到尿素培养基中 ,接种量应足够大 ,振摇几秒钟 , 26 ℃±1 ℃培养2h~4h。将尿素酶试验阳性菌落分别接种于两管半固体培养基中,于26 ℃±1 ℃和 36 ℃±1 ℃培养24h。将在26 ℃有动力而36 ℃无动力的可疑菌培养物划线接种营养琼脂平板,进行纯化培养 ,用纯化物进行革兰氏染色镜检和生化试验。
除乳与乳制品外,其他食品的增菌液0.5 mL 与碱处理液4.5 mL 充分混合15s。
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GB 4789.8—2016
5.3 分离
将乳与乳制品增菌液或经过碱处理的其他食品增菌液分别接种于 CIN-1 琼脂平板和改良 Y 琼脂平板,26 ℃±1 ℃培养48h±2h。典型菌落在 CIN-1上为深红色中心,周围具有无色透明圈(红色牛眼状菌落),菌落大小为1 mm~2 mm,在改良 Y 琼脂平板上为无色透明、不黏稠的菌落。
3 培养基和试剂
3.1 改良磷酸盐缓冲液:见 A.1。 3.2 CIN-1培养基(CepulodinIrgasanNovobiocinAgar):见 A.2。 3.3 改良 Y 培养基(AgarY,Modified):见 A.3。 3.4 改良克氏双糖培养基:见 A.4。 3.5 糖发酵管:见 A.5。 3.6 鸟氨酸脱羧酶试验培养基:见 A.6。 3.7 半固体琼脂:见 A.7。 3.8 缓冲葡萄糖蛋白胨水[甲基红(MR)和 V-P 试验用]:见 A.8。 3.9 碱处理液:见 A.9。 3.10 尿素培养基:见 A.10。 3.11 营养琼脂:见 A.11。 3.12 小肠结肠炎耶尔森氏菌诊断血清。

《小肠结肠炎耶尔森氏菌检验》编制说明

《食品微生物学检验小肠结肠炎耶尔森氏菌检验》编制说明一、标准起草的基本情况2011年原卫生部（现国家卫生计生委）牵头组织开展食品卫生微生物学标准的修订工作，小肠结肠炎耶尔森氏菌的测定方法被列入修订。

本标准起草单位为江苏省疾病预防控制中心，起草人包括袁宝君、唐震、沈赟、庄凌、乔昕、王艳梅、巢国祥、徐勒、郑东宇。

二、标准的重要内容及主要修改情况（一）标准主要修改的内容1. 修改了标准的中文名称；2. 修改了典型菌落的形态描述；3. 删除了生化鉴定中的商品化名称；4. 修改了附录A。

（二）修改依据及说明1．修改了标准的中文名称按照食品安全国家标准编制的规范要求将标准的中文名称进行了修改，将原来的《食品卫生微生物学检验小肠结肠炎耶尔森氏菌检验》修改为《食品安全国家标准食品微生物学检验小肠结肠炎耶尔森氏菌检验》。

2．修改了典型菌落的形态描述根据征求意见函中专家建议及结合2008版国标近几年的使用情况,在本次修订过程中增加了CIN-1琼脂平板的典型菌落形态描述，形态描述结合FDA BAM( 2007)及GB/T 4789.8-2008的描述方式由原来的“红色牛眼状菌落”修改为“深红色中心，周围具有无色透明圈（红色牛眼状菌落）,菌落大小为1-2mm”，通过对典型菌落形态的详细描述有利于国将“Vitek GNI 全自动微生物生化分析仪”修改为“生化鉴定试剂盒标使用者在分离该菌的过程中能够较易查找并发现目标菌，提高对本菌的检出率。

3. 删除了生化鉴定中的商品化名称或全自动微生物生化鉴定系统删除“4.11 API 20E生化鉴定试剂盒或VITEK GNI+生化鉴定卡”。

传统的微生物鉴定主要参考《伯杰式细菌鉴定手册》和《真菌鉴定手册》，鉴定过程繁琐耗时长，容易出错，对经验要求非常高。

商品化的自动微生物系统有效地解决了这个问题，目前自动微生物鉴定系统从原理上包括以下几种：1)基于表型的鉴定方法；2)基于基因型的鉴定方法； 3)基于蛋白的鉴定方法；三类方法各有优缺点，理论上不冲突，应该互为补充，基于系统生化仍是国际上微生物鉴定的金标准，所以本标准仍然将基于表型的鉴定方法之一的系统生化鉴定作为微生物鉴定的确证方法。

小肠结肠炎耶尔森氏菌显色培养基说明书

广东环凯微生物科技有限公司网址：地址：广州市黄埔区科学城神舟路788号邮编：510663传真：860288778876产品说明书Product Manual【产品名称】通用名称：小肠结肠炎耶尔森氏菌显色培养基英文名称：Chromogenic Yersinia Enterocolitica Agar【产品编号与包装规格】产品编号产品类型包装规格CRM017干粉1000mL/瓶SR0770冻干配套试剂10支/盒【产品用途】用于致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌的检测与鉴别。

【检验原理】蛋白胨提供氮源、维生素、生长因子；盐类可维持均衡的渗透压，琼脂是培养基凝固剂；抑制剂（配套试剂）抑制杂菌的生长，混合色素与对应的酶发生特异反应，水解底物，释放显色基团，使致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌形成紫红色菌落，非致病性显金属蓝色或受抑制。

称取本品干粉30.4g，加入蒸馏水或纯化水1000mL，搅拌加热煮沸至完全溶解，冷却至50℃备用。

每100mL 培养基基础添加1支配套试剂(SR0770)，混合均匀后倾注无菌培养皿。

【性能特点】该显色培养基能够区分致病性与非致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌，致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌显淡紫色，非致病性显金属蓝色或受抑制。

一些较为罕见的非致病耶尔森氏菌（如：克氏耶尔森氏菌Y.kristensenii ）、一些未能全部抑制的气单胞菌（如：兽生气单胞菌A.bestiarum 、嗜矿泉气单胞菌A.eucrenophila 等）、沙雷氏菌（液化沙雷氏菌S.liquefaciens、变形斑沙雷氏菌S.proteamaculans ）等菌株，也可能出现紫红色菌落。

最终鉴定致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌需做附加试验。

【质量控制】下列质控菌株接种待测试培养基，26±1℃，48h 结果如下：广东环凯微生物科技有限公司网址：地址：广州市黄埔区科学城神舟路788号邮编：510663传真：************-8619************8602************88778876贮存于2~8℃，避光、干燥处；保质期见产品标签。

小肠结肠炎耶尔森菌病试点监测方案(试行)

小肠结肠炎耶尔森菌病试点监测方案（试行）一、背景小肠结肠炎耶尔森菌是20世纪80年代以来引起国际社会广泛关注的一种病原菌。

1934年美国Mclver和Pike首先对该菌作了描述，1964年Frederiksen根据众多学者的研究成果将该菌命名为小肠结肠炎耶尔森菌。

小肠结肠炎耶尔森菌广泛分布于自然界，是能在冷藏温度下生长的少数几种肠道致病菌之一。

它除引起胃肠道症状外，还能引起呼吸系统、心血管系统、骨骼结缔组织等疾患，甚至可引起败血症，造成死亡。

该菌还是重要的食源性致病菌，很多国家都已将该菌列为进出口食品的常规检测项目。

但国内既往对该菌重视不够，医务人员普遍缺乏对本菌的认识，临床医生在对胃肠道疾病诊断时很少考虑小肠结肠炎耶尔森菌感染，检验人员也很少能为准确诊断提供依据。

由于诊断不及时，容易造成误诊，多数小肠结肠炎耶尔森菌感染病人很难得到及时、针对性治疗，造成感染慢性化和并发各种合并症，有些小肠结肠炎耶尔森菌感染甚至被当作阑尾炎施行手术。

近几年国际上对小肠结肠炎耶尔森菌的研究受到了高度重视,研究最多是法国的巴斯德研究所和比利时的Louvain大学。

其主要原因不仅仅是由于它所引起的胃肠道症状而主要是一些由它引起的并发症，如结节性红斑、活动性关节炎、耶氏肝炎以及由超抗原引起的一些自身免疫性疾病（如：突眼性甲状腺肿）。

这些疾病对社会造成的负担很重，这是我们对本菌进行监测的主要原因。

我国自2002年开始在安徽、江苏、河南、山东、吉林开始对该病进行监测，已分离600份菌株，其中在腹泻病人中分离48株。

由于该病流行特点和规律尚不清楚，引起其暴发和流行的因素依然存在，因此，需要对其进行系统监测。

二、监测目的1、了解我国小肠结肠炎耶尔森菌感染性腹泻及其合并症的流行状况。

2、了解冷藏禽畜生、熟肉样品中小肠结肠炎耶尔森菌污染状况。

3、了解我国小肠结肠炎耶尔森菌流行菌株的型别、分布、耐药特性及菌型变迁等情况。

三、监测定义1、疑似病例具备以下三项者可考虑为疑似病例：n 腹泻粪便呈黄色水样或含粘液；n 腹泻每日3～10次，可持续1～2周；n 短期高热到持续几周的低热不等。

CIN-1培养基基础

CIN-1培养基基础CIN-1培养基基础CIN-1Medium用途：用于小肠结肠炎耶尔森氏菌的选择性分离和培养。

（GB/T4789.8-2008和ISO标准）原理：胰胨和酵母浸膏提供氮源和微量元素；甘露醇为可发酵糖；去氧胆酸钠和结晶紫抑制革兰氏阳性菌；中性红是pH指示剂；琼脂是培养基的凝固剂。

配方（每升）：胰胨20.0g酵母浸膏 2.0g甘露醇20.0g氯化钠 1.0g去氧胆酸钠2.0g硫酸镁（MgSO4.7H2O）0.01g中性红0.03g结晶紫0.001g琼脂12.0g最终pH7.5±0.2使用方法：1、称取本品57g，加入蒸馏水或去离子水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15分钟。

2、冷却至80℃左右，每100ml基础培养基加入配套试剂A1支（SR0250）（试剂A：0.04%二苯醚1ml）,充分混匀。

冷至45℃左右时，加入配套试剂B1支（SR0250）（试剂B：0.25mg新生霉素、1.5mg头孢菌素和0.1g氯化锶，用1ml无菌生理盐水溶解），混合后倾注平板。

3、将增菌后的改良磷酸盐缓冲液划线接种于CIN-1培养基上，26℃培养48h.4、挑取培养基上红色牛眼状菌落，进一步的鉴定。

质量控制：质控菌株接种后26℃培养48h，结果如下：菌名菌号生长率菌落特征小肠结肠炎耶尔森氏菌CMCC（B）52204 ≥70% 菌落圆形、红色，边缘透明，中央色深，呈牛眼状。

大肠埃希氏菌ATCC25922 -- 圆形、粉色、边缘胆汁沉淀。

粪肠球菌ATCC29212 ≤0.01%贮存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。

贮存期三年。

规格：250g参考文献:1. GB/T4789.8-2008中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验小肠结肠炎耶尔森氏菌检验2. GB/T4789.8-2003中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验小肠结肠炎耶尔森氏菌检验3. GB/T4789.28-2003中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验染色法,培养基和试剂4.ISO10273-2003Microbiologyoffoodandanimalfeedingstuff s-----Horizontalmethodforthedetectionofpresumptivepathog enicYersiniaenterocolitica。

MMFSCNJ出口食品小肠结肠炎耶尔森氏菌检验方法

M M F S C N J出口食品小肠结肠炎耶尔森氏菌检验方法集团标准化工作小组 [Q8QX9QT-X8QQB8Q8-NQ8QJ8-M8QMN]MM_FS_CNJ_0153出口食品小肠结肠炎耶尔森氏菌微生物法MM_FS_CNJ_0153出口食品小肠结肠炎耶尔森氏菌检验方法1.适用范围本方法适用于出口冷冻和生鲜的猪肉、猪舌、鸡肉、虾和虾仁中耶氏菌检验，其他食品可参照使用。

2.培养基.改良的磷酸盐缓冲液磷酸氢二钠；磷酸二氢钠(含1个结晶水) ；氯化钠；山梨醇；胆盐(3号) ；蒸馏水1000mL；将前三种成分溶于水中，再加入后两种成分，溶解后调至，分装于500mL广口玻璃瓶内，每瓶225mL，高压灭菌121℃15min。

.改良的酵母浸汁-孟加拉红肉汤(modified yeast extract-rose bengal broth) 基础液磷酸二氢钾；磷酸氢二钠；酵母浸汁；氯化钠；硫酸镁(含7个结晶水) ；蒸馏水770mL；将上述各成分溶于蒸馏水中，加热使之完全溶解，调至，121℃高压灭菌15min。

40g/L山梨糖水溶液：。

10g/L丙酮酸钠水溶液：。

4g/L孟加拉红水溶液：。

，溶液流通蒸汽加热灭菌，溶液过滤除菌，将灭菌过的此三种溶液加到灭菌、冷却的基础液中，调至最终pH为，以无菌操作分装于18mm×180mm灭菌的试管中，每管8mL，4℃冰箱保存备用。

.含吐温80的麦康凯琼脂蛋白胨；月示蛋白胨(proteose peptone) ；乳糖；胆盐(3号) ；氯化钠；吐温80(Tween 80) ；氯化钙(无水) ；中性红；结晶紫；琼脂；蒸馏水1000mL；将琼脂于800mL蒸馏水中加热溶化，以50mL蒸馏水将吐温80稀释，再将其他各成分(指示剂除外)加入150mL蒸馏水中，加热使之完全溶解。

将后二种溶液加至已溶化的琼脂液中，充分混匀，调至±，再加入指示剂，混匀后121℃高压灭菌15min，待冷至50～55℃时，立即倾注于灭菌平皿内，每皿约15mL，制成的琼脂平板呈淡橙色。

小肠结肠炎耶尔森氏菌检验（食品微生物学检验）

⼩肠结肠炎耶尔森⽒菌检验（⾷品微⽣物学检验）⾷品安全国家标准⾷品微⽣物学检验⼩肠结肠炎耶尔森⽒菌检验1范围本标准规定了⾷品中⼩肠结肠炎耶尔森⽒菌(Y e r s i n i a e n t e r o c o l i t i c a)的检验⽅法三本标准适⽤于⾷品中⼩肠结肠炎耶尔森⽒菌的检验三2设备和材料除微⽣物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:2.1冰箱:0?~4?三2.2恒温培养箱:26??1?⼆36??1?三2.3显微镜:10倍~100倍三2.4均质器三2.5天平:感量0.1g三2.6灭菌试管:16mm?160mm⼆15mm?100mm三2.7灭菌吸管:1m L(具0.01m L刻度)⼆10m L(具0.1m L刻度)三2.8锥形瓶:200m L⼆500m L三2.9灭菌平⽫:直径90mm三2.10微⽣物⽣化鉴定试剂盒或微⽣物⽣化鉴定系统三3培养基和试剂3.1改良磷酸盐缓冲液:见A.1三3.2 C I N-1培养基(C e p u l o d i n I r g a s a nN o v o b i o c i nA g a r):见A.2三3.3改良Y培养基(A g a rY,M o d i f i e d):见A.3三3.4改良克⽒双糖培养基:见A.4三3.5糖发酵管:见A.5三3.6鸟氨酸脱羧酶试验培养基:见A.6三3.7半固体琼脂:见A.7三3.8缓冲葡萄糖蛋⽩胨⽔[甲基红(M R)和V-P试验⽤]:见A.8三3.9碱处理液:见A.9三3.10尿素培养基:见A.10三3.11营养琼脂:见A.11三3.12⼩肠结肠炎耶尔森⽒菌诊断⾎清三4检验程序⼩肠结肠炎耶尔森⽒菌检验程序见图1三图1⼩肠结肠炎耶尔森⽒菌检验程序5操作步骤5.1增菌以⽆菌操作取25g(或25m L)样品放⼊含有225m L改良磷酸盐缓冲液增菌液的⽆菌均质杯或均质袋内,以8000r/m i n均质1m i n 或拍击式均质器均质1m i n三液体样品或粉末状样品,应振荡混匀三均质后于26??1?增菌48h~72h三增菌时间长短可根据对样品污染程度的估计来确定三5.2碱处理除乳与乳制品外,其他⾷品的增菌液0.5m L与碱处理液4.5m L充分混合15s三5.3分离将乳与乳制品增菌液或经过碱处理的其他⾷品增菌液分别接种于C I N-1琼脂平板和改良Y琼脂平板,26??1?培养48h?2h三典型菌落在C I N-1上为深红⾊中⼼,周围具有⽆⾊透明圈(红⾊⽜眼状菌落),菌落⼤⼩为1mm~2mm,在改良Y琼脂平板上为⽆⾊透明⼆不黏稠的菌落三5.4改良克⽒双糖试验分别挑取5.3中的可疑菌落3个~5个,分别接种于改良克⽒双糖铁琼脂,接种时先在斜⾯划线,再于底层穿刺,26??1?培养24h,将斜⾯和底部皆变黄且不产⽓的培养物做进⼀步的⽣化鉴定三5.5尿素酶试验和动⼒观察⽤接种环挑取⼀满环5.4得到的可疑培养物,接种到尿素培养基中,接种量应⾜够⼤,振摇⼏秒钟, 26??1?培养2h~4h三将尿素酶试验阳性菌落分别接种于两管半固体培养基中,于26??1?和36??1?培养24h三将在26?有动⼒⽽36?⽆动⼒的可疑菌培养物划线接种营养琼脂平板,进⾏纯化培养,⽤纯化物进⾏⾰兰⽒染⾊镜检和⽣化试验三5.6⾰兰⽒染⾊镜检将纯化的可疑菌进⾏⾰兰染⾊三⼩肠结肠炎耶尔森⽒菌呈⾰兰⽒阴性球杆菌,有时呈椭圆或杆状,⼤⼩为(0.8µm~3.0µm)?0.8µm5.7⽣化鉴定5.7.1从5.5中的营养琼脂平板上挑取单个菌落接种⽣化反应管,⽣化反应在26??1?进⾏三⼩肠结肠炎耶尔森⽒菌的主要⽣化特征以及与其他相似菌的区别见表1三表1⼩肠结肠炎耶尔森⽒菌与其他相似菌的⽣化性状鉴别表项⽬⼩肠结肠炎耶尔森⽒菌Y e r s i n i ae n t e r o c o l i t i c a中间型耶尔森⽒菌Y e r s i n i ai n t e r m e d i a弗⽒耶尔森⽒菌Y e r s i n i af r e d e r i k s e n i i克⽒耶尔森⽒菌Y e r s i n i ak i r s t e n s e n i i假结核耶尔森⽒菌Y e r s i n i ap s e u d o t u b e r c u l o s i s⿏疫耶尔森⽒菌Y e r s i n i ap e s t i s动⼒(26?)+++++-尿素酶+++++-V-P试验(26?)+++---鸟氨酸脱羧酶++++--蔗糖d++---棉⼦糖-+---d⼭梨醇++++--⽢露醇++++++⿏李糖-++--+注:+阳性;-阴性;d有不同⽣化型三5.7.2如选择微⽣物⽣化鉴定试剂盒或微⽣物⽣化鉴定系统,可根据5.6镜检结果,选择⾰兰阴性球杆菌菌落作为可疑菌落,从5.5所接种的营养琼脂平板上挑取单菌落,使⽤微⽣物⽣化鉴定试剂盒或微⽣物⽣化鉴定系统进⾏鉴定三5.8⾎清型鉴定(选做项⽬)除进⾏⽣化鉴定外,可选择做⾎清型鉴定三在洁净的载玻⽚上加⼀滴O因⼦⾎清,将待试培养物混⼊其内,使成为均⼀性混浊悬液,将玻⽚轻轻摇动0.5m i n~1m i n,在⿊⾊背景下观察反应三如在2m i n内出现⽐较明显的⼩颗粒状凝集者,即为阳性反应,反之则为阴性,另⽤⽣理盐⽔作对照试验,以检查有⽆⾃凝现象;具体操作⽅法可按G B4789.4中沙门⽒菌O因⼦⾎清分型⽅法进⾏三6结果与报告综合以上及⽣化特征报告结果,报告25g(或25m L)样品中检出或未检出⼩肠结肠炎耶尔森⽒菌三附录A培养基和试剂A.1改良磷酸盐缓冲液A.1.1成分磷酸氢⼆钠8.23g磷酸⼆氢钠1.2g氯化钠5.0g三号胆盐1.5g⼭梨醇20.0gA.1.2制法将磷酸盐及氯化钠溶于蒸馏⽔中,再加⼊三号胆盐及⼭梨醇,溶解后校正p H⾄7.6,分装试管,于121?⾼压灭菌15m i n,备⽤三A.2C I N-1培养基A.2.1基础培养基:胰胨20.0g酵母浸膏2.0g⽢露醇20.0g氯化钠1.0g去氧胆酸钠2.0g硫酸镁0.01g琼脂12.0g蒸馏⽔950m L校正p H⾄7.5?0.1,将基础培养基于121?⾼压灭菌15m i n,备⽤三A.2.2I r g a s a n(⼆氯苯氧氯酚):可⽤95%的⼄醇作溶剂,溶解⼆苯醚,配成0.4%的溶液来替代I r g a s a n,待基础培养基冷⾄80?时,加⼊1m L混匀三A.2.3冷⾄50?时,加⼊:中性红(3.0m g/m L)10.0m L结晶紫(0.1m g/m L)10.0m L头孢菌素(1.5m g/m L)10.0m L新⽣霉素(0.25m g/m L)10.0m L最后不断搅拌加⼊10.0m L的10%氯化锶,倾注平⽫三A.3改良Y培养基A.3.1成分蛋⽩胨15.0g氯化钠5.0g乳糖10.0g草酸钠2.0g去氧胆酸钠6.0g三号胆盐5.0g丙酮酸钠2.0g孟加拉红40.0m g⽔解酪蛋⽩5.0g琼脂17.0g蒸馏⽔1000m LA.3.2制法将A.3.1中成分混合,校正p H⾄7.4?0.1三于121?⾼压灭菌15m i n,待冷⾄45?左右时,倾注平⽫三A.4改良克⽒双糖培养基A.4.1成分蛋⽩胨20.0g⽜⾁膏3.0g酵母膏3.0g⼭梨醇20.0g葡萄糖1.0g氯化钠5.0g柠檬酸铁铵0.5g硫代硫酸钠0.5g琼脂12.0g酚红0.025g蒸馏⽔1000m LA.4.2制法将酚红以外的各成分溶解于蒸馏⽔中,校正p H⾄7.4三加⼊0.2%的酚红溶液12.5m L,摇匀,分装试管,装量宜多些,以便得到⽐较⾼的底层三121?⾼压灭菌15m i n,放置⾼层斜⾯备⽤三A.5糖发酵管A.5.1成分⽜⾁膏5.0g。

小肠结肠炎耶尔森氏菌使用说明

小肠结肠炎耶尔森氏菌编号名称北京华越洋生物NRR00070 小肠结肠炎耶尔森氏菌基本信息：名称：小肠结肠炎耶尔森氏菌规格：300ul甘油菌储存温度：-‐80℃简介：小肠结肠炎耶尔森氏菌为革兰氏阴性杆菌或球杆菌，大小为1-‐3.5×0.5-‐1.3μm，多单个散在，有时排列成短链或成堆。

操作说明：1，本品包含一份甘油菌，使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。

也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。

2，为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板，然后再挑单克隆菌落进行后续操作。

冷冻管开封：用浸过75%酒精的脱脂棉严格消毒冷冻管盖。

菌株复溶：无菌环境中旋开装有复溶液的滴瓶盖，吸取1ml 左右复溶液，加入到冷冻管中。

轻轻振荡，使冻干菌株溶解呈悬浮状。

菌株复壮：用无菌吸管吸取菌悬液，转移到复溶液滴瓶中。

做好标识，在适宜温度下培养。

细菌在30-‐35℃培养箱中培养24-‐48h，真菌在23-‐28℃培养箱中培养24-‐72h（必要时，可适当延长培养时间）。

菌株传代：将得到的菌株的新鲜培养物转接到适宜的固体培养基及液体培养基中（尽量增大接种量：如用无菌吸管吸取≥50μl 新鲜培养物至固体培养基，边移动边缓慢释放），适宜温度下培养，用以菌株的保藏、传代及制备工作菌株。

注意事项：1、菌种活化前，将冷冻管保存在低温、清洁、干燥的环境中，长时间室温下放置会导致菌种衰退；2、冷冻管开封、冻干粉复溶、菌株恢复培养等操作应在无菌条件下进行；3、一些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，部分需连续两次继代培养才能正常生长；4、苛养菌的培养需采用含特定营养成分的培养基，敬请正确选择，不清楚时来电询问；5、某些厌氧菌的培养，自开封到接种完成，均需以无氧气体充填，以保持厌氧状态；培养过程中亦要保持厌氧状态；6、某些菌种，如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌等需要5-‐10%CO2 促进生长；7、如发现冷冻管盖松动、复溶液浑浊等异常情况，应停止使用对应产品。

小肠结肠炎耶尔森菌

1B 2或3
1B
2或3
1B 1B 1B
来源绒鼠野兔，山羊，大鼠，猴子人，狗，猪狗，猫，鼠人猪人人，猪，鸡肉人，食物
人，狗，猪，猴子
狗，牛奶，猪，水
人人，牛奶，注，饮水人，猪人，猪人，猪人，狗，毛，鼠人人，猴子，牛奶人人，猴子，牛奶，鼠
地理分布欧洲、美国欧洲、美国欧洲，日本，北美和南美南非，澳大利亚
咽喉猪舌其它
传播途径
人群传播感染者的便、尿带菌可引起人群间的相互传染，同
时感染者的咽喉、舌、痰和气管分泌物等均带菌，因而不能排除呼吸道传播可能。
食物传播：被认为是一种食源性病原菌，被污染的水源、奶制品
、肉类、水产品、蔬菜、水果等都可能作为经口感染的传播因子
动物传播：家畜和家禽的广泛感染和长期排菌，直接威胁着接触
我国耶尔森菌病呈现散发状态，部分地区有暴发流行的报告
流行特征
小肠结肠炎耶尔森菌感染可分为散发与暴发，但不同类型和规模的暴发似有增长趋
势。1972年3月日本静冈县初级中学发生一次暴发流行，这是世界上大规模流行的最早报告。日本是世界暴发流行最多的国家，其次为美国，此外加拿大、芬兰、前苏联等国也相继报告过不同类型和规模的暴发。这些暴发流行多发生在学校和家庭等场所。
家畜类带菌情况
60% 50% 49%
40% 30.0%
30%
24.60%
20%
18.90%
10%
7.9% 7.50% 1.7%
0%
猪
牛
狗
其它
最高最低
猪是人类的重要的传染源，理由是猪的感染率高，猪与人类接触密切，故成为人类的传染源是很明显的。

小肠结肠炎耶尔森氏菌的快速分离、鉴定、分型及基础性研究

征。
（．２．５） — ０的温度范围内，Ｔ．６７７。３＂２４在４Ｃ它们的生长速率都随着温度的升高而增加．而在４＂５７Ｃ到１．＂Ｃ之间时，耶氏菌０：４清型的生长速率大于耶３氏菌０：４清型，ｌ．— Ｏ９在５７３ ℃之间时，耶氏菌０：４清型的生长速率大则９
１从南京市肉联厂屠宰场共采集猪扁桃体，）猪屠体，地面污水，砧板，围裙等２２２份样，检测了小肠结肠炎耶尔森氏菌在上述样本中的污染状况，并对分离到的菌株进行血清型、生物型分布研究。
２采集农贸市场散装生鲜猪、羊肉．）牛、鲜鱼，冷藏冷冻禽肉，生禽肉
共９份检测该菌，５并对检出的菌株进行进行血清和生化分型。３聚合酶链反应（Ｒ）ＰＣ技术对上述所有分离到的菌株进行ａｌｙｔｉｓ，Ａ，ｙｔｙｄｓＢ，ａＡ，Ⅵｒ毒力基因检测，Ｆ研究本地区该菌毒力基因主要分布特
２２创新点、术意义及应用价值学
７采南京市屠宰场猪扁桃体样４份，）０采用不同方法增菌及Ｓｓ，麦康凯，Ｉ等平板分别培养，ＣＮ，对不同方法的检验结果进行比较。２主要研究成果、创新点、术意义及应用价值学２１主要研究成果．２１１首先，．．南京地区猪屠宰场来源的猪屠体、猪扁桃体、环境样本中４肠结肠炎耶尔森氏菌总体血清型分布以Ｏ：、７８Ｏ：，０Ｏ：，７、９Ｏ：，、６３、５２及Ｏ：为主。３其中，血清型Ｏ：、５２仅从猪分离出，３Ｏ：，７环境样中未能检出这两种血清型。血清型Ｏ：、７８Ｏ：，０９Ｏ：，、６３从猪和屠宰场环境样中均有检出。其次，猪来源的（猪屠体、猪扁桃体）本菌Ｏ：４清型的生物型以低致病ｌ９Ａ型为主而非以３型为主，２２株猪来源的Ｏ：菌中有ｌ株为Ｉ９９Ａ型，仅有３株为３型。第三。从猪屠体样中检出ｌ株生物４型Ｏ：菌，３这在国内尚属首次报道。实验结果提示可能本菌在本地区致病性与在其它地区有一定差异。本研究分离出的小肠结肠炎耶尔森氏菌的血清型共有ｌ，９２种除０：、Ｏ：，、６３、５２及０：外，７８０：，００：，７３还有Ｏ：０Ｏ：４Ｏ１，９Ｏｔ，、２、１、１、６２，９８０５０１，５０５种非致病血清型。２２、５等７另有７株菌与已有的全套因子血清均不凝集。提示本地区本菌的血清型分布范围广，致病性比较复杂。

小肠结肠炎耶尔森氏菌盲样考核X-ABT方案

小肠结肠炎耶尔森氏菌盲样考核X-ABT方案针对小肠结肠炎耶尔森氏菌盲样考核样本，X-ABT系列试剂不但可提供种属检测，也可提供多种毒力基因的检测，既包含荧光检测试剂，也包含普通多重检测试剂，方案多样，满足考核工作的需求，根据2016年考核工作经验，需检测基因包括：种属基因foxA及5种毒力基因ail、ystA、ystB、yadA、virF。

现给出以下方案供参考：方案一：普通PCR检测试剂（首选方案）（1）使用试剂：A2286（小肠结肠炎耶尔森氏菌毒力基因多重PCR检测试剂盒）50T/盒（2）方案介绍：本方案适用于检测平台为普通PCR平台的客户需求，包括琼脂糖凝胶电泳平台或MPS平台。

该试剂可满足客户对于毒力基因的上报需求，如种属基因foxA无需上报（种属鉴定可以使用血清学反应来进行），则该方案可完全满足客户盲样考核需求。

方案二：荧光PCR检测试剂+普通PCR检测试剂（配合使用）（1）使用试剂：A3322（小肠结肠炎耶尔森氏菌及其致病性双重实时荧光PCR检测试剂盒）50T/盒A2286（小肠结肠炎耶尔森氏菌毒力基因多重PCR检测试剂盒）50T/盒（2）方案介绍：本方案适用于荧光PCR平台及普通电泳平台均具备的客户需求，两种试剂盒结合使用，可同时满足客户种属基因及毒力基因的上报需求；A3322用于种属基因的检测，A2286用于毒力基因的检测。

注：（1）竞品情况：目前市售竞品多为单重或者双重，只可检测种属基因foxA及毒力基因ail，目前尚无竞品可以检测其他毒力基因。

（2）上述两种方案涉及到的ABT试剂不作为试用储备。

（3）ABT试剂可检测基因如下：A3322：可检测种属基因foxA及毒力基因ail；A2286：既可检测毒力基因ail、ystA、yadA、virF、ystB，也可进行小肠结肠炎耶尔森氏菌鉴定和O3血清型的筛检。

出口食品小肠结肠炎耶尔森氏菌检验方法

出口食品小肠结肠炎耶尔森氏菌检验方法1.适用范围本方法适用于出口冷冻和生鲜的猪肉、猪舌、鸡肉、虾和虾仁中耶氏菌检验，其他食品可参照使用。

2.培养基2.1.改良的磷酸盐缓冲液磷酸氢二钠8.23g；磷酸二氢钠(含1个结晶水) 1.20g；氯化钠 5.00g；山梨醇10.00g；胆盐(3号) 1.50g；蒸馏水1000mL；将前三种成分溶于水中，再加入后两种成分，溶解后调至pH7.6，分装于500mL广口玻璃瓶内，每瓶225mL，高压灭菌121℃15min。

2.2.改良的酵母浸汁-孟加拉红肉汤(modified yeast extract-rose bengal broth)2.2.1.基础液磷酸二氢钾0.508g；磷酸氢二钠11.21g；酵母浸汁 5.00g；氯化钠 1.00g；硫酸镁(含7个结晶水) 0.01g；蒸馏水770mL；将上述各成分溶于蒸馏水中，加热使之完全溶解，调至pH8.0，121℃高压灭菌15min。

2.2.2. 40g/L山梨糖水溶液：100.00mL。

2.2.3. 10g/L丙酮酸钠水溶液：100.00mL。

2.2.4. 4g/L孟加拉红水溶液：10.00mL。

2.2.2，2.2.3溶液流通蒸汽加热0.5h灭菌，2.2.4溶液过滤除菌，将灭菌过的此三种溶液加到灭菌、冷却的基础液中，调至最终pH为8.0，以无菌操作分装于18mm×180mm灭菌的试管中，每管8mL，4℃冰箱保存备用。

2.3.含吐温80的麦康凯琼脂蛋白胨12.00g；月示蛋白胨(proteose peptone) 3.00g；乳糖10.00g；胆盐(3号) 1.50g；氯化钠 5.00g；吐温80(Tween 80) 10.00g；氯化钙(无水) 0.20g；中性红0.03g；结晶紫0.001g；琼脂18.00g；蒸馏水1000mL；将琼脂于800mL蒸馏水中加热溶化，以50mL蒸馏水将吐温80稀释，再将其他各成分(指示剂除外)加入150mL蒸馏水中，加热使之完全溶解。