透射电镜样品制备固定液配方

0.2M磷酸缓冲液一系列PH值的配方：

磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液（0.2M）

pH 0.2M Na2HPO4/ml 0.2M NaH2PO4/ml

5.8 8.0 92.0

5.9 10.0 90.0

6.0 12.3 8

7.7

6.1 15.0 85.0

6.2 18.5 81.5

6.3 22.5 7

7.5

6.4 26.5 73.5

6.5 31.5 68.5

6.6 3

7.5 62.5

6.7 43.5 56.5

6.8 49.5 51.0

6.9 55.0 45.0

7.0 61.0 39.0

7.1 67.0 33.0

7.2 72.0 28.0

7.3 77.0 23.0

7.4 81.0 19.0

7.5 84.0 16.0

7.6 87.0 13.0

7 .7 89.5 10.5

7.8 91.5 8.5

7.9 93.0 7.0

8.0 94.7 5.3

Na2HPO4·2H2O分子量＝178.05 0.2M溶液含35.61g/L

Na2HPO4·12H2O分子量＝358.22 0.2M溶液含71.64g/L

NaH2PO4·H2O分子量＝138.01 0.2M溶液含27.6g/L

NaH2PO4·2H2O分子量＝156.03 0.2M溶液含31.21g/L

电镜实验用２．５％戊二醛固定液及其制备方法

申请号/专利号：201010185630

本发明公开了一种电镜实验用２．５％戊二醛固定液及其制备方法，包括以下步骤：１、磷酸盐缓冲液配制：Ａ液：磷酸氢二钠＊１２个结晶水７１．６４克加蒸镏水至１０００ｍｌ；Ｂ液：磷酸二氢钠＊２个结晶水３１．２１克加蒸镏水至１０００ｍｌ；将Ａ液３６ｍｌ＋Ｂ液１４ｍｌ配置成０．２ｍｏｌｐＨ７．２的磷酸盐缓冲液；２、固定剂戊二醛配制：将步骤１配置好的０．２ｍｏｌｐＨ７．２磷酸盐缓冲液５０ｍｌ，加入５０％戊二醛５ｍｌ，然后加蒸镏水至１００ｍｌ，加入活性炭２ｇ

1、0.2M磷酸缓冲液的配制

磷酸二氢钠(NaH2PO4.H2O) 2.6g

磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O) 29g

重蒸馏水加至500ml

调pH至7.4

2、戊二醛固定液

0．1M磷酸缓冲液配制的戊二醛固定液如下

（A）（B）（C）

25%戊二醛（ml）0.4 1 1.6

重蒸馏水（ml）4.6 4 3.4

0．2M缓冲液（ml）5 5 5

戊二醛最终浓度(%) 1 2.5 4

配制后的固定液pH应为7.3-7.4。

3、回答提出的三个问题：

A 若我只有50%戊二醛溶液, 是不是只需将其5ml与50ml P

B 定容到100ml, 我不明白缓冲液的作用?量为什么不变!

答：50%戊二醛？我好像只看到过25%的戊二醛，当然，非电镜用的可能有50%的戊二醛，记住，电镜用的戊二醛包装上面应该有电镜专用几个字。其次，0.2M缓冲液的量当然不变，都是最后量的一半，这样固定液的浓度就是0.1M，能够维持固定液的pH值和渗透压。将固定液的pH值和渗透压维持在生理状态，可防止由于固定液和组织液的渗透压或pH值不同而引起的细胞收缩和肿胀等人为损伤。

B 为什么要4度保存? 固定时也要4度吗? 50%戊二醛要不要4度保存?

答：4度保存的目的有二：方便固定的时候温度为4度，可以减少组织的自溶；其次，可以防止固定液里面的成分挥发，包括水，从而导致pH值和渗透压的变化。至于原装的戊二醛，应为封口严密，所以没必要4度保存，但好像需要避光。