戊二醛-银染法
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戊二醛-银染法
(基于Heukeshoven和Dernick的方法,根据以下方案,用戊二醛作为敏化剂进行硝酸银染色)
1.固定
凝胶电泳后,将凝胶在125mL 固定液中固定30分钟(固定液配方:40%EtOH / 10%HAc)
2.敏化
使凝胶在125mL敏化液中反应30分钟(敏化液配方:0.125%戊二醛/0.2%硫代硫酸钠/6.8%乙酸钠溶)
3.洗涤
用125mL去离子水洗涤三次,每次5分钟
4.银染
将凝胶用125mL银染液浸渍20分钟(0.015%甲醛和0.25%硝酸银溶液)
5.洗涤
随后用125mL去离子水洗涤两次,每次1分钟
6.显色
加入125ml显色液还原银离子(显示液配方:0.008%甲醛/3%碳酸钠溶)
7.终止
完成银离子还原后,将凝胶浸入125mL 1.5%EDTA中以停止显影
8.洗涤
用去离子水洗涤。
9.保藏
将染色的凝胶储存在去离子水中或在滤纸上在真空下在65℃下干燥40分钟。