叶绿素提取实验

实验二、叶绿体色素的提取、分离与性质分析

一、实验目的

•掌握叶绿体色素的提取方法；掌握板层析法分离叶绿体色素的原理和步骤；掌握叶绿体色素的部分理化性质。

二、实验原理

（一）叶绿体色素：

1.叶绿素

叶绿素a：叶绿素b=3：1

2.类胡萝卜素

胡萝卜素：叶黄素=2：1

叶绿素：类胡萝卜素=3：1

（二）叶绿素的光学性质

叶绿素a在663nm有吸收峰；叶绿素b 在645nm有吸收峰。但在蓝光区也有一个吸收峰。

胡萝卜素和叶黄素的吸收峰是在蓝光区（440nm）。

三、叶绿素含量测定：

1．取新鲜叶片，擦净组织表面污物，剪碎（去掉中脉）混匀。

2．称取剪碎的新鲜样品1.0g ，放入研钵中，加少量石英砂及2－3ml （或80％丙酮）研成匀浆，继续研磨至组织变白，静置3－5分。

3．取滤纸1张，置漏斗中，用80％丙酮湿润，沿玻棒把提取液倒人漏斗中，过滤到25ml。

4．用滴管吸取80％丙酮，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。

直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用80％丙酮定容至25ml，摇匀。

5．把叶绿体色素提取液倒入比色杯内。以80％丙酮为空白，在波长663nm、645nm下测定吸光度。

6 计算：按下列公式：

Ca(mg/L)=12.7OD663-2.69 OD645

Cb (mg/L) =22.9OD645-4.68 OD663

C总(mg/L) = Ca+ Cb分别计算叶绿素a、b的浓度。

四、光合色素鉴定（板层析）

•支持物：硅胶层析板

•流动相：石油醚：丙酮：（v：v=65：35）

•步骤：1、取板划线

2、点样

3、配展开剂

4、展开

5、前沿到达2/3处时停止，取出凉干并观察各色素带计算Rf值

叶绿素a：蓝绿色；叶绿素b：黄绿色；胡萝卜素：桔黄色

叶黄素：黄色

六：叶绿素前驱物的荧光观察

七、作业

1、计算你的实验中植物叶片中叶绿素的含量。

２．研磨提取叶绿素时，为何要加入CaCO3？

３．画图说明叶绿体色素板层析结果，并解释原因。