膜片钳记录系统中的电阻
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膜片钳记录系统中的电阻
一·膜电阻与膜输入阻抗
二·电极电阻(pipette resistance,R p)是玻璃微电极本身的电阻,为串联电阻的主要成分。对于玻璃微电极,我们实际上要考虑的是其尖端的形状和口径,而不是其电阻的大小。
三·封接电阻
当电极尖端与细胞膜片之间形成高阻封接(gigaseal)时,通过微电极的电流几乎为0,形成的电流阻抗非常大,这就是封接电阻(seal resistance,R seal),又称封接阻抗。封接的好坏与玻璃微电极,细胞膜表面都有关,为获得良好的高阻封接,请注意如下几点:(1)细胞膜表面必须清洁,培养的细胞多符合这点,但也有些细胞株细胞难以形成封接,需要对细胞膜进行酶处理才能形成良好的封接。对组织片表面进行机械清洁或酶处理也有助于形成高阻封。
(2)在拉制,灌注玻璃微电极的过程中要保持其清洁,玻璃微电极经过抛光处理有助于封接。
(3)电极内液与浴液必须用微孔滤膜(0.2um)进行过滤,以去除灰尘及其他微颗粒杂质成分。对于培养细胞,在记录前应将培养液更换为浴液(记录液),并反复用浴液清洗几遍以去除培养液中的血清大分子成分。
(4)封接前,要给电极尖端施加一个小的正压,这可保持电极尖端不被浴液中的杂质污染。在封接时,大多需要给予细胞膜轻微的负压吸吮,但有时封接也可在微电极与细胞膜接触的瞬间自动形成。