Carnoy固定液使用说明

人的外周血淋巴细胞培养及染色体制片方法、染色体组型分析

人的外周血淋巴细胞培养及染色体制片方法、染色体组型分析一、实验背景1、Carnoy固定液：固定液的重要特性是能迅速穿透细胞，将其固定并维持染色体结构的完整性，还要能够增强染色体的嗜碱性，达到优良染色效果。

单纯的固定液一般难以达到这些要求，因此在实验中使用两种混合的固定液。

由于Carnoy首先使用的甲醇和冰乙酸混合液而称其为卡诺氏固定液。

Carnoy固定液（甲醇∶冰乙酸=3∶1）每次使用前需临时配制，长时间放置影响固定效果，固定时间15min至24h，冰箱、室温均可。

必要时可改变甲醇和冰乙酸的比例，冰乙酸比例增加，利于细胞膨胀、染色体铺展，但易导致细胞破裂、染色体散失。

2、低渗液（hypotonic solution）低渗液是指渗透压和离子强度均低于正常细胞生理条件的溶液，渗透压低于组织液，与外周血混在一起时，水分迅速进入细胞，使其膨胀，甚至破裂，获得分散良好的染色体分裂象。

常见的低渗液：水、低渗的柠檬酸钠或氯化钠、甘油磷酸钾（0.65mol/L）、氯化钾（0.075mol/L）等。

低渗效果取决于低渗液的化学组成、低渗的温度和处理时间。

低渗处理是凭借反渗透作用使细胞膨胀染色体铺展，同时可使黏附于染色体的核仁物质散开，以便能在一个平面上观察所有染色体形态。

实验室中一般选用0.075mol/L KCl为低渗液，其优点有：①染色体轮廓清楚，可染色性强，染色时间短。

②用于显带染色时能充分显示带型特点。

低渗处理为37℃，25～30min，以预实验条件为准。

2、肝素N-硫酸和艾杜糖醛酸含量较多的一种糖胺聚糖，由D-β-葡糖醛酸(或L-α-艾杜糖醛酸)和N-乙酰氨基葡糖形成重复二糖单位组成的多糖。

肝素是一种抗凝剂，是由二种多糖交替连接而成的多聚体，在体内外都有抗凝血作用。

2、PHA植物血凝素(Phytohaemagglutinin)是一种有丝分裂原，主要用于激活免疫细胞—淋巴细胞。

是一种干扰素诱导剂，不仅可以刺激机体产生白介素-2和干扰素；还可以刺激机体产生非特异性抗体。

组织固定液的使用

谈谈固定液的使用作者: liza3(站内联系TA)发布：2013—01-11当前，应用于固定试剂的种类较多,它们对于固定不同的组织成分起着不同的作用，因此我们在使用时应该了解不同固定剂的效能,才能合理的固定组织。

根据Bencroft的分类法，将不同的固定剂分为四种类型:Ⅰ类:醛类，甲醛，戊二醛,多聚甲醛，丙烯醛，已二醛，丙二醛等.Ⅱ类:氧化剂类，四氧化锇（奥酸），高锰酸钾,重铬酸钾等。

Ⅲ类：蛋白变性类,甲醇，乙醇，醋酸等.Ⅳ类：其他,氯化汞，苦味酸等.上述四种类型的固定剂，最常使用的是甲醛，其余的也在其它病理技术方面中用到。

下面根据使用的需要，将着重介绍几种常用的固定剂。

(1）甲醛甲醛商品名为福尔马林，一般市售的含甲醛37-40%，由甲醛气体饱和于水而成,比重为1。

12。

它也可以稳定的固体形式存在,它的成分为高分子量的聚合体，称为多聚甲醛。

甲醛溶液较难纯化，在每批市售商品中，都含有不少的杂质如甲醇,这种在组织化学方法当中，能使酶钝化,影响其反应。

甲酸,它可使固定液变酸，在陈列标本或长时间固定的组织，由于酸的作用，往往细胞核染色欠佳。

甲醛有效固定作用的要点是，在蛋白质末端基团之间形成交联链。

参与甲醛固定蛋白质的基团，主要为氨基，亚氨基及酰氨基，肽，胍基，羟基，SH和芳香环.甲醛与组织蛋白类的反应是多样和复杂的，因为它能和多种不同的功能基团结合，在多数情况下在其间形成桥键。

甲醛有这种交联的功能,也是它的缺点，在用甲醛固定过的组织中,需要做免疫组化的，往往提倡用酶消化或热抗原修复法来使蛋白与甲醛交联的醛键断裂开，以利于后来的染色.甲醛可配成简单的或混合的固定液，最简单和最容易掌握的方法,就是取10ml甲醛液，加水90ml，这就是10％的福尔马林。

当然,现在使用的固定液要求较为严格些,最好是使用缓冲福尔马林固定液,这将有利于后来的免疫组化染色的需要.从组织学的观点来说,甲醛是一种良好的固定剂,它有很多的优点:1. 组织收缩较少,损伤少，保存固有物质好。

常用固定液的配制

常用固定液的配制1. 福尔马林-醋酸-酒精固定液(FAA)50%或70%酒精90ml + 冰醋酸5ml + 福尔马林(37%~40%甲醛)5ml可用作固定植物的一般组织,但不适用于单细胞及丝状藻类,也不适宜作细胞学研究。

幼嫩材料用50%酒精代替70%酒精，可防止材料收缩。

若材料坚硬，可略减冰醋酸，略增福尔马林。

若材料易收缩，可稍增加冰醋酸。

久置时另加入5ml甘油以防蒸发和材料变硬。

此液又可作保存液。

固定时间最多10h。

如果用在植物胚胎的材料上，改用下面的配方，效果较好：50%酒精89ml + 冰醋酸6ml + 福尔马林5ml2. 福尔马林-丙酸-酒精固定液（FPA）福尔马林5ml + 丙酸5ml + 70%酒精90ml固定一般的植物组织，通常固定8~24h，可长久保存。

3. 酒精-醋酸-氯仿固定液（卡诺固定液，Carnoy fixative）配方Ⅰ：纯酒精3份+ 乙酸1份配方Ⅱ：纯酒精6份+乙酸1份+ 氯仿3份配方Ⅲ：甲醇6份+乙酸1份+ 氯仿3份适用于植物组织和细胞学材料，为研究细胞分裂和染色体的优良固定液。

固定时间不宜过久。

4. 酒精-福尔马林固定液福尔马林2~6（6~10）ml + 70%酒精100ml固定植物一般组织，尤其适用于萌发的花粉管的固定。

通常固定24h，亦可长久保存。

5. 酒精-福尔马林-甘油固定液95%酒精150ml + 5%福尔马林100ml + 甘油50ml此液也可长期储存材料。

6. 铬酸-醋酸固定液根据固定对象的不同，可分为强、中、弱3种配方：（1）弱液配方：10%铬酸2.5ml + 10%醋酸5ml + 蒸馏水92.5ml（2）中液配方：10%铬酸7ml + 10%醋酸10ml + 蒸馏水83ml（3）强液配方：10%铬酸10ml + 10%醋酸30ml + 蒸馏水60ml弱液配方用在固定较柔软的材料，如藻类、苔藓和蕨类的原叶体等。

固定时间较短，一般为。

1h，但藻类和蕨类的原叶体可缩短到几分钟至12~24h数小时，最长可固定中液配方用于固定根尖、茎尖、未成熟子房和胚珠等。

组织固定液

组织固定液组织固定液北京华越洋生物------------------------------------------------------AAF固定液500ml 固定液40% 室温,避光,12个月组织化学中细胞或组织切片的固定。

主要由乙醇、冰乙酸、甲醛等组成。

常用于快速脱水和固定以及冷冻切片的快速固定。

AAF固定液5L 固定液40% 室温,避光,12个月组织化学中细胞或组织切片的固定。

主要由乙醇、冰乙酸、甲醛等组成。

常用于快速脱水和固定以及冷冻切片的快速固定。

Davidson's fixative 100ml 固定液40% 室温,避光,12个月Davidson's fixative 500ml 固定液40% 室温,避光,12个月Bouin's固定液100ml 固定液40% 室温,避光,6个月活检标本的固定、媒染剂、适用于脂肪较多的组织标本。

主要由PA溶液、甲醛、乙酸组成。

Bouin's固定液500ml 固定液40% 室温,避光,6个月活检标本的固定、媒染剂、适用于脂肪较多的组织标本。

主要由PA溶液、甲醛、乙酸组成。

改良乙醇Bouin固定液100ml 固定液40% 室温,避光,12个月固定肾活检组织,组织学制备固定液,亦可以很好的保存糖原主要由乙醇、甲醛、乙酸乙酯等组成。

改良乙醇Bouin固定液500ml 固定液40% 室温,避光,12个月固定肾活检组织,组织学制备固定液,亦可以很好的保存糖原主要由乙醇、甲醛、乙酸乙酯等组成。

Carnoy固定液100ml 固定液40% 室温,避光,12个月又称卡诺氏固定液,RNA\DNA染色的固定,糖原的固定,能清除血性标本,可以用于细胞学固定Carnoy固定液500ml 固定液40% 室温,避光,12个月又称卡诺氏固定液,RNA\DNA染色的固定,糖原的固定,能清除血性标本,可以用于细胞学固定Carnoy固定液Ⅱ100ml 固定液40% 室温,避光,12个月又称卡诺氏固定液,RNA\DNA染色的固定,糖原的固定,能清除血性标本,可以用于细胞学固定Carnoy固定液Ⅱ500ml 固定液40% 室温,避光,12个月又称卡诺氏固定液,RNA\DNA染色的固定,糖原的固定,能清除血性标本,可以用于细胞学固定BS固定液500ml 固定液40% 室温,6个月细胞核染色固定,尤其适用于DNA染色。

卡诺氏固定液

北京雷根生物技术有限公司
卡诺氏固定液
简介：
Carnoy 固定液(Carnoy's Fluid)又称卡诺氏固定液，主要由乙醇、乙酸等混合而成。

适用于一般动植物组织和细胞的固定，常用于动植物压片及石蜡切片等，有极快的渗透力，固定最多不超24h 。

其特点是能迅速穿透细胞，将其固定并维持染色体结构的完整性，还能够增强染色体的嗜碱性，达到优良染色效果。

推荐用于RNA 和DNA 染色的组织固定，亦可用于糖原染色的组织固定，能够使糖原呈细微颗粒状。

组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、一般小块组织固定30～40min 。

2、稍大块组织2～4h 。

3、如果组织块大，可适当延长固定时间，但不宜超过24h 。

注意事项：
1、 Carnoy 固定液对人体有一定的损害，请小心操作。

不宜用于固定脂类染色的组织。

2、组织取材的厚度不同，固定时间也不同。

3、温度对固定的影响很明显，提高温度可以加速固定作用，但温度不宜过高。

4、取出新鲜组织后，应及时固定，无法及时固定时，应保存于生理盐水中及时送检。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

编号名称 DF0019 DF0019 Storage Carnoy Fluid 100ml 500ml RT 避光
使用说明书 1份。

卡诺氏固定液

固定液的重要特性是能迅速穿透细胞，将其固定并维持染色体结构的完整性，还要能够增强染色体的嗜碱性，达到优良染色效果。

单纯的固定液一般难以达到这些要求，因此在实验中使用两种混和的固定液。

由于Carnoy首先使用的甲醇和冰乙酸混合液而称的卡诺氏固定液是效果良好的固定液。

Carnoy固定液（甲醇:冰乙酸=3:l）每次使用前需临时配制，长时间放置影响固定效果，固定时间15分钟至24小时，冰箱、室温均可。

必要时可改变甲醇和冰乙酸的比例，冰乙酸比例增加，利于细胞膨胀、染色体铺展，但易导致细胞破裂、染色体散失。

水稻根尖染色体标本制备作者: biozxp 发布日期: 2006-4-04 查看数: 22 出自: 1.取材：选取水稻种子，充分浸种后，将它们摆在铺有滤纸的培养皿内，在约28℃条件下发芽培养，当胚根长至1～1.5cm时，剪下备用。

2.预处理压片法：采用0.1％秋水仙素处理2h左右去壁低渗法可采用以下四种方法处理处理方法0.002mol/L8-羟基喹啉α－溴萘饱和溶液低温（－4℃）卡诺氏Ⅰ固定液处理时间（h）1 24 24 24注：卡诺氏Ⅰ固定液乙醇：冰醋酸（3：1）3.固定卡诺氏Ⅰ固定液，固定时间以不超过24h为宜。

经过固定的材料如不及时使用，可经90％酒精换到70％酒精各半小时，再换入一次70％酒精，在0～4℃冰箱内备用。

去壁低渗法a.将3固定的材料用DDW洗净后，0.075mol/LKCL溶液室温条件下处理约30min。

b.酶解去壁吸取低渗液，加入1％混合酶液（1％果胶酶与1％纤维素酶的混合液，均为Sigma公司），28℃左右，酶解4.5～5h.酶解过程中，将材料瓶轻轻摇动1～3次，使材料与酶液充分接触。

c.后低渗吸取酶液,用DDW冲洗材料2～3次，然后在DDW中停留30min。

d.重固定吸取低渗液后,加入新配制的卡诺氏Ⅰ固定液，固定时间约20min。

e.标本制备吸取固定液后，将根尖捣碎,再滴入新鲜固定液3～5滴，制成细胞悬液，充分搅匀。

7. 细胞生物学实验七 DNA的Feulgen染色法

三、试剂
1. 1. Carnoy固定液：3份95%酒精加入1份冰醋酸。 2. 1mol/LHCL ：准确量取86.2ml浓盐酸（比重1.18）加入到 93.8ml蒸馏水中。 3. Schiff试剂：称1g碱性品红于200ml煮沸的重蒸馏水中，5 分钟后断电使其冷却至55～50℃，过滤到一个棕色的试剂瓶中，加入1mol/L HCl 20ml，继续冷却至25℃，加入1g 偏亚硫酸氢钠，摇动瓶子使其溶解。密闭瓶口，置黑暗低温处或冰箱内（4℃左右），18～24小时后检查，试剂如透明无色或呈浅黄色时即可使用，这就是Schiff试剂溶液。如有不同程度的红色未褪，可加入1g活性炭，强烈震荡一分钟，仍在低温下静置过夜，然后用滤纸过滤后使用。密封瓶口，包以黑纸，在5℃以下冰箱内可以保存半年。
（四）0.5%的固绿染色1 min（要快），取出用蒸馏水（或自来水）流水冲洗干净。
（五）压片法取一根尖置于载玻片上，用切下生长区部位（染成紫红色），加盖玻片，用拇指或铅笔的橡皮头轻压使细胞分散均匀，镜检。（六）对照组预先用5%三氯醋酸（90℃）处理 15min，用70%酒精浸泡2~3min，蒸馏水浸泡一下。然后再依次进行实验步骤（二）（三）（四）（五）。
（3）后期：姊妹染色体分别向细胞两极移动，染色体达到两极时染色体紧缩成团，染色体的轮廓逐渐变得不清楚，细胞质中间部位（细胞的赤道板）形成细胞板。（4）末期：盘绕变粗的染色体又伸展开，此时，核仁、核膜又重新出现。此外，间期细胞的细胞核有下述特点：核膜清楚，核内结构均匀，除异染色质外，可见1－2个着色较深的核仁。而在进入细胞分裂期的细胞核，一般均大于间期细胞核。
4. Schiff试剂的作用 Feulgen反应成功与否的一个非常关键的因素，就是 schiff试剂的质量。有一大类试剂均称为碱性品红，它们实际上是由几种产品分别组成的。因此只能选用注明 “DNA染色反应用” 的碱性品红才行。此外，Schiff试剂的配制方法也可影响DNA的染色反应。配好的Schiff试剂须在5℃以下冰箱内避光保存。

常用固定液的性质、用途

常用固定液的性质、用途和配置1．单一固定液的性质和用途（1）乙醇（C2H5OH）（ethylalcohol）：又名酒精，可沉淀白蛋白、球蛋白、核蛋白，后者易溶于水，所以经酒精固定的标本对细胞核染色不良。

酒精可溶解脂肪、类脂体，所以不能用酒精固定脂肪。

酒精可沉淀肝糖，但仍可溶解于水，因此肝糖经酒精固定后不能在低于70％酒精中保存。

单独固定使用酒精的浓度应为95—100％。

无水酒精渗透力较差，并且能使组织收缩，在与醋酸、氯仿混合使用时，可增强它们的穿透力。

酒精除固定作用外，还具有硬化和脱水的作用，固定后的组织可保存于70％酒精中，所以酒精在制片过程中用途很大。

无水乙醇容易挥发，又容易吸收空气中的水分，所以瓶盖必须塞紧，为了吸去其中水分，最好在无水乙醇瓶内放入少量无水硫酸铜粉末。

酒精是一种还原剂，不能与重铬酸钾、锇酸等氧化剂混合使用。

（2）甲醛（HCHO）（formeldehyde）：是一种气体，溶于水成为甲醛水溶液或称福尔马林，一般使用浓度为10％福尔马林（formalin）液，其配法是取市售的甲醛液10ml 与90ml 蒸馏水混合即可，实际上其含量只有4％甲醛。

这样的配法已成为一般实验室常用的惯例。

甲醛不能沉淀白蛋白及核蛋白，但能与蛋白质化合。

它是一种应用广泛，使用简单的固定液，具有穿透力强、固定均匀、组织收缩小、硬度适当，适用于一般器官组织的固定及保存。

尤其对脂肪、神经组织固定效果较好。

更适于病理组织的制片及大体积标本的保存，一般组织需固定24 小时以上，固定后的组织可移入50％酒精中逐步脱水。

甲醛是一种强还原剂，不能与铬酸、重铬酸钾、锇酸等氧化剂混合，因极易被氧化为甲酸。

在配混合固定液时，如海利氏液等需临用前再加入，24 小时后失效。

甲醛由于长期贮存，特别是低温气候，容易产生多聚甲醛，即溶液中的白色沉淀，在高温下又成为甲醛。

不纯的甲醛易产生甲酸，使溶液变为酸性，影响核的染色。

所以在备用的福尔马林中加入小量的醋酸钙、碳酸镁或大理石作为中和剂。

Carnoy固定液新用途的探讨

作切片，进行常规染色、酶组织化学染色，光镜下观察，并对第１、３周的标本进行透射电镜观察。结果Ｃａｍｏｙ液
和２０％和３５％三氯醋酸均可引起颊囊上皮的坏死、脱落，形成溃疡，深达基层。术后３周，脱落坏死组织区被临近
上皮和（或）瘢痕组织修复。结论Ｃａｍｏｙ固定液具有较强的固定作用和穿透力，其能导致正常生长的囊壁衬里
上皮的坏死脱落，组织坏死脱落区可被临近上皮和（或）瘢痕组织修复，可试用于临床治疗反复发作的尖锐湿疣、
收稿日期：２００７—０３—２７作者单位：河南科技大学医学院。河南洛阳４７１００３作者简介：付银锋（１９６４一），男，河南洛阳人，实验师，从事病理学实验
教学和技术工作。
酸均可引起颊囊上皮的坏死、脱落，形成溃疡，其穿透深度约０．３ｍｍ，超过黏膜下层深达基层。术后３周，处理面颊囊上皮重新形成，胶原纤维明显增生，成纤维细胞增多。术后６周，小鼠颊囊组织恢复正常。２．２酶组织化学反应术后３周，酶组织化学反应也在此期内重新出现。２．３透射电镜观察术后１周，处理面上皮为无结构的电子密度增高区，基底膜连续性中断，桥粒和半桥粒消失。术后３周，基底膜完整，桥粒和半桥粒恢复，细胞器呈异常改变，线粒体肿胀，嵴变短或消失。３讨论

细胞固定、染色原理与方法

(4)使不同组织成分对染料有不同的亲和力，便于染色。
(5)防止细胞过度收缩或膨胀，失去原有的形态结构。
2.时期
(1)有丝分裂：有丝分裂主要发生在根尖、茎生长点及幼叶等部位的分生组织，根尖取材容易，操作和鉴定方便。
(2)减数分裂：选取适当大小的花蕾是观察花粉母细胞减数分裂的关键性的第一步。此时的植株形态及花蕾大小依植物的类别及品种有所不同。
(4)AF液：90ml乙醇 10ml甲醛用于固定大块组织。
(5)卡诺氏固定液：冰醋酸:氯仿:无水乙醇=1:3:6
改良卡诺氏固定液: 冰醋酸:无水乙醇=1:3
二、染色与染色原理
根据染料的来源不同可分为天然染料(苏木精、洋红等)和人工合成染料（煤焦油染料，如碱性品红等）。
1.苯与苯的取代物
醋酸洋红： 45%醋酸100ml与1-2g卡红混合，煮沸，充分溶解，凉后过滤。1-2个月后加媒染剂铁即可使用。主要染细胞核，若时间太长，细胞质也被染红。
(3)碱性品红染细胞核的特异染料。
2.染细胞质伊红Y、刚果红、苦味酸、酸性品红（品红磺基）
四、洋葱根尖有丝分裂的观察
流程：固定好的根尖→水洗2-3次→1N HCl7-8min→水洗2-3次→取材(1/2分生区)→切碎→染色6-7min→加盖玻片→轻敲→压片→观察。
②饱和对二氯苯溶液室温下处理3-5h，对阻止纺锤体活动和缩短染色体效果也较好，但对染色体小而多的植物来说个利于染色体的计数。
③0.002-0.00mol/L8-羟基喹啉18℃条件下处理5-6h，可以引起细胞粘度的改变，导致纺锤体活动受阻，使中期染色体在赤道面上保持相应的排列位置。缢痕区也较为清晰。一般认为对中等或长染色体的植物较合适。

卡诺氏液的作用

卡诺氏固定液(Carnoy's Fluid) 适用于一般植物组织和细胞的固定,常用于根尖,花药压片及子房石蜡切片等.有极快的渗透力,根尖材料固定15—20min即可,花药则需1h左右,此液固定最多不超过24h,固定后用95%酒精冲洗至不含冰醋酸为止;如果材料不马上用,需转入70%酒精中保存.固定液的重要特性是能迅速穿透细胞，将其固定并维持染色体结构的完整性，还要能够增强染色体的嗜碱性，达到优良染色效果。

配方:无水酒精3份:冰醋酸1份或无水乙醇6份，氯仿3份，冰醋酸1份。

龙胆紫，其1～2％溶液俗称紫药水，是人们所熟悉的外用药。

龙胆紫为一种碱性阳离子染料，因其阳离子能与细菌蛋白质的羧基结合，影响其代谢而产生抑菌作用。

它能抑制革兰氏阳性菌，特别是葡萄球菌、白喉杆菌，对白色念珠菌也有较好的抗菌作用。

它杀菌力强，对组织没有刺激性，也没有毒性和副作用。

醋酸洋红常被用作核、染色体的固定和染色剂。

在“观察植物细胞有丝分裂”（即“观察根尖分生区组织细胞”）时，对染色体进行染色，需要用碱性染液，此时可以使用醋酸洋红或龙胆紫染液。

改良苯酚品红染色液对果蝇唾液腺染色体的染色效果与醋酸染洋高中生物试验中试剂和药品的作用如下：1、斐林试剂作用：鉴定还原性糖：C6H12O6、果糖、麦芽糖、乳糖等。

还原性糖与斐林试剂发生作用，生成砖红色沉淀。

如用于鉴定组织液中有否还原性糖、糖尿病人尿成分分析、酶专一性探索等。

2、班氏尿糖定性试剂使用方法同斐林试剂，所不同的是班氏试剂可长期使用。

3、双缩脲试剂作用：鉴定蛋白质，蛋白质与双缩脲试剂发生作用，可产生紫色反应。

也可用于鉴定多肽。

4、苏丹Ⅲ作用：鉴定脂肪，脂肪可以被苏丹Ⅲ染成橘黄色（或被苏丹Ⅳ染成红色）。

5、质量分数为15%的盐酸和体积分数为95%的酒精溶液的混合液作用：用于洋葱根尖的解离，即使组织中的细胞相互分离开来。

能杀死细胞固定。

6、质量浓度为0.01g/mL的或0.02g/mL龙胆紫溶液（或醋酸洋红溶液）作用：使细胞核内的染色体着色，便于观察。

卡诺氏液

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卡诺氏液
简介：
卡诺氏液、Carn oy 固定液(Carnoy's Fluid)又称卡诺氏固定液，主要由乙醇、乙酸等混合而成。

适用于一般动植物组织和细胞的固定，常用于动植物压片及石蜡切片等，有极快的渗透力，固定最多不超24h 。

其特点是能迅速穿透细胞，将其固定并维持染色体结构的完整性，还能够增强染色体的嗜碱性，达到优良染色效果。

推荐用于RNA 和DNA 染色的组织固定，亦可用于糖原染色的组织固定，能够使糖原呈细微颗粒状。

组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、一般小块组织固定30～40min 。

2、稍大块组织2～4h 。

3、如果组织块大，可适当延长固定时间，但不宜超过24h 。

注意事项：
1、 Carnoy 固定液对人体有一定的损害，请小心操作。

不宜用于固定脂类染色的组织。

2、组织取材的厚度不同，固定时间也不同。

3、温度对固定的影响很明显，提高温度可以加速固定作用，但温度不宜过高。

4、取出新鲜组织后，应及时固定，无法及时固定时，应保存于生理盐水中及时送检。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

编号名称 DF0019 DF0019 Storage Carnoy Fluid 100ml 500ml RT 避光
使用说明书 1份。

卡诺氏固定液

卡诺⽒固定液固定液的重要特性是能迅速穿透细胞，将其固定并维持染⾊体结构的完整性，还要能够增强染⾊体的嗜碱性，达到优良染⾊效果。

单纯的固定液⼀般难以达到这些要求，因此在实验中使⽤两种混和的固定液。

由于Carnoy⾸先使⽤的甲醇和冰⼄酸混合液⽽称的卡诺⽒固定液是效果良好的固定液。

Carnoy固定液（甲醇:冰⼄酸=3:l）每次使⽤前需临时配制，长时间放置影响固定效果，固定时间15分钟⾄24⼩时，冰箱、室温均可。

必要时可改变甲醇和冰⼄酸的⽐例，冰⼄酸⽐例增加，利于细胞膨胀、染⾊体铺展，但易导致细胞破裂、染⾊体散失。

⽔稻根尖染⾊体标本制备作者: biozxp 发布⽇期: 2006-4-04 查看数: 22 出⾃: /doc/3a6c68d233d4b14e852468e0.html1.取材：选取⽔稻种⼦，充分浸种后，将它们摆在铺有滤纸的培养⽫内，在约28℃条件下发芽培养，当胚根长⾄1～1.5cm 时，剪下备⽤。

2.预处理压⽚法：采⽤0.1％秋⽔仙素处理2h左右去壁低渗法可采⽤以下四种⽅法处理处理⽅法0.002mol/L8-羟基喹啉α－溴萘饱和溶液低温（－4℃）卡诺⽒Ⅰ固定液处理时间（h） 1 24 24 24注：卡诺⽒Ⅰ固定液⼄醇：冰醋酸（3：1）3.固定卡诺⽒Ⅰ固定液，固定时间以不超过24h为宜。

经过固定的材料如不及时使⽤，可经90％酒精换到70％酒精各半⼩时，再换⼊⼀次70％酒精，在0～4℃冰箱内备⽤。

去壁低渗法a.将3固定的材料⽤DDW洗净后，0.075mol/LKCL溶液室温条件下处理约30min。

b.酶解去壁吸取低渗液，加⼊1％混合酶液（1％果胶酶与1％纤维素酶的混合液，均为Sigma公司），28℃左右，酶解4.5～5h.酶解过程中，将材料瓶轻轻摇动1～3次，使材料与酶液充分接触。

c.后低渗吸取酶液,⽤DDW冲洗材料2～3次，然后在DDW中停留30min。

d.重固定吸取低渗液后,加⼊新配制的卡诺⽒Ⅰ固定液，固定时间约20min。

病理组织的固定

病理组织的固定㈠凡需要进行病理组织学检查的标本（器官或组织），于离体（活体或尸体）后，应尽快置放（浸泡）于装有足够量固定液的容器中固定。

固定液量应为被固定标本体积的5~10倍。

置放标本的容器大小视标本和固定液的体积而定，应适当大一些。

临床科室切取的标本置放于容器中固定后，应尽快送交病理科继续固定。

未能及时、充分固定的干涸或腐败标本不能再进行固定和用于制做切片。

㈡常规固定液为4%中性甲醛（10%中性福尔马林），应预先多量配制贮存，以备随时使用。

小标本的固定时间为4~6小时，大标本为18~24小时或更久。

㈢根据病理学特殊检查（特殊染色和组织化学染色、免疫组织化学染色和原位核酸分子杂交染色、电镜观察等）的需要，应选用其他适宜的固定液进行固定［参见后述的“㈦固定液的常用种类和制备”］。

㈣器官、组织固定的基本方法1．食管、胃、肠、胆囊、膀胱等空腔器官：依规范方法剪开后，按其自然状态平铺于硬纸板上（重点暴露黏膜面或内表面的病变处），并用大头针将标本边缘处固定于纸板上，然后放入4%中性甲醛中固定（黏膜面或内表面朝向容器的液面，并覆盖薄层脱脂棉）。

2．肝、脾：由器官背面，沿其长轴每间隔1.5~2.0cm纵向平行剖开，切成数片。

将每片肝或脾轻轻地平放于装有4%中性甲醛的容器中，容器底面衬以脱脂棉。

应避免标本弯曲和相互间的叠压。

3．肺叶：放入固定液中的肺叶漂浮于液面，需在肺表面覆盖薄层脱脂棉。

必要时从支气管注入适量4%中性甲醛。

4．肾：沿肾外缘中线朝肾门方向作一水平切面（深达于肾盏），再行固定。

5．淋巴结：先用4%中性甲醛固定1小时后，再沿其长轴切成数片（厚 2 ~3mm），继续固定。

6．骨组织：先锯成小片（若是长骨应作横向锯片），在4%中性甲醛中固定24小时后，再进行脱钙。

7．微小组织或液体沉淀物：先用拭纸或滤纸妥为包裹（需用大头针扎牢），然后放入专用小盒内进行中性4%甲醛固定，以防检材遗失。

8．凡进入固定程序的标本必须连带其正确无误的病理检验号（病理号）。

组织固定液的使用

谈谈固定液的使用作者: liza3(站内联系TA)发布: 2013-01-11当前，应用于固定试剂的种类较多，它们对于固定不同的组织成分起着不同的作用，因此我们在使用时应该了解不同固定剂的效能，才能合理的固定组织。

根据Bencroft的分类法，将不同的固定剂分为四种类型：Ⅰ类：醛类，甲醛，戊二醛，多聚甲醛，丙烯醛，已二醛，丙二醛等。

Ⅱ类：氧化剂类，四氧化锇（奥酸），高锰酸钾，重铬酸钾等。

Ⅲ类：蛋白变性类，甲醇，乙醇，醋酸等。

Ⅳ类：其他，氯化汞，苦味酸等。

上述四种类型的固定剂，最常使用的是甲醛，其余的也在其它病理技术方面中用到。

下面根据使用的需要，将着重介绍几种常用的固定剂。

（1）甲醛甲醛商品名为福尔马林，一般市售的含甲醛37—40%，由甲醛气体饱和于水而成，比重为1.12。

它也可以稳定的固体形式存在，它的成分为高分子量的聚合体，称为多聚甲醛。

甲醛溶液较难纯化，在每批市售商品中，都含有不少的杂质如甲醇，这种在组织化学方法当中，能使酶钝化，影响其反应。

甲酸，它可使固定液变酸，在陈列标本或长时间固定的组织，由于酸的作用，往往细胞核染色欠佳。

甲醛有效固定作用的要点是，在蛋白质末端基团之间形成交联链。

参与甲醛固定蛋白质的基团，主要为氨基，亚氨基及酰氨基，肽，胍基，羟基，SH和芳香环。

甲醛与组织蛋白类的反应是多样和复杂的，因为它能和多种不同的功能基团结合，在多数情况下在其间形成桥键。

甲醛有这种交联的功能，也是它的缺点，在用甲醛固定过的组织中，需要做免疫组化的，往往提倡用酶消化或热抗原修复法来使蛋白与甲醛交联的醛键断裂开，以利于后来的染色。

甲醛可配成简单的或混合的固定液，最简单和最容易掌握的方法，就是取10ml甲醛液，加水90ml，这就是10%的福尔马林.当然,现在使用的固定液要求较为严格些,最好是使用缓冲福尔马林固定液,这将有利于后来的免疫组化染色的需要.从组织学的观点来说,甲醛是一种良好的固定剂,它有很多的优点:1. 组织收缩较少,损伤少,保存固有物质好.2. 固定均匀,穿透力强.3. 能使组织硬化,增进组织弹性,有利于切片.4. 能保存脂肪及脂类物质.5. 成本较低.虽然甲醛有上述的优点,但这都是相对而言,任何物质都不可能十全十美的,它也有许多缺点:1. 杂质含量较多,如甲醇,可钝化酶类,影响反应.2. 含有微量甲酸,导致固定液酸变,影响染色.3. 可产生福尔马林色素,影响观察.4. 不能固定尿酸和糖类物质.5. 容易挥发,污染环境,可导致标本干涸.6. 可长期存在于固定过的组织上.有人做过实验,组织用甲醛固定后在流水中冲洗5小时后,仍留有相当多的甲醛与蛋白质相结合,但需要经过长时间的流水冲洗(24天的冲洗)方能除去.可见存在于组织上的甲醛是不可能除去的.因为临床活检不可能有这么长的时间来冲洗组织.因此要特别指出的是,在其后的各种技术操作中,要特别注意到甲醛的存在,必须要想办法除去它,否则将会给各种染色造成影响,甚至导致失败。

常用固定液的配制

常用固定液的配制1. 福尔马林-醋酸-酒精固定液(FAA)50%或70%酒精90ml + 冰醋酸5ml + 福尔马林(37%~40%甲醛)5ml可用作固定植物的一般组织,但不适用于单细胞及丝状藻类,也不适宜作细胞学研究。

幼嫩材料用50%酒精代替70%酒精，可防止材料收缩。

若材料坚硬，可略减冰醋酸，略增福尔马林。

若材料易收缩，可稍增加冰醋酸。

久置时另加入5ml甘油以防蒸发和材料变硬。

此液又可作保存液。

固定时间最多10h。

如果用在植物胚胎的材料上，改用下面的配方，效果较好：50%酒精89ml + 冰醋酸6ml + 福尔马林5ml2. 福尔马林-丙酸-酒精固定液（FPA）福尔马林5ml + 丙酸5ml + 70%酒精90ml固定一般的植物组织，通常固定8~24h，可长久保存。

3. 酒精-醋酸-氯仿固定液（卡诺固定液，Carnoy fixative）配方Ⅰ：纯酒精3份+ 乙酸1份配方Ⅱ：纯酒精6份+乙酸1份+ 氯仿3份配方Ⅲ：甲醇6份+乙酸1份+ 氯仿3份适用于植物组织和细胞学材料，为研究细胞分裂和染色体的优良固定液。

固定时间不宜过久。

4. 酒精-福尔马林固定液福尔马林2~6（6~10）ml + 70%酒精100ml固定植物一般组织，尤其适用于萌发的花粉管的固定。

通常固定24h，亦可长久保存。

5. 酒精-福尔马林-甘油固定液95%酒精150ml + 5%福尔马林100ml + 甘油50ml此液也可长期储存材料。

6. 铬酸-醋酸固定液根据固定对象的不同，可分为强、中、弱3种配方：（1）弱液配方：10%铬酸2.5ml + 10%醋酸5ml + 蒸馏水92.5ml（2）中液配方：10%铬酸7ml + 10%醋酸10ml + 蒸馏水83ml（3）强液配方：10%铬酸10ml + 10%醋酸30ml + 蒸馏水60ml弱液配方用在固定较柔软的材料，如藻类、苔藓和蕨类的原叶体等。

固定时间较短，一般为数小时，最长可固定12~24h，但藻类和蕨类的原叶体可缩短到几分钟至1h。

卡诺氏液的作用

卡诺氏固定液(Carnoy's Fluid) 适用于一般植物组织和细胞的固定,常用于根尖,花药压片及子房石蜡切片等.有极快的渗透力,根尖材料固定15—20min即可,花药则需1h左右,此液固定最多不超过24h,固定后用95%酒精冲洗至不含冰醋酸为止;如果材料不马上用,需转入70%酒精中保存.固定液的重要特性是能迅速穿透细胞，将其固定并维持染色体结构的完整性，还要能够增强染色体的嗜碱性，达到优良染色效果。

配方:无水酒精3份:冰醋酸1份或无水乙醇6份，氯仿3份，冰醋酸1份。

龙胆紫，其1～2％溶液俗称紫药水，是人们所熟悉的外用药。

龙胆紫为一种碱性阳离子染料，因其阳离子能与细菌蛋白质的羧基结合，影响其代谢而产生抑菌作用。

它能抑制革兰氏阳性菌，特别是葡萄球菌、白喉杆菌，对白色念珠菌也有较好的抗菌作用。

它杀菌力强，对组织没有刺激性，也没有毒性和副作用。

醋酸洋红常被用作核、染色体的固定和染色剂。

在“观察植物细胞有丝分裂”（即“观察根尖分生区组织细胞”）时，对染色体进行染色，需要用碱性染液，此时可以使用醋酸洋红或龙胆紫染液。

改良苯酚品红染色液对果蝇唾液腺染色体的染色效果与醋酸染洋高中生物试验中试剂和药品的作用如下：1、斐林试剂作用：鉴定还原性糖：C6H12O6、果糖、麦芽糖、乳糖等。

还原性糖与斐林试剂发生作用，生成砖红色沉淀。

如用于鉴定组织液中有否还原性糖、糖尿病人尿成分分析、酶专一性探索等。

2、班氏尿糖定性试剂使用方法同斐林试剂，所不同的是班氏试剂可长期使用。

3、双缩脲试剂作用：鉴定蛋白质，蛋白质与双缩脲试剂发生作用，可产生紫色反应。

也可用于鉴定多肽。

4、苏丹Ⅲ作用：鉴定脂肪，脂肪可以被苏丹Ⅲ染成橘黄色（或被苏丹Ⅳ染成红色）。

5、质量分数为15%的盐酸和体积分数为95%的酒精溶液的混合液作用：用于洋葱根尖的解离，即使组织中的细胞相互分离开来。

能杀死细胞固定。

6、质量浓度为0.01g/mL的或0.02g/mL龙胆紫溶液（或醋酸洋红溶液）作用：使细胞核内的染色体着色，便于观察。

常用固定液的配制

钉于染液中，过1min后取出，使染色剂略含铁质，以增加染色性能。

静置12h后过滤于棕色瓶中备用（置于避光处）。

12.苏木精染液苏木精的配方很多，常用的有如下3种：配方Ⅰ：苏木精水溶液0.5g苏木精溶入100ml煮沸的蒸馏水中，静置24h后可使用。

配方Ⅱ：代氏苏木精（Delarfield’s haematoxylin）甲液：苏木精1g + 无水酒精6ml乙液：硫酸铝铵（铵矾）10g + 蒸馏水100ml丙液：甘油25ml + 甲醇25ml分别配制甲、乙两液，将甲液一滴滴地加入乙液中，充分搅拌后，放入广口瓶中用纱布蒙住瓶口，置于温暖和光线充足处7~10天，再加入丙液，混匀后静置1~2月，至颜色变为深紫色后，过滤备用，可长期保存。

配方Ⅲ：爱氏苏木精（Ehrlich’s haematoxylin）苏木精1g + 无水或95%酒精50ml + 蒸馏水50ml + 甘油50ml + 冰醋酸5ml + 硫酸铝钾（钾矾）3~5g。

配制时，先将苏木精溶于酒精中，然后依次加入蒸馏水、甘油和冰醋酸，最后加入研细的钾矾，边加边搅拌，直到瓶底出现钾矾结晶为止。

混合后溶液颜色呈淡红色，放入广口瓶中，用纱布封口，自然氧化1~2月，至颜色变为深红色时即可过滤备用，可长期保存。

13.席夫试剂（Schiff’s regent）将0.5g碱性品红溶入煮沸的蒸馏水，搅拌使其充分溶解。

冷却至50℃时，过滤于棕色细口瓶中，加入10ml1mol/L盐酸。

冷却至25℃左右，加入1g偏亚硫酸钾或钠（Na2S2O5或K2S2O5），振荡使其溶解，密封瓶口，置于黑暗低温处过夜。

次日检查，若染色液透明无色或呈淡茶色，即可使用。

若染色较深，可加入少量优质活性炭（0.5~2g），振荡1min，置于4℃冰箱中过夜，过滤使用。

此液配好后，应塞紧瓶塞，外包黑纸，贮藏于冰箱中。

14.硫堇染液将0.25g硫堇粉末，溶于100ml蒸馏水中，即可使用。

使用此液时。

需用微碱性自来水封片或用1%NaHCO3水溶液封片，能产生多色反应。