戊二醛-银染法 - 360文档中心

银染方法总汇及注意事项

ptotocol是这样的，请看哪里不妥：蛋白银染步骤步骤溶液时间固定甲醇100ml冰醋酸25ml加双蒸水至250ml 30min冲洗双蒸水3次敏化甲醇75ml戊二醛（25%w/）1.25ml硫代硫酸钠(5%w/) 10ml醋酸钠（17g）加双蒸水至250ml 30min冲洗双蒸水3次银反应硝酸银溶液(2.5%w/) 25ml甲醛(37%w/) 0.1ml加双蒸水至250ml 20min冲洗双蒸水2次显色碳酸钠(6.25g)甲醛(37%w/) 0.05ml加双蒸水至250ml2-5min终止EDTA-Na22H2O(3.65g)加双蒸水至250ml 10min冲洗双蒸水3次建议使用silia的方法！！简单，快！本人的银染方法：1. 固定：100ml MeOH, 24ml H Ac, 56ml 0.04%HCHO, 20ml ddH2O,洗三次，每次>=20分钟；2. 50％EtOH洗PAGE胶三次，每次20分钟；3. 预处理：0.02％Na2S2O3 处理一分钟；4. 水洗：ddH2O漂洗三次，每次20秒；5. 染色：0.8ml 20％AgNO3+72ml 0.04%HCHO处理PAGE胶20分钟；6. 水洗：同上；7. 显色：25ml 12％Na2CO3, 24ml 0.04%HCHO, 1ml 0.02％Na2S2O3, 漂洗10－15分钟；8. 水洗：同上；9. 终止：50％MeOH, 12％H Ac,10分钟。

以上步骤从中科院生化所学来，过程和silia 的基本一致，不知道是否有出入，请大家指正。

谢谢！！！5.2.2.3 银染色1 银染液1（1000ml）：甲醇50％乙酸12％甲醇500ml 冰醋酸120ml2 银染液2（1000ml）：甲醇30％，乙酸钠0.4M，戊二醛0.5%，硫代硫酸钠0.1%，（含乙酸1－2ml）甲醇300ml 乙酸钠54.4g 戊二醛10ml 硫代硫酸钠1g 乙酸1－2ml3 显色液(1000ml) 无水碳酸钠2.5% 甲醛0.02%无水碳酸钠25g，甲醛1.5ml4 硝酸银（100ml）：20%硝酸银（过滤后待用）染色步骤：1 银染液1 洗2次，每次5分钟2 银染液2 洗1次，每次30分钟3 超纯水洗2次，每次1分钟4 0.5%硝酸银洗30分钟5 超纯水洗5次，每次1分钟（关键步骤，共计5分钟）显色液显色6 看到各条带，则倾去显色液, 1％乙酸中止我感觉浸银后、显色前的水洗非常关键，时间不能太长，次数不能太多，否则可能会染不上颜色。

双向电泳中4种常用染色方法的比较

图谱染色方法近１０种。本文对４种在蛋白质组学中常０
取、等电聚焦、白质转移、ＤＰＧ蛋ＳＳ— ＡＥ电泳以及染色等
环节，个环节又包括若干步骤。由此可见２一Ｅ技每一Ｄ
术是一个受多种因素控制的技术，中任何一种因素没其
有理想地控制好都有可能引起整个实验的失败，且这而种失败往往要等到２一Ｅ图谱染色显影之后才能看到。Ｄ因此，２一Ｅ中，得到一张理想的图谱果进行了对比，筛选出适合以期本实验室条件的染色方法。
１材料与方法
１１试验材料．本实验所用的研究材料为杂交水稻威优９６１。本实验染色所涉及的试剂：硝酸银（上海试剂一
的质谱分析提供有益的帮助，除了控制好每一个步骤外，
摘
要：采用ＳＳ— ＡＥ电泳技术，ＤＰＧ比较分析了双向电泳中常用４种染色方法的优、点。结果表明：缺常规银染法灵敏
度低；的双胺硝酸银银柒法与质谱分析不兼容；染方法一银染复合染色法的灵敏度稍低于双胺硝酸银银染法，它的改进考但质谱兼容性最高；改进后的银染方法灵敏度高、背景清晰、与质谱兼容。因此后两种方法较广泛适用于蛋白质组学研究。
技术具有高分辨率、重复性、量分析和制备等性能，高微
它与质谱分析是当今蛋白质组学研究中必不可少的工
具。２Ｄ一Ｅ技术所涉及的环节较多，一般包括蛋白质提
及实验条件的差异，同一染色方法往往在不同的实验室

DNA和蛋白银染步骤(独门绝技--有图)

DNA银染一、银染试剂500ml/瓶(双蒸水稀释)1、固定液：50ml乙醇2、前处理液（敏化液）：5ml HNO33、染色液：0.5g 硝酸银（避光配制）4、显色液：无水Na2CO3 12.5g 甲醛200ul 加水至500ml5、终止液：50ml 冰醋酸二、银染步骤（摇床设置52rpm左右）1、准备好放有双蒸水的塑料盒，将电泳后的变性胶放入盒中在摇床上轻摇1min；2、凝胶固定：倒掉盒中的水，加入100ml左右的固定液，摇床上缓缓摇动10min；3、洗胶：弃固定液，用双蒸水洗2次，每次30S；4、凝胶氧化：弃双蒸水，加入100ml左右前处理液氧化6min；5、洗胶：弃前处理液，用双蒸水洗2次每次10S；6、凝胶染色：弃双蒸水，加入100ml左右的染色液避光摇20min；7、洗胶：弃染色液，用双蒸水洗1次10S；8、凝胶显色：加入100ml显色液摇到看到清晰的条带为止；9、终止：弃显色液，迅速加入终止液100ml左右，摇2-3min；10、洗胶：弃终止液，用双蒸水洗2次每次1min。

三、变性聚丙酰胺凝胶的配制（两块、使用1.0BioRad胶板）1.2%的凝胶可以跑微卫星，和基因组DNA1、尿素：7.2g2、30%聚丙酰胺，4.68ml3、10×TBE，1.5ml (Tris碱108g；硼酸55g；EDTA 40ml 0.5mol/L,Ph=8.0；加水至1L)4、30%AP，35ul5、TEMED,4ul四、下图：左为果蝇正常基因组DNA与损伤后基因组DNA；右为果蝇微卫星电泳12h Treatment24h TreatmentMCT 0 5 10 200 5 10 20Protein银染一、银染试剂500ml/瓶(双蒸水稀释)1、固定液：200ml甲醇，50ml冰醋酸2、前处理液（敏化液）：150ml 乙醇，34g醋酸钠，1g硫代硫酸钠（使用前加入）3、染色液：1.25g 硝酸银（避光配制）4、显色液：无水Na2CO3 12.5g 甲醛200ul 加水至500ml5终止液：2g甘氨酸二、银染步骤（摇床设置52rpm左右）1、凝胶固定：准备好放有双蒸水的塑料盒，将电泳后的变性胶放入盒中，加入100ml左右的固定液，摇床上缓缓摇动30min；2、洗胶：弃固定液，用双蒸水洗2次，每次1min；3、凝胶氧化：弃双蒸水，加入100ml左右前处理液氧化30min；4、洗胶：弃前处理液，用双蒸水洗3次每次5min；5、凝胶染色：弃双蒸水，加入100ml左右的染色液避光摇20min；6、洗胶：弃染色液，用双蒸水洗2次每次5min；7、凝胶显色：加入100ml显色液摇到看到清晰的条带为止；8、终止：弃显色液，迅速加入终止液100ml左右，摇10min；9、洗胶：弃终止液，用双蒸水洗2次每次5min。

快速银染银染步骤及相关药品配制

快速银染银染步骤及相关药品配制银染步骤及相关药品配制一．银染基本步骤1．洗板和擦板电泳槽板先用无水乙醇擦一遍，5分钟后用配制的剥离硅烷（repel）溶液涂抹均匀。

放置15－30分钟玻板（用过的玻板先用NaOH溶液浸泡，直至废胶脱落）先用抹布蘸少许洗洁精在自来水下洗净，再用无水乙醇擦一遍，5分钟后用新鲜配制的亲和硅烷（binding）溶液涂抹均匀。

放置15－30分钟2．装板玻板在下，电泳槽板在上，中间放两根压条(涂抹repel和binding的面相互靠近)，对齐后，用三对夹子将波板与电泳槽板夹紧。

3．灌胶用针筒吸取6％的聚丙烯酰胺凝胶溶液，缓慢均匀的从灌胶口将胶灌入，灌好后取下靠近灌胶口的夹子，倒插入梳子，注意不要起汽泡，插好后，再夹上夹子。

凝胶需要1－2个小时。

4．预电泳取下夹子，拔出倒插的梳子，在自来水下将灌胶口冲洗干净，放入电泳槽，卡紧，灌入缓冲液，上下槽各300ml左右，注意用夹子夹紧上槽排放缓冲液的胶管。

80W衡功率电泳半小时。

5．点样用吸管吹干净灌胶口的废胶，将梳子顺插入灌胶口，开始点样，注意不要串样，梳齿不要将胶面弄坏。

6．电泳80W衡功率电泳1小时左右。

7．银染将玻板放入配制好的银染液中，银染半小时左右10．显影从银染液中拿出玻板快速水洗3－5秒，然后放入新鲜配制的显影液中，室温显影，直至条带清晰11．用自来水轻轻冲洗板子正反面几次，洗净残余的NaOH。

二．药品配制1．6%聚丙烯酰胺凝胶（PA）：Urea: 420.42gAcr: 60g 丙烯酰胺Bis: 3.16g10×TBE: 50ml加超纯水定容至 1L8% 聚丙烯酰胺PA：尿素 420.42gAcr： 80gBis: 4.212g10*TBE: 100ml加超纯水定容至 1L2. 10×TBETris-base: 216g硼酸：110gEDTA-Na2：14.88g3. binding（亲和硅烷）无水乙醇：2mlBinding原液：8ul冰醋酸：8ul4．Repel （剥离硅烷）三氯甲烷：100mlRepel：2ml5．Loading buffer：甲酰氨：49ml10mM EDTA（PH=8.0）：1ml溴酚蓝：0.125g二甲苯青：0.125g7．银染液蒸馏水：1500ml无水乙醇：150ml硝酸银溶液（1g/ml）：1500ul 8．显影液蒸馏水：1500ml氢氧化钠：30g甲醛：6ml硫代硫酸钠（10mg/ml）：300ul。

银染法的名词解释

银染法的名词解释对于普通人来说，银染法可能是一个陌生的名词，但对于纺织品行业的从业者来说，它却是一个非常重要的工艺。

银染法是一种利用化学方法将银离子引入纺织品中，以达到防菌、抗菌、净化空气等功能的一种技术。

下面，我们将深入探讨银染法的详细内容。

一、银染法的原理银染法利用的是银离子的抗菌性能。

事实上，早在古代，人们就发现银具有抗菌的作用。

在现代，科学家们通过研究发现，银离子能够干扰细菌的细胞膜和核酸的复制，从而抑制细菌的生长和繁殖。

为了将银离子引入纺织品中，银染法应运而生。

二、银染法的流程银染法的流程主要包括：纺织品预处理、银染剂的配制、浸染银染剂、干燥和固定银离子等步骤。

首先，在纺织品进行预处理。

预处理主要包括漂白、洗涤、软化、充电等步骤，以去除纺织品表面的杂质，使其更加适合染色。

接着，配制银染剂。

银染剂通常由银盐和染料组成。

不同的银盐可以产生不同的效果，例如硝酸银可以产生较强的抗菌效果，氧化银则可以产生净化空气的效果。

然后，将纺织品浸泡在银染剂中。

这个步骤中，纺织品会吸收银离子，并且银离子会与纺织品的纤维结合，从而实现功能的目的。

完成浸染后，需要将纺织品进行干燥。

干燥的目的是除去多余的水分，使银离子更好地固定在纺织品上。

最后，采用适当的固定剂将银离子固定在纺织品上。

固定剂能够与银离子进行反应，形成稳定的化学结构，从而增加银离子在纺织品上的使用寿命。

三、银染法的应用银染法在现代纺织品行业中应用广泛。

首先是医疗纺织品领域。

由于银离子的抗菌性能，银染法在生产医用口罩、手术衣等产品时被广泛采用，可以有效地阻止细菌的传播，保护医护人员和患者的健康。

另外，银染法也被应用于家纺领域。

银染法可以制作出带有抗菌功能的床上用品，例如枕头套、被套等。

这些产品可以减少细菌的滋生，为家庭提供一个干净、健康的生活环境。

此外，银染法还可以应用于户外装备领域。

例如，登山服、户外鞋等产品采用了银染法，不仅可以抑制细菌的生长，还有效防止异味产生，让户外运动更加舒适。

银染操作步骤(精)

银染操作步骤1. 固定:电泳结束后,取凝胶放入约 100ml 固定液中,在摇床上室温摇动 20分钟,摇动速度为 60-70rpm 。

固定 40分钟以上甚至过夜可以进一步降低背景。

固定液的配制:依次加入 50ml 乙醇、 10ml 乙酸和 40ml MilliQ级纯水或双蒸水,混匀后即成 100ml 固定液,可大量配制室温存放。

2. 30%乙醇洗涤:弃固定液,加入 100ml 30%乙醇,在摇床上室温摇动 10分钟,摇动速度为 60-70rpm 。

30%乙醇的配制:70ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入 30ml 乙醇,混匀后即成 100ml 30%乙醇。

3. 水洗涤:(洗 2次弃 30%乙醇,加入 200ml MilliQ级纯水或双蒸水,在摇床上室温摇动 10分钟,摇动速度为 60-70rpm 。

4. 增敏:(辅染现配现用弃水,加入 100ml 银染增敏液 (1X,在摇床上室温摇动 2分钟,摇动速度为 60-70rpm 。

银染增敏液 (1X的配制:99ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入 1ml 银染增敏液 (100X,混匀后即为银染增敏液 (1X。

银染增敏液 (1X配制后需在 2小时内使用。

银染增敏液 (100X的配制:即 2.8%硫代硫酸钠溶液,需用黑袋包裹避光保存。

5. 水洗涤 (共 2次 :弃原有溶液,加入 200ml MilliQ级纯水或双蒸水,在摇床上室温摇动 1分钟,摇动速度为 60-70rpm 。

弃水,再加入 200ml MilliQ级纯水或双蒸水,在摇床上室温摇动 1分钟,摇动速度为 60-70rpm 。

6. 银染:弃水,加入 100ml 银溶液 (1X,在摇床上室温摇动 10分钟,摇动速度为 60-70rpm 。

银溶液 (1X的配制:99ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入 1ml 银溶液 (100X,混匀后即为银溶液 (1X。

银溶液 (1X配制后需在 2小时内使用, 最好是现配现用。

戊二醛生产工艺

戊二醛生产工艺(总3页)--本页仅作为文档封面，使用时请直接删除即可----内页可以根据需求调整合适字体及大小--1、戊二醛生产工艺选择1）吡啶法在甲醇溶液中，用金属钠将吡啶还原为二氢吡啶，再通过羟胺处理得戊二肟，最后采用亚硝酸钠和盐酸使戊二肟分解为戊二醛。

该生产工艺设备简单，转化率可达到90%，但工艺线路长，收率低，原材料消耗大，生产成本高，污染大，产品质量差。

2）吡喃法吡喃法又称丙烯醛法，它由丙烯醛与乙烯基甲醚加成反应生成2-甲氧基-3，4-二氢吡喃，在酸性催化剂作用下水解得到戊二醛粗品，再经脱色、过滤、蒸馏甲醇后得戊二醛。

投资少，成本低，工艺简单，收率高，产品质量好，操作方便，是目前国内外工业生产戊二醛的主要方式。

3）1，5-戊二醇法在固定床反应器中，将预热气化后的1，5-戊二醇与空气混合进入催化剂床层进行气-固相反应生成戊二醛。

该法的优点是反应线路短，缺点是收率低，原料短缺，没广泛用于工业生产。

4）环戊烯氧化法以乙烯生产过程中副产物环二戊烯为原料，加氢制得环戊烯，再在水基介质中以固体酸为催化剂，双氧水为氧化剂，一步氧化制得戊二醛。

该法反应条件温和，操作简单，流程短，在反应、分解、蒸馏过程中，产品收率较吡喃法高出5～10%。

通过比较，吡喃法和以双氧水氧化环戊烯为主要生产方法，本公司自产丙烯醛和乙烯基甲醚，因此采用吡喃法生产戊二烯。

2、戊二醛生产工艺简述丙烯醛同乙烯基甲醚按一定比例经流量计计量后进入管道反应器中，在压力左右、温度小于200℃条件下反应生成甲氧基二氢吡喃，甲氧基二氢吡喃及没反应完的原材料丙烯醛同乙烯基甲醚通过分离、精馏得到纯甲氧基二氢吡喃；精制后的甲氧基二氢吡喃通过泵打入水解釜中在酸性催化剂条件下进行水解，水解后的物料进入- 1 -分离塔中分离，分离后的有效成分进入精馏塔中精馏，收集不同沸点馏分，甲醇返回到乙烯基醚工序循环使用，戊二醛通过过滤除杂后得到纯净产品。

将纯产品加水调配到50%水溶液包装。

银染方法总结

银染的方法种类很多，目前有文献报道的就有100 多种。

大致的原理是银离子在碱性pH 环境下被还原成金属银，沉淀在蛋白质的表面上而显色。

由于银染的灵敏度很高，可染出胶上低于1 ng/蛋白质点，故广泛的用在2D 凝胶分析上，及极低蛋白含量测定的垂直凝胶中。

这里介绍的是我们实验室成功运用的银染方法，主要是用于垂直凝胶电泳中低丰度蛋白的检测！如内源性GST-Pulldown、Co-IP等实验中相互作用蛋白的研究银染操作规程实验原理：在碱性条件下，用甲醛将蛋白带上的硝酸银（银离子）还原成金属银，以使银颗粒沉积在蛋白带上。

染色的程度与蛋白中的一些特殊的基团有关，不含或者很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时候呈负染。

试剂：乙醇、冰醋酸、乙酸钠、硫代硫酸钠、硝酸银、碳酸钠、甘氨酸或EDTA.Na2.2H2O、甲醛实验操作程序：固定：30min或者更长时间100ml 乙醇（40% 乙醇）25ml冰醋酸（10% 冰醋酸）加水到250ml致敏：30min75ml 乙醇（30% 乙醇）17g乙酸钠或28.2g三水乙酸钠0.5g硫代硫酸钠加水到终体积250ml 水洗：3 x 10min银染：20min0.625g AgNO3、100 ul 37%甲醛（在使用前加入）加水到终体积250ml水洗：2 x 1 min (注意把握时间，水洗时间长显色速度慢，点的颜色偏黄色)显色：视情况而定6.25 g Na2CO3、50 ul 37% 甲醛（在使用前加入）加水到终体积250ml终止：10min3.65g EDTA.Na2.2H2O 或者1g 甘氨酸加水到终体积250ml保存：1% 冰醋酸，4 ℃注意事项：1．固定时间较长，则加一步水洗30min，以免胶太脆而破碎。

2．甲醛在使用前加入。

3．最好多配制一份显色液，第一次显色到溶液变混浊时换一份显色液，显色到点清晰。

4．显色过程很快，要注意把握时间，避免染色过度。

5．银染液和显色液需要预冷。

蛋白质凝胶电泳银染色法的改进

１材料与方法１．１材料１．１．１丙烯酰胺（Ａｃｒ）北京化学试剂公司产品。１．１．２甲叉双丙烯酰胺（Ｂｉｓ）ＦＬＵＫＡｃｏｍｐａｎｙ。１．１．３十二烷基硫酸钠（ＳＤＳ）ＩＮＤＯＮＥＳＩＡＣＨＥＭＩＣＡＬＳｃｏｍｐａｎｙ。１．１．４牛血清白蛋白（ＢＳＡ）上海长阳生化制药厂（电泳单点纯）。１．１．５糜蛋白酶上海化学试剂采购供应站（国产分装）。１．１．６戊二醛Ｅ．Ｍ．Ｋ进口分装（上海化学试剂站分装厂）。１．１．７硝酸银成都化学试剂厂（ＧＲ）。１．１．８考马斯亮兰ＣｏｏｍａｓｓｉｅＢｒｉｌｌａｎｔＢｌｕｅＲ－２５０
１．２．２ＣＢＢＲ－２５０染色电泳结束后凝胶片置０．２５％ＣＢＢＲ－２５０染液（溶解１．２５ｇＣＢＢＲ－２５０于４５４ｍｌ５０％甲醇及４６ｍｌ冰醋酸中）４ｈ以上或过夜，再用脱色液（含１０％冰醋酸，２５％甲醇的水溶液）浸泡至背景色褪色完全为止。银染色：电泳结束后，在直径１３ｃｍ培养皿中按以下步骤在摇床上进行操作（每块凝胶需最低试剂量为２０ｍｌ）。固定：将凝胶置固定液（含冰醋酸１０％，甲醇４０％的水溶液）中浸泡１０ｍｉｎ。漂洗：将固定的凝胶片置重蒸馏水中洗５ｍｉｎ。增敏：将凝胶片置５％的戊二醛水溶液中７ｍｉｎ。漂洗：重蒸馏水洗３次，每次３ｍｉｎ。银染：将凝胶片转入染液（２０％硝酸银２００μ１；浓氨水２００μｌ；４％氢氧化钠ｌｍｌ；２０％乙醇１８．６ｍｌ，新鲜配制）中１０ｍｉｎ。漂洗：２０％乙醇洗两次，每次３ｍｉｎ。显影：将

银染流程及注意事项

银染流程及注意事项
银染流程银染 protocol
注意事项：
在最初甲醇固定时就应该先除去甘油、尿素、甘氨酸、Triton X 100和两性电解质这些干扰性物质。

蛋白胶固定之前一定要先用水涮干净！
SDS凝胶中的巯基乙醇会导致在60 KDa或67 KDa处出现两条水平线。

减少巯基乙醇的用量即可避免。

不同蛋白质对银染的反应是不一样的，尤其是碱性蛋白染色效果差。

因此，不宜用银染测定不同蛋白的比例。

染色过程中，缓慢的振荡是必要的，一般选择 40 60 rpm.
对于银染条带不理想可尝试优化：
① 反应溶液都平衡到室温，
② 硝酸银和显色液容易失效，可以现配现用
③ PAGE胶固定之前，用水浸洗掉running buffer
④ 检查用水器具是否都去离子彻底（用新鲜配置50%硝酸润洗）。

我们实验室用的银染方法

我们实验室用的银染方法1.50%甲醇浸泡15分钟(置于摇摆床上,以下省略,本步骤两次,每15分钟更换一次)2.10%甲醇浸泡10分钟3.水漂洗3次,每次数秒4.2μM DTT溶液浸泡20分钟5.0.1%硝酸银溶液浸泡20分钟6.水漂洗3次,每次不超过15秒(每次约150ML)7.显色液漂洗3次,每次不超过15秒(每次约100ML)8.显色液浸泡显色至看到目的蛋白带(约200ML)9.10G柠檬酸定影显色液:15G无水碳酸钠溶于500ml水,用前加入250μL福尔马林搅拌均匀水用双蒸水就可以,纯度越高越好,其他试剂用分析纯,据书上说甲醇用化学纯的比分析纯更灵敏此方法出自冷泉港蛋白质技术指南(实际上是其蛋白质技术会议的总结)灵敏度稍低于分子克隆上老方法,但是非常方便,也比其他方法快速,只需要1.5小时,我染出来的胶非常漂亮,有需要的话可以上传给大家看看一般来说，高背景是由于杂质产生的，银染的水质很重要，最好要用去离子水或双蒸水，装胶的器皿也一定要洗得很干净。

固定、银染之后均需充分的漂洗。

其实银染就是银镜反应，可能是你的样品浓度高，所以白了，浓度更高还会变成一条能反光的带。

固定时间不需加长，我有时来不及还减少固定时间，银染关键是器皿和溶液干净，显色前胶一定要漂干净大板本来效果就差点，浓度越大，条带形状越差，这也很正常，银染薄点的胶效果要好些，因为染的是表面的蛋白1.取下凝胶,蒸馏水冼胶30秒.2. 0.1% 硝酸银染色10分钟.3. 弃去染色液,蒸馏水洗胶1分钟.4.显色液显色15秒,换用新的显色液,显清条带为止.显色液配方: 10克氢氧化钠+0.2克碳酸钠+2m甲醛溶液,定溶到500ml.这个染色方法挺好的,我用过.注意染色时间不能长.材料没什么要求，玻璃会更好一点，但不好搞到，我们是见到什么大小合适就用什么。

液体的量一般是胶体积的5倍，比如13×13×0.1cm的胶，用一百ml一定够，80也行。

he.银染.胶原染色方法

固定4-12小时。

HE染色步骤1、苏木素苏木色精2.5g，硫酸铝钾22g，碘酸钠0.25g，无水乙醇10ml，蒸馏水350ml，冰醋酸5ml甘油140ml苏木色精溶于无水乙醇中，完全溶解后加入碘酸钠为A液。

硫酸铝钾溶于蒸馏水中为B液。

将A，B两液混均搅拌3min，溶液由淡红色逐渐加深呈暗紫红色，再加入甘油、冰醋酸混匀，无需过滤即可使用。

2、伊红（水溶性）改良醋酸化伊红溶液5g伊红Y溶于100ml蒸馏水,完全溶解后加醋酸20ml 立即有沉淀物生成,充分搅拌混合均匀沉淀物呈糊状,过滤后将沉淀物放入60℃烤箱中烘干,将烘干的沉淀物用棕色瓶装备用。

配制时称取0.25g溶于95%乙醇100ml。

3、0.5%～1%盐酸乙醇：将0.5ml盐酸缓缓加入95%乙醇中，再用95%乙醇稀释至100ml。

4、中性甲醛：甲醛(40%) 100 ml、无水磷酸氢二钠 6.5 g、磷酸二氢钠 4.0g、蒸馏水 900 ml 。

染色过程：Gomori染色方法1、Gomori氨性银改良液取5%硝酸银水溶液5ml，滴加浓氨水由棕黑色变清为止，再加入3%氢氧化钠水溶液5ml，此时该液突变紫黑色，这时再加入氨水使之变清晰为止（有少量颗粒）。

最后用蒸馏水补足至50ml，盛棕色试剂瓶中，置于冰箱中备用较长时间。

2、10%中性甲醛：pH=8.210％中性甲醛固定液，福尔马林（40％ W/ 甲醛） 100ml，磷酸二氢钠（NaH2PO4•H2O） 4g （无水NaH2PO4 3.5g ），磷酸氢二钠（Na2HPO4）6.5g，补蒸馏水至1000ml。

3、酸性高锰酸钾液：0.25%高锰酸钾100ml与3%硫酸5ml混合。

注意事项：1、所使用的玻璃仪器，须用清洁液处理。

2、配制氨银溶液时，氨水加入的量不能过多或不足，过多感应下降，会使液体过碱，滴染时，切片容易脱落，过少则感应上升，浸染效果不佳，不好掌握。

3、配制氨银液时，有可能用玻璃蒸馏水。

（玻璃蒸馏水器蒸馏的双蒸水）4、使用的化学试剂应尽量用分析纯以上。

银染步骤及注意事项

银染步骤及注意事项银染步骤及注意事项银染色步骤为1次固定10分钟冰醋酸2用双蒸水洗涤凝胶，每次1分钟3染色液1g硝酸银。

5mL37甲醛1L双蒸水现在匹配染色30分钟。

4.快速清洗并清洗凝胶数次。

5开发30克碳酸钠1.5毫升37甲醛200微升10毫克/升硫代硫酸钠显影直到出现清晰的条纹银染色成功的关键因素包括:1 .用超纯水，如纳米纯水或Milli-Q或双蒸水进行银染色的纯化2.使用提供的碳酸钠或ACS试剂级碳酸钠染色后用于水洗的时间长度非常重要。

清洗胶水，然后将其放入通常浸泡在水中的显色溶液中，只需5-10秒钟。

4使用前及时向显色液中加入甲醛和硫代硫酸钠ul/1ml5.使用前及时配制染液银染方法有很多种，目前文献报道有100多种。

然而，确切的染色机理还不是特别清楚。

一般原理是银离子在碱性酸碱度环境下还原成金属银，沉淀在蛋白质表面形成颜色。

银染色广泛用于2D凝胶分析和垂直凝胶，用于极低蛋白质含量的测定，因为它对低于1纳克/蛋白质斑点的染色凝胶具有高灵敏度。

本文介绍了我们实验室成功使用的银染色法，以补充关键操作和要求。

主要用于垂直凝胶电泳中低丰度蛋白的检测，如内源GST-Pulldown、Co-IP等实验中相互作用蛋白的研究。

银染色程序用于检测聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质。

实验原理是在碱性条件下，用甲醛将蛋白质带上的硝酸银和银离子还原成金属银，在蛋白质带上沉积银颗粒。

染色程度与蛋白质中某些特殊基团的有关。

不含或很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时会被染色。

银染的详细机制尚不十分清楚。

试剂乙醇、冰醋酸、乙酸钠、硫代硫酸钠、硝酸银、碳酸钠、甘氨酸或乙二胺四乙酸。

Na2.2H2O，甲醛实验程序固定30分钟或更长时间100毫升乙醇40毫升乙醇25毫升冰醋酸10毫升冰醋酸加水250毫升敏化30分钟75毫升乙醇30毫升乙醇17克醋酸钠28.2克三水醋酸钠0.5克硫代硫酸钠加水250毫升水洗涤3×10毫升银染料20分钟0.625克硝酸银100微升37甲醛加水至最终体积250毫升使用前用水冲洗2×1min注意掌握时间水冲洗时间长颜色慢点是黄色发展取决于情况o 6.25 g Na2CO3 o 50 ul 37甲醛添加o 水至最终体积2使用前50ml终止10 min o 3.65 g EDTA、na 2.2h2o 或1g甘氨酸o加水至最终体积250ml保存1冰醋酸4℃注意事项1如果固定时间较长，加一步水洗30分钟以避免胶水太脆而破裂。

蛋白质银染原理与方法

原理：蛋白质条带的银染是基于蛋白质中各种基团（如琉基、碳基等）与银的结合，检测极限是2～／蛋白条带。

① SDS-PAGE电泳。

注意：银染检测蛋白质的水平是在100ng左右，与CommassieBlue染色比较，银染加样量要少。

否则难以得到清晰的电泳分辨率。

②电泳结束后，戴手套将PAGE胶转移到干净的玻璃培养皿或TIP头盒盖中。

加入25ml FixingSolution（固定液），室温振荡保温30min。

胶需要完全淹没在固定液中。

③彻底弃去固定液，加入25mlIncubation Solution（保育液），室温振荡保温30min。

胶需要完全淹没在保育液中。

④彻底弃去IncubationSolution（保育液），用50ml去离子水洗3次，每次5min。

⑤准备：取10XSilvering Solution, 加入水，混匀后使用。

⑥弃去洗涤的水，加入25mlSilvering Solution (银染液)。

室温振荡保温20min。

⑦彻底弃去银染液，加入25mLDevelopingSolution（显色液），室温振荡保温1~10min。

注意观察目的条带。

如果目的条带出现了，可以考虑终止显色。

显色时间不要过长，否则本底较深。

⑧彻底弃去显色液,加入25mLStopping Solution（终止液），室温振荡保温10min。

⑨彻底弃去StoppingSolution（终止液），用50mL去离子水洗3次，每次5min。

弃去洗涤的水，加入25mL PreservingSolution（保护液），室温振荡保温20min。

银染PAGE胶可以拍照保存，也可以室温玻璃纸干燥。

今天第一次银染，结果出来啥也没有，凝胶就像一块海带一样。

能不能提供详细的银染步骤呢？好像有好几种版本，哪位大侠有经验的希望能点拨一下？hotstoe wrote:1. 取下凝胶,蒸馏水冼胶30秒.2. % 硝酸银染色10分钟.3. 弃去染色液,蒸馏水洗胶1分钟.4.显色液显色15秒,换用新的显色液,显清条带为止.显色液配方: 10克氢氧化钠+克碳酸钠+2m甲醛溶液,定溶到500ml.这个染色方法挺好的,我用过.注意染色时间不能长.我的经验是：1.取下凝胶用去离子水冼胶30秒三次，硝酸银染色10分钟.3.弃去染色液,蒸馏水洗胶1分钟（换2次去离子水）4.显色液显色15秒,换用新的显色液,显清条带为止.不要试图将所有的条带都显出来，要求越高可能导致背景就深，5.染色后要用固定液（冰乙酸）终止染色，6.固定3分钟后再用去离子水洗涤2遍（整个试验比较费去离子水）。